Name: Muis Abdominale Aorta Aneurysma Model Geïnduceerd door Perivasculaire Toepassing van Elastase (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-02-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 49 s
Description: Leer een gestandaardiseerd chirurgisch protocol voor het induceren van abdominaal aortaan aneurysma bij muizen met behulp van elastase. Deze methode biedt hoge reproduceerbaarheid en lage kosten voor cardiovasculair onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We bedanken de Unit for Laboratory Animal Medicine van de Universiteit van Michigan voor hun hulp bij het voeren en fokken van dieren. Deze studie wordt ondersteund door NIH RO1 HL138139, NIH RO1 HL153710 aan J. Zhang, NIH RO1 HL109946, RO1 HL134569 aan Y.E. Chen en de American Heart Association grant 20POST35110064 aan G. Zhao.

De dierprotocollen zijn goedgekeurd door de University of Michigan Institutional Animal Care and Use Committee (PRO00010092). Mannelijke en vrouwelijke C57BL / 6J wild-type (WT) muizen, ~ 7 weken oud, werden gebruikt voor de experimenten.
1. Bereiding van dieren
<ol><li>Voed de muizen met het standaard chow-dieet (zie Tabel met materialen) voor en na de operatie. OPMERKING: Verschillende stammen en leeftijden van muizen kunnen worden gebruikt. Leeftijd variërend van 5,5-12 weken oud wordt echter aanbevolen om een maximale incidentie te bereiken.</li>
	<li>Dien voor elke muis 5 mg/kg Carprofen subcutaan toe 30 minuten vóór de inductie van de anesthesie.</li>
	<li>Dien na 30 minuten 100 mg/kg Ketamine en 5 mg/kg Xylazine toe via intraperitoneale injectie om anesthesie te induceren.</li>
</ol>2. Voorbereiding op de operatie
<ol><li>Bereid het chirurgische materiaal voor.<ol>
<li>Snijd de nitril handschoenen in reepjes van 4 cm x 4 mm. Snijd de wattenschijfjes in stukjes van 3 cm x 2 mm. Autoclaaf deze met andere chirurgische instrumenten, waaronder chirurgische scharen, weefseltangen en Halsted-Mosquito hemostaten (zie Tabel met materialen).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Plaats de muis in rugligging op een steriel absorberend verbandkussen. Immobiliseer de voor- en achterpoten met chirurgische tape.</li>
	<li>Gebruik applicators met wattenpunt (zie Tabel met materialen) om haarverwijderaarlotion over de middelste en onderste buikstreek te borstelen en veeg het gebied vervolgens uit met chirurgisch gaas om het haar te verwijderen.</li>
	<li>Desinfecteer het operatiegebied ten minste drie keer in een cirkelvormige beweging met afwisselende toepassingen van 70% alcohol en een scrub op basis van jodium of chloorhexidine. Laat drogen.</li>
</ol>3. Chirurgische ingreep
<ol><li>Voer de volgende stappen uit om toegang te krijgen tot de buikholte.<ol>
<li>Test de muis op het ontbreken van een teenknijpreactie vóór de huidincisie.</li>
		<li>Maak een longitudinale incisie van 2,5 cm op de huid langs de middellijn van de midden- en onderbuik met behulp van een chirurgische schaar.</li>
		<li>Trek voorzichtig de onderliggende spier omhoog en maak een longitudinale incisie van 2,5 cm langs linea alba om toegang te krijgen tot de buikholte.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Leg de abdominale aorta bloot.<ol>
<li>Gebruik bevochtigde applicators met katoenen punt om de darmen en maag naar de rechterkant van de muis te verplaatsen. OPMERKING: Idealiter zal dit het infrarode segment van de aorta blootleggen. Als de aorta moeilijk te lokaliseren is, kunnen de rechternier en de rechter nierslagader de aorta identificeren (omdat de rechternier een iets lagere anatomische locatie heeft dan de linker nier).</li>
		<li>Gebruik een tang om voorzichtig het bindweefsel te verwijderen dat de abdominale aorta en inferieure vena cava (IVC) bedekt. OPMERKING: De abdominale aorta en IVC bevinden zich in dezelfde vaatschede. Het is niet nodig om al het bindweefsel te verwijderen, omdat volledige verwijdering het risico op beschadiging van deze twee bloedvaten zou vergroten.</li>
		<li>Gebruik een tang om de achterkant van de abdominale aorta en IVC voorzichtig te ontleden van de onderliggende spieren. OPMERKING: Uiteinden van de tang moeten dwars in de achterkant van de schede gaan en een gat in de fascia maken dat de schede verbindt met de onderliggende spieren. Zodra het gat is gemaakt, vergroot u de grootte ervan door de tang langzaam los te laten.</li>
		<li>Plaats een stuk van de 4 cm x 4 mm handschoenstreep (zoals eerder vermeld, stap 2.1.1) door de achterkant van de abdominale aorta en IVC en recht de streep. Plaats de streep ~0,5 cm van de rechter nierslagader. OPMERKING: Zorg ervoor dat het gat groot genoeg is, zodat de omliggende fascia de streep niet zal verdraaien.</li>
		<li>Plaats boven de streep een stuk van 3 cm x 2 mm wattenschijfje door de achterkant van de abdominale aorta en IVC en maak vervolgens het wattenschijfje recht.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Incubeer de elastase.<ol>
<li>Gebruik een pipet om 30 μL varkens pancreatische elastase (totale enzymatische activiteit van 1,8 eenheid, zie Tabel met materialen) op het aortasegment boven het wattenschijfje te laten vallen en wikkel vervolgens het wattenschijfje en de streep rond de aorta en IVC. Spoel een stuk gaas van 10 cm x 10 cm af met steriele 0,9% zoutoplossing en plaats het op de buik. OPMERKING: Het gaas hoeft slechts gedeeltelijk te worden gespoeld, omdat overdrijven het risico zou lopen de elastase eronder te verdunnen.</li>
		<li>Verwijder na 30 minuten de streep en het wattenschijfje met een tang.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Sluit de buikholte volgens de onderstaande stappen.<ol>
<li>Irrigeer de aorta en buikholte met 500 μL steriele 0,9% zoutoplossing. Gebruik een gaasje van 10 cm x 10 cm om de resterende zoutoplossing te absorberen.</li>
		<li>Hersluit de spierlagen met een lopende 6-0 niet-absorbeerbare monofilament hechting.</li>
		<li>Sluit de huid met 3-4 onderbroken 6-0 niet-absorbeerbare monofilament hechtingen.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Postoperatieve zorg
<ol><li>Dien 5 mg/kg Carprofen subcutaan toe op de postoperatieve dag 1.</li>
	<li>Verwijder huidnaden op de postoperatieve dag 10.</li>
</ol>5. Meting van de diameter van het abdominale aorta-aneurysma
<ol><li>Euthanaseer de muizen door CO 2-overdosering op postoperatieve dag 14. Dit vertegenwoordigt het tijdspunt van maximale dilatatie.</li>
	<li>Toegang tot de buikholte zoals beschreven in stap 3.1.</li>
	<li>Voer vasculaire perfusie uit door 10 ml van 0,9% zoutoplossing in de bloedsomloop te injecteren via de linker ventrikel.</li>
	<li>Stel het infrarode segment van de abdominale aorta bloot zoals beschreven in stap 3.1-3.2. Verwijder voorzichtig het omliggende bindweefsel en scheid de abdominale aorta van IVC.</li>
	<li>Meet de diameter van de abdominale aorta met een remklauw.</li>
</ol>

<ol><li>Kent, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+practice%3A+Abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Clinical practice: Abdominal aortic aneurysms.</a> The New England Journal of Medicine. 371 (22), 2101-2108 (2014).</li>
<li>Karthikesalingam, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mortality+from+ruptured+abdominal+aortic+aneurysms%3A+Clinical+lessons+from+a+comparison+of+outcomes+in+England+and+the+USA%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Mortality from ruptured abdominal aortic aneurysms: Clinical lessons from a comparison of outcomes in England and the USA.</a> Lancet. 383 (9921), 963-969 (2014).</li>
<li>Noel, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ruptured+abdominal+aortic+aneurysms%3A+The+excessive+mortality+rate+of+conventional+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Ruptured abdominal aortic aneurysms: The excessive mortality rate of conventional repair.</a> Journal of Vascular Surgery. 34 (1), 41-46 (2001).</li>
<li>Lederle, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rupture+rate+of+large+abdominal+aortic+aneurysms+in+patients+refusing+or+unfit+for+elective+repair%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Rupture rate of large abdominal aortic aneurysms in patients refusing or unfit for elective repair.</a> JAMA. 287 (22), 2968-2972 (2002).</li>
<li>Kochanek, K. D., Xu, J., Murphy, S. L., Minino, A. M., Kung, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deaths%3A+Final+data+for+2009%5BTitle%5D)+AND+%22National+Vital+Statistics+Reports%22%5BJournal%5D)">Deaths: Final data for 2009.</a> National Vital Statistics Reports. 60 (3), 1(2011).</li>
<li>Daugherty, A., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+abdominal+aortic+aneurysm+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Atherosclerosis+Reports%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of abdominal aortic aneurysm formation.</a> Current Atherosclerosis Reports. 4 (3), 222-227 (2002).</li>
<li>Quintana, R. A., Taylor, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+mechanisms+of+aortic+aneurysm+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Cellular mechanisms of aortic aneurysm formation.</a> Circulation Research. 124 (4), 607-618 (2019).</li>
<li>Kuivaniemi, H., Ryer, E. J., Elmore, J. R., Tromp, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+pathogenesis+of+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Cardiovascular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Understanding the pathogenesis of abdominal aortic aneurysms.</a> Expert Review of Cardiovascular Therapy. 13 (9), 975-987 (2015).</li>
<li>Trollope, A., Moxon, J. V., Moran, C. S., Golledge, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+abdominal+aortic+aneurysm+and+their+role+in+furthering+management+of+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Pathology%22%5BJournal%5D)">Animal models of abdominal aortic aneurysm and their role in furthering management of human disease.</a> Cardiovascular Pathology. 20 (2), 114-123 (2011).</li>
<li>Patelis, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+in+the+research+of+abdominal+aortic+aneurysms+development%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Research%22%5BJournal%5D)">Animal models in the research of abdominal aortic aneurysms development.</a> Physiological Research. 66 (6), 899-915 (2017).</li>
<li>Senemaud, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translational+relevance+and+recent+advances+of+animal+models+of+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Translational relevance and recent advances of animal models of abdominal aortic aneurysm.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 37 (3), 401-410 (2017).</li>
<li>Lysgaard Poulsen, J., Stubbe, J., Lindholt, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+used+to+explore+abdominal+aortic+aneurysms%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Vascular+and+Endovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Animal models used to explore abdominal aortic aneurysms: A systematic review.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 52 (4), 487-499 (2016).</li>
<li>Tsui, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+models+of+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Cardiovascular+Medicine+Journal%22%5BJournal%5D)">Experimental models of abdominal aortic aneurysms.</a> Open Cardiovascular Medicine Journal. 4, 221-230 (2010).</li>
<li>Manning, M. W., Cassi, L. A., Huang, J., Szilvassy, S. J., Daugherty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abdominal+aortic+aneurysms%3A+Fresh+insights+from+a+novel+animal+model+of+the+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Vascular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Abdominal aortic aneurysms: Fresh insights from a novel animal model of the disease.</a> Vascular Medicine. 7 (1), 45-54 (2002).</li>
<li>Chiou, A. C., Chiu, B., Pearce, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+aortic+aneurysm+produced+by+periarterial+application+of+calcium+chloride%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Murine aortic aneurysm produced by periarterial application of calcium chloride.</a> Journal of Surgical Research. 99 (2), 371-376 (2001).</li>
<li>Allaire, E., Guettier, C., Bruneval, P., Plissonnier, D., Michel, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free+arterial+grafts%3A+Morphologic+characteristics+of+aortic+isografts%2C+allografts%2C+and+xenografts+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Cell-free arterial grafts: Morphologic characteristics of aortic isografts, allografts, and xenografts in rats.</a> Journal of Vascular Surgery. 19 (3), 446-456 (1994).</li>
<li>Anidjar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastase-induced+experimental+aneurysms+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Elastase-induced experimental aneurysms in rats.</a> Circulation. 82 (3), 973-981 (1990).</li>
<li>Sun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mast+cells+modulate+the+pathogenesis+of+elastase-induced+abdominal+aortic+aneurysms+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Mast cells modulate the pathogenesis of elastase-induced abdominal aortic aneurysms in mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 117 (11), 3359-3368 (2007).</li>
<li>Bhamidipati, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+novel+murine+model+of+aortic+aneurysms+using+peri-adventitial+elastase%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Development of a novel murine model of aortic aneurysms using peri-adventitial elastase.</a> Surgery. 152 (2), 238-246 (2012).</li>
<li>Pyo, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+disruption+of+matrix+metalloproteinase-9+%28gelatinase+B%29+suppresses+development+of+experimental+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Targeted gene disruption of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase B) suppresses development of experimental abdominal aortic aneurysms.</a> Journal of Clinical Investigation. 105 (11), 1641-1649 (2000).</li>
<li>Tanaka, A., Hasegawa, T., Chen, Z., Okita, Y., Okada, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+rat+model+of+abdominal+aortic+aneurysm+using+a+combination+of+intraluminal+elastase+infusion+and+extraluminal+calcium+chloride+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">A novel rat model of abdominal aortic aneurysm using a combination of intraluminal elastase infusion and extraluminal calcium chloride exposure.</a> Journal of Vascular Surgery. 50 (6), 1423-1432 (2009).</li>
<li>Busch, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Four+surgical+modifications+to+the+classic+elastase+perfusion+aneurysm+model+enable+haemodynamic+alterations+and+extended+elastase+perfusion%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Vascular+and+Endovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Four surgical modifications to the classic elastase perfusion aneurysm model enable haemodynamic alterations and extended elastase perfusion.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 56 (1), 102-109 (2018).</li>
<li>Liang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KLF11+protects+against+venous+thrombosis+via+suppressing+tissue+factor+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+and+Haemostasis%22%5BJournal%5D)">KLF11 protects against venous thrombosis via suppressing tissue factor expression.</a> Thrombosis and Haemostasis. , (2021).</li>
<li>Marinov, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Can+the+infusion+of+elastase+in+the+abdominal+aorta+of+the+Yucatan+miniature+swine+consistently+produce+experimental+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Surgery%22%5BJournal%5D)">Can the infusion of elastase in the abdominal aorta of the Yucatan miniature swine consistently produce experimental aneurysms.</a> Journal of Investigative Surgery. 10 (3), 129-150 (1997).</li>
<li>Shannon, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porcine+model+of+infrarenal+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Porcine model of infrarenal abdominal aortic aneurysm.</a> Journal of Visualized Experiments. (153), e60169(2019).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Het elastase-geïnduceerde AAA-model werd voor het eerst gemeld door Anidjar et al. met behulp van ratten in 199017. In de afgelopen dertig jaar zijn verschillende aangepaste versies geïntroduceerd, samen met een aanzienlijke verbetering van de chirurgische technieken 19,20,21,22. Honderden instituten gebruiken elastase-geïnduceerde AAA-modellen als het op één na meest ge...

Abdominaal aorta-aneurysma (AAA) wordt gedefinieerd als een segmentale dilatatie van de abdominale aorta met ten minste 50% toename van de diameter van het vat1. AAA is potentieel fataal, omdat de breuk kan leiden tot een extreem hoog sterftecijfer, zelfs met interventie 2,3,4. Er is gemeld dat AAA verantwoordelijk is voor ongeveer 13.000 sterfgevallen per jaar in de VS, waardoor het de10e belangrijkste doodsoorzaak is 1,5.
De pathogenese van AAA is nog niet helemaal begrepen 6,7,8. Om het moleculaire mechanisme van AAA te onderzoeken en potentiële therapeutische doelen te testen, zijn verschillende experimentele AAA-modellen opgesteld 9,10. Knaagdiermodellen van AAA omvatten elastase, calciumchloride, angiotensine II en xenograftmodellen, waaronder het elastase-geïnduceerde AAA-model het op één na meest gebruikte model 10,11,12,13,14,15,16,17. Dit model omvat directe infusie of toepassing van varkens pancreatische elastase (PPE) in het infrarode segment van de aorta. De penetratie van elastase in de mediale laag van de aorta zal de afbraak van elastische lamellen en infiltratie van ontstekingscellen veroorzaken, wat leidt tot het verlies van de integriteit van de aortawand en de daaropvolgende verwijding van abdominale aorta 7,18. Het elastase-geïnduceerde AAA-model werd voor het eerst gerapporteerd door Anidjar et al. in 1990 met behulp van ratten, waarbij een geïsoleerd segment van de aorta werd doordrenkt met elastase17. Later in 2012 werd een aangepast model met behulp van een periadventiële toepassing van PBM gerapporteerd door Bhamidipati et al.19. Tegenwoordig zijn de meeste operaties voor het elastase-geïnduceerde AAA-model geïnspireerd op de groep van Bhamidipati en worden ze uitgevoerd met de externe toepassing in plaats van intraluminale perfusie van PBM. Hoewel de externe toepassing minder behoefte heeft aan fijne chirurgische vaardigheden, is de incidentie van AAA relatief lager en de grootte iets kleiner dan die van intraluminale perfusie11,19.
Hoewel het veel wordt gebruikt in AAA-studies, heeft het door elastase geïnduceerde AAA-model bepaalde beperkingen. Een kanttekening bij dit model is de onvermijdelijke variaties van hoe de operatie wordt uitgevoerd, wat kan leiden tot het probleem van reproduceerbaarheid. Het verschil kan bijvoorbeeld bestaan in de chirurgische procedure met betrekking tot hoe het infrarode segment van de aorta wordt geïsoleerd en welk deel van het segment wordt geselecteerd voor PBM-toepassing tussen verschillende laboratoria. De enzymatische activiteit van PBM's en de tijdsduur van PBM-incubatie kunnen ook variëren. Dit zijn echter allemaal essentiële determinanten die de uiteindelijke AAA-formatiesnelheid en aneurysmadiameter beïnvloeden. De variatie van deze kritische determinanten maakt gegevensvergelijking van AAA-studies uit verschillende groepen met behulp van dit model erg moeilijk. Daarom is een gestandaardiseerde chirurgische ingreep nodig als hulpmiddel om vergelijkbare resultaten van verschillende instellingen te krijgen.
Dit artikel beschrijft een gestandaardiseerd chirurgisch protocol voor het elastase-geïnduceerde AAA-model door directe toepassing van PBM op de adventitia van infrarood abdominale aorta bij muizen. Details over chirurgisch materiaal en procedures die essentieel zijn voor een succesvolle en robuuste generatie van AAA bij muizen met behulp van dit model zullen ook worden besproken.

<table><tbody><tr><td>6-0 non-absorbable monofilament suture</td><td>Pro Advantage</td><td>P420697</td><td></td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>Zoetis Inc.</td><td>NDC: 54771-8507</td><td></td></tr><tr><td>Chow Diet</td><td>LabDiet</td><td>3005659-220</td><td>PicoLab 5L0D</td></tr><tr><td>Cotton Applicator</td><td>Dynarex</td><td>4303</td><td></td></tr><tr><td>Cotton Pad</td><td>Rael</td><td>UPC: 810027130969</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism 8</td><td>GraphPad Software Inc.</td><td></td><td>Versie 8.4.3</td></tr><tr><td>Grarfe Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11051-10</td><td></td></tr><tr><td>Halsted Mosquito Hemostats</td><td>Fine Science Tools</td><td>13009-12</td><td></td></tr><tr><td>Ketamine</td><td>Par Pharmaceutical</td><td>NDC: 42023-0115-10</td><td></td></tr><tr><td>Nitrile gloves</td><td>Fisherbrand</td><td>19-130-1597</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Thermo Fisher</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Porcine pancreatic elastase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E1250-100MG</td><td></td></tr><tr><td>Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>14068-12</td><td></td></tr><tr><td>Sterile 0.9% saline solution</td><td>Baxter</td><td>2B1324X</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Akorn</td><td>NDC: 59399-110-20</td><td></td></tr></tbody></table>

muis abdominale aorta aneurysma model geïnduceerd door perivasculaire toepassing van elastase

Mouse Abdominal Aortic Aneurysm Model Induced by Perivascular Application of Elastase

Abdominaal aorta-aneurysma (AAA), hoewel voornamelijk asymptomatisch, is potentieel levensbedreigend omdat de breuk van AAA meestal een verwoestend resultaat heeft. Momenteel zijn er verschillende verschillende experimentele modellen van AAA, die elk een ander aspect in de pathogenese van AAA benadrukken. Het elastase-geïnduceerde AAA-model is het op één na meest gebruikte AAA-model voor knaagdieren. Dit model omvat directe infusie of toepassing van varkens pancreatische elastase (PPE) in het infrarode segment van de aorta. Vanwege technische uitdagingen wordt het meeste elastase-geïnduceerde AAA-model tegenwoordig uitgevoerd met de externe toepassing in plaats van een intraluminale infusie van PBM' s. De infiltratie van elastase zal degradatie van elastische lamellen in de mediale lagen veroorzaken, wat resulteert in het verlies van de integriteit van de aortawand en de daaropvolgende verwijding van de abdominale aorta. Een nadeel van het elastase-geïnduceerde AAA-model is echter de onvermijdelijke variatie in hoe de operatie wordt uitgevoerd. Met name de chirurgische techniek van het isoleren van het infrarode segment van de aorta, het materiaal dat wordt gebruikt voor aorta-verpakking en PBM-incubatie, de enzymatische activiteit van PBM en de tijdsduur van PBM-toepassing kunnen allemaal belangrijke determinanten zijn die de uiteindelijke AAA-formatiesnelheid en aneurysmadiameter beïnvloeden. Met name het verschil in deze factoren van verschillende studies over AAA kan leiden tot reproduceerbaarheidsproblemen. Dit artikel beschrijft een gedetailleerd chirurgisch proces van het elastase-geïnduceerde AAA-model door directe toepassing van PBM op de adventitia van de infrarode abdominale aorta in de muis. Na deze procedure is een stabiele AAA-formatiesnelheid van ongeveer 80% bij mannelijke en vrouwelijke muizen haalbaar. De consistentie en reproduceerbaarheid van AAA-studies met behulp van een elastase-geïnduceerd AAA-model kan aanzienlijk worden verbeterd door een standaard chirurgische procedure vast te stellen.

Een totaal van drieëntwintig 7 weken oude wild-type (WT) muizen, waaronder 12 vrouwtjes en 11 mannetjes, werden geopereerd volgens het gepresenteerde protocol. De overlevingskans was 100% (chirurgische mortaliteit uitgesloten). De maximale abdominale aortadiameter werd gemeten met een remklauw.
AAA werd gedefinieerd als het verwijden van de abdominale aorta met een toename van 50% van de vaatdiameter. Daarom werd een toename van 50% in de maximale abdominale aortadiameter geselecteerd als het ...

Het huidige protocol beschrijft een gestandaardiseerde chirurgische methode voor het elastase-geïnduceerde AAA-model door de directe toepassing van elastase op de adventitia van infrarode abdominale aorta bij muizen.

Muis Abdominale Aorta Aneurysma Model Geïnduceerd door Perivasculaire Toepassing van Elastase

Abdominal aortic aneurysm (AAA), although primarily asymptomatic, is potentially life-threatening as the rupture of AAA usually has a devastating outcome. ...

Dit is een gestandaardiseerd protocol voor elastase geïnduceerd abdominaal aorta-aneurysma, wat de reproduceerbaarheid en de consistentie van studies met behulp van dit model aanzienlijk zou verbeteren. Deze techniek heeft een consistente inductiesnelheid van abdominaal aorta-aneurysma. Het bezit ook het voordeel van lage kosten en korte bedrijfstijd, wat zal resulteren in een sterkere statistische kracht en de reproduceerbaarheid.U moet ervoor zorgen dat de bindweefsels die de aorta bedekken, zijn verwijderd, zodat de elastase een betere kans op penetratie heeft, maar pas op dat u de bloedvaten niet beschadigt. Dien om te beginnen vijf milligram per kilogram carprofen subcutaan toe, 30 minuten vóór de inductie van anesthesie. Test de verdoofde muis op het ontbreken van een teenknijpreactie vóór de huidincisie.Maak een longitudinale incisie van 2,5 centimeter op de huid, langs de middellijn van de midden- en onderbuik. Trek voorzichtig de onderliggende spier omhoog en maak een longitudinale incisie van 2,5 centimeter langs linea alba. Gebruik bevochtigde applicators met katoenen punt om de darmen en maag naar de rechterkant van de muis te verplaatsen en toegang te krijgen tot de buikholte.Gebruik een tang om voorzichtig het bindweefsel te verwijderen dat de abdominale aorta en inferieure vena cava bedekt. Gebruik een tang om de achterkant van de abdominale aorta en inferieure vena cava voorzichtig te ontleden van de onderliggende spieren. Plaats een stuk van vier centimeter bij vier millimeter handschoenstreep door de achterkant van de abdominale aorta en inferieure vena cava en maak de streep recht.Plaats de streep op ongeveer 0,5 centimeter afstand van de rechter nierslagader. Plaats boven de streep een stuk van drie centimeter bij twee millimeter wattenschijfje door de achterkant van de abdominale aorta en inferieure vena cava. Maak vervolgens het wattenschijfje recht.Om de elastase te incuberen, gebruikt u een pipet om 30 microliter varkens pancreatische elastase op het aortasegment boven het wattenschijfje te laten vallen. Wikkel het wattenschijfje en de streep om de aorta en inferieure vena cava. Spoel een stuk gaas van 10 centimeter bij 10 centimeter af met steriele zoutoplossing van 0,9% en plaats het op de buik.Verwijder na 30 minuten de streep en het wattenschijfje met een tang. Irrigeer de aorta en buikholte met 500 microliter steriele 0,9% zoutoplossing. Gebruik gaas om de resterende zoutoplossing te absorberen.Benader de spierlagen opnieuw met een lopende 6-0 niet-absorbeerbare monofilament hechting. Sluit vervolgens de huid met drie tot vier onderbroken bij 6-0 niet-absorbeerbare monofilament hechtingen. De incidentie van het ontwikkelen van een abdominaal aorta-aneurysma op postoperatieve dag 14 was 91,7% voor vrouwelijke dieren, terwijl de incidentie voor mannelijke dieren 72,7% was Onder de 19 dieren waarbij abdominaal aorta-aneurysma werd ontwikkeld, werd een 1,7-voudige en 1,6-voudige toename van de maximale abdominale aortadiameter waargenomen, respectievelijk bij vrouwen en mannen, vergeleken met niet-chirurgische controles.Representatieve beelden van de aorta van niet-chirurgische en operatiegroepen op een postoperatieve dag 14 worden weergegeven. Deze techniek diende als een potentieel hulpmiddel om de pathofysiologie van triple A te helpen ontleden en te helpen bij de ontdekking van nieuwe potentiële therapeutische doelen.

mouse-abdominal-aortic-aneurysm-model-induced-perivascular

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Deze video laat zien hoe u abdominale aorta-aneurysma (AAA) te induceren in muizen via voorbijgaande intraluminale infusie van varkens pancreas elastase in de infrarenale segment van de abdominale aorta. Het model heeft de mogelijkheid om breed inzicht toe te voegen in de pathobiologie van AAA te wijten aan de opkomst van tal van transgene en knockout muizen.

Creatie van Muizen Experimentele abdominale aorta-aneurysma met Elastase

We beschrijven een chirurgisch protocol voor het consequent induceren van robuuste aflopend thoracische aorta aneurysma bij muizen. De procedure omvat linker Thoracotomie, thoracische aorta blootstelling, en plaatsing van een spons gedrenkt in varkens alvleesklier elastase op de aorta wand.

Murine chirurgische model van actuele elastase geïnduceerde dalende thoracale aorta aneurysma

Dit protocol beschrijft een calciumfosfaat-geïnduceerd abdominaal aorta-aneurysma (AAA) muismodel om de pathologische kenmerken en moleculaire mechanismen van AAAs te bestuderen.

Een calciumfosfaat-geïnduceerd muis abdominaal aorta-aneurysma model

Dit manuscript presenteert een protocol voor het opstellen van een abdominaal aorta-aneurysmamodel van muizen met behulp van calciumchloride en elastase, waarbij de voordelen van eerdere modelleringsmethoden worden gecombineerd. Dit model kan worden gebruikt om de pathofysiologische mechanismen te onderzoeken die ten grondslag liggen aan abdominale aorta-aneurysma's.

Een abdominaal aorta-aneurysmamodel van muizen door periadventitiële infiltratie van calciumchloride en elastase

Dit protocol beschrijft een methodische chirurgische benadering voor het modelleren van geavanceerde abdominale aorta-aneurysma's bij muizen door een combinatie van het rechtstreeks aanbrengen van elastase op de infrarenale aorta en het toedienen van ß-aminopropionitril via drinkwater.

Geavanceerde modellering van abdominale aorta-aneurysma's bij muizen door combinatie van topisch elastase en oraal ß-aminopropionitril

Het huidige protocol beschrijft een gestandaardiseerde chirurgische methode voor de inductie van halsslagaderaneurysma's in een muizenmodel door middel van een enkele chirurgische ingreep.

Een muizenmodel van de vorming van een aneurysma van de halsslagader

Dit protocol biedt een herhaalbare en betrouwbare methode om abdominale aorta-aneurysma's (AAA's) in C57BL/6-muizen op te wekken met behulp van elastine-sensitisatie en perivasculaire elastase-toepassing, als een AAA-model dat een immuunsensitisatiecomponent bevat.

Betrouwbare creatie van een model voor muriene abdominale aorta-aneurysma met behulp van elastine-sensitisatie en perivasculaire elastase

Orthotope diermodellen van kanker van de eierstokken te repliceren beter mens-en vaatziekten en daardoor meer inzicht in de progressie van kanker en tumor respons op therapie. Een muis model krijgt een intrabursale injectie van luciferase-expressie ovarium tumorcellen. De behandeling wordt toegediend via orale sondevoeding. Tumorgroei wordt bewaakt...

In vivo beeldvorming en therapeutische behandelingen in een orthotope Muis Model van eierstokkanker

Het genereren van geïnduceerde pluripotente stamcellen (IPSC) lijnen produceert lijnen van verschillende ontwikkelingspotentieel, zelfs als ze passeren standaard tests voor pluripotentie. Hier beschrijven we een protocol muizen volledig zijn verkregen uit iPSCs die de iPSC lijnen gedefinieerd als hebbende full pluripotentie...

Generatie van Muizen Afgeleid van geïnduceerde pluripotente stamcellen

De aard van de interactie tussen hematopoietische stamcellen en progenitorcellen (HSPCs) en beenmerg nissen wordt slecht begrepen. Aangepaste hardware wijzigingen en een meerstaps overname protocol maken het gebruik van twee-foton en confocale microscopie beeld ex vivo gemerkte HSPCs geadopteerd in beenmerg gebieden volgen interacties en beweging.

In Vivo 4-dimensionale Tracking van hematopoietische stamcellen en progenitorcellen in volwassen muis calvarial Bone Marrow

Leer een gestandaardiseerd chirurgisch protocol voor het induceren van abdominaal aortaan aneurysma bij muizen met behulp van elastase. Deze methode biedt hoge reproduceerbaarheid en lage kosten voor cardiovasculair onderzoek.

Muis Abdominale Aorta Aneurysma Model Geïnduceerd door Perivasculaire Toepassing van Elastase

Meer video's verkennen