Een vlamvrije methode voor het steriliseren van C. elegans picks, spatels en scalpels

Dit protocol presenteert een aseptische techniek voor gebruik met C.Elegans die de noodzaak van een open vuur elimineert. De belangrijkste voordelen van deze techniek zijn dat het veiligheidsrisico's vermindert door een open vlam te elimineren en kan worden gebruikt in laboratoriumruimtes zonder gasleidingen en in laminaire stromingskappen. Het verplaatsen van instrumenten in en uit het sterilisatiegebied zonder de zijkanten aan te raken kan moeilijk zijn, maar het toevoegen van een geleider en het stabiliseren van uw hand maakt de beweging gemakkelijker.

Begin met het bevestigen van een lushouder accessoiregeleider aan de micro-verbrandingsoven door deze op de buitenste loop te klikken. Sluit de microverbrandingsoven aan op een standaard stopcontact van 120 of 230 volt, indien van toepassing. Zet de microverbrandingsoven op de hoge stand en laat hem 10 tot 20 minuten opwarmen om een optimale temperatuur tussen 800 en 825 graden Celsius te bereiken.

Plaats het instrument in het cilindrische sterilisatiegebied zonder de zijkanten aan te raken door het langs de geleider te schuiven. Houd het instrument vijf tot zeven seconden in het sterilisatiegebied. Verwijder het instrument zonder de zijkanten aan te raken door naar achteren langs de geleider te schuiven.

Voor beitels, laat het instrument drie tot vijf seconden afkoelen voordat je een worm aanraakt om te voorkomen dat het verbrandt. Na het plukken van wormen, plaats de plectrum opnieuw in de kamer gedurende vijf tot zeven seconden om eventuele wormen op de plectrum te verbranden. Sluit een Bunsen-brander aan op de gasleiding met behulp van rubberen buizen.

Zorg ervoor dat u de slang goed vastzet en plaats de brander uit de buurt van voorwerpen boven het hoofd. Zet het gas aan door aan de knop op de gasleiding te draaien. Steek de brander aan met een aansteker of aansteker.

Stel de vlam in met behulp van de gasknop en de luchtinlaat totdat een blauwe kegel zichtbaar is. Houd de plectrum, spatel of scalpel in de vlam totdat deze rood gloeit. Voor beitels, laat het instrument drie tot vijf seconden afkoelen voordat je een worm aanraakt om te voorkomen dat het verbrandt.

Na het plukken van wormen, plaats je de plectrum opnieuw in de vlam om eventuele wormen op de plectrum te verbranden. Kweek OP50 E.coli bacteriën in Luria bouillon 's nachts op een shaker van 37 graden Celsius. Verdun na de nachtkweek de cultuur in steriel water in een verhouding van 1:100.

Dompel een wormenprik gesteriliseerd met behulp van een Bunsen-brander of een microverbrandingsoven in de bacteriële oplossing, steriliseer opnieuw en draai het in 100 microliter steriel water. Voor positieve controle dompelt u de pick in een bacteriële oplossing, wervelt u in steriel water en steriliseert u voor de negatieve controle de pick zonder in een bacteriële oplossing te dompelen en vervolgens in het steriele water te draaien. Leg de 100 microliter water op een Luria bouillon agar petrischaaltje van 10 centimeter, verspreid het water met een steriele celstrooier en incubeer bij kamertemperatuur gedurende 24 uur met het deksel erop.

Tel de kolonies handmatig na de incubatietijd. De relatieve besmettingsgraad werd gemeten door het aantal kolonies per monster te tellen. In negatieve controleplaten werden nul kolonies gevonden.

Een gemiddelde telling van 4,7 kolonies met een standaardfout van 0,3 kolonies werd verkregen toen de Bunsen-brander werd gebruikt om beitels te steriliseren. Een gemiddelde telling van 3,3 kolonies met een standaardfout van 1,2 kolonies werd waargenomen in de toestand van de micro-verbrandingsoven. Een gemiddelde telling van 298,3 kolonies werd echter verkregen in de positieve controleconditie.

Zo bereikte de microverbrandingsoven steriliteitsresultaten die even effectief waren als de Bunsen-brander. Volgens deze procedure kunnen alle methoden worden uitgevoerd waarbij C.Elegans worden geplukt of gesneden. Het is dus van toepassing op een breed scala aan onderzoeksvragen.