Name: Standaard membraanvoedingstest voor de detectie van Plasmodium falciparum-infectie in Anopheles Mosquito Vectors (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-05-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 28 s
Description: Leer de standaard membraanvoedingstest voor antimalaria-onderzoek met Anopheles-muggen. Deze methode evalueert verbindingen die malariaoverdracht blokkeren via oöcystdetectie in het midden-darm.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs willen Graag Onze erkentelijkheid betuigen. Lyn-Mari Birkholtz en Dr. Janette Reader van de afdeling Biochemie, Genetica en Microbiologie, Instituut voor Duurzame Malariabestrijding, aan de Universiteit van Pretoria, voor het kweken en leveren van de gametocytencultuur. De parasiestam is verkregen van deze laatste afdeling (geen onderdeel van deze publicatie). Het Department of Science and Innovation (DSI) en de National Research Foundation (NRF); South African Research Chairs Initiative (UID 64763 tot LK en UID 84627 tot LMB); de NRF Communities of Practice (UID 110666 aan LMB en LK); en de South African Medical Research Council Strategic Health Innovation Partnerships (SHIP) zijn ook erkend voor fondsen van de DSI.

Zie figuur 1 voor een illustratie van het protocol. Ethische goedkeuring werd verkregen van de Ethische Commissie gezondheidswetenschappen van de Universiteit van Pretoria (506/2018) voor het terugtrekken en gebruiken van menselijk bloed.
1. Gametocytencultuur
OPMERKING: Voorafgaand aan het opzetten van de SMFA werd een gametocytencultuur voorbereid aan de Universiteit van Pretoria (zie Reader et al.22 voor het volledige protocol).
<ol><li>Bereid een gametocytencultuur voor die bestaat uit stadium V-gametocyten van de NF54-parasietenstam.</li>
	<li>Zorg ervoor dat de gametocytemie van de cultuur tussen 1,5% en 2,5% ligt, met een 50% hematocriet in A + mannelijk serum, waaraan verse rode bloedcellen worden toegevoegd.</li>
	<li>Scheid de cultuur in verschillende kolven en voeg 48 uur voorafgaand aan het uitvoeren van de SMFA 2 μM van elke verbinding toe voor elke respectieve behandeling. Laat de controlegroep onbehandeld.</li>
	<li>Beoordeel de gametocytencultuur kort voordat de SMFA wordt uitgevoerd om de exflagelatie van mannelijke gameten te garanderen, met de aanwezigheid van een 3: 1 vrouw: man-verhouding.</li>
</ol>2. Kunstmatige infectie van muggen via de SMFA
OPMERKING: Bioveiligheid: geïnfecteerde muggen moeten worden gehuisvest in een bioveiligheidsniveau 2 (BSL2) -faciliteit met beperkte toegang.
<ol><li>Plaats met behulp van een mondaspirator 25 ongevoede vrouwelijke An. gambiae muggen in een voedingsbeker van 350 ml. Doe hetzelfde voor elke behandelingsbeker en label de cups duidelijk op basis van of ze moeten worden gebruikt als controle- of behandelingsgroepen. Kies het aantal kopjes per behandeling op basis van het aantal technische replica's dat is inbegrepen. OPMERKING: Koloniemuggen tussen 5 en 7 dagen oud worden gebruikt in een typische transmissieblokkerende samengestelde evaluatie. Het uithongeren van muggen gedurende 3-4 uur of langer voorafgaand aan de bloedvoeding zal de opname van bloed tijdens SMFA vergemakkelijken.</li>
	<li>Sluit het glazen invoersysteem aan op het waterbad en houd de temperatuur op 37 °C. OPMERKING: De glazen feeder bestaat uit twee armen, die zijn verbonden met de siliconen slang waarop het waterbad is aangesloten (figuur 2). De holle structuur van de feeder laat water circuleren door en onderhoud van de temperatuur van het bloed.</li>
	<li>Bereid de darm van de koe (of het synthetische membraan) voor door het in leidingwater te spoelen en in stukken te snijden die voor elke feeder zijn aangebracht. Bedek elke feeder en bevestig het membraan met een elastische band. OPMERKING: Er was geen ethische goedkeuring nodig voor de darm, omdat het werd gekocht bij een lokale slagerij, waar het aan het publiek wordt verkocht voor voedselbereiding.</li>
	<li>Plaats de infectiebekers onder de feeders, waarbij het membraan bovenop het net van de beker ligt.</li>
	<li>Voeg 1 ml met gametocyten geïnfecteerd bloed toe aan de feeders van de controlebekers en met gametocyten geïnfecteerd bloed met toegevoegde verbinding aan elke overeenkomstige mengvoeder en beker.</li>
	<li>Laat de muggen ongeveer 40 minuten voeden met de feeders onbedekt. OPMERKING: Voedingen vinden plaats onder insectaire omstandigheden (25 °C, 80% relatieve vochtigheid) in het donker. De diameter van een feeder is ongeveer 13 mm.</li>
	<li>Verwijder na het voeden de feeders uit de kopjes, spoel de feeders en behandel het overtollige bloed met hypochloriet.</li>
	<li>Verwijder de ongevoede muggen uit de beker door alle muggen op ijs te slaan (gedurende 1-2 minuten) en de niet-gevoede muggen te scheiden van degenen die een bloedmeel hebben genomen. Zoek naar gezwollen en rode buiken (die bloed aangeven) om de gevoede, volledig opgezwollen muggen te onderscheiden van de niet-gevoede muggen (figuur 3).</li>
	<li>Plaats de infectiebekers in de bioveiligheidskamer (aanvullende figuur S1) en voorzie elke beker van een 10% suikerwaterpad, waarbij het suikerwater op alternatieve dagen gedurende 8-10 dagen wordt vervangen.</li>
</ol>3. Voorbereiding van geïnfecteerde muggen
OPMERKING: Dit deel van het protocol vindt plaats binnen de BSL2-infectieruimte. Alleen geautoriseerd, getraind personeel mag de infectiekamer betreden waar geïnfecteerde muggen zijn gehuisvest. Muggen worden bewaard in gemodificeerde bekers die slechts één toegangspunt bevatten, dat automatisch wordt afgesloten wanneer de mondaspirator wordt verwijderd. Deze bekers worden in een transparante, thermoplastische container geplaatst om ontsnapping te voorkomen. De container bevindt zich in de infectieruimte achter een dubbeldeurssysteem. Alle noodzakelijke protocollen moeten aanwezig zijn voor accidentele blootstelling aan geïnfecteerde muggen (Supplemental File S1). De protocollen zijn landspecifiek en afhankelijk van de vereisten van de instelling.
<ol><li>Op dag 8-10 na infectievoeding, sla de geïnfecteerde muggen neer door ze op ijs te plaatsen en ze over te brengen naar gelabelde buizen met 70% ethanol (waardoor de muggen van elke controle- en behandelingsgroep gescheiden blijven).</li>
	<li>Zorg ervoor dat alle muggen dood zijn voordat u de infectieruimte verlaat.</li>
</ol>4. Dissecties van geïnfecteerde muggen
OPMERKING: Dit deel van het protocol wordt uitgevoerd in het laboratorium.
<ol><li>Breng de muggen over in gelabelde petrischalen bekleed met filterpapier, waarbij de controle- en testgroepen gescheiden blijven.</li>
	<li>Plaats een druppel fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) op een microscoopglaasje (gemarkeerd volgens de controle-/testgroep) en breng een individuele mug over van het filterpapier naar de PBS.</li>
	<li>Verwijder het midgut uit het geïmmobiliseerde, geïnfecteerde monster door de thorax van de mug vast te pinnen met de ontleednaald terwijl u het7e buiksegment met de tang trekt.</li>
	<li>Met de darm die wordt blootgesteld en zichtbaar, zoekt u naar de Malpighian tubuli (figuur 4A, B) om de darm van de eierstokken te onderscheiden. Verwijder het uit de PBS, breng het over naar een druppel van 0,1% mercurochroom op een nieuwe microscoopglaasje en laat de darm 8-10 minuten vlekken.</li>
	<li>Plaats na het kleuren een coverslip op de gekleurde darm en bekijk de darm onder brightfield-verlichting bij 20x-40x vergroting (figuur 4C, D).</li>
	<li>Noteer de aanwezigheid van en het aantal oöcysten per midgut voor elke controle- en behandelingsgroep (Aanvullend dossier S2).</li>
	<li>Bereken de transmissieblokkadeactiviteit met behulp van vergelijking (1): %TBA <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63546/63546eq01.jpg" style="margin: auto;"> (1) waarbij TBA = transmissieblokkerende activiteit (vermindering van de oöcystenprevalentie); p = oöcystenprevalentie; C = controle; en T = behandeling.</li>
	<li>Bereken de transmissiereducerende activiteit met behulp van vergelijking (2): %TRA = <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/63546/63546eq02.jpg" style="margin: auto;"> (2) waarbij TRA = transmissiereducerende activiteit (vermindering van oöcystintensiteit); I = oöcystintensiteit; C = controle; en T = behandeling. OPMERKING: De TBA is mogelijk niet significant verminderd, maar er kan een significant verschil worden waargenomen in de TRA en vice versa. Dit is afhankelijk van het chemische materiaal dat wordt geëvalueerd.</li>
	<li>Statistische analyse uitvoeren met behulp van de niet-parametrische t-test (Mann-Whitney).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen belangenconflicten te onthullen.

Om dit protocol met succes uit te voeren, moet aandacht worden besteed aan elke stap, ook al kan het een vervelend en moeizaam proces zijn. Een van de belangrijkste stappen is ervoor te zorgen dat de gametocytencultuur van goede kwaliteit is en dat deze bestaat uit volwassen gametocyten, met de juiste man/vrouw-verhouding, voordat de SMFA23,24 wordt gestart. Tijdens de SMFA is het ook cruciaal om de gametocytencultuur op de juiste temperatuur te houden om te voor...

Malaria, bekend als een van de meest destructieve ziekten wereldwijd, vormt nog steeds een grote bedreiging voor verschillende landen - vooral die in de Afrikaanse regio - en draagt bij aan ongeveer 95% van de gevallen wereldwijd1. Deze ziekte wordt veroorzaakt door een protozoaire parasiet en samen met zijn Anopheles-muggenvector kunnen deze boosdoeners grote schade toebrengen aan de menselijke gastheer2. Meer specifiek is de falciparumsoort van het geslacht Plasmodium-parasiet verantwoordelijk voor naar schatting 99% van de malariagevallen in Afrika ten zuiden van de Sahara1. Daarnaast kunnen verschillende belangrijke Anopheles-muggenvectoren (waaronder An. gambiae Giles, An. arabiensis Patton, An. coluzzii Coetzee & Wilkerson sp.n. en An. funestus Giles) de schuld krijgen van meer dan 95% van de parasietoverdracht wereldwijd 3,4,5,6,7,8 . Om het ideale parasiet-vector gezelschap vast te stellen, moet de muggenvector vatbaar zijn voor de parasiet en in staat zijn om deze over te brengen9. Bovendien moeten zowel de vector als de parasiet fysieke barrières overwinnen om de perfecte infectieuze combinatie te vormen - de muggenvector moet de ontwikkeling van parasieten kunnen ondersteunen en de parasiet moet het vermogen hebben om de afweermechanismen van de gastheer te overwinnen10,11.
Gametocyten, het geslachtsstadium van de P. falciparumparasiet, spelen een cruciale rol bij het verbinden van de vector- en parasietpartners12. Seksuele ontwikkeling vindt plaats in vivo en gametocytogenese beschrijft het proces van de differentiatie van volwassen gametocyten in beweeglijke mannelijke microgameten en vrouwelijke macrogameten13. Een ander proces dat plaatsvindt in de mug is exflagellation - het proces waarbij de mannelijke gametocyt transformeert in gameten en tevoorschijn komt uit de rode bloedcellen die tijdens een bloed maaltijd worden opgenomen11. Het exflagelatieproces wordt verder gesuggereerd om te worden versterkt door een gunstige verandering in de omgeving van de mug midgut14. Na exflagellation wordt een zygote gevormd door de fusie van de mannelijke en vrouwelijke gameten13. Uit de zygote ontstaat een beweeglijk ookineet en verplaatst zich van het bloedmeel naar het epitheel van de mug midgut13. Hier rijpt de ookineet en wordt een oöcyst gevormd, die op zijn beurt beweeglijke sporozoïeten13,15 produceert. De sporozoïeten migreren vervolgens naar de speekselklieren van de mug en terwijl de mug een bloedmaaltijd van zijn gastheer neemt, worden deze sporozoïeten in de bloedbaan van de gastheer geïnjecteerd15.
Malariabestrijdingsinterventies, waarbij vectorcontrolestrategieën en het gebruik van effectieve antimalariamiddelen worden gecombineerd, zijn cruciaal geworden in de strijd tegen deze ziekte15. Met een toename van parasiet- en muggenresistentie neemt de urgentie voor de identificatie van nieuwe antimalariaverbindingen toe16. Daarom is de in vivo evaluatie van transmissieblokkerende verbindingen belangrijk16. Na de ontwikkeling van dergelijke effectieve transmissieblokkerende geneesmiddelen is de SMFA gebruikt om te beoordelen of deze verbindingen de seksuele ontwikkeling van P. falciparum in de Anopheles-mug 17,18,19 remmen. Deze test heeft sinds de jaren 1970-1980 erkenning gekregen als de gouden standaard voor het evalueren van transmissieblokkering 20,21. Deze test biedt een goedkoper alternatief dan andere assays zoals RT-qPCR, waarvoor gespecialiseerde apparatuur nodig is. Verder zijn er geen patiënten nodig om de experimenten uit te voeren. Deze test omvat ook de levering van gametocyt-geïnduceerd bloed aan vrouwelijke muggen, die vervolgens worden ontleed om te evalueren of oöcystontwikkeling aanwezig is21. Dit maakt gametocytenkwantificering en de detectie van misvormde oöcysten mogelijk vanwege de verbindingen22. Om een verbinding als effectief te classificeren, moeten de prevalentie (het aandeel muggen dat ten minste één oöcyst in het midgut herbergt) en het aantal oöcysten (intensiteit) in het muggenmiddendarm worden geëvalueerd om infectieremming 17,21,22 te beoordelen.

<table><tbody><tr><td>Bovine intestine/</td><td>Slachterij</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Compound MMV1581558</td><td>MMV</td><td></td><td>Pandemie-responsbox</td></tr><tr><td>Dissectie naalden</td><td>WRIM</td><td></td><td>Op maat gemaakt</td></tr><tr><td>Falcon tube</td><td>Lasec</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glazen voeder</td><td>Glastechniek Peter Coelen B.V.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Graphpad Prism (8.3.0)</td><td>Graphpad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mercurochrome</td><td>Merck (Sigma-Aldrich)</td><td>129-16-8</td><td></td></tr><tr><td>Microscoopglaasjes</td><td>Merch (Sigma-Aldrich)</td><td>S8902</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Cleansafe</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS-tabletten</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>BP2944</td><td></td></tr><tr><td>Perspex bioveiligheidskast</td><td>Wits University</td><td></td><td>Gemaakt door de aannemers bij Wits</td></tr><tr><td>Kunststof bekers (350 mL)</td><td>Plastic Land</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

standaard membraanvoedingstest voor de detectie van plasmodium falciparum-infectie in anopheles mosquito vectors

Standard Membrane Feeding Assay for the Detection of Plasmodium falciparum Infection in Anopheles Mosquito Vectors

Malaria blijft een van de meest verwoestende ziekten ter wereld en tot op heden is de Afrikaanse regio nog steeds verantwoordelijk voor 94% van alle gevallen wereldwijd. Deze parasitaire ziekte vereist een protozoaire parasiet, een Anopheles-muggenvector en een gewervelde gastheer. Het geslacht Anopheles omvat meer dan 500 soorten, waarvan er 60 bekend staan als vectoren van de parasiet. Het geslacht Plasmodium-parasiet bestaat uit 250 soorten, waarvan er 48 betrokken zijn bij de overdracht van ziekten. Bovendien heeft de Plasmodium falciparum-parasiet de afgelopen jaren bijgedragen aan naar schatting 99,7% van de malariagevallen in Afrika ten zuiden van de Sahara. 
Gametocyten maken deel uit van het seksuele stadium van de parasiet en worden ingenomen door de vrouwelijke mug bij het voeden met een geïnfecteerde menselijke gastheer. Verdere ontwikkeling van de parasiet in de mug wordt versterkt door gunstige omgevingsomstandigheden in het midden van de mug. Hier vindt de fusie van de vrouwelijke en mannelijke gameten plaats en ontstaan de beweeglijke ookineten. De ookineten komen het midgut-epitheel van de mug binnen en volwassen ookineten vormen oöcysten, die op hun beurt beweeglijke sporozoïeten produceren. Deze sporozoïeten migreren naar de speekselklieren van de mug en worden geïnjecteerd als een mug een bloedmaaltijd neemt. 
Voor het ontdekken van geneesmiddelen werden muggen kunstmatig geïnfecteerd met met gametocyten geïnfecteerd bloed in de standaard membraanvoedingstest (SMFA). Om infectie in de mug op te sporen en/of de werkzaamheid van antimalariamiddelen te beoordelen, werden de midguts van de vrouwelijke muggen na infectie verwijderd en gekleurd met mercurochroom. Deze methode werd gebruikt om de visuele detectie van oöcysten onder de microscoop te verbeteren voor de nauwkeurige bepaling van oöcystenprevalentie en -intensiteit.

Het totale aantal ontleedde controlemonsters was 47, met een gemiddelde tot 89% prevalentie en een intensiteit van 9,5 oöcysten per midgut (tabel 1, zoals eerder gepubliceerd22). Voor de verbinding MMV1581558 bereikte de steekproefomvang een totaal van 42 exemplaren, met een oöcystenprevalentie van 36% en een gemiddelde intensiteit van 1,5 oöcysten. Dit toont een vermindering van de oöcystenprevalentie van 58% en een TRA van 82% voor alle drie de biologische replicaties (t...

De standaard membraanvoedingstest (SMFA) wordt beschouwd als de gouden standaard voor de beoordeling en identificatie van potentiële antimalariaverbindingen. Dit kunstmatige voedingssysteem wordt gebruikt om muggen te infecteren om de effecten van dergelijke verbindingen op de intensiteit en prevalentie van de Plasmodium falciparum-parasiet verder te evalueren.

Standaard membraanvoedingstest voor de detectie van Plasmodium falciparum-infectie in Anopheles Mosquito Vectors

Malaria remains one of the most devastating diseases worldwide and, to date, the African region is still responsible for 94% of all cases worldwide. This ...

Het protocol stelt ons in staat om het effect van de behandeling op de malariagevoeligheid van Afrikaanse malariavectoren te detecteren. Bijvoorbeeld verbindingen gericht op het blokkeren van de overdracht van de mens naar de mug. Deze techniek stelt onderzoekers in staat om een groot aantal verbindingen onder laboratoriumomstandigheden te evalueren, zelfs voordat toxiciteit GATE's beschikbaar zijn.Midgut-dissecties kunnen in het begin een uitdaging zijn, maar het vergt gewoon wat oefening. Ook het kan niet altijd gemakkelijk zijn om oöcysten te kunnen identificeren. Plaats eerst met behulp van een mondaspirator 25 ongevoede vrouwelijke Anopheles gambiae-muggen in een voedingsbeker van 350 milliliter.Label de cups duidelijk om onderscheid te maken tussen controle- en behandelingsgroepen. Kies het aantal kopjes per behandeling op basis van het aantal technische replica's dat is inbegrepen. Sluit het glazen feedersysteem aan op een waterbad en houd de temperatuur op 37 graden Celsius.Bereid vervolgens de darm of het synthetische membraan van de koe voor door het in kraanwater te spoelen en in stukken te snijden die voor elke feeder zijn aangebracht. Bedek het onderste deel van elke feeder en bevestig het membraan met een elastische band. Voor het gebruik van de voedingsbekers als infectiebekers, houdt u eerst het membraan bovenop de netten van de kopjes.Plaats vervolgens de infectiebekers onder de feeders. Voeg nu een milliliter met gametocyten geïnfecteerd bloed toe aan de feeders van de controlebekers en met gametocyten geïnfecteerd bloed met een teststof aan de feeders van de behandelingsbekers. Laat de muggen vervolgens ongeveer 40 minuten voeden.Verwijder na het voeden de feeders uit de kopjes, spoel de feeders en behandel het overtollige bloed met hypochloriet. Sla vervolgens alle muggen één tot twee minuten op het ijs en selecteer de muggen die een bloedmaaltijd hebben genomen door te zoeken naar gezwollen en rode buiken. Vervang het suikerwater dat op alternatieve dagen aan elke infectiebeker wordt gegeven door een 10% suikerwaterpad en incubeer de infectiebekers in een bioveiligheidskamer gedurende acht tot 10 dagen.Acht tot 10 dagen na het voeden, sla de geïnfecteerde muggen neer door ze op ijs te plaatsen. Breng ze vervolgens over naar gelabelde buizen met 70% ethanol, waarbij u de controle in elke behandelingsgroep in afzonderlijke buizen behoudt. Houd de controle- en testgroepen gescheiden en breng de muggen over naar gelabelde petrischalen bekleed met filterpapier.Voeg een druppel PBS toe op een goed gemarkeerde glazen dia en breng een mug over van het filterpapier naar de druppel. Pin de thorax van de mug met ontleednaald. Verwijder vervolgens het midgut door het zevende buiksegment met een tang te trekken en breng het over naar een druppel van 0,1% mercurochroom op een nieuw microscoopglaasje.Laat de darm acht tot 10 minuten vlekken. Plaats vervolgens een afdekplaat op de bevlekte darm en bekijk deze onder heldere veldverlichting met een vergroting van 20 tot 40 keer. Noteer het aantal oöcysten per midgut voor de controle en elke behandelingsgroep.In deze studie bleek de verbinding MMV1581558 het aantal Plasmodium falciparum oöcysten in het middendarm van vrouwelijke Anopheles gambiae muggen aanzienlijk te beperken in vergelijking met de bestrijding. In de controlegroep was de gemiddelde prevalentie van oöcysten in het midgut 89% met een gemiddelde intensiteit van 9,5 oöcysten per midgut. Maar in de met MMV1581558 behandelde groep was de gemiddelde oöcystenprevalentie 36% met een gemiddelde intensiteit van slechts 1,5 oöcysten per midgut.De behandeling van MMV1581558 resulteerde dus in 58% transmissieblokkerende activiteit en 82% transmissieverlagende activiteit in alle drie de biologische replicaties. Het is van cruciaal belang om ervoor te zorgen dat muggen zich voeden met een gezonde gametocytencultuur. Als dit onrijpe gametocyten zijn, of geen stadium vijf gametocyten, is de kans op het krijgen van een infectie in de mug beperkt of onmogelijk.De test maakt gebruik van een visuele morfologische identificatiemethode, maar moleculaire kwantificeringstests kunnen worden gebruikt. Dit is echter duurder en kan het gebruik ervan in laboratoria met beperkte middelen beperken. Het vermogen om deze techniek te doen, opent nieuwe wegen om de verandering van malariaprevalentie en -intensiteit tussen bijna alles in muggen te evalueren.Bijvoorbeeld het vergelijken van de vectoriële capaciteit van soorten.

standard-membrane-feeding-assay-for-detection-plasmodium-falciparum

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Zodra een gen is geïdentificeerd als potentieel refractaire voor het dengue virus moet worden geëvalueerd voor zijn rol in het voorkomen van virale infecties in de mug. Dit protocol illustreert hoe de mate van dengue infecties van muggen kunnen worden getest. De technieken voor het groeien van het virus in de cultuur, membraan voeden muggen menselijk bloed, en het testen van virale titers in de mug middendarm worden gedemonstreerd.

Protocol voor Dengue Infecties in Muggen (A. aegypti) en Infectie Fenotype Bepaling

Zodra een gen is geïdentificeerd als potentieel vuurvaste voor malaria, dient te worden geëvalueerd voor zijn rol in het voorkomen van Plasmodium besmettingen binnen de mug. Dit protocol illustreert hoe de mate van plasmodium infecties van muggen kunnen worden getest. De technieken voor de voorbereiding van de gametocyt cultuur, membraan voeden muggen menselijk bloed, en het testen van virale titers in de mug middendarm worden gedemonstreerd.

Protocol voor Plasmodium falciparum Infecties in Muggen en Infection Fenotype Bepaling

This video demonstrates a blood-feeding assay to evaluate the mortality and fecundity of test compounds with novel modes of action on female mosquitoes. This technique helps in screening new classes of insecticides to kill the resistant population of mosquitoes and control disease spread.

Mosquito Feeding Assay: A Method to Evaluate Test Compound Effects on Mortality and Fecundity of Adult Female Mosquitoes

Het meten van antilichaam-functie is de sleutel tot het begrijpen van immuniteit tegen Plasmodium falciparum malaria. Deze methode beschrijft de zuivering van levensvatbare merozoïeten en meting van opsonisatie-afhankelijke fagocytose door flowcytometrie.

High Yield Zuivering van<em&gt; Plasmodium falciparum</em&gt; Merozoïeten Voor gebruik in opsoniserende antilichaamassays

Muggen die malaria overdragen, hebben een aantal epidemiologisch belangrijke kenmerken die alleen kunnen worden gedetecteerd met behulp van moleculaire technieken. Door gebruik te maken van een MALDI-TOF-gebaseerde SNP-genotyperingsplatform, hebben we een test ontwikkeld voor het gelijktijdig detecteren van meerdere belangrijke eigenschappen (soorten, insecticideresistentie, parasietinfectie en gastheukeuze) van malariavectoren.

Een Multi-detectie test voor Malaria Zenden Muggen

We beschrijven een muismodel van experimentele cerebrale malaria en laten zien hoe inflammatoire en microvasculaire pathologie in vivo kunnen worden gevolgd met behulp van magnetische resonantie beeldvorming.

In vivo Tracking van Oedema Ontwikkeling En Microvasculaire Patologie In Een Model Van Experimentele Cerebrale Malaria Met Magnetic Resonance Imaging

Als gevolg van de opvallende gelijkenissen van de levenscyclus en de biologie van knaagdieren malariaparasieten voor menselijke malariaparasieten, knaagdieren malaria modellen zijn onmisbaar geworden voor malaria onderzoek. Hierin hebben we enkele van de belangrijkste technieken gestandaardiseerd die worden gebruikt in de fenotypische analyse van wild-type en transgene knaagdier malaria soorten.

Fenotypische analyse van knaagdieren malaria parasiet asexual en seksuele bloed stadia en muggen stadia

Beschreven is een tijd- en ruimtebesparende methode om eieren te tellen en de broedsnelheden van individuele muggen te bepalen met behulp van 24 putweefselkweekplaten, die de schaal en snelheid van vruchtbaarheids- en vruchtbaarheidstesten aanzienlijk kunnen verhogen.

Verbeterde vruchtbaarheid en vruchtbaarheidstest voor Aedes aegypti met behulp van 24 well tissue kweekplaten (EAgaL-platen)

Gedetailleerd onderzoek naar muggenstadia van malariaparasieten is van cruciaal belang voor het ontwerpen van effectieve transmissieblokkeringsstrategieën. Dit protocol laat zien hoe infectieuze gametocyten effectief kunnen worden gekweekt en deze gametocyten vervolgens aan muggen kunnen worden gevoerd om muggenstadia van P. falciparumte genereren .

Plasmodium falciparum Gametocytencultuur en muggeninfectie door kunstmatige membraanvoeding

Het doel van dit protocol is om dierlijke en kunstmatige bloedmaaltijden aan Aedes aegypti-muggen te leveren via een kunstmatige membraanvoeder en het volume van de ingenomen maaltijd nauwkeurig te kwantificeren.

Het voeden en kwantificeren van dierlijk bloed en kunstmatige maaltijden in Aedes aegypti-muggen

Dit protocol beschrijft een sandwich-enzymgekoppelde immunosorbenttest om speekselkliersporozoïeten bij muggen te detecteren. Met behulp van gemakkelijk verkrijgbare monoklonale antilichamen maakt de methode kosteneffectieve detectie met hoge doorvoer mogelijk van muggen die Plasmodium falciparum of Plasmodium vivax dragen. De methode is geschikt voor onderzoek naar de overdracht van malaria, inclusief vectoronderzoeken.

Detectie van Plasmodium Sporozoïeten bij Anopheles-muggen met behulp van een enzymgekoppelde immunosorbenttest

Leer de standaard membraanvoedingstest voor antimalaria-onderzoek met Anopheles-muggen. Deze methode evalueert verbindingen die malariaoverdracht blokkeren via oöcystdetectie in het midden-darm.

Standaard membraanvoedingstest voor de detectie van Plasmodium falciparum-infectie in Anopheles Mosquito Vectors

Meer video's verkennen