Name: Inductie en beoordeling van Levodopa-geïnduceerde dyskinesieën in een rattenmodel van de ziekte van Parkinson (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-10-14T14:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 51 s
Description: Leer hoe je levodopa-geïnduceerde dyskinesieën induceert en beoordeelt in een rattenmodel van de ziekte van Parkinson. Deze methode kwantificeert intensiteit en frequentie van abnormale bewegingen voor therapeutisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We willen de strijd van iedereen met de ziekte van Parkinson en de kracht en veerkracht die ze elke dag tonen erkennen, vooral de geliefde vader van KSC, Mark Steece. Het hier vertegenwoordigde werk werd ondersteund door het National Institute of Neurological Disorders and Stroke (NS090107, NS110398) en het Parkinson Disease Foundation International Research Grant Program, nu de Parkinson Foundation. We willen ook Molly VanderWerp bedanken voor haar uitstekende redactionele hulp.

De hier gepresenteerde dieren werden onderhouden en behandeld in overeenstemming met de institutionele richtlijnen. Alle dierprocedures werden goedgekeurd door de Michigan State University Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) in overeenstemming met de federale en staatsvoorschriften.
1. Drugsvrije bevestiging van de 6-OHDA laesiestatus
<ol><li>Posturale staarthangtest 11,12,13 OPMERKING: Beoordeel de laesiestatus ten minste 1 week na inductie van 6-OHDA-laesies (zie 9,10,35 voor details over laesie) bij proefpersonen (bijv. mannelijke of vrouwelijke, volwassen Sprague Dawley of Fisher 344-ratten).<ol>
<li>Hang de rat ongeveer 6 cm boven zijn kooi en houd stevig vast aan de basis van de staart, gedurende ~ 5 s.</li>
		<li>Noteer de richting van lichaamsconwrongie als + voor een succesvol laesiedier dat contralateraal naar de laesiezijde draait en - bij gebrek aan draaien of draaien in beide richtingen.</li>
		<li>OPMERKING: Deze tests zijn optioneel, maar worden aanbevolen. Zie 14,15,16,17 voor aanvullende drugsvrije testopties/variaties.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Stapaanpassing sleeptest (aangepast vanaf16) OPMERKING: Beoordeel de laesiestatus ten minste 1 week na unilaterale 6-OHDA-laesie-inductie bij proefpersonen (bijv. mannelijk of vrouwelijk, volwassen Sprague Dawley of Fisher 344 ratten).<ol>
<li>Houd de rat bij de basis van zijn staart en til de achterpoten van het oppervlak met ~ 6 cm; sleep achteruit over een vlak, glad maar niet glad oppervlak, ~ 75 cm, over 5-10 s.</li>
		<li>Observeer en registreer het aantal tikkende / stapaanpassingsbewegingen van elke voorpoot gedurende drie herhaalde tests.</li>
		<li>Scoor het onderwerp als + voor succesvolle unilaterale laesie wanneer 0-2 voorpootkranen contralateraal aan de laesiezijde worden waargenomen, samen met snel tikken (~ 10 tikken) van de voorepaw ipsilateraal naar de laesiezijde (bijv. Dieren die eenzijdig aan de linkerkant zijn geschaad, vertonen een taptekort (0-2 tikken) met de contralaterale rechtervoorpoot).</li>
		<li>Daarentegen, scoor matig tot snel tikken (5-10 tikken) van beide voorpoten als - om onvolledige of onbekende laesiestatus aan te geven. OPMERKING: Een angstig dier kan snel tikken / stapaanpassing vertonen, zelfs als het met succes is beschadigd. Als dit wordt vermoed, plaats de rat dan terug in hun thuiskooi en test ≥30 minuten later opnieuw.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Bereiding van reagentia en benodigdheden
<ol><li>Bepaal L-3,4-dihydroxyfenylalaninemethylesterhydrochloride (levodopa of levodoPA) en benserazidehydrochloride, een perifere decarboxylaseremmer (zie Tabel met materialen), beoordelingsfrequentie en experimentele tijdlijn die geschikt is voor de onderzoeksvraag 12,18,19,20 (figuur 1). OPMERKING: Onderzoeksvragen kunnen worden gesteld om een willekeurig aantal vragen te stellen, variërend van de vraag of een specifieke therapie bestaande LID kan verminderen of inductie van LID kan voorkomen. Ze kunnen ook onderzoeken of de therapeutische werkzaamheid afhankelijk is van de dosis levodopa of dat de expressie en / of therapeutische werkzaamheid van LID varieert afhankelijk van het geslacht, de soort en de leeftijd van het onderwerp.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62970/62970fig1v3.jpg"> Figuur 1: Voorbeeld van de tijdlijn van de behandeling. Voorbeeld levodopa dosis-escalatie tijdlijn van 12 weken in totale lengte, met 8 weken van 3 weken van 3 weken na 6-OHDA laesie en 4 weken na experimentele behandeling. In dit voorbeeld wordt levodopa subcutaan 5x per week (maandag-vrijdag) geïnjecteerd op ongeveer hetzelfde tijdstip elke dag, gedurende 2 weken bij elke voorgeschreven dosis levodopa (3, 6, 9 en 12 mg / kg). Gedragsmatige LID-beoordelingen vinden plaats op dag 1, 6 en 10 van elk levodopa-doseringsniveau. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62970/62970fig01large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
<ol start="2"><li>Weeg ratten wekelijks om de juiste hoeveelheid geneesmiddel te berekenen op basis van de voortdurende gewichtsveranderingen tijdens het onderzoek. OPMERKING: Vanwege de verhoogde activiteit bij LID + -ratten, is er potentieel voor gewichtsverlies met langdurige levodopa-behandelingen. Als gewichtsverlies optreedt, geef ratten dan voedingsrijke, zeer smakelijke traktaties (zie Tabel met materialen) na levodopa-injecties.</li>
	<li>Bereken de hoeveelheid levodopa en benserazide die nodig is voor elke wekelijkse concentratie, weeg gelyofiliseerde aliquots af voor elke dag van injectie en bewaar in combinatie gedurende 1-2 weken bij -20 °C in glazen amberkleurige injectieflacons tot de dag van de behandeling. OPMERKING: De streefdosis is 12 mg/kg of 12 mg L-DOPA/1000 g lichaamsgewicht. Voorbeeld van berekeningen voor het bepalen van de hoeveelheid levodopa en zoutoplossing die nodig is voor elke dag van een week met behulp van 12 mg levodopa/kg lichaamsgewicht bij een injectievolume van 1 cc/kg rattengewicht wordt gegeven in aanvullend dossier 1.</li>
</ol>3. Ruimte en kooiopstelling
<ol><li>Op de eerste dag van de levodopa-behandeling 3-4 weken na 6-OHDA-laesiechirurgie, breng ratten over naar een enkele behuizing, inclusief IACUC-goedgekeurde verrijking.</li>
	<li>Onderhoud gedurende de hele studie in een enkele behuizing om interferentie van collega's met gedragsbeoordelingen te voorkomen.</li>
	<li>Plaats de thuiskooien op een stalen draadrek, gedraaid in een hoek van ongeveer 45° voor optimaal zicht op de rat (figuur 2A). Draai de identificatietags (figuur 2B) omhoog en verwijder waterflessen, voedselrekken en alle soorten verrijking in de kooi (figuur 2C) om interferentie met gedragsbeoordelingen te voorkomen.</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62970/62970fig02.jpg"> Figuur 2: Voorbeeld van de kooi die is opgezet voor LID-classificaties van grootschalige rattenexperimenten. (A) Meerdere kooien kunnen worden ingesteld voor LID-classificatie met behulp van grote metalen rekken die een optimaal zicht op elk dier mogelijk maken. Kooien moeten in een hoek van 45 ° uit elkaar worden gespreid met ID-kaarten naar boven geklapt (B), voedsel, waterflessen, nestmateriaal en andere verrijking verwijderd om visuele duisternis van de rat en afleiding voor de rat te beperken tijdens het onderzoeken van dyskinetisch gedrag (C). De metalen rekken moeten een paar meter van elke muur verwijderd zijn, zodat de beoordelaar de rat aan de voor- of achterkant van de kooi kan onderzoeken als dat nodig is. Het is essentieel om verrijkingsapparaten (bijv. C-rode rattenretraitehuizen) te labelen met individuele dier-ID's om ze te vervangen in dezelfde kooi waaruit ze kwamen. Dit is vooral belangrijk bij het gebruik van dieren van verschillende geslachten om de stress voor de proefpersonen niet te verhogen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62970/62970fig02large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
4. Levodopa-injecties en dyskinesiebeoordeling
<ol><li>Subcutane injecties van levodopa21,22<ol>
<li>Voeg onmiddellijk voorafgaand aan de dagelijkse injectie van levodopa het juiste volume steriele zoutoplossing toe aan het voorgewogen gelyofiliseerde levodopa- en benserazidemengsel in de amberkleurige injectieflacon en schud goed gedurende 10 s (stap 2.3). OPMERKING: Het doelinjectievolume is 1 ml/1000 g lichaamsgewicht (met 12 mg L-DOPA per ml). Het volume van de steriele zoutoplossing is afhankelijk van het aantal dieren per onderzoek.</li>
		<li>Vul afzonderlijke spuiten (bijv. 1,0 of 0,5 ml met 26 G naald) met het vereiste volume voor elk dier (1 ml/kg rattengewicht) en label elke spuit met individuele dieridentificatie. OPMERKING: Bewaar de gevulde spuiten beschermd tegen licht in steriele zakjes tot het moment van injectie. Levodopa oxideert snel in aanwezigheid van zuurstof en licht in een waterige omgeving 23,24,25,26.</li>
		<li>Breng de eerste kooi naar de injectiebank.</li>
		<li>Verwijder de rat uit zijn kooi en plaats deze op het injectieoppervlak.</li>
		<li>Houd het hoofd en de schouders voorzichtig vast tegen het oppervlak waarop de rat rust met de palm van de niet-dominante hand.</li>
		<li>Krab voorzichtig de huid op de rug boven het schouderblad met de duim en wijsvinger van de niet-dominante hand, injecteer levodopa-volume met de dominante hand in de onderhuidse ruimte tussen / onder de vingers, waarbij de naald zo parallel mogelijk aan het lichaam blijft om intramusculaire injectie te voorkomen. OPMERKING: De ratten worden niet verdoofd voor de injectie.</li>
		<li>Gooi elke gebruikte individuele spuit weg in een scherpe container.</li>
		<li>Vervang de rat in zijn individuele kooi en voeg nutritioneel complete traktaties toe, behalve op LID-beoordelingsdagen om interferentie met gedragsbeoordelingen te voorkomen tot nadat de beoordelingen zijn voltooid.</li>
		<li>Stel de timer in op 1-2 minuten, afhankelijk van de gewenste beoordelingstijd en het aantal ratten in het onderzoek op beoordelingsdagen. Haal de volgende kooi op en injecteer de volgende rat wanneer de timer dit aangeeft.</li>
		<li>Herhaal dit en injecteer elke 1-2 minuten een rat, totdat alle ratten zijn geïnjecteerd.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Levodopa-geïnduceerde dyskinesie rating post-injectie<ol>
<li>Beoordeel de intensiteit (tabel 1) en frequentie (tabel 2) van dystonische en hyperkinetische dyskinesiebewegingen op het gewenste aantal tijdspunten, waaronder het eerste begin van LID-gedrag, piekgedrag en de fase van achteruitgang (zie aanvullend bestand 2 voor een voorbeeld van lid-beoordelingslogboekblad).</li>
		<li>Voor mannelijke en vrouwelijke volwassen Sprague Dawley- of Fisher 344-ratten en een steekproefgrootte van N = 40 ratten, begint u de dyskinesiebeoordelingen 20 minuten na de eerste levodopa-injectie en vervolgens met intervallen van 50 minuten tot 220 of 270 minuten na de injectie, afhankelijk van wanneer het LID-gedrag bij 90% -100% van de ratten is gestopt.</li>
		<li>Als u intervallen van 1 minuut gebruikt, stelt u een timer in voor 1 minuut. Beoordeel de eerste rat gedurende één minuut. Ga naar de volgende rat en beoordeel deze gedurende 1 minuut. Ga door alle ratten, met tussenpozen van 1 minuut.</li>
		<li>Zorg ervoor dat een timer zichtbaar naast de kooi wordt geplaatst, zodat de LID-gedragsintensiteit (tabel 1) kan worden waargenomen terwijl de frequentie van een bepaald gedrag (tabel 2) tijdens de beoordelingsperiode wordt geschat.</li>
		<li>Nadat de beoordelingen voor het eerste tijdspunt zijn voltooid, begint u opnieuw met de eerste rat op het volgende tijdstip (bijv. 70 minuten na injectie) en gaat u verder met het gewenste interval (bijv. elke 50 minuten) totdat alle tijdspunten zijn voltooid. OPMERKING: Vanwege de overlap van levodopa-injectie- en LID-beoordelingstaken, zijn twee personen nodig op de beoordelingsdagen, één voor injecteren en één voor gedragsbeoordelingen.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

Er werden geen belangenconflicten aangegeven.

Hier worden details gepresenteerd voor de reproduceerbare inductie en beoordeling van LIDs in een parkinsonratmodel na unilaterale 6-OHDA-laesie van het nigrostriatale DA-systeem. Hoewel ooit werd gedacht dat knaagdieren geen LID ontwikkelden en dat rotatie-asymmetrie het analoog kan zijn van LID bij ratten31, zijn ratten- en muismodellen de afgelopen twee decennia gekarakteriseerd en zijn ze een goed geaccepteerd hulpmiddel voor LID-onderzoek 15,32,33,34.<sup cl...

Hoewel het meer dan 50 jaar geleden is dat levodopa (levodopa) voor het eerst werd geïntroduceerd als een behandeling voor personen met PD 1,2, blijft het opmerkelijk genoeg de meest effectieve therapie voor parkinsonmotorische symptomen. De klinische motorische symptomen geassocieerd met PD komen voort uit het verlies van dopamine (DA) neuronen in de substantia nigra (SN) pars compacta, wat resulteert in de dramatische afname van beschikbare dopamine in het striatum. Levodopa herstelt effectief de striatale DA-niveaus, wat resulteert in motorisch voordeel vroeg in de ziekte 3,4. In ongelegen zin zullen de meeste personen met PD bij langdurige behandeling levodopa-geïnduceerde dyskinesieën (LID) ontwikkelen, waaronder chorea, dystonie en athetose, die vaak een aanzienlijke invloed hebben op de activiteiten van het dagelijks leven 5,6,7.
Hoewel er verschillende gedragsmodellen van LID bij knaagdieren bestaan, hebben verschillen in modellering en gedragsbeoordeling van LIDs de reproduceerbaarheid van resultaten tussen laboratoria in twijfel getrokken, evenals de betrouwbaarheid van deze experimentele hulpmiddelen voor preklinisch PD-onderzoek. Ontwikkeld in samenwerking met een klinische bewegingsstoornisspecialist8, is het huidige protocol een eenvoudige methode voor LID-inductie en -classificatie en is geschikt voor gebruik in een rattenmodel van PD met behulp van 6-hydroxydopamine (6-OHDA) -geïnduceerde unilaterale ninigrale laesie 9,10. De LID-beoordelingsschaal die hier wordt verstrekt, omvat scores voor zowel de intensiteit als de frequentie van dyskinetisch gedrag in verschillende individuele lichaamsdelen. Relevante informatie met betrekking tot workflowoptimalisatie van experimenten en de juiste zorg en behandeling van parkinson- en dyskinetische dieren wordt ook verstrekt.

<table><tbody><tr><td>&nbsp;100 Minuten Digitale Timer</td><td>Staples</td><td>1111764</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;Compass CX Compact Scale</td><td>Ohaus</td><td>30428202</td><td></td></tr><tr><td>5-(2-aminoethyl)-1,2,4-benzenetriol, monohydrobromide</td><td>Cayman Chemicals</td><td>25330</td><td>6-OHDA is een catecholaminerge neurotoxine die wordt gebruikt om dopaminerge laesies en parkinson-symptomen bij knaagdieren te induceren.</td></tr><tr><td>Allentown kooien</td><td>Allentown, LLC</td><td>Rat900</td><td>Allentown kooien bieden de mogelijkheid om de ratten van alle kanten te bekijken.</td></tr><tr><td>BD Allergist Trays met permanent bevestigde naald</td><td>BD</td><td>BD 305540</td><td>Voor subcutane L-DOPA injecties</td></tr><tr><td>Benserazide hydrochloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B7283</td><td>Benserazide is een perifere decarboxylase-remmer die wordt gebruikt met L-DOPA om dyskinesie te induceren in knaagdiermodellen van PD.</td></tr><tr><td>Glazen barnsteenkleurige scintillatiebuisjes</td><td>Thermo Scientific</td><td>B7921</td><td>Gezet voor opslag van L-DOPA/benserazide bij -20 &deg;C totdat gemengd met steriel zoutoplossing.</td></tr><tr><td>L-3,4-Dihydroxyfenylalanine methylester hydrochloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D1507</td><td>L-3,4-Dihydroxyfenylalanine methylester is een voorloper van&nbsp;L-DOPA die de bloed-hersenbarrière overschrijdt en wordt gebruikt om parkinson-symptomen bij knaagdieren te behandelen.</td></tr><tr><td>Paper Mate Sharpwriter mechanische potloden</td><td>Staples</td><td>107250</td><td></td></tr><tr><td>Rodent voedingstechnisch volledige verrijkingssnacks</td><td>Bio-Serv</td><td>F05478</td><td></td></tr><tr><td>Ronde ijsemmer met deksel, 2,5 L</td><td>Corning</td><td>432129</td><td></td></tr><tr><td>Standaard plastic klembord</td><td>Staples</td><td>1227770</td><td></td></tr><tr><td>Stalen draad 6' lange verplaatsbare legplanken</td><td>Uline</td><td>H9488</td><td>Breedte/hoogte kan worden aangepast aan behoefte/aantal ratten per experiment</td></tr><tr><td>Steriele zoutoplossing 0,9%</td><td>Covidien/Argyle</td><td>1020</td><td>Voor menging met L-DOPA/benserazide vóór subcutane injecties.</td></tr></tbody></table>

inductie en beoordeling van levodopa-geïnduceerde dyskinesieën in een rattenmodel van de ziekte van parkinson

Induction and Assessment of Levodopa-induced Dyskinesias in a Rat Model of Parkinson's Disease

Levodopa (levodopa) blijft de gouden standaard therapie die wordt gebruikt om de ziekte van Parkinson (PD) motorische symptomen te behandelen. Echter, ongewenste onwillekeurige bewegingen bekend als levodopa-geïnduceerde dyskinesieën (LIDs) ontwikkelen zich met langdurig gebruik van deze dopamine voorloper. Geschat wordt dat de incidentie van LIDs escaleert tot ongeveer 90% van de personen met PD binnen 10-15 jaar na de behandeling. Het begrijpen van de mechanismen van deze ziekte en het ontwikkelen van zowel nieuwe als effectieve anti-dyskinesiebehandelingen vereist consistente en nauwkeurige modellering voor preklinische testen van therapeutische interventies. Een gedetailleerde methode voor betrouwbare inductie en uitgebreide beoordeling van LIDs na 6-OHDA-geïnduceerde ninigrale laesie in een rattenmodel van PD wordt hier gepresenteerd. Betrouwbare LID-beoordeling bij ratten biedt een krachtig hulpmiddel dat gemakkelijk kan worden gebruikt in laboratoria om opkomende therapieën te testen die gericht zijn op het verminderen of elimineren van deze veel voorkomende door behandeling veroorzaakte last voor personen met PD.

LIDs bij parkinsonratten kunnen zich manifesteren als een reeks abnormale onwillekeurige bewegingen (AIM's), waaronder dystonisch, hyperkinetisch en stereotiep gedrag. Lid-beoordelingscriteria voor dergelijk gedrag worden hier gepresenteerd om zowel intensiteit (tabel 1) als frequentie (tabel 2) te omvatten. Dit biedt een algemene LID-ernstscore voor elke rat die zowel de kwaliteit (intensiteit) als de hoeveelheid tijd weergeeft die wordt besteed (frequentie) aan dit gedrag op elk beoord...

Dit artikel beschrijft methoden om levodopa-geïnduceerde dyskinesieën te induceren en te evalueren in een rattenmodel van de ziekte van Parkinson. Het protocol biedt gedetailleerde informatie over de intensiteit en frequentie van een reeks dyskinetische gedragingen, zowel dystonisch als hyperkinetisch, en biedt een betrouwbaar hulpmiddel om behandelingen te testen die gericht zijn op deze onvervulde medische behoefte.

Inductie en beoordeling van Levodopa-geïnduceerde dyskinesieën in een rattenmodel van de ziekte van Parkinson

Levodopa (L-DOPA) remains the gold-standard therapy used to treat Parkinson&#39;s disease (PD) motor symptoms. However, unwanted involuntary movements ...

Ons protocol biedt een gedetailleerde methode voor een betrouwbare inductie en uitgebreide beoordeling van levodopa-geïnduceerde dyskinesie in een rattenmodel van de ziekte van Parkinson. Het belangrijkste voordeel van onze dyskinesiebeoordelingsschaal is dat het kwantificering mogelijk maakt van zowel de intensiteit van een bepaalde abnormale onwillekeurige beweging als de hoeveelheid tijd die wordt besteed aan het vertonen van dat gedrag. Betrouwbare diermodellen van levodopa-geïnduceerde dyskinesie zijn van cruciaal belang bij het realiseren van het uiteindelijke doel van het vinden van effectieve behandelingen om de bijwerking bij personen met de ziekte van Parkinson te verminderen of te elimineren.Begin de voorbereiding op het experiment door ratten wekelijks te wegen om de juiste hoeveelheid geneesmiddel te berekenen op basis van de gewichtsveranderingen. Voorzie de ratten van qua voedingswaarde complete en zeer smakelijke lekkernijen. Op de eerste dag van de levodopa-behandeling brengen ratten over naar een enkele behuizing die is voorzien van institutionele verrijking door het Comité voor dierverzorging en -gebruik.En houd ratten gedurende de hele studie in de enkele behuizing om interferentie van collega's met de gedragsbeoordelingen te voorkomen. Verwijder op de dyskinesiebeoordelingsdagen waterflessen, voedselrekken en de verrijking in de kooi om interferentie met de gedragsbeoordelingen te voorkomen en plaats de kooien op een stalen draadrek in een hoek van ongeveer 45 graden en draai vervolgens de identificatielabels naar boven. Voeg vóór de levodopa-injectie het juiste volume steriele zoutoplossing toe aan het voorweegnet gelyofiliseerde levodopa- en benserazidemengsel in de amberkleurige injectieflacon en schud goed gedurende 10 seconden.Vul onmiddellijk na de bereiding het vereiste volume van het levodopa-benserazidemengsel voor elk dier in individuele spuiten die zijn gemonteerd met een naald van 26 gauge en label elke spuit met een individuele dieridentificatie. Nadat u de eerste kooi naar de injectiebank hebt gebracht, verwijdert u de rat uit zijn kooi om deze op het injectieoppervlak te plaatsen. Gebruik de niet-dominante hand om het hoofd en de schouders van de rat met de handpalm tegen het oppervlak te houden en de huid op de rug boven het schouderblad te krabben met de duim en wijsvinger.Gebruik de dominante hand om het levodopa-volume in de onderhuidse ruimte tussen de vingers te injecteren, waarbij de naald parallel aan het lichaam blijft om intramusculaire injectie te voorkomen. Verplaats de rat na de injectie in de kooi. Stel vervolgens de timer in op één tot twee minuten en herhaal de procedure waarbij elke één tot twee minuten een rat wordt geïnjecteerd totdat alle ratten zijn geïnjecteerd.Plaats op de beoordelingsdag een timer naast de kooi om levodopa-geïnduceerde dyskinesie of LID-gedragsintensiteit te observeren terwijl u de frequentie van een bepaald gedrag tijdens de beoordelingsperiode schat. Beoordeel de intensiteit en frequentie van de dystonische en hyperkinetische dyskinesiebewegingen, inclusief het eerste begin van LID-gedrag, piekgedrag en de fase van achteruitgang op het gewenste aantal tijdstippen. Als u beoordelingsintervallen van één minuut gebruikt, stelt u een timer in voor één minuut om de eerste rat te beoordelen en de beoordeling door alle ratten met intervallen van één minuut voort te zetten.De LID-beoordeling voor abnormaal onvrijwillig gedrag bij de Parkinson-ratten werd gecategoriseerd om de intensiteit en frequentie van het gedrag op te nemen. Een reeks abnormale onwillekeurige bewegingen, waaronder dystonisch, hyperkinetisch en stereotiep gedrag, werden waargenomen bij ratten. De representatieve analyse geeft een voorbeeld van de gegevens die worden gepresenteerd als piekdosis LID over de gehele experimentele tijdlijn en het doseringsschema.De piekdosis LID werd gedefinieerd als een tijd waarin de groepsgemiddelde LID-score het grootst was. Bovendien werden de LID-beoordelingsgegevens onderzocht over elk dagelijks beoordelingstijdsverloop bij verschillende L-DPOA-concentraties met de groepen gecombineerd en uitgezet als individuele dieren. Postmortaal weefsel van gedragsmatig geëvalueerde proefpersonen kan worden gebruikt om moleculaire mechanismen te onderzoeken die verband houden met levodopa-geïnduceerde dyskinesieën en de impact van therapeutische interventies op dergelijke moleculaire mechanismen.Diermodellen van levodopa-geïnduceerde dyskinesie zijn nuttig geweest bij het ophelderen van verschillende mechanismen waarvan wordt gedacht dat ze ten grondslag liggen aan deze gedragsstoornis. Een dergelijk begrip heeft geleid tot preklinische en klinische evaluatie van verschillende doelen.

induction-assessment-levodopa-induced-dyskinesias-rat-model-parkinson

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Ziekte van Parkinson wordt veroorzaakt door het verlies van dopaminerge innervatie naar het striatum, die experimenteel kunnen worden geïnduceerd door 6-OH-dopamine. We beschrijven hoe u een stereotaxische laesie te voeren en op apomorfine-geïnduceerde rotatie gedrag bij muizen te controleren. Dit model is handig en betrouwbaar voor het testen van nieuwe therapieën voor de ziekte van Parkinson.

Muismodel voor de ziekte van Parkinson: van 6-OH Dopamine Laesie naar Behavioral Test

Een protocol voor het uitvoeren van unilaterale 6-OHDA letsels van de mediale voorhersenen bundel bij muizen wordt beschreven. Deze methode heeft een laag sterftecijfer (13,3%) met 89% van de overlevende dieren die&gt; 95% verlies van striatale dopamine en 90,63 ± -4,02% ipsiversive rotatie voorkeur voor de kant van de laesie.

Ontwikkeling van een eenzijdig-gelaedeerde 6-OHDA muismodel van de ziekte van Parkinson

Dopamine vervanging farmacotherapie met L-dopa is de meest gebruikte symptomatische behandeling van Parkinson, maar gaat gepaard met bijwerkingen zoals onwillekeurige abnormale bewegingen, genoemd...

MALDI massaspectrometrie Imaging van neuropeptiden bij de ziekte van Parkinson

This video demonstrates the process of inducing levodopa-induced dyskinesias in a Parkinson's rat model by administering levodopa alongside a dopamine conversion inhibitor. Repeated injections overstimulate the brain neurons, resulting in motor dysfunction.

Induction of Levodopa-Induced Dyskinesias in a Rat Model of Parkinson's Disease

De ziekte van Parkinson en bewegingsstoornissen in het algemeen, gevoelig en betrouwbaar gedrag assays zijn essentieel voor het testen van nieuwe potentiële geneesmiddelen. We beschrijven hier een beheersbare batterij sensorimotorische tests voor muizen die gevoelig zijn voor verschillende mate van schade aan het nigrostriatale systeem en nuttig voor preklinische studies.

Beoordeling van Sensorimotor Functie in muismodellen van de ziekte van Parkinson

We beschrijven de oprichting van een lymfkliertest model voor de ziekte van Parkinson met behulp van MPTP en gedrags evaluaties met behulp van cilinder en open veldproeven voor het meten van de motorische functie. We gebruiken dan levodopa een voorbeeldfunctie te laten zien hoe dit model in de studie van PD drugs van toepassing.

Gedrags evaluaties van spontane voortbewegen in een lymfkliertest MPTP-geïnduceerde ziekte Parkinson's Model

Wij bieden een protocol voor het genereren van een farmacologische DYT /PARK-ATP1A3 dystonie muis model via implantatie van canules in basale ganglia en cerebellum aangesloten op osmotische pompen. We beschrijven de inductie van dystonie-achtige bewegingen via toepassing van een motorische uitdaging en de karakterisering van het fenotype via gedragsscoresystemen.

Implantatie van osmotische pompen en inductie van stress om een symptomatisch, farmacologisch muismodel voor DYT/PARK-ATP1A3 Dystonie vast te stellen

Hier beschrijven we het RatWalker-systeem, gebouwd door het MouseWalker-apparaat opnieuw te ontwerpen om tegemoet te komen aan de toegenomen grootte en het gewicht van ratten. Dit systeem maakt gebruik van gefrustreerde totale interne reflectie (FTIR), snelle video-opname en open-access analysesoftware om loopparameters te volgen en te kwantificeren.

Het ratwalkersysteem toepassen voor loopanalyse in een genetisch rattenmodel van de ziekte van Parkinson

Het 6-hydroxydopamine (6-OHDA) model wordt al tientallen jaren gebruikt om het begrip van de ziekte van Parkinson te bevorderen. In dit protocol laten we zien hoe unilaterale nigrostriatale laesies bij de rat kunnen worden uitgevoerd door 6-OHDA in de mediale voorhersenenbundel te injecteren, motorische tekorten te beoordelen en laesies te voorspellen met behulp van de staptest.

Het 6-hydroxydopamine rattenmodel van de ziekte van Parkinson

Knaagdiermodellen van levodopa-geïnduceerde dyskinesieën zijn onschatbare hulpmiddelen om therapeutische interventies te identificeren om de ontwikkeling te verzwakken of de manifestaties te verlichten die ontstaan als gevolg van de herhaalde toediening van L-DOPA. Dit protocol laat zien hoe dyskinetische bewegingen kunnen worden geïnduceerd en geanalyseerd in het eenzijdig 6-OHDA-laesie rattenmodel van de ziekte van Parkinson.

Rating L-DOPA-geïnduceerde dyskinesieën in het eenzijdig 6-OHDA-laesie rattenmodel van de ziekte van Parkinson

Leer hoe je levodopa-geïnduceerde dyskinesieën induceert en beoordeelt in een rattenmodel van de ziekte van Parkinson. Deze methode kwantificeert intensiteit en frequentie van abnormale bewegingen voor therapeutisch onderzoek.

Inductie en beoordeling van Levodopa-geïnduceerde dyskinesieën in een rattenmodel van de ziekte van Parkinson

Meer video's verkennen