Name: Isolatie van groep 2 aangeboren lymfoïde cellen van muis neusslijmvlies om de expressie van CD226 te detecteren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-05-10T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 30 s
Description: Leer groep 2 aangeboren lymfoïde cellen isoleren uit muizenneusslijmvlies voor detectie van CD226-expressie via flowcytometrie. Deze methode ondersteunt onderzoek naar ILC2s bij allergische rinitis.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

R.Z. werd ondersteund door de National Natural Science Foundation of China (nr. 81871258) en fondsen verstrekt door de Fourth Military Medical University (nr. 2020rcfczr). Y.Z. werd ondersteund door het Natural Science Basic Research Program van Shaanxi (Nr. 2021JM-081).

Alle experimenten werden uitgevoerd in overeenstemming met de richtlijnen voor verzorging en gebruik van proefdieren. Alle procedures en protocollen werden goedgekeurd door de Ethische Commissie voor Wetenschappelijk Onderzoek van de Vierde Militaire Medische Universiteit (nr. 20211008).
1. Murine AR-modelvestiging
<ol><li>Huis mannelijke en vrouwelijke wild-type (WT) C57BL / 6 muizen in de leeftijd van 8-12 weken onder specifieke pathogeenvrije omstandigheden en bieden standaard laboratorium chow en water.</li>
	<li>Emulgeer 50 μg ovalbumine (OVA) in 0,2 ml steriele PBS met 2 mg aluminiumhydroxide op een schone bank om de steriliteit te behouden. Injecteer op dag 0, 7 en 14 intraperitoneaal vrouwelijke of mannelijke muizen met elk 50 μg geëmulgeerde OVA.</li>
	<li>Op dag 21, 22, 23, 24 en 25, intranasaal inbrengen muizen met 50 μg OVA opgelost in 30 μL steriele PBS (15 μL per neusgat) onder inhalatie-anesthesie (2-3% isofluraan met een zuurstofstroomsnelheid of 0,5 l / min).</li>
	<li>Euthanaseer de muizen 24 uur na de laatste uitdaging (dag 26).</li>
</ol>2. Isolatie van mononucleaire cellen (MNC's) uit het neusslijmvlies
<ol><li>Euthanaseer de muizen door cervicale dislocatie onder diepe anesthesie. Week de muizenkop gedurende 5 minuten in 75% ethanol en vermijd dat ethanol het externe neusgat binnendringt. Plaats de buik naar beneden op de operatietafel.</li>
	<li>Knip de voortanden af. Maak op de middellijn van het hoofd een incisie en knip de huid open met een schaar.</li>
	<li>Verwijder de onderkaak, snijd de hele neus langs het uiteinde van het gehemelte af en plaats het weefsel in een petrischaal van 60 mm met 5 ml ijskoude PBS. Verwijder met een schaar en een tang het vlees en de spieren die zich aan de botten hechten.</li>
	<li>Breng de muisneus over in een nieuwe petrischaal van 60 mm met 5 ml ijskoud PBS. Was de botten twee keer met 5 ml ijskoude PBS.</li>
	<li>Breng de neus over in een microcentrifugebuis van 1,5 ml.</li>
	<li>Sla de neus voldoende kapot en breng deze over in een buis van 15 ml met 2 ml voorverwarmde verteringsbuffer (RPMI 1640 medium aangevuld met 1 mg/ml collagenase IV en 10 U/ml DNase I).</li>
	<li>Bevestig het deksel en plaats de buis verticaal in een orbitale schudder bij 37 °C, met continu roeren bij 120-150 tpm gedurende 40 minuten. OPMERKING: Verwarm de verteringsbuffer voor tot 37 °C om de hoogste enzymactiviteit te bereiken.</li>
	<li>Voeg 5 ml ijskoud RPMI 1640-medium met 10% foetaal runderserum (FBS) toe om het verteringsproces te stoppen.</li>
	<li>Filter door een 70 μm celzeef om vaste fragmenten te verwijderen.</li>
	<li>Centrifugeer gedurende 5 minuten op 500 x g en gooi het supernatant voorzichtig weg.</li>
	<li>Resuspendie van de pellet in ijskoud RPMI 1640 medium en centrifugeer gedurende 5 minuten op 500 x g . Gooi het supernatant voorzichtig weg.</li>
	<li>Resuspendeer de celpellet in 4 ml 40% dichtheidsgradiëntmedia (160 μl 10x PBS + 1,44 ml dichtheidsgradiëntmedia-voorraadoplossing + 2,4 ml RPMI 1640-medium).</li>
	<li>Plaats voorzichtig een Pasteur-pipet op de bodem van de buis en voeg langzaam 2,5 ml 80% dichtheidsgradiëntmedia toe (200 μL 10x PBS + 1,8 ml dichtheidsgradiëntmedia-voorraadoplossing + 0,5 ml RPMI 1640-medium).</li>
	<li>Stel de versnellings- en vertragingssnelheid van de centrifuge lager in dan de derde versnelling en centrifugeer gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur (RT) op 400 x g .</li>
	<li>Verwijder de bovenste laag onzuiverheden voordat u de cellen op het grensvlak afvoert om mogelijke besmetting te voorkomen. Giet de mononucleaire cellen (MNC's) laag op de 40%/80% dichtheid gradiënt media interface voorzichtig af in een buis van 15 ml met 2 ml ijskoude PBS met behulp van een pipet. Was de cellen twee keer met ijskoude PBS.</li>
</ol>3. Oppervlaktekleuring voor FCM-analyse
<ol><li>Oogst de cellen en centrifugeer gedurende 5 minuten bij 500 x g bij 4 °C. Resuspendeer de celpellet in kleurbuffer (PBS aangevuld met 2% FBS en 0,1% NaN3) en centrifugeer gedurende 5 minuten bij 500 x g bij 4 °C. Gooi het supernatant weg. LET OP: Wees voorzichtig bij het voorbereiden van de kleuringsbuffer. NaN3 is zeer giftig en kan schade aan organen veroorzaken bij inslikken, inademen of in contact komen met de huid. Vermijd ook afgifte aan de omgeving.</li>
	<li>Resuspendeer de cellen in 80 μL blokkerende oplossing (anti-CD16/32 antilichaam (1:100) verdund in kleuringsbuffer) per buis. Incubeer gedurende 30 minuten in het donker bij 4 °C.</li>
	<li>Voeg zonder wassen 20 μl van de juiste verdunning van de oppervlaktekleuringscocktail van antilichamen toe (tabel 1).</li>
	<li>Voeg 1 μL (per test) fixeerbare levensvatbaarheidskleurstof 520 (FVD) toe vlak voordat u de antilichaamcocktail aan de monsters toevoegt. Incubeer in het donker bij 4 °C gedurende 30 min. Stel overeenkomende isotype-antilichamen en fluorescentie minus één (FMO) in als de negatieve controles.</li>
	<li>Was de cellen in 500 μL kleuringsbuffer door gedurende 5 minuten bij 4 °C te centrifugeren op 500 x g .</li>
	<li>Resuspendeerde de celkorrel in 200 μL kleuringsbuffer. Voeg 50 μL vortexed absolute telparels toe aan de gekleurde cellen en roer. Onderwerp ze aan een flowcytometrie (FCM) analyse. OPMERKING: FCM-gegevens werden verkregen met behulp van een spectrale celanalysator en geanalyseerd met flowcytometrie (FCM) analysesoftware.</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

ILC2's zijn nauw verbonden met type 2-ontsteking en ontstekingsstoornissen, zoals aangetoond door een toenemend aantal studies. Zowel muismodellen als menselijke observatie dragen bij aan een beter begrip van de functie ervan in de bovenste luchtwegen. In astmapathofysiologie worden ILC2's geactiveerd door thymusstromale lymfopoietine, IL-25 en IL-33, die meestal worden geproduceerd door epitheelcellen. Vervolgens spiegelen ze Th2-cellen en produceren ILC2's IL-4, IL-5 en IL-13 om type 2-ontstekingte ve...

Groep 2 aangeboren lymfoïde cellen (ILC2's) werden voor het eerst ontdekt in de peritoneale holteweefsels van muizen en bleken vervolgens aanwezig te zijn in het bloed en andere perifere weefsels zoals de longen, huid en neusholte 1,2,3. Als weefsel-residente cellen worden ILC2's voornamelijk lokaal onderhouden en geprolifereerd en functioneren ze als de eerste bewakers die reageren op exogene schadelijke stimuli door talrijke type 2 cytokines te produceren en type 2 immuniteit 4,5,6 te induceren. ILC2's kunnen ook hun effecten uitoefenen door te smokkelen naar de geïnfecteerde weefsels 7,8.
Net als T-helper 2 (Th2) cellen, zorgen de gecompliceerde regulerende netwerken van ILC2's voor hun significante betrokkenheid bij de progressie van verschillende type 2 ontstekingsziekten, waaronder allergische aandoeningen van de luchtwegen 8,9. Bij astma kunnen van epitheelcellen afgeleide alarmins ILC2's activeren, die longontsteking verder bevorderen door de secretie van interleukine (IL) -4, IL-5 en IL-1310. Klinische studies hebben ook aangetoond dat ILC2-niveaus significant verhoogd waren in het sputum en bloed van patiënten met ernstig astma, wat wijst op een associatie van ILC2's met astma-ernst en hun functie als voorspeller van astmaprogressie11.
Allergische rhinitis (AR) is een veel voorkomende chronische ontstekingsziekte die jaarlijks miljoenen mensen treft, en effectieve behandelingen voor deze ziekte zijn beperkt12,13. ILC2's spelen een cruciale rol in de pathofysiologie van AR, of het nu gaat om de sensibilisatiefase of symptoomgeneratie en ontstekingsfase14. Bij patiënten met AR zijn de niveaus van ILC2 in het perifere bloed zowel lokaal als systemisch verhoogd15. Bepaalde effecten en de onderliggende mechanismen van ILC2's op de pathofysiologie en progressie van AR vereisen echter nog steeds verder onderzoek.
CD226 - een transmembraan glycoproteïne dat dient als een costimulatory molecuul - wordt voornamelijk uitgedrukt op natural killer (NK) cellen, T-cellen en andere inflammatoire monocyten16,17. De interactie van CD226 en zijn liganden (CD155 en/of CD112) of concurrent (TIGIT) stelt het in staat om deel te nemen aan de biologische functies van verschillende immuuncellen18. De binding van de liganden op antigeen-presenterende cellen aan CD226 op cytotoxisch lymfocyt (CTL) bevordert de activering van beide cellen tegelijkertijd, terwijl de activering van CTL verder kan worden onderdrukt door TIGIT (T-cel immunoreceptor met Ig- en ITIM-domeinen), de concurrent van CD22619,20. Een menselijke ex vivo studie toonde aan dat CD226 en CD155 op T-cellen de balans tussen Th1/Th17 en Th2 reguleren door differentieel modulerende Th-deelverzamelingen21. CD226 kan eveneens bloedplaatjesadhesie en NK tumordodende activiteit bemiddelen22,23. Ondertussen is CD226 goed bestudeerd in de pathogenese van verschillende infectieziekten, auto-immuunziekten en tumoren 18,24,25. Op dit moment is CD226 een nieuw lichtpuntje geworden voor immunotherapie. Studies hebben aangetoond dat extracellulaire blaasjes CD226-expressie op NK-cellen kunnen omkeren om hun cytotoxische activiteit te herstellen en in te grijpen in de progressie van longkanker26. Een recente studie heeft een subcluster van foetale intestinale groep 3 ILC's onthuld die worden gekenmerkt door hoge CD226-expressie door eencellige RNA-sequencing27, wat aangaf dat CD226 een rol zou kunnen spelen in de aangeboren lymfoïde celgemedieerde immuniteit.
Onze kennis over ILC2's bij luchtwegontsteking is voornamelijk gebaseerd op studies over astma; Er is echter weinig bekend over hun functies in nasale mucosale immuniteit. Zo werd een protocol opgesteld om ILC2's uit het neusslijmvlies te isoleren en te identificeren. De studie richt zich op de expressie van CD226 op ILC2's in neusweefsels en de variatie tussen gezonde en AR-muizen. Dit kan nieuwe inzichten opleveren in de onderliggende mechanismen van ILC2-gemedieerde regulatie in de lokale immuniteit en dienen als basis voor het ontwikkelen van nieuwe benaderingen voor AR-behandeling.

<table><tbody><tr><td>Aluminum hydroxide</td><td>Meilun biologische Technologie</td><td>21645-51-2</td><td></td></tr><tr><td>CD11b</td><td>eBioscience</td><td>11-0112-82</td><td>Gebruikt in antilichaam cocktail</td></tr><tr><td>CD11c</td><td>BioLegend</td><td>117306</td><td>Gebruikt in antilichaam cocktail</td></tr><tr><td>CD16/32</td><td>BioLegend</td><td>101302</td><td>Clone: 93; Verdunning 1:100</td></tr><tr><td>CD226</td><td>BioLegend</td><td>128812</td><td>Gebruikt in antilichaam cocktail</td></tr><tr><td>CD3e</td><td>BioLegend</td><td>100306</td><td>Gebruikt in antilichaam cocktail</td></tr><tr><td>CD45</td><td>BioLegend</td><td>103128</td><td>Gebruikt in antilichaam cocktail</td></tr><tr><td>CD45R</td><td>eBioscience</td><td>11-0452-82</td><td>Gebruikt in antilichaam cocktail</td></tr><tr><td>CD90.2</td><td>BD Pharmingen</td><td>553014</td><td>Gebruikt in antilichaam cocktail</td></tr><tr><td>Collagenase IV</td><td>DIYIBio</td><td>DY40128</td><td></td></tr><tr><td>CountBright absolute counting beads</td><td>Invitrogen</td><td>C36950</td><td>absolute counting beads</td></tr><tr><td>Dnase <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63525/63525eq01v2.jpg" style="margin: auto;"/></td><td>Beyotime</td><td>D7076</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>gibco</td><td>10270-106</td><td></td></tr><tr><td>Fixable Viability Dye eFluor 520 (FITC)</td><td>eBioscience</td><td>65-0867-14</td><td>FVD</td></tr><tr><td>HBSS, calcium, magnesium</td><td>Servicebio</td><td>G4204-500</td><td></td></tr><tr><td>KLRG1</td><td>eBioscience</td><td>17-5893-81</td><td>Gebruikt in antilichaam cocktail</td></tr><tr><td>NaN3</td><td>SIGMA</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>NovoExpress software</td><td>AgilentTechnologies</td><td>Version 1.5.0</td><td>flow cytometry (FCM) analysesoftware</td></tr><tr><td>OVA</td><td>SIGMA</td><td>9006-59-1</td><td></td></tr><tr><td>PBS, 1x</td><td>Servicebio</td><td>G4202-500</td><td></td></tr><tr><td>PBS, 10x</td><td>Servicebio</td><td>G4207-500</td><td></td></tr><tr><td>Percoll</td><td>Yeasen</td><td>40501ES60</td><td>density gradient media</td></tr><tr><td>RPMI 1640 culture media</td><td>Corning</td><td>10-040-CVRV</td><td></td></tr><tr><td>Spectral cell analyzer</td><td>SONY</td><td>SA3800</td><td></td></tr></tbody></table>

isolatie van groep 2 aangeboren lymfoïde cellen van muis neusslijmvlies om de expressie van cd226 te detecteren

Isolation of Group 2 Innate Lymphoid Cells from Mouse Nasal Mucosa to Detect the Expression of CD226

Met overvloedig onderzoek naar groep 2 aangeboren lymfoïde cellen (ILC2s) gepubliceerd door de jaren heen, is algemeen bekend dat ILC2's betrokken zijn bij het reguleren van verschillende pathologische processen, waaronder anti-helminth immuniteit, weefselherstel, thermogenese en auto-immuunziekten zoals astma en allergische rhinitis (AR). ILC2's bevinden zich permanent in perifere weefsels zoals de huid, darmen, longen en neusholte; Er is echter beperkte informatie over hun exacte functies in nasale mucosale immuniteit. CD226 is een activerend kostenimulatoir molecuul, voornamelijk uitgedrukt op natural killer (NK) cellen, T-cellen en inflammatoire monocyten. Of ILC2's CD226 tot expressie brengen of een rol spelen in de pathogenese van ILC2s-gerelateerde ziekten blijft echter onbekend. Hier hebben we een methode vastgesteld om ILC2's uit het neusslijmvlies te isoleren en te identificeren en CD226-expressie gedetecteerd op ILC2's verkregen van gezonde en AR-muizen. Hierin beschrijven we dit protocol voor de isolatie en identificatie van ILC2's uit neusslijmvlies van muizen, dat zal helpen bij het verkennen van het interne pathologische mechanisme van immunologische aandoeningen bij neusslijmvliesaandoeningen.

Een OVA-geïnduceerd muizenmodel werd ontwikkeld om de rol van ILC2's in AR te onderzoeken. De constructie van het AR-muizenmodel was gebaseerd op eerdere studies met kleine wijzigingen 28,29,30,31. Een video van 10 minuten werd opgenomen om de frequentie van niezen en nasale krabben na de laatste neusuitdaging te meten. Allergische symptomen van de OVA-geïnduceerde-AR-muizen werden weergegeven ...

Groep 2 aangeboren lymfoïde cellen (ILC2's), betrokken bij type 2-ontsteking, nemen voornamelijk deel aan de reactie op worminfectie, allergische aandoeningen, metabole homeostase en weefselherstel. In deze studie wordt een procedure aangetoond om ILC2's te isoleren van murine neusslijmvlies en de expressie van CD226 te detecteren.

Isolatie van groep 2 aangeboren lymfoïde cellen van muis neusslijmvlies om de expressie van CD226 te detecteren

With abundant research on group 2 innate lymphoid cells (ILC2s) published over the years, ILC2s are widely known to be implicated in regulating various ...

Dit protocol is opgesteld om de groep twee aangeboren lymfoïde cellen uit het muriene neusslijmvlies te isoleren en te identificeren en de bepaalde effecten en onderliggende mechanismen van de ILC twee bij neusziekten te onderzoeken. Deze techniek stelt de onderzoekers in staat om ILC twee te isoleren van lokaal mesotheliaal en de expressie van oppervlakteantigeen bloot te leggen door flowcytometrie. Onze techniek omvat geen ingewikkelde operaties.Een belangrijk ding is echter proberen het vlees dat zich aan de kleine botten hecht volledig te verwijderen om de impact van andere nabijgelegen weefsels te voorkomen Voordat u met het experiment begint, huisvest u wild type C57 zwarte zes mannelijke en vrouwelijke muizen van 8 tot 12 weken onder specifieke pathogeenvrije omstandigheden voorzien van standaard laboratorium chow en water. Om het allergische rhinitismodel vast te stellen, emulgeert u 50 microgram ovalbumine in 0,2 milliliter steriele PBS met twee milligram aluminiumhydroxide en injecteert u intraperitoneaal 50 microgram geëmulgeerd ovalbumine in elke muis op nul, zeven en 14 dagen. Op dag 21, 22, 23, 24 en 25 instilleerde intranasaal muizen met 50 microgram ovalbumine opgelost in 30 microliter steriele PBS, gevolgd door euthanasie van de muizen 24 uur na de laatste uitdaging.Week de kop van de geëuthanaseerde muis gedurende vijf minuten in 75% ethanol en vermijd dat ethanol het uitwendige neusgat binnendringt. Plaats de buik naar beneden op de operatietafel. Knip de vier tanden af en maak op de middellijn van het hoofd een incisie en knip de huid open met een schaar.Verwijder vervolgens de onderkaak, snijd de hele neus langs het uiteinde van het gehemelte af en plaats het weefsel in een petrischaal van 60 millimeter met vijf liter ijskoude PBS. Verwijder met een schaar en een tang het vlees en de spieren die zich aan de botten hechten. Breng vervolgens de muizenneus over naar een nieuwe petrischaal van 60 millimeter met vijf milliliter ijskoude PBS en was de botten.Breng na de tweede wasbeurt de neus over in een microcentrifugebuis van 1,5 milliliter. Breek het weefsel voldoende en breng het over in een buis van 15 milliliter met twee milliliter voorverwarmde verteringsbuffer. Bevestig het deksel en plaats de buis verticaal in een orbitale shaker bij 37 graden Celsius en 120 tot 150 RPM gedurende 40 minuten.Voeg vervolgens vijf milliliter ijskoud RPMI 1640-medium toe met 10% foetaal runderserum om de spijsvertering te stoppen. Filter vervolgens de inhoud door een celzeef van 70 micron om vaste fragmenten te verwijderen. Nadat u het filtraat gedurende vijf minuten op 500 G hebt gecentrifugeerd, gooit u het supernatant voorzichtig weg en resuspenseert u de pellet in ijskoud RPMI 1640-medium.Om de centrifugatie te herhalen zoals eerder is aangetoond, resuspensie van de celpellet in vier milliliter 40% dichtheidsgradiëntmedia. Plaats vervolgens voorzichtig een Pasteur-pipet op de bodem van de buis om 2,5 milliliter 80% dichtheidsgradiëntmedia toe te voegen. Centrifugeer de buis gedurende 15 minuten op 400 G bij kamertemperatuur met de versnellings- en vertragingssnelheid lager ingesteld dan de derde versnelling.Voordat u de cellen op het grensvlak aftapt, verwijdert u de bovenste laag onzuiverheden om mogelijke besmetting te voorkomen. Gebruik vervolgens een pipet om de mononucleaire cellaag op de 40% bij 80% dichtheid gradiënt media-interface af te tappen in een buis van 15 milliliter met twee milliliter ijskoud. Was de cellen twee keer met ijskoude PBS.Oogst de cellen en centrifugeer ze gedurende vijf minuten op 500 G bij vier graden Celsius. Resuspendeer de celkorrel in kleurbuffer en centrifugeer opnieuw gedurende vijf minuten bij 500 G.Gooi het supernatant weg. Resuspendeer en incubeer de cellen in 80 microliter blokkerende oplossing gedurende 30 minuten bij vier graden Celsius in de donkere toestand.Voeg een microliter fixeerbare levensvatbaarheidskleurstof 520 toe vlak voordat u 20 microliter van de oppervlaktekleuringsantilichaamcocktail van de juiste verdunning aan het monster toevoegt. Stel ook de overeenkomende isotype-antilichamen en fluorescentie minus één in als de negatieve controles. Was vervolgens de cellen in 500 microliter kleuringsbuffer door gedurende vijf minuten bij vier graden Celsius op 500 maal G te centrifugeren.Suspensie vervolgens de celpellet in 200 microliter kleuringsbuffer. Voeg ten slotte 50 microliter vortexed absolute telparels toe aan de gekleurde cellen. Roer ze en onderwerp ze aan een flowcytometrie-analyse.Een door eicellen geïnduceerd muizenmodel dat werd ontwikkeld om de rol van groep twee aangeboren lymfoïde cellen te onderzoeken, toonde aan dat de frequentie van nasaal wrijven en niezen bij de allergische rhinitismuizen significant hoger was dan in de controlegroep. In het neusslijmvlies van gezonde controlemuizen werd ongeveer 2 tot 3% van de afstammingsnegatieve en CD 45-positieve cellen geïdentificeerd. Het absolute aantal groep twee aangeboren lymfoïde cellen varieerde van 2.000 tot 4.000.De flowcytometrie-analyse wees op een opmerkelijke toename van het totale aantal groep twee aangeboren lymfoïde cellen in allergische rhinitis neusslijmvlies in vergelijking met die bij gezonde controlemuizen. Hogere expressie van CD 226 werd gedetecteerd op de groep twee aangeboren lymfoïde cellen in de allergische rhinitis muizen dan in de controlemuizen. Bovendien werd de gemiddelde fluorescentie-intensiteit van CD 226 significant verhoogd in de AR-muizen.Wees je bewust van de stappen van het verwijderen van het vlees dat zich aan het neusbeen hecht, het instellen van de versnellings- en vertragingssnelheid bij het centrifugeren van de media en het draineren van de mononucleaire cellen. De geïdentificeerde ILC-tweeën kunnen een stand zijn voor flowcytometriekarakterisering gesorteerd voor celkweek of gestimuleerd in vitro, wat zou helpen bij het onderzoeken van het specifieke risico van ILC-tweeën in neusweefsel. Deze procedure van het isoleren en karakteriseren van lymfocyten, met name in aangeboren lymfecellen in neusslijmvlies, maakt dit protocol een voorlopige referentie voor onderzoekers die de lokale nasale immuunomgeving verkennen.

isolation-group-2-innate-lymphoid-cells-from-mouse-nasal-mucosa-to

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Isolatie van lymfocyten met behulp van de Miltenyi MAC-kit is een betrouwbare manier om cellen van hele lymfeweefsel homogenaten te zuiveren. Cellen gezuiverd met behulp van de Miltenyi systeem zijn meestal ≥ 96% zuiver. Hier tonen we de stappen die zijn genomen om CD4 + T-cellen, een van de vele kits worden aangeboden door Miltenyi isoleren.

Isolatie van CD4 + T-cellen van de muis lymfeknopen Met behulp van Miltenyi MACS Zuivering

Methoden om bijdragen van de nasofaryngeale-geassocieerde lymforeticulaire weefsels (nalt) naar neus-en systemische immuunrespons van muizen voor intranasale vaccins te onderzoeken beschreven. We tonen een chirurgische ingreep om een ​​nalt-afhankelijke muis model vast te stellen...

Het onderzoeken van de rol van Nasopharyngeal-geassocieerde lymforeticulaire Tissue (nalt) in de muis reacties op vaccins

Een efficiënte manier om lymfocyten uit muizen genitaal isoleren beschreven. Deze methode maakt gebruik van enzymdigestie en Percoll gradiëntscheiding om efficiënte isolatie. Deze techniek is ook aangepast aan gebruik in andere...

Isolatie van Lymfocyten van Mouse geslachtsorganen Mucosa

Er is een toenemende belangstelling voor het begrijpen van de immunologische functies van specifieke subpopulaties van cellen in platen van Peyer (PP), de primaire inductieve plaatsen van darm-geassocieerd lymfeweefsel. Hier schetsen we parallel protocollen voor de voorbereiding van PP enkele cel voorbereidingen voor flowcytometrische analyse en PP cryocoupes voor immunokleuring.

Isoleren En Immunokleuring Lymfocyten en dendritische cellen uit Patches Murine Peyer

Isolatie van lymfeklieronstcellen is een meervoudige procedure die enzymatische vertering en mechanische disaggregatie omvat om fibroblastische reticulaire cellen, lymfatische en bloed-endotheelcellen te verkrijgen. In de beschreven procedure wordt een korte vertering gecombineerd met geautomatiseerde mechanische disaggregatie om de degradatie van oppervlaktemarkeringen van vitale lymfeklersonstcellen te minimaliseren.

Isolatie van muizen lymfkliertest stromale cellen

Er is een algemene kennisgebrek over hoe vaccins werken. Hier stellen we het gecombineerde gebruik van omgekeerde genetica en botmerg chimerische muizen voor om inzicht te krijgen in de vroege gastheer immuunreacties op vaccins met een speciale focus op dendritische cellen en T-cel immuniteit.

Intranasale toediening van recombinante Influenza Vaccines in Chimerisch muismodellen om mucosale immuniteit bestuderen

We beschrijven hier een protocol voor het isoleren van myeloïde cellen uit muizenhuid en drainerende lymfknoop na intradermale injectie van Plasmodium sporozoïeten. Stroomcytometrie van de verzamelde cellen biedt een betrouwbare test om de ontstekingsreactie in de huid en de drainerende lymfknoop op de parasiet te karakteriseren.

Myeloïde Cell Isolatie van Mouse Skin en aftappen lymfkliertest Na Intradermal Immunisatie met levende verzwakte<em&gt; Plasmodium</em&gt; sporozoieten

Hier beschrijven we een gedetailleerd protocol voor de isolatie van lymfocyten van de inductieve sites met inbegrip van de darm-geassocieerde lymfoïde weefsel Peyer van patches en de zuig mesenterische lymfklieren, en de effector met inbegrip van de lamina propria en de intestinale epitheel van het kleine intestinale immuunsysteem.

Isoleren van lymfocyten van het immuunsysteem intestinale kleine muis

In het huidige protocol leggen we uit hoe je gemakkelijk tonsillar mononucleaire cellen van gezonde mensen verwerken en kweken die gedeeltelijke chirurgische tonsillectomie ondergaan om aangeboren immuunreacties bij activering te bestuderen, waarbij virale infectie in mucosale weefsels nabootst.

Isolatie van tonsillaire mononucleaire cellen om ex vivo ingeboren immuunreacties te bestuderen in een menselijk mucosale lymfoïde weefsel

Hier presenteren we een protocol om de menselijke limbale nichecellen te isoleren en te identificeren.

Isolatie en identificatie van limbale nichecellen

Leer groep 2 aangeboren lymfoïde cellen isoleren uit muizenneusslijmvlies voor detectie van CD226-expressie via flowcytometrie. Deze methode ondersteunt onderzoek naar ILC2s bij allergische rinitis.

Isolatie van groep 2 aangeboren lymfoïde cellen van muis neusslijmvlies om de expressie van CD226 te detecteren

Meer video's verkennen