Muis Abdominale Aorta Aneurysma Model Geïnduceerd door Perivasculaire Toepassing van Elastase
11 februari 2022
Het huidige protocol beschrijft een gestandaardiseerde chirurgische methode voor het elastase-geïnduceerde AAA-model door de directe toepassing van elastase op de adventitia van infrarode abdominale aorta bij muizen.
Dit is een gestandaardiseerd protocol voor elastase geïnduceerd abdominaal aorta-aneurysma, wat de reproduceerbaarheid en de consistentie van studies met behulp van dit model aanzienlijk zou verbeteren. Deze techniek heeft een consistente inductiesnelheid van abdominaal aorta-aneurysma. Het bezit ook het voordeel van lage kosten en korte bedrijfstijd, wat zal resulteren in een sterkere statistische kracht en de reproduceerbaarheid.
U moet ervoor zorgen dat de bindweefsels die de aorta bedekken, zijn verwijderd, zodat de elastase een betere kans op penetratie heeft, maar pas op dat u de bloedvaten niet beschadigt. Dien om te beginnen vijf milligram per kilogram carprofen subcutaan toe, 30 minuten vóór de inductie van anesthesie. Test de verdoofde muis op het ontbreken van een teenknijpreactie vóór de huidincisie.
Maak een longitudinale incisie van 2,5 centimeter op de huid, langs de middellijn van de midden- en onderbuik. Trek voorzichtig de onderliggende spier omhoog en maak een longitudinale incisie van 2,5 centimeter langs linea alba. Gebruik bevochtigde applicators met katoenen punt om de darmen en maag naar de rechterkant van de muis te verplaatsen en toegang te krijgen tot de buikholte.
Gebruik een tang om voorzichtig het bindweefsel te verwijderen dat de abdominale aorta en inferieure vena cava bedekt. Gebruik een tang om de achterkant van de abdominale aorta en inferieure vena cava voorzichtig te ontleden van de onderliggende spieren. Plaats een stuk van vier centimeter bij vier millimeter handschoenstreep door de achterkant van de abdominale aorta en inferieure vena cava en maak de streep recht.
Plaats de streep op ongeveer 0,5 centimeter afstand van de rechter nierslagader. Plaats boven de streep een stuk van drie centimeter bij twee millimeter wattenschijfje door de achterkant van de abdominale aorta en inferieure vena cava. Maak vervolgens het wattenschijfje recht.
Om de elastase te incuberen, gebruikt u een pipet om 30 microliter varkens pancreatische elastase op het aortasegment boven het wattenschijfje te laten vallen. Wikkel het wattenschijfje en de streep om de aorta en inferieure vena cava. Spoel een stuk gaas van 10 centimeter bij 10 centimeter af met steriele zoutoplossing van 0,9% en plaats het op de buik.
Verwijder na 30 minuten de streep en het wattenschijfje met een tang. Irrigeer de aorta en buikholte met 500 microliter steriele 0,9% zoutoplossing. Gebruik gaas om de resterende zoutoplossing te absorberen.
Benader de spierlagen opnieuw met een lopende 6-0 niet-absorbeerbare monofilament hechting. Sluit vervolgens de huid met drie tot vier onderbroken bij 6-0 niet-absorbeerbare monofilament hechtingen. De incidentie van het ontwikkelen van een abdominaal aorta-aneurysma op postoperatieve dag 14 was 91,7% voor vrouwelijke dieren, terwijl de incidentie voor mannelijke dieren 72,7% was Onder de 19 dieren waarbij abdominaal aorta-aneurysma werd ontwikkeld, werd een 1,7-voudige en 1,6-voudige toename van de maximale abdominale aortadiameter waargenomen, respectievelijk bij vrouwen en mannen, vergeleken met niet-chirurgische controles.
Representatieve beelden van de aorta van niet-chirurgische en operatiegroepen op een postoperatieve dag 14 worden weergegeven. Deze techniek diende als een potentieel hulpmiddel om de pathofysiologie van triple A te helpen ontleden en te helpen bij de ontdekking van nieuwe potentiële therapeutische doelen.
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's
Overzicht
Deze studie presenteert een gestandaardiseerd chirurgisch protocol voor het induceren van een abdominal aorta aneurysma (AAA) bij muizen met behulp van elastase. De methode garandeert een hoge reproduceerbaarheid en lage operatiekosten, waardoor het een krachtig instrument is voor het bestuderen van AAA.
Belangrijkste studiecomponenten
Onderzoeksgebied
- Cardiovasculaire biologie
- Pathofysiologie van aortaziekten
- Experimentele modellering in muizen
Achtergrond
- Een abdominaal aortaneurysma is een ernstige medische aandoening met een aanzienlijke morbiditeit.
- Huidige modellen variëren in reproduceerbaarheid en kosten.
- Een gestandaardiseerde aanpak zou de onderzoeksresultaten kunnen verbeteren.
Gebruikte methoden
- Directe applicatie van porcine pancreatische elastase op de adventitia van de aorta.
- Muismodel (C57BL/6 of vergelijkbare stammen).
- Chirurgische dissectietechnieken en follow-upbeoordelingen.
Belangrijkste resultaten
- 91,7% incidentie van AAA bij vrouwelijke muizen en 72,7% bij mannetjes op postoperatieve dag 14.
- Significante toenames in de maximale diameter van de abdominale aorta zijn waargenomen.
- Ondersteunt de toepasbaarheid van het model voor een verdere verdieping in AAA en de ontdekking van therapeutische doelwitten.
Conclusies
- Dit protocol demonstreert een betrouwbare methode voor de inductie van AAA.
- Het heeft de potentie om onderzoek naar cardiovasculaire biologie en therapeutische ontwikkeling te verbeteren.
Veelgestelde vragen
Industriële Relevantie voor Management
Gestandaardiseerde muismodellen voor abdominale aortaneurysmata (AAA) zijn essentieel om risico's bij de vroege ontdekking van cardiovasculaire targets te verminderen en reproduceerbare mechanistische studies mogelijk te maken. Het protocol voor de perivasculaire elastase-applicatie biedt een hoge consistentie en statistische kracht, wat robuuste hypothesetoetsing en vergelijkbaarheid tussen studies ondersteunt. Dit model versterkt het vertrouwen in de portfolio door een betrouwbaar preklinisch systeem te bieden voor de pathogenese van AAA en de evaluatie van therapeutische targets.
Strategische Toepassingen in Biofarmaceutische R&D
Vroege ontdekking & targetvalidatie
- Maakt onderzoek naar de pathofysiologie van AAA en de identificatie van ziekte-drijvende mechanismen mogelijk.
- Ondersteunt functionele validatie van kandidaat-targets in een reproduceerbare in vivo context.
- Verbetert het voorspellend vertrouwen voor vroegstadium cardiovasculaire programma's.
Screening & Assayontwikkeling
- Biedt een gevalideerd in vivo systeem voor het evalueren van farmacologische interventies gericht op AAA.
- Levert gestandaardiseerde, kwantitatieve resultaten, zoals veranderingen in de aortadiameter, voor de ontwikkeling van assays.
- Maakt reproduceerbaarheid en schaalbaarheid mogelijk voor compound-screening in preklinische studies.
Translationeel & Preklinisch Onderzoek
- Sluit aan bij ziekte-relevante eindpunten voor translationele biomarker-exploratie.
- Ondersteunt de continuïteit van mechanische ontdekking naar preklinische beoordeling van de effectiviteit.
- Vermindert het biologische risico door belangrijke kenmerken van humane AAA in muizen te modelleren.
Integratie van Pijplijn & Workflow
Dit model integreert in het continuüm van ontdekking tot preklinisch onderzoek, waarbij een brug wordt geslagen tussen mechanistische studies en de identificatie van lead-verbindingen voor AAA-therapeutica.
- Ontdekkingsbiologie: Ondersteunt hypothese-gestuurde toetsing van AAA-mechanismen en de rol van targets.
- Screening: Levert reproduceerbare, kwantitatieve resultaten voor de evaluatie van de effectiviteit van verbindingen.
- Analytica: Maakt statistische vergelijking van aortadilatatie en incidentiepercentages tussen experimentele groepen mogelijk.
- Translationeel onderzoek: Faciliteert afstemming met klinische AAA-kenmerken voor de ontwikkeling van biomarkers en eindpunten.
- Herbruikbaarheid binnen de organisatie: Biedt een gestandaardiseerd, kosteneffectief model dat aanpasbaar is voor diverse cardiovasculaire onderzoeksteams.
Operationele & Bedrijfsimpact
- Wetenschappelijke waarde: Verhoogt het voorspellende vertrouwen en vermindert mechanistische ambiguïteit in AAA-onderzoek.
- Operationele waarde: Verbetert de reproduceerbaarheid, standaardisatie en doorvoer voor in vivo studies.
- Strategische waarde: Verbetert de kwaliteit van go/no-go beslissingen en de kapitaalallocatie in vroege cardiovasculaire pijplijnen.
- Impact op de portfolio: Maakt risico-gecorrigeerde prioritering van AAA-targets en therapeutische kandidaten mogelijk.
Overwegingen voor de implementatie
- Vereist chirurgische expertise en gestandaardiseerde procedurele training voor consistente resultaten.
- Toegang tot chirurgische suites voor dieren en kwantitatieve beeldvormings- of meetinstrumenten is noodzakelijk.
- Strikte naleving van het protocol door het hele team is vereist om interstudievariabiliteit te minimaliseren.
- Aanpassingen kunnen nodig zijn voor verschillende muizenstammen of experimentele eindpunten.
- Potentiële beperkingen omvatten technische variabiliteit en modelspecifieke pathofysiologische kenmerken.
