Name: Het genereren van transgenen en knock-outs in strongyloides soorten door micro-injectie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-10-07T14:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 42 s
Description: Leer intragonadale micro-injectie voor transgenese en knock-outs in Strongyloides stercoralis en S. ratti. Deze methode maakt genetische manipulatie van parasitaire nematoden mogelijk voor onderzoek naar ontwikkeling en parasitisme.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

pPV540 en pPV402 waren vriendelijke geschenken van Dr. James Lok aan de Universiteit van Pennsylvania. Wij danken Astra Bryant voor de nuttige reacties op het manuscript. Dit werk werd gefinancierd door een Burroughs-Wellcome Fund Investigators in de Pathogenesis of Disease Award, een Howard Hughes Medical Institute Faculty Scholar Award en National Institutes of Health R01 DC017959 (E.A.H.).

<ol><li>Krolewiecki, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+public+health+response+against+Strongyloides+stercoralis%3A+time+to+look+at+soil-transmitted+helminthiasis+in+full%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Neglected+Tropical+Diseases%22%5BJournal%5D)">A public health response against Strongyloides stercoralis: time to look at soil-transmitted helminthiasis in full.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 7 (5), 2165(2013).</li>
<li>Buonfrate, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+global+prevalence+of+Strongyloides+stercoralis+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Pathogens%22%5BJournal%5D)">The global prevalence of Strongyloides stercoralis infection.</a> Pathogens. 9 (6), 468(2020).</li>
<li>Castelletto, M. L., Gang, S. S., Hallem, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+functional+genomics+for+parasitic+nematodes+of+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Recent advances in functional genomics for parasitic nematodes of mammals.</a> Journal of Experimental Biology. 223, Pt Suppl 1 206482(2020).</li>
<li>Evans, T. C., et al. Transformation and microinjection. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aEvans%2C+TC+%22WormBook%22">WormBook</a>. , ed. The C. elegans Research Communnity (2006).</li>
<li>Lok, J. B., Unnasch, T. R., et al. Transgenesis in animal parasitic nematodes: Strongyloides spp. and Brugia spp. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLok%2C+JB+%22WormBook%22">WormBook</a>. , ed. The C. elegans Research Communnity (2013).</li>
<li>Shao, H. G., Li, X. S., Lok, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heritable+genetic+transformation+of+Strongyloides+stercoralis+by+microinjection+of+plasmid+DNA+constructs+into+the+male+germline%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+for+Parasitology%22%5BJournal%5D)">Heritable genetic transformation of Strongyloides stercoralis by microinjection of plasmid DNA constructs into the male germline.</a> International Journal for Parasitology. 47 (9), 511-515 (2017).</li>
<li>Schafer, T. W., Skopic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parasites+of+the+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Gastroenterology+Reports%22%5BJournal%5D)">Parasites of the small intestine.</a> Current Gastroenterology Reports. 8 (4), 312-320 (2006).</li>
<li>Stiernagle, T. Maintenance of C. elegans. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aStiernagle%2C+T+%22The+C.+elegans+Research+Community%2C+WormBook%22">The C. elegans Research Community, WormBook</a>. , (2006).</li>
<li>Gang, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+mutagenesis+in+a+human-parasitic+nematode%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Targeted mutagenesis in a human-parasitic nematode.</a> PLoS Pathogens. 13 (10), 1006675(2017).</li>
<li>Lok, J. B. Strongyloides stercoralis: a model for translational research on parasitic nematode biology. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLok%2C+JB+%22The+C.+elegans+Research+Community%2C+WormBook%22">The C. elegans Research Community, WormBook</a>. , (2007).</li>
<li>Hawdon, J. M., Schad, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+storage+of+hookworm+infective+larvae+in+buffered+saline+solution+maintains+larval+responsiveness+to+host+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Helminthological+Society+of+Washington+%28USA%29%22%5BJournal%5D)">Long-term storage of hookworm infective larvae in buffered saline solution maintains larval responsiveness to host signals.</a> Proceedings of the Helminthological Society of Washington (USA). 58 (1), 140-142 (1991).</li>
<li>Bargmann, C. I., Hartwieg, E., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odorant-selective+genes+and+neurons+mediate+olfaction+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Odorant-selective genes and neurons mediate olfaction in C. elegans.</a> Cell. 74 (3), 515-527 (1993).</li>
<li>Junio, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strongyloides+stercoralis%3A+cell-+and+tissue-specific+transgene+expression+and+co-transformation+with+vector+constructs+incorporating+a+common+multifunctional+3%27+UTR%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Parasitology%22%5BJournal%5D)">Strongyloides stercoralis: cell- and tissue-specific transgene expression and co-transformation with vector constructs incorporating a common multifunctional 3' UTR.</a> Experimental Parasitology. 118 (2), 253-265 (2008).</li>
<li>Gang, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemosensory+mechanisms+of+host+seeking+and+infectivity+in+skin-penetrating+nematodes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Chemosensory mechanisms of host seeking and infectivity in skin-penetrating nematodes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 117 (30), 17913-17923 (2020).</li>
<li>Bryant, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+role+for+thermosensation+in+host+seeking+by+skin-penetrating+nematodes%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">A critical role for thermosensation in host seeking by skin-penetrating nematodes.</a> Current Biology. 28 (14), 2338-2347 (2018).</li>
<li>Lok, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleic+acid+transfection+and+transgenesis+in+parasitic+nematodes%5BTitle%5D)+AND+%22Parasitology%22%5BJournal%5D)">Nucleic acid transfection and transgenesis in parasitic nematodes.</a> Parasitology. 139 (5), 574-588 (2012).</li>
<li>Shao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transposon-mediated+chromosomal+integration+of+transgenes+in+the+parasitic+nematode+Strongyloides+ratti+and+establishment+of+stable+transgenic+lines%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Transposon-mediated chromosomal integration of transgenes in the parasitic nematode Strongyloides ratti and establishment of stable transgenic lines.</a> PLoS Pathogens. 8 (8), 1002871(2012).</li>
<li>Lok, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((piggyBac%3A+a+vehicle+for+integrative+DNA+transformation+of+parasitic+nematodes%5BTitle%5D)+AND+%22Mobile+Genetic+Elements%22%5BJournal%5D)">piggyBac: a vehicle for integrative DNA transformation of parasitic nematodes.</a> Mobile Genetic Elements. 3 (2), 24417(2013).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+transgenesis+of+the+parasitic+nematode+Strongyloides+stercoralis+requires+endogenous+non-coding+control+elements%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+for+Parasitology%22%5BJournal%5D)">Successful transgenesis of the parasitic nematode Strongyloides stercoralis requires endogenous non-coding control elements.</a> International Journal for Parasitology. 36 (6), 671-679 (2006).</li>
<li>Bryant, A. S., Hallem, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Wild+Worm+Codon+Adapter%3A+a+web+tool+for+automated+codon+adaptation+of+transgenes+for+expression+in+non-Caenorhabditis+nematodes%5BTitle%5D)+AND+%22G3%22%5BJournal%5D)">The Wild Worm Codon Adapter: a web tool for automated codon adaptation of transgenes for expression in non-Caenorhabditis nematodes.</a> G3. 3 (7), (2021).</li>
<li>Crane, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+measurements+reveal+a+single+5%27-intron+is+sufficient+to+increase+protein+expression+level+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">In vivo measurements reveal a single 5'-intron is sufficient to increase protein expression level in Caenorhabditis elegans.</a> Scientific Reports. 9 (1), 9192(2019).</li>
<li>Han, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+transgenesis+efficiency+and+CRISPR-associated+tools+through+codon+optimization+and+native+intron+addition+in+Pristionchus+nematodes%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Improving transgenesis efficiency and CRISPR-associated tools through codon optimization and native intron addition in Pristionchus nematodes.</a> Genetics. 216 (4), 947-956 (2020).</li>
<li>Adams, S., Pathak, P., Shao, H., Lok, J. B., Pires-daSilva, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liposome-based+transfection+enhances+RNAi+and+CRISPR-mediated+mutagenesis+in+non-model+nematode+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Liposome-based transfection enhances RNAi and CRISPR-mediated mutagenesis in non-model nematode systems.</a> Scientific Reports. 9 (1), 483(2019).</li>
<li>Dulovic, A., Puller, V., Streit, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+culture+conditions+for+free-living+stages+of+the+nematode+parasite+Strongyloides+ratti%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Parasitology%22%5BJournal%5D)">Optimizing culture conditions for free-living stages of the nematode parasite Strongyloides ratti.</a> Experimental Parasitology. 168, 25-30 (2016).</li>
<li>Harvey, S. C., Gemmill, A. W., Read, A. F., Viney, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+control+of+morph+development+in+the+parasitic+nematode+Strongyloides+ratti%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Royal+Society+B%3A+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">The control of morph development in the parasitic nematode Strongyloides ratti.</a> Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences. 267 (1457), 2057-2063 (2000).</li>
<li>Kim, A., Pyykko, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size+matters%3A+versatile+use+of+PiggyBac+transposons+as+a+genetic+manipulation+tool%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Size matters: versatile use of PiggyBac transposons as a genetic manipulation tool.</a> Molecular and Cellular Biochemistry. 354 (1-2), 301-309 (2011).</li>
<li>Lok, J. B., Shao, H., Massey, H. C., Li, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenesis+in+Strongyloides+and+related+parasitic+nematodes%3A+historical+perspectives%2C+current+functional+genomic+applications+and+progress+towards+gene+disruption+and+editing%5BTitle%5D)+AND+%22Parasitology%22%5BJournal%5D)">Transgenesis in Strongyloides and related parasitic nematodes: historical perspectives, current functional genomic applications and progress towards gene disruption and editing.</a> Parasitology. 144 (3), 327-342 (2017).</li>
<li>Farboud, B., Meyer, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dramatic+enhancement+of+genome+editing+by+CRISPR%2FCas9+through+improved+guide+RNA+design%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Dramatic enhancement of genome editing by CRISPR/Cas9 through improved guide RNA design.</a> Genetics. 199 (4), 959-971 (2015).</li>
<li>Cheong, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+nuclear+receptor%2Fcoactivator+developmental+signaling+pathway+in+the+nematode+parasite+Strongyloides+stercoralis%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Identification of a nuclear receptor/coactivator developmental signaling pathway in the nematode parasite Strongyloides stercoralis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 118 (8), 2021864118(2021).</li>
<li>Nolan, T. J., Megyeri, Z., Bhopale, V. M., Schad, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strongyloides+stercoralis%3A+the+first+rodent+model+for+uncomplicated+and+hyperinfective+strongyloidiasis%2C+the+Mongolian+gerbil+%28Meriones+unguiculatus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Strongyloides stercoralis: the first rodent model for uncomplicated and hyperinfective strongyloidiasis, the Mongolian gerbil (Meriones unguiculatus).</a> Journal of Infectious Diseases. 168 (6), 1479-1484 (1993).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenesis+in+the+parasitic+nematode+Strongyloides+ratti%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Biochemical+Parasitology%22%5BJournal%5D)">Transgenesis in the parasitic nematode Strongyloides ratti.</a> Molecular and Biochemical Parasitology. 179 (2), 114-119 (2011).</li>
<li>Viney, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploiting+the+life+cycle+of+Strongyloides+ratti%5BTitle%5D)+AND+%22Parasitology+Today%22%5BJournal%5D)">Exploiting the life cycle of Strongyloides ratti.</a> Parasitology Today. 15 (6), 231-235 (1999).</li>
<li>Stoltzfus, J. D., Massey, H. C., Nolan, T. J., Griffith, S. D., Lok, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strongyloides+stercoralis+age-1%3A+a+potential+regulator+of+infective+larval+development+in+a+parasitic+nematode%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Strongyloides stercoralis age-1: a potential regulator of infective larval development in a parasitic nematode.</a> PLoS ONE. 7 (6), 38587(2012).</li>
<li>Castelletto, M. L., Massey, H. C., Lok, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphogenesis+of+Strongyloides+stercoralis+infective+larvae+requires+the+DAF-16+ortholog+FKTF-1%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Morphogenesis of Strongyloides stercoralis infective larvae requires the DAF-16 ortholog FKTF-1.</a> PLoS Pathogens. 5 (4), 1000370(2009).</li>
<li>Douglas, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+expression+of+a+T+cell+epitope+in+Strongyloides+ratti+reveals+that+helminth-specific+CD4%2B+T+cells+constitute+both+Th2+and+Treg+populations%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Transgenic expression of a T cell epitope in Strongyloides ratti reveals that helminth-specific CD4+ T cells constitute both Th2 and Treg populations.</a> PLoS Pathogens. 17 (7), 1009709(2021).</li>
</ol>

De auteurs verklaren geen belangenconflicten.

Dit micro-injectieprotocol beschrijft de methoden voor het introduceren van constructen voor transgenese en CRISPR/Cas9-gemedieerde mutagenese in S. stercoralis en S. ratti. Voor zowel S. stercoralis als S. ratti zijn de overleving na injectie en de snelheid van transgenese of mutagenese onderhevig aan verschillende variabelen die kunnen worden verfijnd.
De eerste kritische overweging voor succesvolle transgenese is hoe plasmidetransgenen worden geconstruee...

Strongyloides stercoralis is lang over het hoofd gezien als een belangrijke menselijke ziekteverwekker in vergelijking met de meer algemeen erkende haakwormen en de rondworm Ascaris lumbricoides1. Eerdere studies naar wormbelasting onderschatten vaak de prevalentie van S. stercoralis vanwege de lage gevoeligheid van gangbare diagnostische methoden voor S. stercoralis2. In de afgelopen jaren hebben epidemiologische studies op basis van verbeterde diagnostische hulpmiddelen geschat dat de werkelijke prevalentie van S. stercoralis-infecties veel hoger is dan eerder gemeld, ongeveer 610 miljoen mensen wereldwijd2.
Zowel S. stercoralis als andere Strongyloides-soorten, waaronder de nauw verwante rattenparasiet en het gemeenschappelijke laboratoriummodel S. ratti, hebben een ongewone levenscyclus die voordelig is voor experimentele genomische studies omdat het bestaat uit zowel parasitaire als vrijlevende (milieu) generaties3 (figuur 1). Concreet kunnen zowel S. stercoralis als S. ratti door één vrijlevende generatie fietsen. De vrijlevende generatie bestaat uit postparasitaire larven die zich ontwikkelen tot vrijlevende volwassen mannetjes en vrouwtjes; alle nakomelingen van de vrij levende volwassenen ontwikkelen zich tot infectieuze larven, die een gastheer moeten infecteren om de levenscyclus voort te zetten. Bovendien kan deze milieu- of vrijlevende generatie experimenteel worden gemanipuleerd in het laboratorium. Omdat vrijlevende Strongyloides-volwassenen en C. elegans-volwassenen een vergelijkbare morfologie delen, kunnen technieken zoals intragonadale micro-injectie die oorspronkelijk werden ontwikkeld voor C. elegans worden aangepast voor gebruik met vrijlevende volwassen Strongyloides 4,5. Hoewel DNA over het algemeen wordt geïntroduceerd in vrijlevende volwassen vrouwtjes, kunnen zowel mannen als vrouwen van Strongyloides micro-geïnjecteerd worden6. Zo zijn functionele genomische hulpmiddelen beschikbaar om vele aspecten van de biologie van Strongyloides te ondervragen. Andere parasitaire nematoden missen een vrijlevende generatie en zijn daardoor niet zo gemakkelijk vatbaar voor functionele genomische technieken3.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63023/63023fig01.jpg"> Figuur 1: De levenscyclus van Strongyloides stercoralis. De S. stercoralis parasitaire vrouwtjes bewonen de dunne darm van hun zoogdiergastheren (mensen, niet-menselijke primaten, honden). De parasitaire vrouwtjes reproduceren door parthenogenese en leggen eieren in de dunne darm. De eieren komen uit terwijl ze zich nog in de gastheer bevinden in postparasitaire larven, die vervolgens met uitwerpselen in de omgeving worden gebracht. Als de postparasitaire larven mannelijk zijn, ontwikkelen ze zich tot vrijlevende volwassen mannetjes. Als de postparasitaire larven vrouwelijk zijn, kunnen ze zich ontwikkelen tot vrijlevende volwassen vrouwtjes (indirecte ontwikkeling) of infectieve larven in het derde stadium (iL3s; directe ontwikkeling). De vrijlevende mannetjes en vrouwtjes planten zich seksueel voort om nakomelingen te creëren die gedwongen zijn om iL3's te worden. Onder bepaalde omstandigheden kan S. stercoralis ook auto-infectie ondergaan, waarbij sommige van de postparasitaire larven in de darm van de gastheer blijven in plaats van in uitwerpselen in de omgeving te komen. Deze larven kunnen zich ontwikkelen tot auto-infectieuze larven (L3a) in de gastheer, doordringen door de darmwand, migreren door het lichaam en uiteindelijk terugkeren naar de darm om reproductieve volwassenen te worden. De levenscyclus van S. ratti is vergelijkbaar, behalve dat S. ratti ratten infecteert en geen auto-infectieve cyclus heeft. De milieugeneratie is de sleutel tot het gebruik van Strongyloides-soorten voor genetische studies. De vrij levende volwassen vrouwtjes (P0) kunnen micro-geïnjecteerd worden; hun nakomelingen, die allemaal iL3's zullen worden, zijn de potentiële F 1-transgenen. Dit cijfer is aangepast van Castelletto et al. 3. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63023/63023fig01large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
S. stercoralis deelt vele aspecten van zijn biologie met andere gastro-intestinale humaan-parasitaire nematoden, waaronder gastheerinvasie en gastheerimmuunmodulatie. Bijvoorbeeld, menselijk-parasitaire haakwormen in de geslachten Necator en Ancylostoma infecteren ook door huidpenetratie, navigeren op dezelfde manier door het lichaam en verblijven uiteindelijk als parasitaire volwassenen in de dunne darm7. Veel gastro-intestinale nematoden gebruiken dus waarschijnlijk gemeenschappelijk sensorisch gedrag en immuunontwijkingstechnieken. Als gevolg hiervan zal de kennis die is opgedaan bij Strongyloides de bevindingen in andere minder genetisch hanteerbare nematoden aanvullen en leiden tot een vollediger begrip van deze complexe en belangrijke parasieten.
Dit micro-injectieprotocol schetst de methode voor het introduceren van DNA in Strongyloides vrijlevende volwassen vrouwtjes om transgene en mutante nakomelingen te maken. De vereisten voor stamonderhoud, inclusief de ontwikkelingstijd van volwassen wormen voor micro-injecties en het verzamelen van transgene nakomelingen, worden beschreven. Protocollen en een demonstratie van de volledige micro-injectietechniek, samen met protocollen voor het kweken en screenen van transgene nakomelingen, zijn inbegrepen, samen met een lijst van alle benodigde apparatuur en verbruiksartikelen.

<table><tbody><tr><td>(&minus;)-Nicotine, &ge;99% (GC), liquid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N3876-5ML</td><td>nicotine voor het verlammen van wormen</td></tr><tr><td>3" iron C-clamp, 3" x 2" (capacity x depth)</td><td>VWR</td><td>470121-790</td><td>C-klem om de opstelling aan de werkbladrand te bevestigen</td></tr><tr><td>Agarose LE</td><td>Phenix</td><td>RBA-500</td><td>agarose voor dia's</td></tr><tr><td>Bone char, 4 lb pail, 10 x 28 mesh</td><td>Ebonex</td><td>n/a</td><td>houtskool voor fecale-houtskoolculturen</td></tr><tr><td>Bone char, granules, 10 x 28 mesh</td><td>Reade</td><td>bonechar10x28</td><td>houtskool voor fecale-culturen (alternatief voor bovenstaande)</td></tr><tr><td>Coarse micromanipulator</td><td>Narishige</td><td>MMN-1</td><td>grof micromanipulator</td></tr><tr><td>Corning Costar Spin-X centrifuge tube filters</td><td>Fisher</td><td>07-200-385</td><td>microfilterkolom</td></tr><tr><td>Cover glass, 48 x 60 mm, No. 1 thickness</td><td>Brain Research Lab</td><td>4860-1</td><td>dekglasjes (48 x 60 mm)</td></tr><tr><td>Deep Petri dishes, heavy version with 6 vents, 100 mm diameter</td><td>VWR</td><td>82050-918</td><td>10 cm Petri-schijven (voor fecale-houtskoolculturen)</td></tr><tr><td>Eisco retort base w/ rod</td><td>Fisher</td><td>12-000-101</td><td>standaard voor Baermann-apparaat</td></tr><tr><td>Eppendorf FemtoJet microinjector microloader tips</td><td>VWR</td><td>89009-310</td><td>voor het vullen van micro-injectienaalden</td></tr><tr><td>Fisherbrand absorbent underpads</td><td>Fisher</td><td>14-206-62</td><td>werkbladpapier (voor voorbereiding)</td></tr><tr><td>Fisherbrand Cast-Iron Rings</td><td>Fisher</td><td>14-050CQ</td><td>Baermann o-ring</td></tr><tr><td>Fisherbrand tri-cornered polypropylene beakers</td><td>Fisher</td><td>14-955-111F</td><td>Kunststof beker (voor het mengen)</td></tr><tr><td>Fisherbrand tri-cornered polypropylene beakers</td><td>Fisher</td><td>14-955-111F</td><td>Kunststof beker (voor opvangbak/waterbak)</td></tr><tr><td>Fisherbrand tri-cornered polypropylene beakers</td><td>Fisher</td><td>14-955-111F</td><td>Kunststof beker (x2) (om houder te maken)</td></tr><tr><td>Gorilla epoxie in syringe</td><td>McMaster-Carr</td><td>7541A51</td><td>lijm (om slangen aan te bevestigen)</td></tr><tr><td>Halocarbon oil 700</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H8898-50ML</td><td>halogeenkoolwaterstof olie</td></tr><tr><td>High-temperature silicone rubber tubing for food and beverage, 1/2" ID, 5/8" OD</td><td>McMaster-Carr</td><td>3038K24</td><td>slang (voor trechter)</td></tr><tr><td>KIMAX funnels, long stem, 60&deg; Angle, Kimble Chase</td><td>VWR</td><td>89001-414</td><td>Baermann-trechter</td></tr><tr><td>Kimberly-Clark Professional Kimtech Science benchtop protectors</td><td>Fisher</td><td>15-235-101</td><td>werkbladpapier (voor voorbereiding)</td></tr><tr><td>Leica stereomicroscope with fluorescence</td><td>Leica</td><td>M165 FC</td><td>GFP stereomicroscoop voor het identificeren en sorteren van transgene wormen</td></tr><tr><td>microINJECTOR brass straight arm needle-holder</td><td>Tritech</td><td>MINJ-4</td><td>micro-injectienaaldhouder</td></tr><tr><td>microINJECTOR system</td><td>Tritech</td><td>MINJ-1</td><td>micro-injectiesysteem</td></tr><tr><td>Mongolian Gerbils</td><td>Charles River Laboratories</td><td>213-Mongolian Gerbil</td><td>gerbils voor het onderhoud van S. stercoralis, mannelijk 4-6 weken</td></tr><tr><td>Nasco Whirl-Pak easy-to-close bags, 18 oz</td><td>VWR</td><td>11216-776</td><td>Whirl-Pak-steekproefzakken</td></tr><tr><td>Nylon tulle (mesh)</td><td>Jo-Ann Fabrics</td><td>zprd_14061949a</td><td>nylon gaas voor Baermann-houder</td></tr><tr><td>Platinum wire, 36 Gauge, per inch</td><td>Thomas Scientific</td><td>1233S72</td><td>platina/iridium draad voor worm-pikken</td></tr><tr><td>Puritan tongue depressors, 152 mm (L) x 17.5 mm (W)</td><td>VWR</td><td>62505-007</td><td>houten stokken (voor het mengen van monsters)</td></tr><tr><td>QIAprep Spin Miniprep Kit (250)</td><td>QIAGEN</td><td>27106</td><td>QIAGEN-miniprepkit</td></tr><tr><td>Rats-Long Evans</td><td>Envigo</td><td>140 HsdBlu:LE Long Evans</td><td>ratten voor het onderhoud van S. ratti, vrouwelijk 4-6 weken</td></tr><tr><td>Rats-Sprague Dawley</td><td>Envigo</td><td>002 Hsd:Sprague Dawley SD</td><td>ratten voor het onderhoud van S. ratti, vrouwelijk 4-6 weken</td></tr><tr><td>Really Useful Boxes translucent storage boxes with lids, 1.6 L capacity, 7-5/8" x 5-5/16" x 4-5/16"</td><td>Office Depot</td><td>452369</td><td>plastic dozen voor bevochtigde kamer</td></tr><tr><td>Shepherd techboard, 8 x 16.5 inches</td><td>Newco</td><td>999589</td><td>techboard</td></tr><tr><td>Stainless steel raised wire floor</td><td>Ancare</td><td>R20SSRWF</td><td>draadkooienbodems</td></tr><tr><td>StalkMarket compostable cutlery spoons, 6", white, pack of 1,000</td><td>Office Depot</td><td>9587303</td><td>lepels</td></tr><tr><td>Stender dish, stacking type, 37 x 25 mm</td><td>Carolina (Science)</td><td>741012</td><td>waarschuwingsglazen (klein, rond)</td></tr><tr><td>Stereomicroscope</td><td>Motic</td><td>K-400 LED</td><td>voorbereidingspreparaatbereikend</td></tr><tr><td>Storage tote, color clear/white, outside height 4-7/8 in, outside length 13-5/8 in, Sterilite</td><td>Grainger</td><td>53GN16</td><td>plastic dozen voor bevochtigde kamer</td></tr><tr><td>Sutter P-30 micropipette puller</td><td>Sutter</td><td>P-30/P</td><td>naaldtrekker met platina/iridium gloeidraad</td></tr><tr><td>Syracuse watch glasses</td><td>Fisher</td><td>S34826</td><td>waarschuwingsglazen (groot, rond)</td></tr><tr><td>Thermo Scientific Castaloy fixed-angle clamps</td><td>Fisher</td><td>05-769-2Q</td><td>trechterklemmen (2x)</td></tr><tr><td>Three-axis hanging joystick oil hydrolic micromanipulator</td><td>Narishige</td><td>MM0-4</td><td>fijne micromanipulator</td></tr><tr><td>United Mohr pinchcock clamps</td><td>Fisher</td><td>S99422</td><td>Pinch-klemmen (2x)</td></tr><tr><td>Vented, sharp-edge Petri dishes (60 mm diameter)</td><td>Tritech Research</td><td>T3308P</td><td>6 cm Petri-schijven (voor kleine-schaal fecale-houtskoolculturen)</td></tr><tr><td>VWR light-duty tissue wipers</td><td>VWR</td><td>82003-820</td><td>bekleding voor Baermann-houder

het genereren van transgenen en knock-outs in strongyloides soorten door micro-injectie

Generating Transgenics and Knockouts in Strongyloides Species by Microinjection

Het geslacht Strongyloides bestaat uit meerdere soorten huiddoordringende nematoden met verschillende gastheerbereiken, waaronder Strongyloides stercoralis en Strongyloides ratti. S. stercoralis is een mens-parasitaire, huiddoordringende nematode die ongeveer 610 miljoen mensen infecteert, terwijl de rattenparasiet S. ratti nauw verwant is aan S. stercoralis en vaak wordt gebruikt als laboratoriummodel voor S. stercoralis. Zowel S. stercoralis als S. ratti zijn gemakkelijk vatbaar voor het genereren van transgenen en knock-outs door de exogene nucleïnezuurafgiftetechniek van intragonadale micro-injectie, en zijn als zodanig naar voren gekomen als modelsystemen voor andere parasitaire helminten die nog niet vatbaar zijn voor deze techniek.
Parasitaire Strongyloides-volwassenen bewonen de dunne darm van hun gastheer en geven nakomelingen via de ontlasting af aan de omgeving. Eenmaal in de omgeving ontwikkelen de larven zich tot vrijlevende volwassenen, die in uitwerpselen leven en nakomelingen produceren die een nieuwe gastheer moeten vinden en binnendringen. Deze milieugeneratie is uniek voor de Strongyloides-soorten en vergelijkbaar genoeg in morfologie met het model vrijlevende nematode Caenorhabditis elegans dat technieken ontwikkeld voor C. elegans kunnen worden aangepast voor gebruik met deze parasitaire nematoden, inclusief intragonadale micro-injectie. Met behulp van intragonadale micro-injectie kan een breed scala aan transgenen in Strongyloides worden geïntroduceerd. CRISPR/Cas9-componenten kunnen ook micro-geïnjecteerd worden om gemuteerde Strongyloides-larven te creëren. Hier wordt de techniek van intragonadale micro-injectie in Strongyloides beschreven, inclusief de bereiding van vrij levende volwassenen, de injectieprocedure en de selectie van transgene nakomelingen. Afbeeldingen van transgene Strongyloides-larven gemaakt met CRISPR / Cas9-mutagenese zijn opgenomen. Het doel van dit artikel is om andere onderzoekers in staat te stellen micro-injectie te gebruiken om transgene en mutante Strongyloides te creëren.

Als het experiment succesvol was, zullen de F1-larven het transgen en/of mutant fenotype van belang tot expressie brengen (figuur 4). Transformatiesnelheden zijn echter zeer variabel en zijn afhankelijk van de constructies, de gezondheid van de wormen, de kweekomstandigheden na injectie en de vaardigheid van de experimentator. Over het algemeen zal een succesvol experiment > 15 F1 larven per geïnjecteerd vrouwtje opleveren en een transformatiesnelheid van >3% voor fluor...

De functionele genomische toolkit voor de parasitaire nematoden Strongyloides stercoralis en Strongyloides ratti omvat transgenese, CRISPR/Cas9-gemedieerde mutagenese en RNAi. Dit protocol zal demonstreren hoe intragonadale micro-injectie kan worden gebruikt om transgenen en CRISPR-componenten in S. stercoralis en S. ratti te introduceren.

Het genereren van transgenen en knock-outs in strongyloides soorten door micro-injectie

The genus Strongyloides consists of multiple species of skin-penetrating nematodes with different host ranges, including Strongyloides stercoralis and ...

Het gebruik van micro-injectie om DNA-constructies in Strongyloides af te leveren, stelt ons in staat knock-outs en transgenen te genereren, die kunnen worden gebruikt om te bestuderen hoe deze wormen zich ontwikkelen, door hun omgeving navigeren en gastheren parasiteren. Tot nu toe is dit de enige succesvolle techniek voor het genereren van knock-outs en transgenen bij deze parasieten. Voeg een dag voor de microinjectie 180 microliter van de agarose-oplossing toe aan een afdekslip met behulp van een glazen Pasteur-pipet en laat er onmiddellijk een tweede afdekslip op vallen om de agarose in een dunne pad af te vlakken.Verwijder na 5 tot 10 seconden de bovenste cover slip door de twee uit elkaar te schuiven en bepaal op welke schuif de agarpad zit en leg deze met de voorkant naar boven. Selecteer vervolgens een klein stukje glasscherf uit een gebroken afdekslip en druk deze met behulp van een tang voorzichtig in de agar bij de bovenrand van de pad. Op de dag van de micro-injectie bekleedt u de Baermann-houder, een zeef gemaakt van twee plastic ringen met twee lagen nylon tuilegaas ertussen vastgezet met drie overlappende stukjes laboratoriumweefsel.Voeg vervolgens het fecaal-houtskoolmengsel toe aan de Baermann-houder. Plaats vervolgens de Baermann-houder met het fecale-houtskoolmengsel in de trechter, vouw de stukjes weefsel rond het fecale-houtskoolmengsel en voeg voldoende water toe om het grootste deel van de fecale houtskool onder te dompelen. Bedek vervolgens de trechter met een plastic petrischaaldeksel van 15 centimeter om de geur te bevatten en de trechter indien nodig te labelen.Houd na één tot twee uur een centrifugebuis van 50 milliliter onder de rubberen buis aan de onderkant van de trechter en open voorzichtig de klemmen aan de onderkant om 30 tot 40 milliliter water met wormen in de buis van 50 milliliter te doseren. Dan. breng 15 milliliter van het Baermann-water dat de wormen bevat over in een centrifugebuis van 15 milliliter. Draai de buis, verwijder tot 13 milliliter van het supernatant en gooi het weg in een vloeibare afvalcontainer met jodium om eventuele wormen te doden.Nadat je alle wormen hebt verzameld, inspecteer je de pellet wormen op de bodem van de buis. Als er geen wormen zichtbaar zijn, wacht dan één tot twee uur en verzamel dan meer wormen uit het Baermann-apparaat. Breng de wormen in zo min mogelijk water over op een zes centimeter 2%nematoden groeimediumplaat met een gazon van E.coli HB101 en gebruik deze plaat als bronplaat voor de micro-injectie.Bedek onder de ontleedmicroscoop de glasscherf op de afdekslip van het microinjectiepad met halocarbonolie met behulp van een standaard platinawormprikker. Plaats vervolgens de afdeksel van het microinjectiepad op de microinjectiekijker en lokaliseer de glasscherf bedekt met olie. Lijn de glasscherf zo uit dat een rand loodrecht op de richting van de naald staat om te dienen als het oppervlak dat wordt gebruikt om de naald te breken.Zorg er vervolgens met behulp van een ontleedmicroscoop voor dat de naald geen bellen of puin in de taps toelopende schacht heeft en bevestig de naald vervolgens 1 tot 1,5 centimeter in de houder onder druk. Plaats de punt van de naald in het midden van het gezichtsveld van de microscoop met het oog en plaats onder lage vergroting de punt van de naald in het gezichtsveld loodrecht op de zijkant van de glasscherf. Schakel vervolgens over naar een hogere vergroting en lijn de punt van de naald uit met de rand van het glas, dichtbij, maar niet aanrakend.Om vervolgens de punt van de naald te breken en vloeistof te laten stromen, tikt u voorzichtig op de naald aan de zijkant van het stuk glas terwijl u continue druk uitoefent op het gas. Zodra de vloeistof begint te stromen, controleert u de vorm van de punt en zorgt u ervoor dat deze scherp is met gemakkelijk stromende vloeistof. Wanneer de vloeistof goed uit de naald stroomt, verplaatst u de micro-injectieschuif naar de ontleedbare scoop en voegt u één tot twee microliter halocarbonolie toe aan de agarpad voor plaatsing van de wormen.Breng 20 tot 30 jongvolwassen Strongyloides gedurende ten minste vijf minuten over naar een 2% nematoden groeimediumplaat zonder bacteriën om overtollige oppervlaktebacteriën te verwijderen en enkele wormen te selecteren voor micro-injectie. Voeg indien nodig meer wormen toe aan de plaat tijdens het injecteren. Gebruik een kleine hoeveelheid halocarbon-olie op een wormpluk, selecteer een Strongyloides jongvolwassen vrouwtje met één tot vier eieren in haar geslachtsklier van de plaat zonder bacteriën en breng de worm over in een klein druppeltje olie op het agarpad.Gebruik de wormprikker voorzichtig zodat deze niet wordt opgerold en de geslachtsklier zichtbaar en gemakkelijk toegankelijk is. Plaats vervolgens de worm in het gezichtsveld van de microinjectiemicroscoop en zorg ervoor dat de geslachtsklier zich aan dezelfde kant als de naald bevindt en zo is geplaatst dat de naald onder een lichte hoek contact maakt met de geslachtsklier. Breng vervolgens de punt van de naald naar de zijkant van de worm in hetzelfde brandpuntsvlak.Richt vervolgens op de geslachtsklierarm in het midden van de worm en steek de naald voorzichtig in de geslachtsklier met behulp van een micro-injector. Oefen onmiddellijk druk uit op de naald om de hele geslachtsklierarm voorzichtig te vullen met de DNA-oplossing. Nadat voldoende vloeistof is geïnjecteerd, verwijdert u de naald en ziet u dat de wond sluit.Herhaal de procedure met de andere arm van de geslachtsklier, als deze zichtbaar is. Zodra de injectie is voltooid, controleert u snel of de naald niet verstopt is door druk uit te oefenen met de punt van de naald op de agarpad en brengt u de dia met de geïnjecteerde worm over naar de ontleedmicroscoop. Om de geïnjecteerde worm te herstellen, plaatst u eerst een paar druppels worm-gebufferde zoutoplossing op de worm om deze van de agarpad te laten drijven.Verzamel vervolgens een kleine hoeveelheid bacteriën op een wormpluk en raak de worm aan met de aanhangende bacteriën om deze uit de vloeistof te verwijderen. Breng de worm voorzichtig over naar de herstelplaat. Voor gedragsexperimenten, breng 20 tot 30 larven over naar een 2% nematoden groeimediumplaat met een dik HB101-bacteriegazon en identificeer onder een fluorescentieontledende microscoop de larven die het transgen van belang tot expressie brengen.Selecteer vervolgens met behulp van een wormpluk de transgene larven en plaats ze in een klein horlogeglas met wormbuffered zoutoplossing. Voor microscopie, met behulp van een scheermesje, scoor je een rooster op de plastic bodem van een chemotaxisplaat van 10 centimeter om de locatie van de wormen op de plaat gemakkelijk te volgen. Voeg vervolgens drie microliter larven in een door wormen gebufferde zoutoplossing toe aan een vierkant op het rooster en vul zoveel vierkanten als nodig is.Voeg vervolgens 15 tot 20 microliter druppels van 1% nicotine in water toe aan de wormdruppels. Na vier minuten, wanneer de wormen verlamd zijn, screent u ze met een fluorescentieontledende microscoop. Transgene Strongyloides stercolaris larven met een onvolledig en compleet act-2 mRFPmars expressiepatroon worden hier getoond.De fragmentarische expressie in de lichaamswandspier komt vaker voor wanneer het transgen niet in het genoom is geïntegreerd. Daarentegen geeft consistente expressie in de lichaamswandspier vaak aan dat het transgen in het genoom is geïntegreerd. De belangrijkste stap is het positioneren van de naald in hetzelfde focusvlak als de geslachtsklier om ervoor te zorgen dat het DNA in de geslachtsklier wordt geïnjecteerd en in de zich ontwikkelende eieren wordt opgenomen.De ontwikkeling van deze techniek maakte het mogelijk om de genfunctie in parasitaire nematoden te bestuderen, wat nieuwe inzichten oplevert in mechanismen van parasitisme en gastheer-parasiet interacties.

generating-transgenics-knockouts-strongyloides-species

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Deze video demonstreert de techniek van micro-injectie in de gonaden van C. elegans om transgene dieren te creëren.

Generatie van Stable transgene C. elegans Met behulp van micro-injectie

Generatie van transgene C. elegans Door biolistische Transformatie

We zien hier dat epigenetische herprogrammering via Somatic Cell Nuclear Transfer (SCNT) kan worden gebruikt als een instrument om muismodellen te genereren met een vooraf bepaalde T-cel receptor (TCR) specifieke kenmerken. Deze transnuclear muizen drukken de overeenkomstige TCR uit hun endogene locus onder de controle van de endogene promotor.

Transnuclear Muizen met vooraf gedefinieerde T-cel-receptor Bijzonderheden tegen Toxoplasma gondii Verkregen via SCNT

In model organismen, kan transgenese manipuleren genfuncties terwijl RNAi kan knockdown specifieke mRNA-transcripten 1-2. Dit protocol heeft tot doel illustratie van de technieken die nodig zijn om stabiel overgedragen DNA en van voorbijgaande aard dubbelstrengs RNA te brengen in de necromenic...

RNAi Mediated Gene Knockdown en Transgenese door micro-injectie in de Necromenic Nematode Pristionchus pacificus</em

De mediterrane fruitvlieg (Ceratitis capitata) (Diptera: Tephritidae) is een wereldwijde plaag in de landbouw. Een dieper begrip van zijn biologie is cruciaal voor het beheersen van fruitvliegpopulaties en daarmee het verminderen van de economische impact. Micro-injectie van embryo's is een fundamenteel hulpmiddel dat zowel transformatie van de kiemlijn als reverse genetica studies in deze soort mogelijk maakt.

Levering van nucleïnezuren door middel van Embryo micro-injectie in de Worldwide Landbouw Pest Insect,<em&gt; Middellandse-Zeevlieg</em

De microinjectie van muis oocyten wordt vaak gebruikt voor zowel klassieke transgenese ( dwz de willekeurige integratie van transgenen) en CRISPR-gemedieerde gen targeting. Dit protocol beoordeelt de nieuwste ontwikkelingen in microinjectie, met speciale nadruk op kwaliteitscontrole en genotyping strategieën.

Generatie van genetisch gemodificeerde muizen via de microinjectie van oocyten

Microinjection van Nasonia vitripennis embryo's is een essentiële methode voor het genereren van de wijzigingen van het erfelijk genoom. Hier beschreven is een gedetailleerde procedure voor microinjection en transplanteren van Nasonia vitripennis embryo's, die toekomstige genoom manipulatie in dit organisme aanzienlijk zal vergemakkelijken.

Embryo Microinjection en transplantatie techniek voor Nasonia vitripennis genoom manipulatie

Dit protocol beschrijft micro-injectieprocedures voor Culex quinquefasciatus embryo's die zijn geoptimaliseerd om te werken met CRISPR/Cas9 genbewerkingstools. Deze techniek kan efficiënt site-specifieke, erfelijke, kiembaanmutaties genereren die kunnen worden gebruikt voor het bouwen van genetische technologieën in deze onderbelichte ziektevector.

Embryo micro-injection technieken voor efficiënte site-specifieke mutagenese in Culex quinquefasciatus

De efficiëntie van de Improved Genome Editing via Oviductal Nucleic Acids Delivery (I-GONAD)-methode is vergelijkbaar met traditionele micro-injectie, waarbij zygoten moeten worden verzameld bij donorvrouwtjes en moeten worden overgedragen aan pseudo-zwangere vrouwtjes. Dit protocol demonstreert zijn effectiviteit door CRISPR/Cas9-geïnduceerde mutaties te introduceren in de ROSA26-locus op chromosoom 6.

Verbeterde genoombewerking via oviductale nucleïnezuren Op levering gebaseerde in vivo elektroporatietechniek voor het genereren van knock-out muizen

Dit artikel demonstreert CRISPR-Cas9-gemedieerde genoomengineering in Steinernema hermaphroditum, een entomopathogene (EPN: insect-parasitaire) nematode en een opkomend genetisch model. De beschreven technologie is nuttig voor het creëren van mutanten, waardoor genfuncties in de nematodebiologie kunnen worden opgehelderd die relevant zijn voor mutualistische en parasitaire symbiose.

CRISPR-Cas9-gebaseerde mutagenese in de entomopathogene nematode Steinernema hermaphroditum en het onderhoud van mutante lijnen

Leer intragonadale micro-injectie voor transgenese en knock-outs in Strongyloides stercoralis en S. ratti. Deze methode maakt genetische manipulatie van parasitaire nematoden mogelijk voor onderzoek naar ontwikkeling en parasitisme.

Het genereren van transgenen en knock-outs in strongyloides soorten door micro-injectie

Meer video's verkennen