Name: Een neonatale BALB / c muismodel van necrotiserende enterocolitis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-11-30T14:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 39 s
Description: Leer hoe je een neonataal BALB/c muismodel van necrotiserende enterocolitis opzet voor onderzoek naar T-celresponsen. Deze methode helpt bij het bestuderen van immuunmechanismen bij NEC.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs bedanken de Clinical Biological Resource Bank van Guangzhou Women and Children's Medical Center voor het verstrekken van het klinische monster en Guangzhou Forevergen Biosciences Laboratory Animal Center voor het leveren van muizen. Dit onderzoek werd ondersteund door de National Natural Science Foundation of China grant 81770510 (R.Z.).

Dit onderzoek werd goedgekeurd door de Medical Ethics Committee van Guangzhou Women and Children's Medical Center (NO. 174A01) en de Animal Ethical Committee van het Guangzhou Forevergen Biosciences Laboratory Animal Center (IACUC-G160100). Alle dieren werden gefokt in dezelfde ruimte in een specifieke pathogeenvrije (SPF) omgeving en experimenten werden uitgevoerd in een conventionele omgeving. De muizen die voor de fokkerij werden gebruikt, waren 7-8 weken oud; de muizen voor het induceren van NEC (n = 72) werden op dag 4 van de dam gescheiden en de dammen (n = 14) werden in de oorspronkelijke kooi gehouden en verzorgden de controlegroepmuizen (Vervolg) (n = 24).
1. Bereiding van reagentia en hulpmiddelen
<ol><li>Bereid de melkvervanger voor de BALB/c-muizen in de overeenkomstige verhouding (premature babymelkpoeder: geitenmelkpoeder = 2:1). OPMERKING: De uiteindelijke voedingssamenstellingen van formulemelk12 zijn weergegeven in tabel 1.</li>
	<li>LPS-oplossing (2,5 mg/ml)<ol>
<li>Los in totaal 10 mg LPS-poeder op in 4 ml gesteriliseerd dubbel gedestilleerd water, meng goed en bewaar in een koelkast bij -20 °C na aliquotering. OPMERKING: De LPS-oplossing wordt in het donker bewaard bij 2-8 °C voor onmiddellijk gebruik of bij -20 °C voor langdurige opslag.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Induceer necrotiserende enterocolitis bij neonatale BALB/c muizen
<ol><li>Voer de neonatale muizen.<ol>
<li>Houd de neonatale muizen in dezelfde kooi als de moeder, verpleegd door de moeder op dag 0-4.</li>
		<li>In de nacht van dag 4 (wanneer de neonatale muizen 2,5-3 g wegen), scheidt u de neonatale muizen in de NEC-groep van de moeder om NEC te induceren, houdt u ze in een dierenincubator en voedt u ze met formule. De Cont. groep mag echter bij de dam blijven en gevoed worden door de dam. OPMERKING: Neonatale muizen die van de moeder zijn gescheiden, moeten in een couveuse worden grootgebracht vanwege hun zwakke lichaamstemperatuurregulatie.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Bereid de gavagebuis voor door deze gedurende 1-2 minuten in 75% alcoholcontainers te weken en was ze twee keer in schoon, dubbel gedestilleerd water. OPMERKING: Om kruisbesmetting tussen de muizen te voorkomen, moet het bovenstaande proces worden uitgevoerd na het voeren van elke muis.</li>
	<li>Induceer het NEC-model.<ol>
<li>Neem de neonatale muizen van de dam op dag 4 en vast ze voor één nacht.</li>
		<li>Gavage de muizen met LPS (20-30 μL per keer) en voed ze met formule op dag 5 (40-50 μL per keer).</li>
		<li>Vanaf dag 5 onderwerpen de muizen twee keer per dag gedurende 5 dagen aan een hypoxie-reoxygenatie-koude-shockcyclus. Plaats de muizen in een hypoxie-apparaat op 5% O2 gedurende 90 s en reoxygeneer ze gedurende 3 minuten; herhaal dit proces vijf keer. Plaats de muizen vervolgens gedurende 15 minuten in een omgeving van 4 °C en breng ze vervolgens over naar een incubator. Zie figuur 1A,B voor het inductieproces. OPMERKING: Een cyclus van hypoxie-reoxygenatie-koude stimulatie werd eenmaal in de ochtend en eenmaal in de middag uitgevoerd. In de container werd een mengsel van 5% O2 met 95% N2 bereid en de concentratie werd gemeten met een zuurstofdetector.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Observeer alle muizen nauwkeurig, weeg ze elke dag, registreer de overleving van de muizen tijdens de inductieperiode en noteer de ontlastingskenmerken (met of zonder kleverige ontlasting / bloederige ontlasting). OPMERKING: Het gevestigde NEC-model duurt 5 dagen.</li>
	<li>Op dag 10 of eerder, wanneer de muizen NEC-symptomen vertonen (ileus, hematochezie, diarree)13, euthanaseer de muizen door inhalatie-anesthesie met isofluraan en verzamel vervolgens onmiddellijk het darmweefsel. Verzamel geen weefsels van de muizen die spontaan stierven. OPMERKING: In deze studie werd het eindpunt van muiseutthenasie aangepast wanneer de muis hematochezie en cyanose van het hele lichaam vertoonde.</li>
</ol>3. Gavage de muis
<ol><li>Bevestig de muiskop en houd de maagsonde in de rechterhand. Plaats de maagsonde vanuit de linkerhoek van de mond van de muis. OPMERKING: Het hoofd werd met de wijsvinger op het hoofd van de muis bevestigd en zachtjes naar achteren en naar beneden gedrukt om te voorkomen dat de muis tijdens de operatie naar voren buigt en het inbrengen van de maagsonde beïnvloedt.</li>
	<li>Beweeg de buis langzaam naar het midden van de mond. Na het inbrengen van de buis ongeveer 2-3 cm, duw 40-50 μL formule of 20-30 μL LPS in het spijsverteringskanaal. Zie figuur 2A,B voor de maagsonde. OPMERKING: Onder normale omstandigheden wordt de maagsonde soepel in het spijsverteringskanaal ingebracht. Als de muis een sterke braakreflex heeft, is de maagsonde per ongeluk in de luchtpijp ingebracht. De maagsonde moet voorzichtig worden uitgetrokken en de muis moet een tijdje rusten voordat hij opnieuw probeert te plassen. Bovendien wordt de maagsondeprocedure gebruikt om het model van NEC te induceren voorafgaand aan euthanasie van muizen.</li>
</ol>4. Verzamel verse darmweefselmonsters voor hematoxyline en eosine (H & E) kleuring
<ol><li>Dompel het verse ileumweefsel van de muis gedurende 24 uur onder in 10% formaline.</li>
	<li>Sluit de weefsels in paraffine in en snijd ze in secties van 4 μm.</li>
	<li>Deparaffiniseer de secties in xyleen en rehydrateer ze achtereenvolgens in absolute ethanol, 95% ethanol, 80% ethanol, 70% ethanol en gedestilleerd water, waarbij ze in elke stap 5 minuten worden geweekt. Kleur de secties gedurende 5 minuten met hematoxyline-oplossing en onderscheid ze in 1% zoutzuur in 75% alcohol gedurende 5 s. Kleur ze ten slotte gedurende 1 minuut met eosine-oplossing. OPMERKING: Na kleuring met hematoxyline-oplossing moet het worden gedifferentieerd met 1% zoutzuur in ethanol om overmatig gebonden hematoxyline-oplossing en cytoplasmatische hematoxylinekleurstof te verwijderen. De concentratie van 1% zoutzuur is geschikt voor darmweefsel.</li>
	<li>Onderzoek de histopathologie van het darmweefsel bij 40x vergroting.</li>
</ol>

<ol><li>Horbar, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mortality+and+neonatal+morbidity+among+infants+501+to+1500+grams+from+2000+to+2009%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Mortality and neonatal morbidity among infants 501 to 1500 grams from 2000 to 2009.</a> Pediatrics. 129 (6), 1019-1026 (2012).</li>
<li>Stoll, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+outcomes+of+extremely+preterm+infants+from+the+NICHD+Neonatal+Research+Network%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Neonatal outcomes of extremely preterm infants from the NICHD Neonatal Research Network.</a> Pediatrics. 126 (3), 443-456 (2010).</li>
<li>Neu, J., Walker, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Necrotizing+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Necrotizing enterocolitis.</a> New England Journal of Medicine. 364 (3), 255-264 (2011).</li>
<li>Sangild, P. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invited+Review%3A+The+preterm+pig+as+a+model+in+pediatric+gastroenterology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Invited Review: The preterm pig as a model in pediatric gastroenterology.</a> Journal of Animal Science. 91 (10), 4713-4729 (2013).</li>
<li>Cancro, M. P., Sigal, N. H., Klinman, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+expression+of+an+equivalent+clonotype+among+BALB%2Fc+and+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Differential expression of an equivalent clonotype among BALB/c and C57BL/6 mice.</a> Journal of Experimental Medicine. 147 (1), 1-12 (1978).</li>
<li>Kuroda, E., Yamashita, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+enhanced+macrophage-mediated+prostaglandin+E2+production+and+its+suppressive+role+in+Th1+activation+in+Th2-dominant+BALB%2Fc+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of enhanced macrophage-mediated prostaglandin E2 production and its suppressive role in Th1 activation in Th2-dominant BALB/c mice.</a> Journal of Immunology. 170 (2), 757-764 (2003).</li>
<li>Fornefett, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+clinics%2C+pathologies+and+immune+responses+in+BALB%2Fc+and+C57BL%2F6+mice+infected+with+Streptobacillus+moniliformis%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+and+Infection%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of clinics, pathologies and immune responses in BALB/c and C57BL/6 mice infected with Streptobacillus moniliformis.</a> Microbes and Infection. 20 (2), 101-110 (2018).</li>
<li>Rosas, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+background+influences+immune+responses+and+disease+outcome+of+cutaneous+L.+mexicana+infection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22International+Immunology%22%5BJournal%5D)">Genetic background influences immune responses and disease outcome of cutaneous L. mexicana infection in mice.</a> International Immunology. 17 (10), 1347-1357 (2005).</li>
<li>Sproat, T., Payne, R. P., Embleton, N. D., Berrington, J., Hambleton, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cells+in+preterm+infants+and+the+influence+of+milk+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">T cells in preterm infants and the influence of milk diet.</a> Frontiers in Immunology. 11, 1035(2020).</li>
<li>Nanthakumar, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanism+of+excessive+intestinal+inflammation+in+necrotizing+enterocolitis%3A+an+immature+innate+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The mechanism of excessive intestinal inflammation in necrotizing enterocolitis: an immature innate immune response.</a> PLoS One. 6 (3), 17776(2011).</li>
<li>Afrazi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+the+pathogenesis+and+treatment+of+necrotizing+enterocolitis%3A+Toll-like+receptors+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Research%22%5BJournal%5D)">New insights into the pathogenesis and treatment of necrotizing enterocolitis: Toll-like receptors and beyond.</a> Pediatric Research. 69 (3), 183-188 (2011).</li>
<li>Auestad, N., Korsak, R. A., Bergstrom, J. D., Edmond, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Milk-substitutes+comparable+to+rat%27s+milk%3B+their+preparation%2C+composition+and+impact+on+development+and+metabolism+in+the+artificially+reared+rat%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Milk-substitutes comparable to rat's milk; their preparation, composition and impact on development and metabolism in the artificially reared rat.</a> British Journal of Nutrition. 61 (3), 495-518 (1989).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lactoferrin-induced+myeloid-derived+suppressor+cell+therapy+attenuates+pathologic+inflammatory+conditions+in+newborn+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Lactoferrin-induced myeloid-derived suppressor cell therapy attenuates pathologic inflammatory conditions in newborn mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 129 (10), 4261-4275 (2019).</li>
<li>MohanKumar, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+neonatal+model+of+necrotizing+enterocolitis+caused+by+anemia+and+red+blood+cell+transfusions%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">A murine neonatal model of necrotizing enterocolitis caused by anemia and red blood cell transfusions.</a> Nature Communications. 10 (1), 3494(2019).</li>
<li>He, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transitory+presence+of+myeloid-derived+suppressor+cells+in+neonates+is+critical+for+control+of+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Transitory presence of myeloid-derived suppressor cells in neonates is critical for control of inflammation.</a> Nature Medicine. 24 (2), 224-231 (2018).</li>
<li>Cho, S. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+pathoimmunology+of+necrotizing+enterocolitis+reveals+novel+therapeutic+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Characterization of the pathoimmunology of necrotizing enterocolitis reveals novel therapeutic opportunities.</a> Nature Communications. 11 (1), 5794(2020).</li>
<li>Halpern, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+development+of+necrotizing+enterocolitis+in+IL-18-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Decreased development of necrotizing enterocolitis in IL-18-deficient mice.</a> American Journal of Physiology. Gastrointestinal and Liver Physiology. 294 (1), 20-26 (2007).</li>
<li>Wu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MAP3K2-regulated+intestinal+stromal+cells+define+a+distinct+stem+cell+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">MAP3K2-regulated intestinal stromal cells define a distinct stem cell niche.</a> Nature. 592 (7855), 606-610 (2021).</li>
<li>Nino, D. F., Sodhi, C. P., Hackam, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Necrotizing+enterocolitis%3A+new+insights+into+pathogenesis+and+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Gastroenterology+%26+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Necrotizing enterocolitis: new insights into pathogenesis and mechanisms.</a> Nature Reviews. Gastroenterology & Hepatology. 13 (10), 590-600 (2016).</li>
<li>Chuang, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cow%27s+milk+protein-specific+T-helper+type+I%2FII+cytokine+responses+in+infants+with+necrotizing+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Allergy+%26+Immunology%22%5BJournal%5D)">Cow's milk protein-specific T-helper type I/II cytokine responses in infants with necrotizing enterocolitis.</a> Pediatric Allergy & Immunology. 20 (1), 45-52 (2009).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen belangenconflicten te onthullen.

NEC is de meest voorkomende gastro-intestinale systeem noodsituatie voor pasgeborenen, met een hoge incidentie en mortaliteit, vooral bij premature baby's1,2,3. De pathogenese is echter nog steeds onduidelijk. Er wordt momenteel aangenomen dat mucosale schade, pathogene invasie en enterale voeding risicofactoren zijn voor NEC3. Tot op heden zijn de dieren die voor het NEC-model worden gebruikt voornamelij...

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/t/63252">A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis</a>. The Representative Results section was updated.
Figure 1 was updated from:
<img alt="Timeline diagram of NEC induction; process includes LPS, formula, hypoxia, reoxygenation stimulation." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63252/63252fig01.jpg" data-altupdatedat="1761830439000" data-alt="Figure 1"> 
Figure 1: Induction of the BALB/c NEC model process. (A) The mice in the NEC group were separated from the dam at birth until they were 4 days old (on Day 4) and fasted that night. The NEC model was induced from Day 5 onwards after birth and lasted for 5 days. Intestinal tissue specimens were collected on Day 10 or earlier. The mice in the Cont. group were housed with and nursed by the dam. (B) The sequence of operations for each day after inducing the NEC model. Abbreviations: Cont. = control; NEC = necrotizing enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63252/63252fig01large.jpg" target="_blank">Please click here to view a larger version of this figure.</a>
to:
<img alt="NEC induction timeline diagram, days after birth, LPS-formula hypoxia reoxygenation protocol" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63252/63252fig1v2.jpg" data-altupdatedat="1761830439000" data-alt="Figure 1"> 
Figure 1: Induction of the BALB/c NEC model process. (A) The mice in the NEC group were separated from the dam at birth until they were 4 days old (on Day 4) and fasted that night. The NEC model was induced from Day 5 onwards after birth and lasted for 5 days. Intestinal tissue specimens were collected on Day 10 or earlier. The mice in the Cont. group were housed with and nursed by the dam. (B) The sequence of operations for each day after inducing the NEC model. Abbreviations: Cont. = control; NEC = necrotizing enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63252/63252fig1v2large.jpg" target="_blank">Please click here to view a larger version of this figure.</a>

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/63252">A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis</a>. The Representative Results section was&#160;updated.

Erratum: A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis

Necrotiserende enterocolitis (NEC), de ernstigste gastro-intestinale (GI) ziekte, komt voor bij de meeste premature baby's (>90%), vooral die met een zeer laag geboortegewicht (VLBW)1. Bij VLBW-zuigelingen varieert de incidentie van de ziekte van 10% tot 12% en de mortaliteit van kinderen met de diagnose NEC ligt tussen 20% en 30%2,3. De oorzaak van NEC kan verband houden met mucosale verwondingen, invasie door pathogene bacteriën en darmvoeding, wat kan leiden tot ontstekingsreacties en de inductie van darmletsels bij gevoelige gastheren3. De pathogenese van NEC is onduidelijk. Relevant onderzoek toont aan dat de immuunrespons van het getroffen kind abnormaal is en dat genetische gevoeligheid, microvasculaire spanning en intestinale bacteriële veranderingen een belangrijke rol kunnen spelen bij de ziekte3.
Het NEC diermodel is een onmisbaar instrument voor onderzoek naar de pathogenese van NEC. De diersoorten die worden gebruikt voor NEC-modellen zijn varkens, ratten en muizen. Vanwege de lange draagtijd, groeicycli en hoge kosten zijn varkens de afgelopen jaren echter niet de eerste keuze geweest voor NEC-modellen en zijn ze vervangen door ratten of muizen4. Omdat er verschillen zijn in de immuunachtergrond van verschillende muizenstammen5, moeten verschillende studies verschillende muizenstammen gebruiken om NEC-diermodellen vast te stellen. BALB/c muizen hebben een belangrijk kenmerk; wanneer ze geïnfecteerd zijn of omgaan met externe schade, is de polarisatie van TH2-cellen tijdens infectie bij muizen aanzienlijk sterker dan die bij andere muizenstammen6,7,8. T-helpercellen spelen een cruciale rol in het optreden en de progressie van NEC, met name de ontwikkeling van TH2-cellen3,9,10,11. Daarom gebruikte deze studie BALB / c-muizen om het NEC-model vast te stellen, wat nuttig kan zijn voor NEC-ziekteonderzoek op T-cellen.

<table><tbody><tr><td>Absolute ethanol</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD.</td><td>100092683</td><td></td></tr><tr><td>Geitenmelkpoeder</td><td>&nbsp;Petag&nbsp;</td><td>71795558417</td><td></td></tr><tr><td>HE kleurstofoplossing</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD.</td><td>G1003</td><td></td></tr><tr><td>Isofluraan</td><td>RWD, Shenzhen Reward Life Technology Co., LTD.</td><td>R510&nbsp;&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>LPS</td><td>Sigma-Adrich</td><td>L2880</td><td></td></tr><tr><td>Medische zuurstof</td><td>verscheidene</td><td>verscheidene</td><td></td></tr><tr><td>Microscoop</td><td>NIKON</td><td>NIKON beeldvormingssysteem (DS-Ri2)</td><td></td></tr><tr><td>Neutrale hars</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD.</td><td>10004160</td><td></td></tr><tr><td>Paraffine</td><td>verscheidene</td><td>verscheidene</td><td></td></tr><tr><td>Premature babymelkpoeder</td><td>Abbott</td><td>57430</td><td></td></tr><tr><td>XYleen</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD.</td><td>10023418</td><td></td></tr><tr><td>1% Zoutzuuroplossing</td><td>verscheidene</td><td>verscheidene</td><td></td></tr><tr><td>10% Formaline</td><td>LEAGENE</td><td>DF0110</td><td></td></tr></tbody></table>

een neonatale balb / c muismodel van necrotiserende enterocolitis

A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis

Necrotiserende enterocolitis (NEC) is de ernstigste gastro-intestinale (GI) ziekte die vaak voorkomt bij premature baby's, vooral baby's met een zeer laag geboortegewicht, met een hoge mortaliteit en onduidelijke pathogenese. De oorzaak van NEC kan verband houden met inflammatoire immuunregulerende systeemafwijkingen. Een NEC-diermodel is een onmisbaar hulpmiddel voor nec-ziekte-immuunonderzoek. NEC-diermodellen gebruiken meestal C57BL / 6J neonatale muizen; BALB/c neonatale muizen worden zelden gebruikt. Gerelateerde studies hebben aangetoond dat wanneer muizen geïnfecteerd zijn, Th2-celdifferentiatie overheersend is bij BALB / c-muizen in vergelijking met C57BL / 6J-muizen. Studies hebben gesuggereerd dat het optreden en de ontwikkeling van NEC geassocieerd zijn met een toename van T-helper type 2 (Th2) cellen en over het algemeen gepaard gaan met infectie. Daarom gebruikte deze studie neonatale BALB / c-muizen om een NEC-model te induceren met vergelijkbare klinische kenmerken en intestinale pathologische veranderingen als die waargenomen bij kinderen met NEC. Verder onderzoek is gerechtvaardigd om te bepalen of dit diermodel kan worden gebruikt om Th2-celresponsen in NEC te bestuderen.

Het BALB/c muis NEC-model werd geïnduceerd door kunstvoeding, LPS-voeding, hypoxie en koudestimulatie. Tijdens de inductieperiode werden de muizen geobserveerd op darmpathologie, ontlastingskenmerken, veranderingen in lichaamsgewicht en dagelijkse overleving. Representatieve beelden van de dunne darm tijdens NEC-inductie; de getallen op de foto vertegenwoordigen de intestinale pathologiescore van 0 (normaal epitheel) tot 4 (de ernstigste) (figuur 3A). De intestinale pathologiescore was signi...

Necrotiserende enterocolitis (NEC) is de ernstigste gastro-intestinale (GI) ziekte die vaak voorkomt bij premature baby's, vooral baby's met een zeer laag geboortegewicht, met een hoge mortaliteit en onduidelijke pathogenese. De oorzaak van NEC kan verband houden met inflammatoire immuunregulerende systeemafwijkingen. Een NEC-diermodel is een onmisbaar hulpmiddel voor nec-ziekte-immuunonderzoek. NEC-diermodellen gebruiken meestal C57BL / 6J neonatale muizen; BALB/c neonatale muizen worden zelden gebruikt. Gerelateerde studies hebben aangetoond dat wanneer muizen geïnfecteerd zijn, Th2-celdifferentiatie overheersend is bij BALB / c-muizen in vergelijking met C57BL / 6J-muizen. Studies hebben gesuggereerd dat het optreden en de ontwikkeling van NEC geassocieerd zijn met een toename van T-helper type 2 (Th2) cellen en over het algemeen gepaard gaan met infectie. Daarom gebruikte deze studie neonatale BALB / c-muizen om een NEC-model te induceren met vergelijkbare klinische kenmerken en intestinale pathologische veranderingen als die waargenomen bij kinderen met NEC. Verder onderzoek is gerechtvaardigd om te bepalen of dit diermodel kan worden gebruikt om Th2-celresponsen in NEC te bestuderen.

Een neonatale BALB / c muismodel van necrotiserende enterocolitis

Necrotizing enterocolitis (NEC) is the most severe gastrointestinal (GI) disease that often occurs in premature infants, especially very low birth weight ...

Deze studie gebruikt BALB / c-muizen om het NEC-model vast te stellen, wat nuttig zal zijn voor ziekteonderzoek op T-cellen. Op dag vijf vertonen de twee groepen geen significant verschil in lichaamsgrootte. Op dag 10 waren de NEC-muizen echter aanzienlijk dunner dan de controlemuizen.Het gewicht van de muizen in de NEC-groep nam langzaam toe en de overlevingskans nam geleidelijk af tijdens de vijf dagen van modelvorming. Het NEC-model zou voordelig kunnen zijn voor het bestuderen van T-celpolarisatie. De procedure wordt gedemonstreerd door Yan Tian, een postdoctoraal postgraduaat uit mijn laboratorium.Gavage de muizen met 20 tot 30 microliter LPS en voed ze met 40 tot 50 microliter formule op dag vijf. Plaats ze vanaf dag vijf gedurende 90 seconden in een hypoxie-apparaat met 5% zuurstof en geef ze drie minuten opnieuw zuurstof. Plaats de muizen vervolgens gedurende 15 minuten in een omgeving van vier graden Celsius en breng ze over naar een couveuse.Observeer alle muizen nauwkeurig, weeg ze elke dag, registreer de overleving van de muizen tijdens de inductieperiode en registreer of hun ontlasting bloederig en plakkerig is. Houd de maagsonde in de rechterhand en bevestig het hoofd van de muis met de wijsvinger op het hoofd van de muis zachtjes naar achteren en naar beneden gedrukt. Plaats de maagsonde vanuit de linkerhoek van de mond en beweeg deze langzaam twee tot drie centimeter naar het midden van de mond.Duw 40 tot 50 microliter formule of 20 tot 30 microliter LPS in het spijsverteringskanaal. Als de muis een sterke braakreflex heeft en de maagsonde in de luchtpijp gaat, trek dan voorzichtig uit en laat de muis rusten voordat u opnieuw probeert te ontgassen. Dompel het verse illumweefsel van de muis onder in 10% formaline, sluit de weefsels in paraffine in en snijd ze in vier micrometersecties.Om de secties te deparaffiniseren, doe je ze in xyleen. Laat vijf minuten met succes weken in absolute ethanol, 95% ethanol, 80% ethanol, 70% ethanol en gedestilleerd water. Kleur vervolgens de secties gedurende vijf minuten met hematoxyline-oplossing en onderscheid ze gedurende vijf seconden in 1% zoutzuur en 70% alcohol.Kleur ze ten slotte gedurende één minuut met eosine-oplossing en onderzoek de histopathologie van het darmweefsel bij 40 keer de vergroting. Fotomicrografieën van de intestinale pathologiescore van nul tot vier toonden intact en normaal slijmvlies, milde submucosale en lamina propria-scheiding, matige submucosale en lamina propria-scheiding, ernstige submucosale en lamina propria-scheiding en intestinale villi-verdwijning met intestinale necrose. De intestinale pathologiescore was significant hoger in de NEC-groep dan in controle met een P-waarde van minder dan 0,001.De ontlasting werd gescoord van nul met goed gevormde pellets tot drie met vloeibare ontlasting. Op dag 10 waren de ontlastingsscores van de NEC-groepen significant hoger in de NEC-groep met een P-waarde van minder dan 0,001. Op dag vijf vertoonden de twee groepen geen significant verschil in lichaamsgrootte.Op dag 10 waren de muizen in de NEC-groep echter aanzienlijk dunner en kleiner van kop tot staart dan de muizen in de controlegroep. Het gewicht van de muizen in de NEC-groep nam langzaam toe en de overlevingskans nam geleidelijk af tijdens de vijf dagen van modelvorming. Het gereseceerde ileocecale gebied van het darmweefsel van NEC-patiënten vertoonde necrose van darmslijmvliesweefsel.In deze studie ontwikkelden de muizen in de NEC-groep ook ileocecale bloeding en necrose. Wanneer u de muis omzeilt, moet u ervoor zorgen dat de muis geen moeite heeft om te voorkomen dat de maagsonde wordt ingebracht. Gavage de muizen met 20 tot 30 microliter LPS en voed ze met 40 tot 50 microliter formule op dag vijf.Plaats vanaf dag vijf in een hypoxie-apparaat gedurende 90 seconden op 5% zuurstof en reoxygeereer ze gedurende drie minuten. Dit model kan nuttig zijn voor NEC-ziekteonderzoek op T-cellen en kan helpen bij het bestuderen van Th2-celresponsen in NEC.

a-neonatal-balbc-mouse-model-of-necrotizing-enterocolitis

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Source: Seman, B. G., et al. A Neonatal Imaging Model of Gram-Negative Bacterial Sepsis. J. Vis. Exp. (2020)The video demonstrates a neonatal mouse model for studying systemic infection using encapsulated bioluminescent bacteria. Neonatal pups are injected with high- or low-dose bacterial suspensions and returned to their mother for postnatal care. The encapsulated bacteria evade early immune detection, spread systemically, and are visualized over time using luminescence imaging. This model...

Modeling Infection in Neonatal Mice Using Encapsulated Bioluminescent Bacteria

This video demonstrates the development of necrotizing enterocolitis disease in a human-derived neonatal enteroid model induced by lipopolysaccharides treatment. This model helps to study intestinal pathophysiology.

Induction of Necrotizing Enterocolitis in Human Epithelial Enteroid Model

Hier wordt een procedure beschreven voor de oprichting van systemische infectie in de neonatale rat met culturen van Escherichia coli K1. Deze niet-invasieve procedure toestaat kolonisatie van het maagdarmkanaal, translocatie van het pathogeen in de systemische circulatie, en invasie van het centraal zenuwstelsel bij de choroid plexus.

Non-Invasive Model van Neuropathogenic Escherichia coli Infectie in de Neonatale Rat

Dit artikel beschrijft een methode voor het genereren van een reproduceerbare spinale cord compressie letsel (SCI) in de neonatale muis. Het model biedt een voordelige platform voor het bestuderen van mechanismen van adaptieve plasticiteit die ten grondslag liggen aan spontane functionele herstel.

Een Neonatale Mouse Spinal Cord Injury Compressie Model

Dit protocol biedt de nodige maatregelen treffen en evalueren van neonatale sepsis in 7 dagen oude muizen.

Een gecontroleerde muismodel voor neonatale Sepsis van de Polymicrobial

We ontwikkelden een model van chorioamnionitis om foetale blootstelling aan maternale ontsteking (FEMI) te simuleren zonder complicaties van levende organismen om de effecten van FEMI op de ontwikkeling van het darmkanaal van het nageslacht te onderzoeken. Dit maakt het mogelijk om mechanistische oorzaken voor de ontwikkeling van darmletsel na chorioamnionitis te bestuderen.

Een murien model van foetale blootstelling aan maternale ontsteking om de effecten van acute chorioamnionitis op de ontwikkeling van pasgeborenen te bestuderen

Infectie van neonatale muizen met bioluminescente E. coli O1:K1:H7 resulteert in een septische infectie met significante longontsteking en longpathologie. Hier beschrijven we procedures om neonatale sepsis te modelleren en verder te bestuderen met behulp van longitudinale intravitale beeldvorming parallel met de opsomsoming van systemische bacteriële lasten, ontstekingsprofilering en longsentopathologie.

Een neonatale beeldvorming model van gram-negatieve bacteriële sepsis

Dit protocol beschrijft een in vitro model van necrotiserende enterocolitis (NEC), dat kan worden gebruikt voor mechanistisch onderzoek naar de pathogenese van ziekten. Het beschikt over een microfluïdische chip bezaaid met darmenteroïden die zijn afgeleid van de menselijke neonatale darm, endotheelcellen en het darmmicrobioom van een pasgeborene met ernstige NEC.

Microfluïdisch model van necrotiserende enterocolitis met menselijke neonatale darmenteroïden en een dysbiotisch microbioom

Vroeggeboorte (bevalling &lt; 37 weken) is een urgent wereldwijd gezondheidsprobleem met suboptimale preventie- en behandelingsopties. We presenteren een muismodel van oplopende vaginale bacteriële infectie-geïnduceerde vroeggeboorte en schetsen hoe de resulterende neonatale morbiditeit en mortaliteit kunnen worden geanalyseerd.

Modellering van oplopende vaginale infectie, vroeggeboorte en neonatale morbiditeit bij muizen

Dit protocol schetst een neonataal muismodel van necrotiserende enterocolitis (NEC) en daaropvolgende isolatie van lamina propria-immuuncellen uit de neonatale muizendunne darm.

Een neonataal muismodel van necrotiserende enterocolitis en lamina propria-isolatie voor profilering van immuuncellen

Leer hoe je een neonataal BALB/c muismodel van necrotiserende enterocolitis opzet voor onderzoek naar T-celresponsen. Deze methode helpt bij het bestuderen van immuunmechanismen bij NEC.

Een neonatale BALB / c muismodel van necrotiserende enterocolitis

Meer video's verkennen