Laparoscopische oöcyten ophalen en cryopreservatie tijdens vaginoplastiek voor de behandeling van mayer-rokitansky-kuster-hauser syndroom

Onze aanpak maakt het mogelijk om invasieve ziekte bij de behandeling van het Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser-syndroom te minimaliseren door laparoscopische vaginoplastiek en het ophalen van eicellen te combineren voor toekomstige vruchtbaarheidsbehandelingen. De belangrijkste voordelen van onze aanpak zijn de vereiste voor een enkele anesthesie en het overwinnen van de onhaalbaarheid van een transvaginale oöcyt-retrieval bij jongere Rokitansky-patiënten. De procedure zal worden gedemonstreerd door Diana Delprato, een senior gynaecoloog van onze onvruchtbaarheidseenheid en door Alessandra Alteri en Greta Cermisoni, twee senior klinische embryologen van ons laboratorium voor geassisteerde voortplanting.

Start gecontroleerde ovariële stimulatie op dag 14 vanaf de dag van de operatie. Monitor de ovariële respons door seriële transabdominale echografie en gelijktijdige metingen van oestradiol en progesteron. Stel pneumoperitoneum vast met een open techniek.

Plaats één 10 millimeter navelstreng voor het inbrengen van de laparoscoop en drie vijf millimeter trocars in het centrale, rechter en linker onderste kwadrant. Gebruik bij laparoscopisch zicht een 17-gauge enkele lumen naald aangesloten op een aspiratiepomp, zoals vaak gebruikt voor transvaginale retrieval door de centrale en linker trocars voor het doorboren van respectievelijk de rechter en linker eierstok. Til de eierstokken op en houd ze vast met een laparoscopische tang om de blootstelling van de follikels te vergemakkelijken.

Bij het aspirateren van meerdere follikels die dicht bij elkaar liggen, moet u de naaldpunt in de eierstok behouden om het aantal keren dat de ovariële cortex is gefixeerd en het inherente risico op bloedingen te verminderen. Ontleed het peritoneum door de peritoneale streng dwars tussen de twee rudimentaire baarmoederhoorns op te tillen en in te snijden en vervolgens de incisie lateraal, vooraan en achteraan uit te breiden. Stel het vaginale kuiltje bloot op de perineale benadering en voer een H-vormige incisie uit en creëer een neo-vaginale ruimte door scherpe en stompe dissectie van de vesicorectale ruimte.

Trek vervolgens de ontlede peritoneale randen naar beneden naar de rand van het vaginale vestibulum. Positie onderbroken hechtingen in polydioxanone synthetisch absorbeerbaar 3-0 voor de peritoneale vestibulaire anastomose. Begin een tassnaar hechting in polydioxanone synthetisch absorbeerbaar 2-0 monofilament in elk hemipelvis van het gemobiliseerde peritoneum boven de blaas met verbindende transfixie van het ronde ligament, de tubale landengte, het baarmoeder-ovariële ligament en het laterale peritoneale blad.

Neem vervolgens in de twee hechtingen het laterale aspect van het mesorectum en het voorste aspect van de rectale serosa direct onder de rectosigmoïde junctie op. Plaats ten slotte een met paraffine gecoat gaas in het peritoneum gecoate neovagina. Verzamel de folliculaire aspiraten in 10 millimeter buizen met ronde bodem die warm worden gehouden in een draagbare incubator en transporteer ze onmiddellijk naar het embryologielaboratorium met een transporttijd van ongeveer 10 minuten.

Terwijl alle cumulus-eicelcomplexen worden verzameld, plaatst u ze in de schotel met vier putten met het bevruchtingsmedium en labelt u het deksel en de bodem met gegevens met betrekking tot de identiteit van de patiënt. Incubeer ze bij 37 graden Celsius in een gecontroleerde atmosfeer met 6% koolstofdioxide en 5% zuurstof. Zorg ervoor dat een dubbele controle van de procedure wordt uitgevoerd door een tweede lid van het laboratoriumpersoneel.

Voer cumulus-coronacellen te verwijderen binnen 38 uur na de ovulatietrigger. Plaats cumulus-eicelcomplexen in de centrale put die het enzym bevat om de cumuluscellen te dispergeren met een glazen Pasteur-pipet, waarbij de oplossing met cumulus-eicelcomplexen voorzichtig op en neer wordt gepipetteerd gedurende maximaal 30 seconden. Verplaats de eicellen naar de tweede centrale putschaal met alleen HEPES gebufferd medium, zorg ervoor dat een minimale hoeveelheid van het enzym wordt verplaatst.

Verwijder de resterende coronacellen met behulp van ontnuding pipetten met afnemende binnendiameters. Beoordeel het stadium van de rijping van de eicel, waarbij metafase II-eicellen worden gescheiden. Breng de metafase II-eicellen over in een IVF-kweek petrischaal van 60 millimeter met negen druppels continu enkelkweekmedium bedekt met zes millimeter minerale olie.

Incubeer ze bij 37 graden Celsius in een gecontroleerde atmosfeer met 6% koolstofdioxide en 5% zuurstof. Vul een koelbox tot aan de bovenkant met verse vloeibare stikstof en dek af totdat het wordt gebruikt om dispersie en verdamping te minimaliseren. Gebruik een stripperpipet met een binnendiameter van 170 micrometer om beschadiging van eicellen tijdens manipulatie te voorkomen.

Schud voorzichtig elke injectieflacon met equilibratieoplossing, vitrificatieoplossing en wasoplossing om de inhoud voor gebruik te mengen. Bereid het deksel van een petrischaaltje van 60 milliliter met één druppel van 50 microliter wasoplossing één. Plaats druppels vlak voor gebruik om mediumverdamping te beperken.

Neem de eicelschaal uit de incubator en breng de metafase II-eicellen met een minimaal volume medium van de kweekschaal over in de 50 microliter wasoplossing. Doseer 50-microliter druppels wasoplossing twee, equilibratieoplossing één en equilibratieoplossing twee in de nabijheid en breng eicellen over van druppelwasoplossing één naar druppelwasoplossing twee. Voeg de druppel equilibratieoplossing één samen met wasoplossing twee en wacht twee minuten op de spontane menging van beide oplossingen.

Voeg vervolgens de druppel van equilibratieoplossing twee samen met de eerder samengevoegde druppels en laat nog eens twee minuten staan. Voeg ten slotte een nieuwe 100-microliter druppel van equilibratieoplossing drie samen met de eerder samengevoegde druppels en laat een extra minuut staan. Plaats de eicellen gedurende 10 minuten in een druppel van 100 microliter equilibratieoplossing vier.

Doseer twee druppels vitrificatieoplossing van 50 microliter en één druppels vitrificatieoplossing van 100 microliter. Verplaats de eicellen sequentieel in de drie druppels vitrificatieoplossing gedurende 60 seconden, zodat de eicellen ongeveer 20 seconden in elke druppel blijven. Wanneer er nog ongeveer 10 seconden over zijn voor het einde van de 60 seconden incubatie, plaatst u het cryodevice onder de microscoop.

Draag de eicellen aan de punt van de pipet en plaats ze op het cryodevice met de minimale hoeveelheid vitrificatieoplossing. Aspirateer de overtollige vitrificatieoplossing, waardoor de eicellen bedekt blijven met een dunne laag vitrificatieoplossing. Dompel het cryodevice direct in vloeibare stikstof en verplaats het snel.

Bewaar het apparaat in vloeibare stikstof en bedek het met een beschermend deksel. De gelijktijdige laparoscopische procedures van het ophalen van eicellen en vaginoplastiek werden bij alle patiënten met succes gecombineerd. Gemiddeld werden 11,4 5,4 eicellen opgehaald en 9,6 4,3 M2 eicellen werden cryo-geconserveerd.

De totale gemiddelde operatietijd was 114 17 minuten. Intraoperatief bloedverlies was onbeduidend bij alle patiënten en er werden geen intraoperatieve bijwerkingen waargenomen. Op dag drie na de operatie begonnen de patiënten dagelijks met het gebruik van de dilatator en werden ze ontslagen op dag 6.0 1.0.

Een voorzichtige aspiratie van follikels in de eierstok wordt aanbevolen, met de nodige aandacht voor de automatische mobilisatie van de eierstokken om optimale toegang en ophalen te garanderen.