Name: Dosisopname van op platina en ruthenium gebaseerde samengestelde blootstelling bij zebravissen door inductief gekoppelde plasmamassaspectrometrie met bredere toepassingen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-04-21T13:10:00.000+00:00
Duration: 8 min 46 s
Description: Leer een ICPMS-methode voor het kwantificeren van metaalopname in zebravisweefsel na blootstelling aan water. Deze techniek valideert dosis-responsrelaties en heeft toepassingen in farmacologisch en milieutoxicologisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Financiering: NJAES-Rutgers NJ01201, NIEHS Training Grant T32-ES 007148, NIH-NIEHS P30 ES005022. Daarnaast wordt Brittany Karas ondersteund door opleidingssubsidie T32NS115700 van NINDS, NIH. De auteurs erkennen Andreia Valente en de Portugese Stichting voor Wetenschap en Technologie (Fundação para a Ciência e Tecnologia, FCT; PTDC/QUI-QIN/28662/2017) voor de levering van PMC79.

De AB-stam zebravis (Danio rerio) werd gebruikt voor alle experimenten (zie de Tabel met Materialen) en het houderijprotocol (# 08-025) werd goedgekeurd door de Rutgers University Animal Care and Facilities Committee.
1. Zebravishouderij
<ol><li>Fok en onderhoud de zebravis in een recirculerend aquatisch habitatsysteem op een 14 uur licht: 10 uur donkere cyclus.<ol>
<li>Zuiver gemeentelijk leidingwater door zand- en koolstoffiltratie om vissysteemwater te verkrijgen. Houd het water in het aquatische systeem op 28 °C, <0,05 ppm nitriet, <0,2 ppm ammoniak en pH tussen 7,2 en 7,7.</li>
		<li>Voer de zebravis een dieet van uitgekomen Artemia-cysten, pekelkreeftjes en vlokkenvoer van het visdieet.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Dosis-responsprotocol zebravissen (figuur 1)
<ol><li>Bereid zebravis ei water oplossing, ofwel E3 medium of ei water gemaakt van bouillon zeezout in een concentratie van 60 μg / ml opgelost in gedeïoniseerd water18. Vermijd het gebruik van methyleenblauw. OPMERKING: Via ICPMS werd isobare interferentie van zebravis eiwater geïdentificeerd voor strontiumoxiden, die overlapten met een isotoop van ruthenium. Zorgvuldig spoelen van de larven voordat stroomafwaartse analyse dit probleem verbeterde. E3-medium kan voor sommigen een gemakkelijkere keuze zijn vanwege de gepatenteerde samenstelling van commerciële zeezouten.</li>
	<li>Los het metaal of de op metaal gebaseerde verbindingen op in E3 of eiwater. Vortex om elk aggregaatmateriaal te breken en de oplossing te homogeniseren. OPMERKING: In het hieronder beschreven experiment werden PMC79 en cisplatine opgelost in maximale concentraties van 12,4 mg/l en 60 mg/l met een maximale concentratie van 0,5% dimethylsulfoxide (DMSO) om neerslag te weerstaan.<ol>
<li>Verdun zware metalen of op metaal gebaseerde verbindingen, zoals PMC79 en cisplatine, met E3 of eiwater en bereid ten minste 5 concentratiedoses voor.<ol>
<li>Begin met lage concentraties stamoplossingen in zuiver vehikel (d.w.z. DMSO) en verdun vervolgens met E3 of eiwater. Overweeg de uiteindelijke voertuigconcentraties zorgvuldig. OPMERKING: Bepaalde op metaal gebaseerde verbindingen, zoals cisplatine, worden snel afgebroken en hun oplossingen moeten dagelijks vers worden gemaakt. LET OP: Ga voorzichtig om met zware metalen en chemotherapeutica. Bekijk het specifieke veiligheidsinformatieblad (MSDS) voor het metaal van belang. Cisplatine kan oog- en huidirritatie veroorzaken, fataal zijn als het wordt ingeslikt en kan toxiciteit veroorzaken in nieren, bloed, bloedvormende organen en foetaal weefsel. Vermijd het inademen van dampen en contact met ogen, huid en kleding. Draag ondoordringbare handschoenen en kleding, en een veiligheidsbril of -bril19.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Zet de middag voorafgaand aan het experiment kweektanks op in de ideale verhouding van 2 vrouwtjes tot 1 mannetje met een scheidingswand tussen de geslachten20.<ol>
<li>Trek aan de scheidingswand wanneer de lichten aangaan voor de ochtendcyclus.</li>
		<li>Laat de zebravis broeden. OPMERKING: De duur van het fokken is afhankelijk van de initiële blootstellingsfase die vereist is. Voor 3 uur na de verzwaartting, laat fokken ongeveer 2 uur. De eieren bereiken 3 hpf na het reinigen en scheiden van eieren.</li>
		<li>Verplaats de broedvis naar een schone tank.</li>
		<li>Verzamel de eieren door het tankwater door een zeef te gieten.</li>
		<li>Keer de zeef om boven een petrischaaltje en gebruik een spuitfles gevuld met E3 of eiwater om de eieren in het gerecht te spoelen.</li>
		<li>Reinig de schaal van voedsel en afval voorafgaand aan experimenteel gebruik.</li>
	</ol></li>
	<li>Randomiseer ongeveer twintig embryo's van 3 hpf per dosis in individuele glazen injectieflacons met behulp van een transferpipet en een kleine hoeveelheid water.</li>
	<li>Nadat alle embryo's in injectieflacons zijn, verwijdert u al het eiwater en vervangt u het door voldoende doseeroplossing zodat er ongeveer 1 inch oplossing boven de hoogte van het ei is. OPMERKING: De noodzaak van dechorionatie moet zorgvuldig worden overwogen. Zie het discussiegedeelte voor meer informatie.</li>
	<li>Observeer de embryo's dagelijks op laesies of letaliteit. Vanwege de snelle ontwikkeling van embryonale zebravissen, kunt u dagelijks beelden verkrijgen met behulp van een brightfield-microscoop / camera-opstelling om kleine laesies tussen dagen te identificeren.</li>
	<li>Combineer bij het einde van de dosisrespons (4-5 dagen na de bevruchting [dpf], volgens richtlijn21 van de Organisatie voor Economische Samenwerking en Ontwikkeling (OESO) 3-5 larven voorafgaand aan euthanasie voor samengestelde bemonstering. Euthanasie door snelle afkoeling door invriezen in vloeibare stikstof. OPMERKING: Euthanasie door een overdosis MS-222 of tricaine methaansulfonaat kan mogelijk interfereren met ICPMS-analyse stroomafwaarts. Voor dit protocol worden snel afkoelende euthanasiemethoden aangemoedigd om de kans op interferentie te verkleinen.</li>
	<li>Voer 3 wasbeurten van weefsel uit met zeer zuiver water (zoals omgekeerde osmose) om de overtollige verbinding van de buitenkant van het weefsel te verwijderen.</li>
	<li>Verplaats de monsters naar zuur- en magnetronveilige polypropyleen centrifugebuizen van 15 ml. Wees voorzichtig om al het overtollige water te verwijderen, omdat elke resterende vloeistof het salpeterzuur kan verdunnen, en dus het oxiderende potentieel van het zuur tijdens weefselafbraak. OPMERKING: Op dit punt kan weefsel worden opgeslagen bij -20 °C tot verdere analyse. Voor van nature overvloedige metalen zal het reinigen van de buizen in een 5% salpeterzuurbad voorafgaand aan gebruik de omgevingsachtergrondniveaus verbeteren.</li>
</ol>3. Weefselvertering en ICPMS-evaluatie (figuur 2)
<ol><li>Voeg ongeveer 0,25 ml toe aan de polypropyleencentrifugebuizen van 15 ml voor maximaal 10 larven (~ 100 μg) zeer zuiver salpeterzuur (69%). Ultrasoon gedurende 1 uur om de monsters voor te verteren met behulp van de volgende instellingen: ultrasone baduitgang: 85 W; 42 kHz ± 6%; temperatuurbereik: 19-27 °C. LET OP: Draag oorbescherming tijdens ultrasoonapparaat. Salpeterzuur veroorzaakt ernstige brandwonden in de luchtwegen, ogen en huid. Draag volledige beschermingsmiddelen en werk in de zuurkast of op plaatsen met voldoende ventilatie. Het kan brandbaar zijn met andere materialen. Salpeterzuur mag uitsluitend in een zuurkast worden gehanteerd om blootstelling aan dampen die tijdens de spijsvertering worden geproduceerd, te voorkomen. Niet inademen of innemen.<ol>
<li>Voer korte cycli van weefselvertering uit (intervallen van 5 minuten) in een zuurveilige microgolfvergister totdat al het weefsel zichtbaar is geoxideerd (d.w.z. uniforme, heldergele oplossing). OPMERKING: Het microgolfprotocol in tabel 1 wordt aanbevolen om drie keer te worden uitgevoerd en bevat een afkoelinterval van 5 minuten tussen elke verwarmingsstap.</li>
		<li>Controleer de integriteit van de buizen zorgvuldig om breuk te voorkomen en voer korte spins uit in de centrifuge (313 × g gedurende 1 minuut) tussen cycli om zure condensatie naar de bodem van de buis te verplaatsen. OPMERKING: Als het weefsel moeilijk te verteren is (vooral chorionen), kan 30% hoogzuiver waterstofperoxide worden gebruikt na zure vertering. Gebruik het waterstofperoxide (6,75 ml) om de zuurconcentratie te verdunnen tot 3,5% en laat de monsters een nacht in een zuurkast zitten. Waterstofperoxide zal ontbinden tot H2O en is geschikt voor ICPMS-analyse. Verder kunnen alternatieve metalen beter oplossen in zoutzuur of een mengsel van zoutzuur en salpeterzuur (d.w.z. aqua regia). Waterstofperoxide is schadelijk bij inslikken en veroorzaakt ernstig oogletsel. Draag huid- en oogbescherming22,23.</li>
	</ol></li>
	<li>Zodra het weefsel zichtbaar is geoxideerd (d.w.z. uniforme, heldergele oplossing), verdunt u de monsters in een zuurkast tot 3,5% salpeterzuur met behulp van 6,75 ml hoogzuiver water en vortex om grondig te mengen. OPMERKING: Op dit punt kunnen de monsters bij kamertemperatuur worden bewaard. Deze stap is niet nodig als in stap 3.1 waterstofperoxide is toegevoegd om de spijsvertering te bevorderen.</li>
	<li>Voer een matrix-gematchte, 7-punts kalibratiecurve (concentratiebereik van 0,001-10 ppb) uit met behulp van een gecertificeerde elementaire standaard (d.w.z. Pt of Ru, afhankelijk van de test) met het metaal van belang en optimale isotoop (en) om rekening te houden met mogelijke isobare interferenties.<ol>
<li>Gebruik een voorraadconcentratie van de waterige, gecertificeerde elementaire standaard (Ru, Pt = 1000 ppb) en neem een aliquot van 0,1 ml en pipetteer in een nieuwe centrifugebuis van 15 ml. Verdun met 3,5% salpeterzuur tot een eindvolume van 10 ml om een standaardoplossing van 10 ppb te verkrijgen.</li>
		<li>Maak met behulp van de 10 ppb-voorraad de volgende seriële verdunningen: 0,1, 1,0 en 5,0 ppb standaardoplossingen in 3,5% salpeterzuur.</li>
		<li>Maak met behulp van de 0,1-voorraad de volgende seriële verdunningen: standaardoplossingen van 0,001, 0,005 en 0,01 ppb in 3,5% salpeterzuur.</li>
	</ol></li>
	<li>Bereid het ICPMS-instrument voor (zie de Tabel met materialen) voor de monsteranalyse als volgt:<ol><li>Voordat u het instrument start, moet u ervoor zorgen dat de Argon-gasklep open is, dat alle slangen goed zijn aangesloten en dat schoon 5% salpeterzuur open is voor het spoelen van slangen en glaswerk tussen monsteranalyses.</li>
		<li>Controleer de staat van de zaklamp en kegels en zorg ervoor dat de fakkeldoos goed is vergrendeld en dat de afvoerbuis van de sproeikamer goed is aangesloten op de peripomp.</li>
		<li>Open de software (zie de tabel met materialen).</li>
		<li>Controleer de vacuümmetingen en zorg ervoor dat alle turbopompen op 100% draaien.</li>
		<li>Klik op START in het venster Status plasmacontrolesysteem om de startvolgorde te starten, de plasmapomp en plasmakoeler in te schakelen, de vernevelaar te verwijderen en het plasma aan te steken. Wacht tot het plasma brandt en stabiel is wanneer het statusvenster aangeeft dat de opstartvolgorde is voltooid. Let op dit punt op de groene stippen in het venster Systeemstatus die aangeven dat alle voedingen zijn ingeschakeld.</li>
		<li>Klik in de menubalk op Control | autosampler in het vervolgkeuzemenu. Voer de positie van het autosampler-rek in voor de buis met 5% salpeterzuur. Laat het zuur in het plasma komen.</li>
		<li>Klik in de menubalk op Scans | Magneet in het vervolgkeuzemenu. Typ in het MagnetScan-venster 115 in de markermassapositie en klik op enter. Laat de magneet gedurende 30 minuten over het massabereik scannen voor 115in (114.6083 tot 115.3749) terwijl het instrument opwarmt.</li>
		<li>Gebruik na 30 minuten de autosampler-besturing om naar de positie van een 1 ppb multielement tuning-oplossing te gaan. Adem de stemoplossing op en stem het instrument af om de signaalaflezing te optimaliseren. Pas de fakkelpositie (X, Y, Z) zodanig aan dat de zaklamp is uitgelijnd met het midden van de kegels en het debiet van de vernevelaar (~ 30 psi) in het plasmacontrolevenster . Breng de nodige aanpassingen aan in het venster Ion Optics Tuning voor de bron, detector en analyzer.</li>
		<li>Zodra de signaalaflezing is geoptimaliseerd (~ 1,2 × 106 tellen / s voor 1 ppb op 115In), klikt u op Stoppen in het venster Magneetscan .<ol>
<li>Klik op Magneet kalibreren en selecteer Lage resolutie in het pop-upvenster.</li>
			<li>Klik op OK en open het bestand "Mass Calibration (Low Resolution).smc" om de magneet te kalibreren. OPMERKING: De magneetkalibratie meet de tellingen/en past in een curve door het volgende massabereik: 7Li tot 238U.</li>
			<li>Klik op Opslaan | Gebruik om de huidige magneetkalibratie toe te passen op de analyses. Als u onbekende monsters met een enorm bereik van concentraties meet, voert u een detectorkalibratie uit om ionpulstellingensignalen bij lage concentraties te vergelijken met verzwakte ionsignalen die bij hogere concentraties worden geproduceerd. Analyseer de monsters zodra de afstemming en kalibratie zijn voltooid.</li>
		</ol></li>
		<li>Klik in de menubalk op Data Acquisition.<ol>
<li>Klik op Method Setup in het vervolgkeuzemenu. Gebruik een bestaande methode van de fabrikant of maak een methode op basis van de elementen van belang. Pas indien nodig de analysemodus, verblijftijd, schakelvertraging, aantal sweeps / cycli, resolutie, detectiemodus en de parkmassa aan voor deflectorinstellingen.</li>
			<li>Klik op Opslaan om de methode-instellingen vast te leggen. Optimaliseer de parameters voor elk metaal en elke isotoop. Zie tabel 2 voor de specifieke bedrijfsparameters die in dit onderzoek zijn gebruikt.</li>
		</ol></li>
		<li>Klik in de menubalk op Data Acquisition.<ol>
<li>Klik op Batchrun in het vervolgkeuzemenu. U kunt ook op het BATCH-pictogram onder de menubalk klikken. Importeer de batchparameters uit een spreadsheet of maak een reeks in het venster Batchrun . Voer het voorbeeldtype, de positie van het autosampler-rek, de overdrachtstijd, de wastijd, de replicaties, de voorbeeld-id en het methodebestand in.</li>
		</ol></li>
		<li>Rangschik de batchrun in de volgende volgorde: standaardoplossingen voor de kalibratiecurve (0,001-10 ppb Pt of Ru), gevolgd door een kwaliteitscontrolestandaard en vervolgens onbekende monsters. OPMERKING: Standaardoplossingen worden gemeten als tellingen/s op de ICPMS en een lineaire regressie past door de normen met een relatieve standaarddeviatie (RSD) > 0,999. Onbekenden worden ook gemeten als tellingen/s en opgelost voor concentratie in ppb met behulp van de lineaire regressie van de kalibratiecurve, y = mx + b. Gegevensverwerking kan ook worden voltooid met behulp van de software waarnaar wordt verwezen.</li>
		<li>Bewaak instrumentdrift en sample reproduceerbaarheid door elke 5-10 samples een kwaliteitscontrolestandaard van 0,5 ppb op te nemen. OPMERKING: Geschikte kwaliteitscontrolenormen moeten een gecertificeerd standaardreferentiemateriaal zijn dat verschilt van de standaard die in de kalibratiecurve wordt gebruikt.</li>
	</ol></li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Watt</td>
			<td>Macht</td>
			<td>Notulen</td>
		</tr>
<tr>
<td>300</td>
			<td>50%</td>
			<td>5</td>
		</tr>
<tr>
<td>300</td>
			<td>75%</td>
			<td>5</td>
		</tr>
<tr>
<td>300</td>
			<td>0%</td>
			<td>5</td>
		</tr>
<tr>
<td>300</td>
			<td>75%</td>
			<td>5</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabel 1: Microgolfverteringsprotocol voor larvale weefselmassa. Zebravislarvemonsters werden verteerd in 0,25 ml salpeterzuur. Deze tabel is gewijzigd van 24.

<ol><li>Rehman, K., Fatima, F., Waheed, I., Akash, M. S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+exposure+of+heavy+metals+and+their+impact+on+health+consequences%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Prevalence of exposure of heavy metals and their impact on health consequences.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 119 (1), 157-184 (2018).</li>
<li>Anyanwu, B. O., Ezejiofor, A. N., Igweze, Z. N., Orisakwe, O. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heavy+metal+mixture+exposure+and+effects+in+developing+nations%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Toxics%22%5BJournal%5D)">Heavy metal mixture exposure and effects in developing nations: an update.</a> Toxics. 6 (4), 65(2018).</li>
<li>Doherty, C. L., Buckley, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translating+analytical+techniques+in+geochemistry+to+environmental+health%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Translating analytical techniques in geochemistry to environmental health.</a> Molecules. 26 (9), 2821(2021).</li>
<li>Boros, E., Dyson, P. J., Gasser, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classification+of+metal-based+drugs+according+to+their+mechanisms+of+action%5BTitle%5D)+AND+%22Chem%22%5BJournal%5D)">Classification of metal-based drugs according to their mechanisms of action.</a> Chem. 6 (1), 41-60 (2020).</li>
<li>Robertson, J., Barr, R., Shulman, L. N., Forte, G. B., Magrini, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+medicines+for+cancer%3A+WHO+recommendations+and+national+priorities%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+the+World+Health+Organization%22%5BJournal%5D)">Essential medicines for cancer: WHO recommendations and national priorities.</a> Bulletin of the World Health Organization. 94 (10), 735-742 (2016).</li>
<li>Wheate, N. J., Walker, S., Craig, G. E., Oun, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+status+of+platinum+anticancer+drugs+in+the+clinic+and+in+clinical+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Dalton+Transactions%22%5BJournal%5D)">The status of platinum anticancer drugs in the clinic and in clinical trials.</a> Dalton Transactions. 39 (35), 8113-8127 (2010).</li>
<li>Brown, A., Kumar, S., Tchounwou, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cisplatin-based+chemotherapy+of+human+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cancer+Science+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Cisplatin-based chemotherapy of human cancers.</a> Journal of Cancer Science & Therapy. 11 (4), 97(2019).</li>
<li>Ghosh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cisplatin%3A+The+first+metal+based+anticancer+drug%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorganic+Chem%22%5BJournal%5D)">Cisplatin: The first metal based anticancer drug.</a> Bioorganic Chem. 88, 102925(2019).</li>
<li>Abid, M., Shamsi, F., Azam, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ruthenium+complexes%3A+an+emerging+ground+to+the+development+of+metallopharmaceuticals+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Mini+Reviews+in+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Ruthenium complexes: an emerging ground to the development of metallopharmaceuticals for cancer therapy.</a> Mini Reviews in Medicinal Chemistry. 16 (10), 772-786 (2016).</li>
<li>Alessio, E., Messori, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NAMI-A+and+KP1019%2F1339%2C+two+iconic+ruthenium+anticancer+drug+candidates+face-to-face%3A+a+case+story+in+medicinal+inorganic+chemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">NAMI-A and KP1019/1339, two iconic ruthenium anticancer drug candidates face-to-face: a case story in medicinal inorganic chemistry.</a> Molecules. 24 (10), 1995(2019).</li>
<li>Alessio, E., Mestroni, G., Bergamo, A., Sava, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ruthenium+antimetastatic+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Ruthenium antimetastatic agents.</a> Current Topics in Medicinal Chemistry. 4 (15), 1525-1535 (2004).</li>
<li>Lin, K., Zhao, Z. -Z., Bo, H. -B., Hao, X. -J., Wang, J. -Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+ruthenium+complex+in+tumor+diagnosis+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Applications of ruthenium complex in tumor diagnosis and therapy.</a> Frontiers in Pharmacology. 9, 1323(2018).</li>
<li>Howe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+reference+genome+sequence+and+its+relationship+to+the+human+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome.</a> Nature. 496 (7446), 498-503 (2013).</li>
<li>Wiley, D. S., Redfield, S. E., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+screening+in+zebrafish+for+novel+biological+and+therapeutic+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Chemical screening in zebrafish for novel biological and therapeutic discovery.</a> Methods in Cell Biology. 138, 651-679 (2017).</li>
<li>Bambino, K., Chu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+in+toxicology+and+environmental+health%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Zebrafish in toxicology and environmental health.</a> Current Topics in Developmental Biology. 124, 331-367 (2017).</li>
<li>Rubinstein, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+assays+for+drug+toxicity+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+on+Drug+Metabolism+%26+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Zebrafish assays for drug toxicity screening.</a> Expert Opinion on Drug Metabolism & Toxicology. 2 (2), 231-240 (2006).</li>
<li>Cassar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+zebrafish+in+drug+discovery+toxicology%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Research+in+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Use of zebrafish in drug discovery toxicology.</a> Chemical Research in Toxicology. 33 (1), 95-118 (2020).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+zebrafish+book.+A+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29.+4th+edition%22">The zebrafish book. A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). 4th edition</a>. , University of Oregon Press. Eugene. (2000).</li>
<li>Pfizer. Material safety data sheet: cisplatin injection). Pfizer. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://cdn.pfizer.com/pfizercom/products/material_safety_data/PZ01470.pdf">https://cdn.pfizer.com/pfizercom/products/material_safety_data/PZ01470.pdf</a> (2011).</li>
<li>Nasiadka, A., Clark, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+breeding+in+the+laboratory+environment%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+Journal%22%5BJournal%5D)">Zebrafish breeding in the laboratory environment.</a> ILAR Journal. 53 (2), 161-168 (2012).</li>
<li>OECD. Test No. 236: Fish embryo acute toxicity (FET) test. OECD Guidelines for the Testing of Chemicals. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.oecd-ilibrary.org/environment/test-no-236-fish-embryo-acute-toxicity-fet-test_9789264203709-en">https://www.oecd-ilibrary.org/environment/test-no-236-fish-embryo-acute-toxicity-fet-test_9789264203709-en</a> (2013).</li>
<li>EMD Millipore Corporation. Material Safety Data Sheet: OmniTrace Nitric Acid. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22EMD+Millipore+Corporation%22">EMD Millipore Corporation</a>. , (2013).</li>
<li>Safety data sheet: Hydrogen peroxide 30% Suprapur. EMD Millipore Corporation. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.merckmillipore.com/IN/en/product/Hydrogen-peroxide-300-0,MDA_CHEM-107298">https://www.merckmillipore.com/IN/en/product/Hydrogen-peroxide-300-0,MDA_CHEM-107298</a> (2014).</li>
<li>Karas, B. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+screening+method+for+transition+metal-based+anticancer+compounds+using+zebrafish+embryo-larval+assay+and+inductively+coupled+plasma-mass+spectrometry+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Toxicology%22%5BJournal%5D)">A novel screening method for transition metal-based anticancer compounds using zebrafish embryo-larval assay and inductively coupled plasma-mass spectrometry analysis.</a> Journal of Applied Toxicology. 39 (8), 1173-1180 (2019).</li>
<li>Henn, K., Braunbeck, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dechorionation+as+a+tool+to+improve+the+fish+embryo+toxicity+test+%28FET%29+with+the+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Biochemistry+and+Physiology.+Toxicology+%26+Pharmacology%3A+CBP%22%5BJournal%5D)">Dechorionation as a tool to improve the fish embryo toxicity test (FET) with the zebrafish (Danio rerio).</a> Comparative Biochemistry and Physiology. Toxicology & Pharmacology: CBP. 153 (1), 91-98 (2011).</li>
<li>Mandrell, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+zebrafish+chorion+removal+and+single+embryo+placement%3A+optimizing+throughput+of+zebrafish+developmental+toxicity+screens%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Laboratory+Automation%22%5BJournal%5D)">Automated zebrafish chorion removal and single embryo placement: optimizing throughput of zebrafish developmental toxicity screens.</a> Journal of Laboratory Automation. 17 (1), 66-74 (2012).</li>
<li>Karas, B. F., Hotz, J. M., Buckley, B. T., Cooper, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cisplatin+alkylating+activity+in+zebrafish+causes+resistance+to+chorionic+degradation+and+inhibition+of+osteogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Aquatic+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Cisplatin alkylating activity in zebrafish causes resistance to chorionic degradation and inhibition of osteogenesis.</a> Aquatic Toxicology. 229, 105656(2020).</li>
</ol>

Er zijn geen belangenconflicten die door een van de auteurs moeten worden bekendgemaakt.

Het hier beschreven protocol is geïmplementeerd om de levering en opname van op metaal gebaseerde antikankergeneesmiddelen met Pt of Ru te bepalen. Hoewel deze methoden al zijn gepubliceerd, bespreekt dit protocol belangrijke overwegingen en details om deze methodologie aan te passen voor een reeks verbindingen. Het OESO-protocol in combinatie met weefselvertering en ICPMS-analyse stelde ons in staat om te bepalen dat PMC79 krachtiger was dan cisplatine en resulteerde in ongelijksoortige weefselaccumulatie, wat afzonderl...

Metalen en op metalen gebaseerde verbindingen blijven farmacologische en toxicologische relevantie hebben. De prevalentie van blootstelling aan zware metalen en de impact ervan op de gezondheid heeft het wetenschappelijk onderzoek sinds de jaren 1960 exponentieel verhoogd en bereikte een recordhoogte in 2021. De concentraties van zware metalen in drinkwater, luchtvervuiling en beroepsmatige blootstelling overschrijden wereldwijd de wettelijke limieten en blijven een probleem voor arseen, cadmium, kwik, chroom, lood en andere metalen. Nieuwe methoden om de blootstelling aan het milieu te kwantificeren en pathologische ontwikkeling te analyseren, blijven veel gevraagd 1,2,3.
Omgekeerd heeft het medische veld de fysiochemische eigenschappen van verschillende metalen benut voor klinische behandeling. Geneesmiddelen op basis van metaal of metallodrugs hebben een rijke geschiedenis van medicinale doeleinden en hebben activiteit getoond tegen een reeks ziekten, met het hoogste succes als chemotherapeutica4. De beroemdste van metallodrugs, cisplatine, is een op Pt gebaseerd antikankermedicijn dat door de Wereldgezondheidsorganisatie (WHO) wordt beschouwd als een van 's werelds essentiële geneesmiddelen5. In 2010 hadden cisplatine en zijn Pt-derivaten tot een slagingspercentage van 90% bij verschillende kankers en werden ze gebruikt in ongeveer 50% van de chemotherapieregimes 6,7,8. Hoewel pt-gebaseerde chemotherapeutica onweerlegbaar succes hebben gehad, heeft de dosisbeperkende toxiciteit onderzoek in gang gezet naar alternatieve op metaal gebaseerde geneesmiddelen met verfijnde biologische afgifte en activiteit. Van deze alternatieven zijn op Ru gebaseerde verbindingen de meest populairegeworden 9,10,11,12.
Nieuwe modellen en methodologie zijn nodig om gelijke tred te houden met de snelheid van de behoefte aan farmaco- en toxicokinetische studies naar metaal. Het zebravismodel ligt op het snijvlak van complexiteit en doorvoer, omdat het een gewerveld dier met een hoge vruchtbaarheid is met 70% geconserveerde gen homologie13. Dit model is een aanwinst geweest in de farmacologie en toxicologie, met uitgebreide screenings voor verschillende verbindingen voor loodontdekking, doelidentificatie en mechanistische activiteit 14,15,16,17. Screening van chemicaliën met een hoge doorvoer is echter meestal afhankelijk van blootstellingen aan water. Aangezien de opname variabel kan zijn op basis van de fysisch-chemische eigenschappen van de verbinding in oplossing (d.w.z. fotodegradatie, oplosbaarheid), kan dit een belangrijke beperking zijn van het correleren van dosisafgifte en respons.
Om deze beperking voor vergelijking van de dosis met hogere gewervelde dieren te overwinnen, werd een methodologie ontworpen om sporenmetaalconcentraties in larvenweefsel van zebravissen te analyseren. Hier werden dosis-responscurven van dodelijke en subletale eindpunten geëvalueerd voor cisplatine en nieuwe op Ru gebaseerde antikankerverbindingen. Letaliteit en vertraagd uitkomen werden geëvalueerd voor nominale concentraties van 0, 3,75, 7,5, 15, 30 en 60 mg/l cisplatine. Pt-accumulatie in organismeweefsel werd bepaald door ICPMS-analyse en de opname van respectieve doses door organismen was 0,05, 8,7, 23,5, 59,9, 193,2 en 461,9 ng (Pt) per organisme. Bovendien werden zebravislarven blootgesteld aan 0, 3,1, 6,2, 9,2, 12,4 mg / l PMC79. Deze concentraties werden analytisch bepaald om 0, 0,17, 0,44, 0,66 en 0,76 mg/l Ru te bevatten. Dit protocol maakte het ook mogelijk om concentraties pt te onderscheiden die in het chorion van de larven waren gesekwestreerd in vergelijking met het zebravisweefsel. Deze methodologie was in staat om betrouwbare, robuuste gegevens te leveren voor vergelijkingen van farmaco- en toxicokinetische activiteit tussen een gevestigde chemotherapeutische en een nieuwe verbinding. Deze methode kan worden toegepast op een breed scala aan metalen en op metaal gebaseerde verbindingen.

<table><tbody><tr><td>AB Strain Zebrafish (Danio reri)</td><td>Zebrafish International Resource Center</td><td>Wild-Type AB</td><td>Wild-Type AB Zebrafish</td></tr><tr><td>ACS Grade Nitric Acid</td><td>VWR BDH Chemicals</td><td>BDH3130-2.5LP</td><td>Salpeterzuur (68-70%); gebruikt voor het maken van 10% HNO3 zuurbadoplossing voor het weken/vooraf zuiveren van centrifugebuizen</td></tr><tr><td>Aquatox Fish Diet (Flake)</td><td>Zeigler Bros, Inc.</td><td></td><td>Vlokvoer om gemengd te worden in een 1:4 verhouding van Aquatox Fish Diet tot TetraMin Tropical Flakes en gebruikt als voer</td></tr><tr><td>Artemia cysts, brine shrimp</td><td>PentairAES</td><td>BS90</td><td>Artemia-eieren verkocht in 15-ounce, vacuümverpakte blikjes om uit te komen en als voer te gebruiken</td></tr><tr><td>ASX-510 Autosampler voor ICPMS</td><td>Teledyne CETAC</td><td></td><td>Automatische sampler met configureerbare XYZ-beweging, stromende spoelstation en sonde met een binnenafmeting van 0,3 mm. Compatibel met Nu AttoLab-software voor programmeerbare batchanalyses.&nbsp;&nbsp;</td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Thermo Scientific</td><td>CL 2</td><td>Thermo Scientific CL 2 compacte tafelcentrifuge met variabele snelheidsbereik tot 5200 rpm; gebruikt om monster en zuurcondensaat naar de bodem van de centrifugebuis te brengen tussen microgolfverteringsintervallen; helpt bij monsterretentie</td></tr><tr><td>Centrifugebuizen</td><td>VWR</td><td>21008-105</td><td>Ultra hoge prestatiepolypropyleen centrifugebuizen met platte dop; 15 mL volume; lekvrij met conische bodem</td></tr><tr><td>Klasse A heldere glazen draadbijtellers</td><td>Fisherbrand</td><td>03-339-25B</td><td>Afzonderlijke glazen bijtellers voor blootstellingsbeveiliging</td></tr><tr><td>Dimethyl Sulfoxide</td><td>Millipore Sigma</td><td>D8418</td><td>Oplosmiddel of drager voor hydrofobe verbindingen</td></tr><tr><td>Fixed Speed Vortex Mixer</td><td>VWR</td><td>10153-834</td><td>Vortex mixer; gebruikt om het monster na zuurvertering en verdunning te homogeniseren</td></tr><tr><td>Zuivere waterstofperoxide</td><td>Merk KGaA, EDM Millipore</td><td>1.07298.0250</td><td>Suprapur waterstofperoxide (30%); gebruikt voor monstervertering</td></tr><tr><td>Zuivere salpeterzuur</td><td>EDM Millipore</td><td>NX0408-2</td><td>Omni Trace Ultra Salpeterzuur (69%); gebruikt voor monstervertering</td></tr><tr><td>Instant Ocean Zeezout</td><td>Spectrum Brands, Inc.</td><td>Instant Ocean&reg; Zeezout</td><td>Eiwiteroplossing bevat Instant Ocean zeewater met een uiteindelijke concentratie van 60 &micro;g/ml</td></tr><tr><td>Mars X Microgolfverteringssysteem</td><td>CEM, Matthews, NC</td><td></td><td>Microgolfzuurverteringssysteem gebruikt om monsters te verteren en homogeniseren onder uniforme omstandigheden. Voor deze methodologie werd de open vatverteringsmethode voltooid met behulp van centrifugebuizen van polypropyleen voor eenmalig gebruik bij laag vermogen (300 W).&nbsp;</td></tr><tr><td>Multi-elementoplossing 3</td><td>SPEX CertiPREP</td><td>CLMS-3</td><td>Bevat 10 mg/L Au, Hf, Ir, Pd, Pt, Fu, Sb, Sr, Te, Sn in 10% HCl/1% HNO3; gebruikt als kwaliteitscontrolestandaard voor Pt- en Ru-analyses</td></tr><tr><td>Nu Instruments AttoM Hoge Resolutie Inductief Gekoppelde Plasma Massa Spectrometer (HR-ICP-MS)</td><td>Nu Instruments/Amatek</td><td></td><td>Dubbel focusserings magnetisch sector inductief gekoppelde plasma massa spectrometer met flexibele lage tot hoge resolutie spleetsysteem en dynamisch bereik detectorsysteem. Gegevensverwerking en kwantificering gebeurt met behulp van NuQuant-begeleidende software.&nbsp;</td></tr><tr><td>Platinum (Pt) standaardoplossing, NIST 3140</td><td>National Institute of Standards and Technology</td><td>3140</td><td>Bereidt uit ampul die 9,996 mg/g Pt in 10% HCl bevat; ; gebruikt als kwaliteitscontrolestandaard voor Pt-analyses</td></tr><tr><td>Platinum (Pt) standaardoplossing, een-element</td><td>High Purity Standards</td><td>100040-2</td><td>Bevat 1000 mg/L Pt in 5% HCl</td></tr><tr><td>Ruthenium (Ru) standaardoplossing, een-element</td><td>High Purity Standards</td><td>100046-2</td><td>Bevat 1000 mg/L Ru in 2% HCl</td></tr><tr><td>TetraMin Tropical Flakes</td><td>Tetra</td><td>77101</td><td>Vlokvoer om gemengd te worden in een 1:4 verhouding van Aquatox Fish Diet tot TetraMin Tropical Flakes en gebruikt als voer</td></tr><tr><td>Trace Metal Grade Salpeterzuur</td><td>VWR BDH Chemicals</td><td>87003-261</td><td>Aristar Plus Salpeterzuur (67-70%); gebruikt voor spoelvloeistof in ASX-510 Autosampler</td></tr><tr><td>Ultrasoon waterbad</td><td>VWR</td><td>B2500A-DTH</td><td>Ultrasoon waterbad gebruikt om te helpen bij zuurvertering vóór microgolfvertering</td></tr></tbody></table>

dosisopname van op platina en ruthenium gebaseerde samengestelde blootstelling bij zebravissen door inductief gekoppelde plasmamassaspectrometrie met bredere toepassingen

Dose Uptake of Platinum- and Ruthenium-based Compound Exposure in Zebrafish by Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry with Broader Applications

Metalen en op metaal gebaseerde verbindingen omvatten veelzijdige farmaco-actieve en toxicologische xenobiotica. Van toxiciteit voor zware metalen tot chemotherapeutica, de toxicokinetiek van deze verbindingen heeft zowel historische als hedendaagse relevantie. Zebravissen zijn een aantrekkelijk modelorganisme geworden in het ophelderen van farmaco- en toxicokinetiek in milieublootstelling en klinische vertaalstudies. Hoewel zebravisstudies het voordeel hebben dat ze een hogere doorvoer hebben dan knaagdiermodellen, zijn er verschillende belangrijke beperkingen aan het model.
Een dergelijke beperking is inherent aan het watergedragen doseringsregime. Waterconcentraties uit deze studies kunnen niet worden geëxtrapoleerd om betrouwbare interne doseringen te bieden. Directe metingen van de op metaal gebaseerde verbindingen zorgen voor een betere correlatie met compound-gerelateerde moleculaire en biologische responsen. Om deze beperking voor metalen en op metaal gebaseerde verbindingen te overwinnen, werd een techniek ontwikkeld om larvenweefsel van zebravissen na blootstelling te verteren en metaalconcentraties in weefselmonsters te kwantificeren door inductief gekoppelde plasmamassaspectrometrie (ICPMS).
ICPMS-methoden werden gebruikt om de metaalconcentraties van platina (Pt) uit cisplatine en ruthenium (Ru) te bepalen uit verschillende nieuwe op Ru gebaseerde chemotherapeutica in zebravisweefsel. Bovendien onderscheidde dit protocol concentraties van Pt die werden gesekwestreerd in het chorion van de larve in vergelijking met het zebravisweefsel. Deze resultaten geven aan dat deze methode kan worden toegepast om de metaaldosis in larvale weefsels te kwantificeren. Verder kan deze methode worden aangepast om specifieke metalen of op metaal gebaseerde verbindingen te identificeren in een breed scala aan blootstellings- en doseringsstudies.

Deze resultaten zijn eerder gepubliceerd24. Weefselopnamestudies werden uitgevoerd met watergedragen blootstellingen van cisplatine en een nieuwe op Ru gebaseerde antikankerverbinding, PMC79. Letaliteit en vertraagd uitkomen werden geëvalueerd op nominale concentraties van cisplatine 0, 3,75, 7,5, 15, 30 en 60 mg/l cisplatine. Pt-accumulatie in organismeweefsel werd bepaald door ICPMS-analyse en organismeweefsel bevatte respectievelijke doses van 0,05, 8,7, 23,5, 59,9, 193,2 en 461,9 ng (Pt) per o...

De verhoogde snelheid van farmaco- en toxicokinetische analyses van metalen en op metaal gebaseerde verbindingen in zebravissen kan voordelig zijn voor milieu- en klinische vertaalstudies. De beperking van onbekende blootstelling aan water werd overwonnen door sporenmetaalanalyse uit te voeren op verteerd zebravisweefsel met behulp van inductief gekoppelde plasmamassaspectrometrie.

Dosisopname van op platina en ruthenium gebaseerde samengestelde blootstelling bij zebravissen door inductief gekoppelde plasmamassaspectrometrie met bredere toepassingen

Metals and metal-based compounds comprise multifarious pharmaco-active and toxicological xenobiotics. From heavy metal toxicity to chemotherapeutics, the ...

Zebravissen zijn een aantrekkelijk model, maar wetenschappers weten niet hoeveel het organisme opneemt met watergedragen dosering. We ontwikkelden een techniek om weefsel na blootstelling te verteren en metalen te kwantificeren via ICPMS. Deze techniek stelt ons in staat om de dosisrespons nauwkeurig te kwantificeren en te valideren met behulp van ICPMS.Deze methode heeft veel potentie. Farmacologische of milieutechnische metaalblootstellingen kunnen worden toegepast vanaf cellulair niveau tot aan hele orgaansystemen in diermodellen. Voeg ongeveer 0,25 milliliter zeer zuiver salpeterzuur toe aan de 15 milliliter polypropyleen centrifugebuizen voor maximaal 10 larven.Ultrasoon gedurende een uur om de monsters voor te verteren. Voer voor ultrasone trillingen korte cycli van weefselvertering uit met intervallen van vijf minuten in een zuurveilige microgolfvergister totdat al het weefsel zichtbaar is geoxideerd, waardoor een uniforme, heldere gele oplossing ontstaat. Controleer de integriteit van de buizen zorgvuldig om breuk te voorkomen en voer korte spins uit in de centrifuge tussen cycli.Zodra het weefsel zichtbaar is geoxideerd, verdunt u de monsters in een zuurkast tot 3,5% salpeterzuur met behulp van 6,75 milliliter zeer zuiver water en vortex om grondig te mengen. Vervolgens om een matrix-gematchte, 7-punts kalibratiecurve uit te voeren om rekening te houden met mogelijke isobare interferenties. Gebruik een voorraadconcentratie van de waterige gecertificeerde elementaire standaard en neem een aliquot van 0,1 milliliter en pipetteer in een nieuwe centrifugebuis van 15 milliliter.Verdun met 3,5% salpeterzuur tot een eindvolume van 10 milliliter om 10 delen per miljard standaardoplossingen te produceren. Maak met behulp van de 10 delen per miljard voorraad de seriële verdunningen 0,1, 1,0 en 5,0 delen per miljard standaardoplossingen in 3,5% salpeterzuur. Maak met behulp van de 0,1-voorraad de seriële verdunningen 0,001, 0,005 en 0,01 delen per miljard standaardoplossingen in 3,5% salpeterzuur.Voordat u het ICPMS-instrument voorbereidt voor monsteranalyse, moet u ervoor zorgen dat de argongasklep open is, dat alle slangen goed zijn aangesloten en schoon zijn, dat 5% salpeterzuur open is voor het spoelen van slangen en glaswerk tussen monsteranalyses. Controleer de staat van de zaklamp en kegels en zorg ervoor dat de zaklampdoos goed is vergrendeld. En de afvoerbuis van de sproeikamer is correct aangesloten op de peripomp.Open de software, controleer de vacuümmetingen en zorg ervoor dat alle turbopompen op 100% werken Klik op START in het statusvenster van het Plasma Control-systeem om de startvolgorde te starten. Zet de plasmapomp en plasmakoeler aan, zet de vernevelaar neer en steek het plasma aan. Wacht tot het plasma brandt en stabiel is wanneer het statusvenster aangeeft dat de opstartvolgorde is voltooid.Let op dit punt op de groene stippen in het systeemstatusvenster die aangeven dat alle voedingen zijn ingeschakeld. Klik in de menubalk op Control, Autosampler in het vervolgkeuzemenu. Voer de autosampler rack positie in voor de buis met 5% salpeterzuur, laat het zuur het plasma binnendringen.Klik in de menubalk op Scans, Magnet in het vervolgkeuzemenu. Typ in het MagnetScan-venster 115 in de markermassapositie en klik op enter. Laat de magneet gedurende 30 minuten over het massabereik scannen terwijl het instrument opwarmt.Gebruik na 30 minuten de autosampler-besturing om naar de positie van een één-delen per miljard multi-element tuning-oplossing te gaan. Adem de stemoplossing op en stem het instrument af om de signaalaflezing te optimaliseren. Pas de fakkelpositie aan voor X-, Y- en Z-coördinaten, zodat de zaklamp wordt uitgelijnd met het midden van de kegels en de stroomsnelheid van de vernevelaar in het plasmacontrolevenster.Breng de nodige aanpassingen aan in het venster Ion Optics Tuning voor de bron, detector en analyzer. Zodra de signaalaflezing is geoptimaliseerd, klikt u op Stoppen in het venster Magneetscan, klikt u op Magneet kalibreren en selecteert u een lage resolutie in het pop-upvenster. Klik op OK En open het bestand Massakalibratie smc om de magneet te kalibreren.Klik op Opslaan, gebruiken om de huidige magneetkalibratie toe te passen op de analyses. Bij het meten van onbekende monsters met een enorm bereik aan concentraties, voert u een detectorkalibratie uit om ionenpulstelsignalen bij lage concentraties te vergelijken met verzwakte ionsignalen die bij hogere concentraties worden geproduceerd. Start de voorbeeldanalyse door op Data-acquisitie te klikken en klik vervolgens op Method Setup in het vervolgkeuzemenu.Gebruik een bestaande methode van de fabrikant of maak een methode op basis van de elementen van belang. Pas indien nodig de analysemodus, verblijftijd, schakelvertraging, aantal sweeps en cycli, resolutie, detectiemodus en de parkmassa aan voor deflectorinstellingen. Klik op Opslaan om de methode-instellingen vast te leggen.Optimaliseer de parameters voor elk metaal en isotype. Klik in de menubalk op Data Acquisition. Klik op Batchrun in het vervolgkeuzemenu.U kunt ook op het BATCH-pictogram onder de menubalk klikken, de batchparameters uit een spreadsheet importeren of een reeks maken in het venster Batchrun. Voer het voorbeeldtype, de positie van het autosampler-rek, de overdrachtstijd, de wastijd, de replicaties, de voorbeeld-id en het methodebestand in. Regel de batchrun voor standaardoplossingen voor kalibratiecurve, gevolgd door een kwaliteitscontrolestandaard en vervolgens onbekende monsters.Bewaak de instrumentdrift en de reproduceerbaarheid van monsters door elke 5 tot 10 monsters een kwaliteitscontrolestandaard van 0,5 delen per miljard op te nemen. Weefselopnamestudies werden uitgevoerd met watergedragen blootstellingen van cisplatine en een nieuwe op ruthenium gebaseerde antikankerverbinding PMC79. Letaliteit en vertraagd uitkomen werden geëvalueerd op nominale concentraties cisplatine.0, 3,75, 7,5 15, 30 en 60 milligram per liter cisplatine. Platina accumulatie in organisme weefsel werd bepaald door ICPMS-analyse en organisme weefsel bevatte respectievelijke doses van 0,05, 8,7, 23,5, 59,9, 193,2 en 461,9 nanogram per organisme. Vertraagd uitkomen werd waargenomen bij alle cisplatineconcentraties.Na de dechorionatie werden koraalen afzonderlijk verzameld en geanalyseerd op platina. Niet-dodelijke doses cisplatine die werden gebruikt voor dechorionatiestudies bepaalden dat 93 tot 96% van de totale afgeleverde dosis cisplatine zich had opgehoopt in het chorion, met de resterende dosis in het larvale weefsel. Zebravislarven werden blootgesteld aan 0, 3,1, 6,2, 9,2 en 12,4 milligram per liter PMC79.Deze concentraties werden analytisch bepaald om 0, 0,17, 0,44, 0,66 en 0,76 milligram per liter ruthenium te bevatten. In tegenstelling tot dit cisplatine werd vertraagd uitkomen niet waargenomen bij de aan PMC79 blootgestelde larven. Chorionen werden niet opgenomen in rutheniumanalyse omdat ze van nature werden afgebroken voorafgaand aan larvale verzameling.Het massieve metaal in larvale weefsels geanalyseerd bij elke concentratie was 0,19, 0,41 en 0,68 nanogram ruthenium per larve. Elk van de reagentia die aan het blootstellingsprotocol worden toegevoegd, geeft de kans op isobare interferenties. Overweeg indien mogelijk alternatieven zoals snelle koeling in vergelijking met tricaïne.Met deze methode kunnen metaaldosiskwantificering voor toxiciteit, werkzaamheid en experimenten worden vergeleken met hogere gewervelde dieren. We waren vooral enthousiast dat onze drempeldosis binnen een orde van grootte lag die aan patiënten werd gegeven.

dose-uptake-platinum-ruthenium-based-compound-exposure-zebrafish

Research

JoVE Journal

Chemistry

Scheikunde

Deze video beschrijft de techniek om een van zebravispatiënt afgeleid xenograftmodel te maken. In het monsterprotocol beoordelen we de efficiëntie van de geneesmiddelen Gemcitabine en Navitoclax op het xenograftmodel van de pancreastumor.

Zebravis patiënt-afgeleide Xenograft (zPDX): een kankermodel

Dit protocol beschrijft het gebruik van amide koppelingsreacties van isonicotinezuur en diaminoalkanes te overbruggen liganden geschikt voor gebruik in de synthese van meerkernige platina complexen, die aspecten van de antikankergeneesmiddelen BBR3464 en picoplatin combineren vormen.

Amidekoppeling reactie voor de synthese van Bispyridine-gebaseerde liganden en hun Complexatie naar Platinum als dinucleair antikankermiddelen

De techniek van diffusieve gradiënten in dunne films (DGT) voorgesteld voor speciatie plutonium. Dit protocol beschrijft diffusie experimenten sonderen het gedrag van Pu (IV) en Pu (V) in aanwezigheid van organisch materiaal. DGTs ingezet in een karstic voorjaar laat de beoordeling van de biologische beschikbaarheid van Pu.

Speciatie en biologische beschikbaarheid Metingen van Milieu Plutonium gebruik van Diffusion in Thin Films

Zebrafish xenograft modellen zorgen voor high-throughput drug screening en fluorescerende beeldvorming van menselijke kankercellen in een in vivo micro-omgeving. We ontwikkelden een workflow voor grootschalige, geautomatiseerde medicijnscreening op patiënt-afgeleide leukemiemonsters bij zebravissen met behulp van een geautomatiseerde fluorescentiemicroscoop uitgeruste imaging unit.

Drug Screening van primaire patiënt afgeleid tumor Xenografts bij zebravissen

Dit protocol beschrijft de procedures om acute nierschade (AKI) te veroorzaken bij volwassen zebravissen met cisplatine als nefrotoxisch middel. We beschreven de stappen om de reproduceerbaarheid van de techniek te evalueren en twee technieken om respectievelijk ontsteking en celdood in het nierweefsel, flowcytometrie en TUNEL te analyseren.

Acuut nierletselmodel geïnduceerd door Cisplatine bij volwassen zebravissen

Dit artikel beschrijft een protocol voor de snelle en efficiënte spatiotemporale monitoring van normale en afwijkende cytosinemethylatie in intacte zebravisembryo's.

Snelle en efficiënte spatiotemporale monitoring van normale en afwijkende cytosinemethylatie binnen intacte zebravisembryo's

De zebravis is onlangs gebruikt als model om potentiële stralingsmodificatoren te valideren. Het huidige protocol beschrijft de gedetailleerde stappen om zebravisembryo's te gebruiken voor op straling gebaseerde screeningsexperimenten en enkele observationele benaderingen om het effect van verschillende behandelingen en bestraling te evalueren.

Zebravislarven als model om potentiële radiosensibilisatoren of beschermers te evalueren

Zebravis gericht op reactieve elektrofielen en oxidanten (Z-REX) is een op chemische biologie gebaseerde methode voor het onderzoek van reactieve signalering van kleine moleculen. Deze techniek kan worden toegepast op levende vissen van verschillende ontwikkelingsstadia. Hier koppelen we standaardtests in zebravissen aan Z-REX voor signaalrouteanalyse.

Monitoring van on-target signaalreacties bij larvale zebravissen - Z-REX ontmaskert precieze mechanismen van elektrofiele geneesmiddelen en metabolieten

We ontwikkelden een aangepaste QuEChERS-HPLC-methode om de interne niveaus van 16 PAK's in zebravisembryo's te beoordelen.

Een gemodificeerde QuEChERS-HPLC-methode voor de detectie van polycyclische aromatische koolwaterstoffen in zebravisembryo's die zijn blootgesteld aan fijnstof

Dit protocol beschrijft een screeningprocedure voor geneesmiddelen bij zebravislarven 3-7 dagen na de bevruchting, gevolgd door morfologische beoordeling.

Screening van kleine moleculen en toxiciteitstesten bij zebravislarven in een vroeg stadium

Leer een ICPMS-methode voor het kwantificeren van metaalopname in zebravisweefsel na blootstelling aan water. Deze techniek valideert dosis-responsrelaties en heeft toepassingen in farmacologisch en milieutoxicologisch onderzoek.

Dosisopname van op platina en ruthenium gebaseerde samengestelde blootstelling bij zebravissen door inductief gekoppelde plasmamassaspectrometrie met bredere toepassingen (Video) | JoVE Journal

Dosisopname van op platina en ruthenium gebaseerde samengestelde blootstelling bij zebravissen door inductief gekoppelde plasmamassaspectrometrie met bredere toepassingen

Meer video's verkennen