Name: Rating L-DOPA-geïnduceerde dyskinesieën in het eenzijdig 6-OHDA-laesie rattenmodel van de ziekte van Parkinson (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-10-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 45 s
Description: Leer hoe je L-DOPA-geïnduceerde dyskinesieën beoordeelt in het 6-OHDA-rattenmodel voor de ziekte van Parkinson. Deze methode maakt systematische scoring van axiale, ledemaat- en orolinguele bewegingen mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd ondersteund door São Paulo Research Foundation (FAPESP, subsidie 2017/00003-0). We zijn dankbaar voor de Coördinatie voor de Verbetering van het Hoger Onderwijs Personeel (CAPES). We danken Dr. Anthony R. West, Dr. Heinz Steiner en Dr. Kuei Y. Tseng voor ondersteuning en mentorschap.

Alle experimenten werden uitgevoerd in overeenstemming met de ethische commissie van de Faculteit der Wijsbegeerte, Wetenschappen en Brieven van Ribeirão Preto (CEUA / FFCLRP 18.5.35.59.5).
1. 6-OHDA laesie
<ol><li>Gebruik Sprague-Dawley mannelijke ratten met een gewicht van 200-250 g aan het begin van de experimenten (6 weken). Huisvest de dieren (2-3 per kooi) onder standaard laboratoriumomstandigheden (12:12 uur licht/donker cyclus, lichten aan om 06:00 uur, temperatuurgecontroleerde faciliteiten (22-24 °C), met voedsel en water beschikbaar ad libitum. OPMERKING: Een volledige beschrijving van het genereren van ernstige 6-OHDA-laesie ratten wordt elders beschreven42.</li>
	<li>Op passende wijze dieren acclimatiseren voor het begin van een experimentele procedure.</li>
	<li>Dien (intraperitoneaal, i.p.) de noradrenalinetransporterremmer imipramine (20 mg/kg, opgelost in 0,9% zoutoplossing) 30 min voor de operatie toe. OPMERKING: Toediening van Imipramine zal de selectiviteit van 6-OHDA voor dopaminerge neuronen verhogen.</li>
	<li>Dien ketamine/xylazine (70/10 mg/kg) intraperitoneaal toe.</li>
	<li>Zorg ervoor dat het dier diep verdoofd is door het gebrek aan reactie op teenknijpen en in een buikligging in het stereotaxische apparaat op de bovenkant van een verwarmingskussen wordt geplaatst.</li>
	<li>Verwijder de vacht op het hoofd en desinfecteer het operatiegebied 3 keer, afwisselend een scrub op basis van jodium en alcohol.</li>
	<li>Gebruik een scalpel om een incisie (ongeveer 1 cm) te maken in het gebied waar de micro-injectie zal optreden.</li>
	<li>Reinig het schedelgebied met wattenstaafjes en zorg ervoor dat de Bregma en Lambda worden blootgesteld.</li>
	<li>Zorg ervoor dat MFB stereotaxische coördinaten zijn genomen van bregma 43,44,45: -4,3 mm voorste, 1,6 mm laterale (rechterkant) en 8,3 mm ventraal (van de dura mater).</li>
	<li>Dien de 6-OHDA toe met een snelheid van 0,4 μL/min (10 μg in 4 μL zoutoplossing met 0,1% ascorbinezuur) eenzijdig in de rechter mediale voorhersenenbundel (MFB) met behulp van een Hamilton glazen spuit van 50 μL.</li>
	<li>Hecht aan het einde van de operatie de hoofdhuidincisie en hydrateer het dier met warme (~ 37 ° C) steriele 0,9% zoutoplossing (~ 10 ml / kg, s.c.).</li>
	<li>Haal het dier uit het stereotaxische frame en plaats het in een verwarmde herstelkooi. Monitor totdat het bewustzijn is herwonnen.</li>
	<li>Beoordeel de effectiviteit van de dopaminerge laesie 4 weken na de laesie met behulp van een stappentest46,47. OPMERKING: In deze test wordt de akinesie van de voorpoot contralateraal aan de laesie beoordeeld door het aantal aanpassingsstappen met de voorpoot contralateraal aan de laesie. Ratten die drie of minder aanpassingsstappen presenteren met de contralaterale voorpoot worden in het onderzoek opgenomen als vermeende ernstig 6-OHDA-laesie ratten48.</li>
</ol>2. L-DOPA chronische behandeling
<ol><li>Start de chronische behandeling op maandag, 4 weken na 6-OHDA laesie. OPMERKING: Aangezien AAM's gedurende 3 opeenvolgende dagen per week (woensdag, donderdag en vrijdag) gedurende 3 weken worden gefilmd, wordt aanbevolen om de behandeling op maandag te starten.</li>
	<li>Behandel de ratten met vers bereide L-DOPA (via subcutaan (s.c.), 1 ml/kg) plus benserazidehydrochloride (respectievelijk 5 mg/kg en 12,5 mg/kg) gedurende 3 weken, eenmaal daags van maandag tot vrijdag45. OPMERKING: Eenmaal gevestigd, zullen AAM's zich manifesteren bij elke toediening van L-DOPA. Daarom is 2-4 keer per week toediening van 3 weken na de inductieperiode van 3 weken voldoende om een stabiele expressie van AMM's48 te behouden.</li>
</ol>3. AAM's registreren en scoren
<ol><li>Voer experimenten uit tussen 09:00 uur en 17:00 uur. Zorg ervoor dat de onderzoeker zich volledig niet bewust is van de identiteit en farmacologische behandeling van de ratten.</li>
	<li>Plaats de rat voorzichtig in een transparante cilinder (20 cm diameter x 40 cm hoog) en laat hem minstens 15 minuten acclimatiseren. Zorg ervoor dat de vloer bedekt is met het beddengoed. Spiegels moeten achter de cilinder worden geplaatst, zodat de experimentator het dier vanuit alle mogelijke hoeken kan observeren. OPMERKING: Als er meer dan één rat per experiment is, gebruik dan een cilinder voor elke rat. Manipulatie van de dieren tussen sessies door kan de gedragsanalyse verstoren.</li>
	<li>Plaats een videocamera met hoge resolutie op een manier die de weergave van axiale, ledemaat- en orolinguele AIM's bevordert. Omdat rotatiegedrag aanwezig is onder deze experimentele omstandigheden, zullen de spiegels achter de cilinder het mogelijk maken om AAM's onder een hoek van 360 ° te volgen. Gebruik een statief of bevestig de camera rechtstreeks op de bank. OPMERKING: Orolinguele AAM's kunnen een uitdaging zijn om te scoren, vooral als er een hoge incidentie van rotatiegedrag is. Het maken van video's met de camera iets onder het vlak waar de dieren zich in een hoek van 15° bevinden, zal helpen om dit bewegingssubtype te observeren.</li>
	<li>Haal het dier voorzichtig uit de cilinder en dien levodopa toe (5 mg/kg gecombineerd met 12,5 mg/kg benserazide, s.c.).</li>
	<li>Plaats het dier terug in de cilinder en start een timer om AAM's te volgen na L-DOPA-injectie. Gebruik een videocamera om AMM's op te nemen gedurende 180 minuten na de injectie van L-DOPA. Hoewel de analyse kan worden uitgevoerd door directe observatie van het dier, heeft offline scoren de voorkeur. OPMERKING: Zorg ervoor dat de timer ook op video is opgenomen, zodat AAM's op precieze tijdstippen na de toediening van L-DOPA kunnen worden gescoord.</li>
	<li>Scoor AMM's met intervallen van 30 minuten tot 180 minuten na L-DOPA-injectie (zie tabel 1 voor definities) zoals aanvankelijk beschreven20,23. Scores moeten worden gegeven over tijdperken van 1-2 minuten en worden geclassificeerd als axiale, ledemaat of orolingueel (figuur 1).</li>
	<li>Observeer zorgvuldig elke AIM en attribuutscores voor ernst en amplitude. Gebruik tabel 1 voor instructies. Neem geen normaal gedrag op, zoals opvoeden, snuiven, verzorgen en knagen in de beoordeling. Er zullen in totaal zes observatieperioden zijn (30, 60, 90, 120, 150 en 180 min).</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>SUBTYPEN</td>
		</tr><tr><td>Axiale: torsie van hoofd, nek en romp</td>
		</tr><tr><td>Ledemaat: onwillekeurige bewegingen van zowel distale als proximale voorpoot</td>
		</tr><tr><td>Orolingual: onwillekeurige bewegingen van de orofaciale spieren</td>
		</tr><tr><td>STRENGHEID</td>
		</tr><tr><td>0: Afwezig</td>
		</tr><tr><td>1: Incidenteel (met onderbrekingen, aanwezig in minder dan de helft van de waarnemingstijd)</td>
		</tr><tr><td>2: Frequent (met onderbrekingen maar aanwezig in meer dan de helft van de waarnemingstijd)</td>
		</tr><tr><td>3: Continu maar onderbroken door externe zintuiglijke prikkels</td>
		</tr><tr><td>4: Continu en niet onderbroken door externe zintuiglijke prikkels</td>
		</tr><tr><td>AMPLITUDE</td>
		</tr><tr><td>Axiale</td>
		</tr><tr><td>1: Torsie van hoofd en nek in een hoek van ongeveer 30°</td>
		</tr><tr><td>2: Torsie van hoofd en nek bij ongeveer 30° < hoek ≤ 60°</td>
		</tr><tr><td>3: Torsie van het hoofd, de nek en de bovenstam in ongeveer 60° < hoek ≤ 90°</td>
		</tr><tr><td>4: Torsie van hoofd, nek en romp in > hoek van 90°, waardoor de rat vaak zijn evenwicht verliest</td>
		</tr><tr><td>Lidmaat</td>
		</tr><tr><td>1: Kleine onwillekeurige bewegingen van de distale voorpoot</td>
		</tr><tr><td>2: Bewegingen van lage amplitude die translocatie van zowel distale als proximale voorpoot veroorzaken</td>
		</tr><tr><td>3: Onwillekeurige bewegingen van de hele ledemaat, inclusief schouderspieren</td>
		</tr><tr><td>4: Sterke ledemaat- en schouderbewegingen, vaak vergelijkbaar met ballisme</td>
		</tr><tr><td>Orolingual</td>
		</tr><tr><td>1: Kleine onwillekeurige bewegingen van de orofaciale spieren</td>
		</tr><tr><td>2: Orofaciale bewegingen met hoge amplitude met tonguitsteeksel</td>
		</tr></tbody></table>Tabel 1: AIMS-definitie en beoordelingscriteria.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62924/62924fig01.jpg"> Figuur 1: Opeenvolging van foto's van elk AIM-subtype. (A tot en met A'") Axiale AIM toont dystonisch-achtige bewegingen in verschillende hoeken (A: 30° hoek, A': 30° < hoek ≤ 60°, A": 60° < hoek ≤ 90°, en A'": > hoek van 90°). (B tot B") Limb AIM (zwarte pijlen) die onwillekeurige bewegingen van de distale (B en B') en de hele voorpoot (inclusief schouder, B) weergeven. (C) Orolingual AIM (rode pijl) met hoge amplitude met tonguitsteeksel. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62924/62924fig01large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
4. Data-analyse
<ol><li>Bereken axiale, ledemaat- of orolinguele AMM-subtypen door de ernst- en amplitudescores voor elke observatieperiode na toediening van L-DOPA (d.w.z. zes observatieperioden) te vermenigvuldigen, zoals eerder beschreven20. De theoretische maximale score die één dier in één testsessie zou kunnen verzamelen is 240 (maximale score per observatieperiode is 40, zie tabel 1 voor details).</li>
	<li>Plot-AMM's scoren voor alle zes observatieperioden die op woensdag, donderdag en vrijdag zijn geregistreerd gedurende de 3 weken van chronische levodopa-toediening (figuur 2). AAM's kunnen worden samengevat om de maximale score van elk dier op elke scoredag (figuur 3) of elke week (figuur 4) gedurende de 3 weken van chronische levodopa-toediening aan te geven.</li>
	<li>Controleer of de gegevens een bijna normale verdeling hebben voordat u de statistische analysebenadering selecteert. OPMERKING: AAM's-beoordelingsschalen bestaan uit ordinale gegevens en kunnen worden geanalyseerd met niet-parametrische statistieken. Parametrische tests worden veel gebruikt bij het vergelijken van AMM-scores tussen experimentele groepen na herhaalde testsessies40.</li>
</ol>

De auteurs hebben geen belangenconflicten.

Dit protocol laat zien hoe amm's kunnen worden geïnduceerd en geanalyseerd in het rattenmodel van PD geïnduceerd door unilaterale micro-injectie van 6-OHDA in de MFB. Chronische dagelijkse toediening van lage doses levodopa (5 mg/kg, gecombineerd met 12,5 mg/kg benserazide) veroorzaakte de ontwikkeling van aam's gedurende de 3 weken behandeling. Temporele analyse onthulde een significante toename van AMM's en de piekdosis dyskinesie wordt waargenomen tussen 30 en 90 minuten na toediening van LEVODOPA. AMM's zijn repetiti...

De dopaminevoorloper L-3,4-dihydroxyfenylalanine (L-DOPA) vertegenwoordigt de meest effectieve behandeling voor de motorische symptomen van de ziekte van Parkinson (PD)1. Levodopa-therapie kan motorische symptomen geassocieerd met PD verbeteren, maar verliest effectiviteit met de tijd. Motorische fluctuaties zoals "slijtagefluctuatie" of "verslechtering aan het einde van de dosis" manifesteren zich klinisch als een verkorte duur van het effect van enkele L-DOPA-doses2. In andere gevallen bestaan klinische manifestaties uit langzame draaiende bewegingen en abnormale houdingen (dystonie)3 en treden op wanneer de dopaminespiegels laag zijn (off-period dystonie)4. Aan de andere kant verschijnen levodopa-geïnduceerde dyskinesieën (LIDs) wanneer dopamineniveaus in het plasma en de hersenen hoog zijn5.
LIDs produceren slopende bijwerkingen die motorische complicaties omvatten, zoals choreiform, dystonische en ballistische 6-bewegingen. Eenmaal vastgesteld, treden LIDs op na elke levodopa-toediening. Motorische complicaties treden op bij 40% -50% van de PD-patiënten die gedurende 5 jaar L-DOPA-therapie ondergaan, en de incidentie neemt in de loop van de jaren toe7. Hoewel de pathofysiologische mechanismen die betrokken zijn bij de ontwikkeling van LIDs bij PD-patiënten nog niet volledig zijn opgehelderd, zijn de mate van dopaminerge denervatie, pulsatiele levatiele levodopa-toediening, downstream veranderingen in striatale eiwitten en genen en afwijkingen in niet-dopaminetransmittersystemen factoren die bijdragen aan de ontwikkeling van deze ongewenste bijwerkingen 6,8,9,10.
Het neurotoxine 6-hydroxydopamine (6-OHDA) is een goed gekarakteriseerd hulpmiddel om PD bij knaagdieren te bestuderen 11,12,13,14. Aangezien 6-OHDA de bloed-hersenbarrière niet overschrijdt, moet het rechtstreeks in de nigrostriatale route worden geïnjecteerd. 6-OHDA-geïnduceerde dopaminerge depletie is concentratie- en plaatsafhankelijk15. Eenzijdige toediening van 6-OHDA aan de mediale voorhersenenbundel (MFB) kan ernstige (>90%) nigrostriatale schade veroorzaken bij knaagdieren 16,17,18,19. Chronische toediening van levodopa aan ernstige eenzijdig 6-OHDA-laesie knaagdieren veroorzaakt het verschijnen van dyskinetische bewegingen die abnormale onvrijwillige bewegingen (AIM's) worden genoemd. Dyskinetisch-achtige bewegingen bij knaagdieren delen vergelijkbare moleculaire, functionele en farmacologische mechanismen gerelateerd aan LIDs bij PD-patiënten5. Daarom zijn 6-OHDA-laesie ratten20 en muizen21 waardevolle preklinische modellen om LIDs te bestuderen. Bij chronische behandeling (7-21 dagen) met therapeutische doses L-DOPA (5-20 mg/kg), vertonen eenzijdig 6-OHDA-laesie ratten en muizen een geleidelijke ontwikkeling van aki's die de voorpoot-, romp- en orofaciale spieren beïnvloeden die contralateraal zijn voor de laesie 17,18,19,20,22,23,24 . Deze bewegingen worden gepresenteerd in een tijdsverloop vergelijkbaar met levodopa-geïnduceerde piekdosis dyskinesieën bij PD-patiënten25 en worden gekenmerkt door hyperkinetische bewegingen en dystonie5. AAM's worden meestal gescoord op basis van hun ernst (bijvoorbeeld wanneer een specifieke AIM aanwezig is) en amplitude (bijvoorbeeld gekenmerkt door de amplitude van elke beweging)5,23,25.
6-OHDA-laesie knaagdiermodellen van LIDs vertonen gezichtsvaliditeit (d.w.z. het model heeft verschillende kenmerken die lijken op de menselijke conditie)5,11,26,27,28. Knaagdier-AIMs, vergelijkbaar met wat optreedt bij PD-patiënten, worden gezien als hyperkinetische (voorpoot- en orolingual) en dystonische (axiale) bewegingen29 en bootsen piekdosis dyskinesie na. Op moleculair en functioneel niveau delen knaagdiermodellen veel pathologische kenmerken met PD-patiënten5, zoals upregulatie van FosB/ΔFosB 19,26,30,31,32,33 en serotoninetransporter (SERT)34,35 . Wat de voorspellende validiteit betreft, vertonen geneesmiddelen die LIDs bij PD-patiënten verminderen (bijv. het N-methyl-D-aspartaat (NMDA) receptorantagonist amantadine) antidyskinetische werkzaamheid in het knaagdiermodel 22,36,37,38,39.
De knaagdier-AIMs-beoordelingsschaal is gemaakt op basis van vier AIMs-subtypen, waaronder AAM's die het hoofd, de nek en de romp beïnvloeden (axiale AMM's), hyperkinetische voorpootbewegingen (limb-AIMs) en dyskinetisch-achtige orolinguele bewegingen (orolinguele AIM's). Hoewel contralaterale rotatie (locomotief-AAM's) ook aanwezig is bij eenzijdig gelaesiede knaagdieren 20,22,23,25,40, is het niet gescoord als een dyskinetisch-achtige beweging omdat het mogelijk geen specifieke maat van LIDs 22,37,41 vertegenwoordigt.
Hier zullen we beschrijven hoe dyskinetisch-achtige bewegingen (axiale, ledemaat en orolinguele AMM's) kunnen worden geïnduceerd en geanalyseerd in het ernstige (>90%) eenzijdig 6-OHDA-laesie ratmodel van PD. We hebben ons protocol georganiseerd op basis van de eerdere literatuur en onze laboratoriumexpertise.

<table><tbody><tr><td>6-hydroxydopamine hydrobromide</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>H6507</td><td>Neurotoxin die degeneratie van catecholaminerge terminalen veroorzaakt</td></tr><tr><td>Benzerazide hydrochloride</td><td>Sigma</td><td>B7283</td><td>Perifere dopa-decarboxylase-remmer</td></tr><tr><td>Camera Bullet IR Turbo HD (HD-TVI)  2.8mm B</td><td>HIKVISION</td><td>DS-2CE16C0T-IRP</td><td>Camera gebruikt om al het gedrag op te nemen</td></tr><tr><td>Imipramine hidrochloride</td><td>Alfa Aesar</td><td>J63723</td><td>Norepinefrinetransportremmer (NET) gebruikt om noradrenerge neuronen te beschermen tegen 6-OHDA</td></tr><tr><td>Ketamine hydrochloride</td><td>Ceva Animal Health</td><td></td><td>Anesthesie voor chirurgische ingreep</td></tr><tr><td>L-3,4-dihydroxyfenylalanine (L-DOPA) methylester (hydrochloride)</td><td>Cayman Chemical Company</td><td>16149</td><td>Dopamine precursor</td></tr><tr><td>Spiegels</td><td></td><td></td><td>Gebaten om het gedrag van dieren tijdens experimenten in alle richtingen te observeren</td></tr><tr><td>Naalden 0,30 x 13 mm</td><td>PrecisionGlide</td><td></td><td>Naalden gebruikt om geneesmiddelen te injecteren</td></tr><tr><td>Natriumchloride (NaCl)</td><td>Samtec</td><td></td><td>Zout</td></tr><tr><td>Spuiten 1 ml steriele</td><td>BD Plastipak</td><td></td><td>Spuiten gebruikt om geneesmiddelen te injecteren</td></tr><tr><td>Transparante cilinders</td><td></td><td></td><td>Gebaten om het gedrag van dieren tijdens experimenten op te nemen</td></tr><tr><td>Xylazinesuccinate</td><td>Ceva Animal Health</td><td></td><td>Sedativum, pijnstiller en spierverslapper voor chirurgische ingreep</td></tr></tbody></table>

rating l-dopa-geïnduceerde dyskinesieën in het eenzijdig 6-ohda-laesie rattenmodel van de ziekte van parkinson

Rating L-DOPA-Induced Dyskinesias in the Unilaterally 6-OHDA-Lesioned Rat Model of Parkinson's Disease

Levodopa-geïnduceerde dyskinesieën (LIDs) verwijzen naar motorische complicaties die voortvloeien uit langdurige toediening van L-DOPA aan patiënten met de ziekte van Parkinson (PD). Het meest voorkomende patroon dat in de kliniek wordt waargenomen, is de piekdosis dyskinesie die bestaat uit klinische manifestaties van choreiforme, dystonische en ballistische bewegingen. Het 6-hydroxydopamine (6-OHDA) rattenmodel van PD bootst verschillende kenmerken van LIDs na. Na herhaalde toediening van L-DOPA vertonen 6-OHDA-laesie ratten dyskinetische bewegingen (bijv. Abnormale onwillekeurige bewegingen, AAM's). Dit protocol laat zien hoe AIMs kunnen worden geïnduceerd en geanalyseerd bij ratten met 6 OHDA-laesie met 90% -95% dopaminerge uitputting in de nigrostriatale route. Herhaalde toediening (3 weken) van levodopa (5 mg/kg, gecombineerd met 12,5 mg/kg benserazide) kan de ontwikkeling van amm's induceren. De analyse van het tijdsverloop onthult een significante toename van AMM's na 30-90 minuten (piekdosis dyskinesie). Knaagdiermodellen van LIDs zijn een belangrijk preklinisch hulpmiddel om effectieve antidyskinetische interventies te identificeren.

Hoewel de AMM-patronen die bij ratten worden waargenomen eenvoudiger en beperkter zijn in vergelijking met die waargenomen bij mensen en niet-menselijke primaten, reproduceert dit model zowel hyperkinetische als dystonisch-achtige bewegingen geïnduceerd door chronische levodopa-toediening. Hier presenteren we gegevens verzameld van een groep (n = 10) van eenzijdig 6-OHDA-laesie ratten die chronisch worden behandeld met levodopa (5 mg / kg gecombineerd met 12,5 mg / kg benserazide) gedurende 3 weken (maandag tot vrijdag)....

Knaagdiermodellen van levodopa-geïnduceerde dyskinesieën zijn onschatbare hulpmiddelen om therapeutische interventies te identificeren om de ontwikkeling te verzwakken of de manifestaties te verlichten die ontstaan als gevolg van de herhaalde toediening van L-DOPA. Dit protocol laat zien hoe dyskinetische bewegingen kunnen worden geïnduceerd en geanalyseerd in het eenzijdig 6-OHDA-laesie rattenmodel van de ziekte van Parkinson.

Rating L-DOPA-geïnduceerde dyskinesieën in het eenzijdig 6-OHDA-laesie rattenmodel van de ziekte van Parkinson

L-DOPA-induced dyskinesias (LIDs) refer to motor complications that arise from prolonged L-DOPA administration to patients with Parkinson's disease (PD). ...

Rating L-DOPA-geïnduceerde dyskinesieën in het 6-hydroxydopamine ratmodel van de ziekte van Parkinson is een belangrijk preklinisch hulpmiddel om effectieve antidyskinetische interventies te identificeren. Dit model is relatief eenvoudig, presenteert lage kosten en heeft overeenkomsten met wat er in de kliniek gebeurt. De procedure wordt gedemonstreerd door Danilo Leandro Ribeiro, promovendus in het laboratorium.Begin het experiment met Sprague-Dawley mannelijke ratten, met een gewicht van 200 tot 250 gram. Huis twee tot drie dieren per kooi onder de standaard laboratoriumomstandigheden met voedsel en water beschikbaar ad libitum. Vóór de operatie dient u de noradrenalinetransporterremmer, imipramine, intraperitoneaal aan de rat toe.Na bevestiging van de anesthesie door het gebrek aan reactie op teenknijpen, plaatst u de rat in een buikligging in het stereotaxische apparaat bovenop het verwarmingskussen. Zodra de rat is gepositioneerd, gebruikt u een scalpel om een incisie van één centimeter te maken in het gebied waar de micro-injectie zal optreden. Reinig vervolgens het schedelgebied met wattenstaafjes en zorg ervoor dat de bregma en lambda worden blootgesteld.Neem de mediale voo

rating-l-dopa-induced-dyskinesias-unilaterally-6-ohda-lesioned-rat

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Ziekte van Parkinson wordt veroorzaakt door het verlies van dopaminerge innervatie naar het striatum, die experimenteel kunnen worden geïnduceerd door 6-OH-dopamine. We beschrijven hoe u een stereotaxische laesie te voeren en op apomorfine-geïnduceerde rotatie gedrag bij muizen te controleren. Dit model is handig en betrouwbaar voor het testen van nieuwe therapieën voor de ziekte van Parkinson.

Muismodel voor de ziekte van Parkinson: van 6-OH Dopamine Laesie naar Behavioral Test

Een protocol voor het uitvoeren van unilaterale 6-OHDA letsels van de mediale voorhersenen bundel bij muizen wordt beschreven. Deze methode heeft een laag sterftecijfer (13,3%) met 89% van de overlevende dieren die&gt; 95% verlies van striatale dopamine en 90,63 ± -4,02% ipsiversive rotatie voorkeur voor de kant van de laesie.

Ontwikkeling van een eenzijdig-gelaedeerde 6-OHDA muismodel van de ziekte van Parkinson

This video demonstrates the process of inducing levodopa-induced dyskinesias in a Parkinson's rat model by administering levodopa alongside a dopamine conversion inhibitor. Repeated injections overstimulate the brain neurons, resulting in motor dysfunction.

Induction of Levodopa-Induced Dyskinesias in a Rat Model of Parkinson's Disease

Het 6-hydroxydopamine (6-OHDA) model wordt al tientallen jaren gebruikt om het begrip van de ziekte van Parkinson te bevorderen. In dit protocol laten we zien hoe unilaterale nigrostriatale laesies bij de rat kunnen worden uitgevoerd door 6-OHDA in de mediale voorhersenenbundel te injecteren, motorische tekorten te beoordelen en laesies te voorspellen met behulp van de staptest.

Het 6-hydroxydopamine rattenmodel van de ziekte van Parkinson

Dit artikel beschrijft methoden om levodopa-geïnduceerde dyskinesieën te induceren en te evalueren in een rattenmodel van de ziekte van Parkinson. Het protocol biedt gedetailleerde informatie over de intensiteit en frequentie van een reeks dyskinetische gedragingen, zowel dystonisch als hyperkinetisch, en biedt een betrouwbaar hulpmiddel om behandelingen te testen die gericht zijn op deze onvervulde medische behoefte.

Inductie en beoordeling van Levodopa-geïnduceerde dyskinesieën in een rattenmodel van de ziekte van Parkinson

Ole Isacson geeft een beknopt overzicht van de ziekte van Parkinson, de oorzaken ervan, therapeutische strategieën, en de vorderingen in het onderzoek van Parkinson.

Ole Isacson: ontwikkeling van nieuwe therapieën voor de ziekte van Parkinson

De geschoolde bereiken van schaal verdeelt de beweging door een voorpoot in een bereik voor voedsel te handelen in samengestelde elementen die elk worden geëvalueerd met een drie-punts schaal. De rating schaal is beschreven voor een normale rat en kan worden toegepast in de richting van de evaluatie van neurologische motorische stoornissen.

De structuur van Skilled voorpoot bereiken in het Rat: een beweging Rating Scale

Deze video laat zien hoe C. elegans te gebruiken om dopaminerge neuron neurodegeneratie te beoordelen als een model voor de ziekte van Parkinson. Verder worden genetische screens gebruikt om de factoren die een verbetering van degeneratie of neuroprotectieve identificeren.

Toepassing van een C. elegans Dopamine neuron degeneratie Assay voor de validatie van Potentieel de ziekte van Parkinson Genen

Kwantificering van DNA dubbel-strengs strepen met behulp van γH2AX vorming als een moleculaire marker is uitgegroeid tot een onmisbaar instrument in straling biologie. Hier laten we zien het gebruik van een immunofluorescentie assay voor de kwantificering van γH2AX foci na blootstelling van cellen aan straling.

Kwantificering van γH2AX Foci in reactie op ioniserende straling

Microscopische analyse van γH2AX foei, welke vorm na de fosforylatie van H2AX op Ser-139 in reactie op DNA dubbelstrengs breuken, is uitgegroeid tot een onmisbaar instrument in straling biologie. Hier hebben we gebruik gemaakt van een antilichaam aan mono-gemethyleerde histon H3 op lysine 4 als een epigenetische marker van actief transcriberen euchromatin, om de ruimtelijke verdeling van de straling-geïnduceerde γH2AX formatie binnen de kern te evalueren.

Evaluatie van de ruimtelijke verdeling van γH2AX volgende ioniserende straling

Leer hoe je L-DOPA-geïnduceerde dyskinesieën beoordeelt in het 6-OHDA-rattenmodel voor de ziekte van Parkinson. Deze methode maakt systematische scoring van axiale, ledemaat- en orolinguele bewegingen mogelijk.

Rating L-DOPA-geïnduceerde dyskinesieën in het eenzijdig 6-OHDA-laesie rattenmodel van de ziekte van Parkinson

Meer video's verkennen