Name: Orale gecombineerde antiretrovirale behandeling bij hiv-1 geïnfecteerde gehumaniseerde muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-10-06T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 7 s
Description: Leer een nieuwe orale methode voor combinatie-antiretrovirale therapie bij gehumaniseerde muizen. Deze techniek onderdrukt HIV-1 RNA-replicatie effectief en vermindert stress vergeleken met dagelijkse injecties.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We willen Drs. Romas Geleziunas en Jeff Murry en de mensen van Gilead bedanken voor het verstrekken van de antiretrovirale geneesmiddelen die in deze studie worden gebruikt. Dit werk werd gefinancierd door NCI 1R01CA239261-01 (to Kitchen), NIH Grants P30AI28697 (de UCLA CFAR Virology Core, Gene and Cell Therapy Core en Humanized Mouse Core), U19AI149504 (PI's: Kitchen &Chen), CIRM DISC2-10748, NIDA R01DA-52841 (naar Zhen), NIAID R2120200174 (PI's: Xie & Zhen), IRACDA K12 GM106996 (Carrillo). Dit werk werd ook ondersteund door het UCLA AIDS Institute, de James B. Pendleton Charitable Trust en de McCarthy Family Foundation.

Geanonimiseerd menselijk foetaal weefsel werd commercieel verkregen. Dieronderzoek werd uitgevoerd volgens protocollen die zijn goedgekeurd door de Universiteit van Californië, Los Angeles en (UCLA) Animal Research Committee (ARC) in overeenstemming met alle federale, staats- en lokale richtlijnen. In het bijzonder werden alle experimenten uitgevoerd in overeenstemming met de aanbevelingen en richtlijnen voor huisvesting en verzorging van proefdieren van de National Institutes of Health (NIH) en de Association for the Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care (AALAC) International onder UCLA ARC Protocol Number 2010-038-02B. Alle operaties werden uitgevoerd onder ketamine (100 mg /kg) / xylazine (5 mg / kg) en isofluraanane anesthesie (2-3 vol%) en alle inspanningen werden geleverd om pijn en ongemak bij dieren te minimaliseren.
1. Gehumaniseerde muizen geïnfecteerd met HIV-1
OPMERKING: Gehumaniseerde muizen werden geconstrueerd zoals eerder beschreven in 30,31,49. Het protocol wordt hieronder kort beschreven.
<ol><li>Zuiver CD34 + hematopoietische voorlopercellen uit de menselijke foetale lever via anti-CD34 microbeads volgens het protocol van de fabrikant.</li>
	<li>Anesthetiseer 6-8 weken oude NOD/SCID/IL2Rγ−/− (NSG) mannelijke en vrouwelijke muizen en bestraling subletaal (2,7 Gy) vóór de operatie.</li>
	<li>Implanteer thymus, afgeleid van dezelfde donor als de foetale lever, onder de niercapsule samen met de lever.</li>
	<li>Na implantatie injecteert u muizen intraveneus met 0,5 miljoen tot een miljoen CD34+ cellen.</li>
	<li>Verzamel na 8-10 weken 100 μL muizenbloed via retro-orbitale bloeding50 in microcentrifugebuizen met 5 μL EDTA en centrifugeer bij 350 x g gedurende 3 minuten.</li>
	<li>Bewaar het plasma bij -80 °C om de virale lading te controleren nadat de muis is geïnfecteerd met HIV-1. Voeg 2 ml 83% NH4C-oplossing toe en incubeer gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur om rode bloedcellen te lyseren.</li>
	<li>Voeg 10 ml RPMI toe met 10% foetaal runderserum (FBS) om de lysis te stoppen. Draai op 300 x g gedurende 5 min.</li>
	<li>Aspirate supernatant. Kleur cellen met antilichaampaneel (zie Tabel van materialen) en analyseer door flowcytometrie om de entransplantatie van menselijke immuuncellen te controleren.</li>
	<li>Infecteer muizen die meer dan 50% van de circulerende CD45+ cellen vertonen door retro-orbitale aderinjectie51,52 met ten minste 200 ng p24 van een HIV-1 stam (d.w.z. NFNSXSL9 30,53,54) met behulp van een insulinespuit. Verzamel tweewekelijks bloed voor flowcytometrie-analyse en om de virale lading te meten.</li>
</ol>2. Bereiding van ART-medicijnen
<ol><li>Weeg individuele medicijnen; als u bijvoorbeeld 10 voedselbekers met cART wilt maken, gebruikt u steriele celschrapers om 250 mg FTC (Emtricitabine), 375 mg TDF en 500 mg RAL of ELV af te wegen in individuele steriele centrifugebuizen van 15 ml in een bioveiligheidskast.</li>
	<li>Voeg 1 ml DMSO toe aan de FTC-buis van 250 mg (eindconcentratie van 250 mg/ml), voeg 1,5 ml DMSO toe aan de buis van 375 mg TDF (eindconcentratie van 250 mg/ml) en voeg 1 ml DMSO toe aan de buis van 500 mg RAL of ELV (eindconcentratie van 500 mg/ml). Roer of pipetteer het medicijnmengsel totdat het volledig is opgelost en een heldere oplossing is verkregen.</li>
	<li>Gebruik een hydrofiel PVDF-membraanfilter van 0,22 μM om oplossingen te steriliseren met een steriele spuit. Individuele geneesmiddeloplossingen kunnen gedurende 12 weken bij -20 °C worden bewaard.</li>
	<li>Wanneer u klaar bent voor gebruik, ontdooit u vers één aliquot van elke geneesmiddeloplossing bij 37 °C totdat de oplossing helder wordt. Meng goed met een pipet.</li>
	<li>Combineer medicijnen en meng goed om mastermix te maken: 1 ml FTC in DMSO, 1,5 ml TDF in DMSO en 1 ml ELV of RAL in DMSO. OPMERKING: Dit bedrag maakt 10 voedselbekers.</li>
	<li>Voeg 350 μL cART master mix oplossing toe aan één kopje om één DietGel Boost cART cup te maken.</li>
	<li>Voeg 0,75 ml Trimethoprim-Sulfamethoxazol (0,48 mg / ml eindconcentratie) toe aan de cup.</li>
	<li>Roer grondig met behulp van 1 ml steriele pipetpunten.</li>
	<li>Plaats de voedselbeker met cART uit de originele beker met een microspatel op een petrischaal van 60 mm als dat nodig is. Weeg het voedsel op een weegschaal om de hoeveelheid voedselbeker met cART voor elke kooi te berekenen op basis van het aantal muizen.</li>
</ol>3. Toediening van ART-geneesmiddelen aan hiv-1-geïnfecteerde muizen
<ol><li>Haal gewone chow uit de kooi en vervang deze door een voedselbeker met cART. OPMERKING: Gemiddeld eet een muis tot 5 g voedsel per dag. Ongeveer één voedselbeker kan gedurende 2 dagen aan vijf muizen worden toegediend.</li>
	<li>Ververs cART-voedsel drie keer per week.</li>
	<li>Weeg gebruikte bekers om de inname te controleren. Weeg muizen wekelijks om de consumptie te bevestigen.</li>
</ol>4. Monitor viral load door real-time PCR
<ol><li>Beoordeel menselijke immuuncellen (CD4- en CD8 T-celniveaus) en HIV-1-replicatie in BLT-muizen elke 2 weken door retro-orbitale bloedingen. Oogst plasma door de instructies in stap 1.5-1.8 te volgen.</li>
	<li>Controleer plasma virale ladingen van muizen geïnfecteerd met HIV-1 voor en tijdens orale cART toediening gedurende 8 weken. Extraheer plasmaviraal RNA uit plasma met behulp van een virale RNA-extractiekit en kwantificeer het door real-time PCR met behulp van de primers en sondes (zie Tabel van materialen) zoals eerder beschreven 27,30,31. Gebruik het volgende fietsprotocol: 48 °C (15 min), 95 °C (10 min), dan fietsen 95 °C (15 s), 60 °C (1 min) gedurende 45 cycli.</li>
</ol>5. Beoordeel CD4/CD8-verhoudingen door middel van flowcytometrie
<ol><li>Bereid eencellige suspensies voor uit perifeer bloed van tweewekelijkse bloedingen volgens stappen 1.5-1.8.</li>
	<li>Kleur cellen met oppervlaktemarkers en analyseer door flowcytometrie. Gebruik de volgende oppervlaktemarkerantistoffen 27,30,43,49 in flowcytometrie: CD45 (kloon HI30), CD8 (kloon SK1), CD3 (kloon OKT3), CD4 (kloon RPA-T4)27,30,42,49.</li>
</ol>

SK is een van de oprichters van CDR3 Inc. De overige auteurs verklaren dat het onderzoek is uitgevoerd bij afwezigheid van commerciële of financiële relaties die kunnen worden opgevat als een potentieel belangenconflict.

Een orale cART-toedieningsmethode wordt hier ontwikkeld voor HIV-1 geïnfecteerde gehumaniseerde muizen door drie antiretrovirale geneesmiddelen te combineren in voedsel met een hoog voedingsgehalte. In vergelijking met toediening door dagelijkse injecties is orale toediening gemakkelijker te gebruiken, beperkt de toedieningsfrequentie, vermindert de behandeling van dieren, minimaliseert stress en verbetert de veiligheid55. Tot nu toe hebben slechts een paar studies bij gehumaniseerde muizen<sup cl...

De levensverwachting van personen die met chronisch humaan immunodeficiëntievirus (HIV) zijn geïnfecteerd, is aanzienlijk verbeterd met combinatie antiretrovirale behandeling (cART)1,2. cART vermindert met succes de HIV-1-replicatie en verhoogt het aantal CD4 + T-cellen tot normaliteit bij de meerderheid van hiv-1 chronisch geïnfecteerde deelnemers3, wat resulteert in een verbeterde algehele gezondheid en dramatisch verminderde ziekteprogressie4. Het latente HIV-1-reservoir wordt echter zelfs vastgesteld wanneer ART wordt geïnitieerd tijdens acute infectie 5,6,7. Reservoirs blijven jarenlang bestaan tijdens ART en snelle virale rebound na ART-onderbreking is goed gedocumenteerd 8,9. Mensen met hiv op ART zijn ook vatbaar voor een hoger risico op comorbiditeiten zoals hart- en vaatziekten, kanker en neurostoornissen 10,11,12. Daarom is een functionele remedie voor HIV nodig. Diermodellen voor HIV-1-infectie bieden duidelijke voordelen bij het ontwikkelen en valideren van nieuwe HIV-genezingsstrategieën 13,14,15. Gehumaniseerde muizen, als een klein diermodel, kunnen multilineage menselijke immuuncelreconstitutie in verschillende weefsels bieden, wat de nauwkeurige studie van HIV-infectie mogelijk maakt 16,17,18,19. Onder gehumaniseerde modellen recapituleert het gehumaniseerde beenmerg-lever-thymus (BLT) -model met succes chronische HIV-1-infectie en functionele menselijke immuunresponsen op HIV-1-infectie 20,21,22,23,24. Daarom is het gehumaniseerde BLT-muismodel op grote schaal gebruikt om verschillende aspecten op het gebied van HIV-onderzoek te onderzoeken. Gehumaniseerde BLT-muizen zijn niet alleen gevestigde modellen voor de recapitulatie van persistente HIV-1-infectie en pathogenese, maar ook consequente hulpmiddelen voor de evaluatie van op celtherapie gebaseerde interventiestrategieën. De huidige auteurs en anderen hebben aangetoond dat het gehumaniseerde BLT-muizenmodel persistente HIV-1-infectie en pathogenese 25,26,27 samenvat en hulpmiddelen biedt om op celtherapie gebaseerde interventiestrategieën te evalueren 28,29,30,31,32,33.
cART-regimes bestaande uit combinaties van antiretrovirale geneesmiddelen die dagelijks worden ingenomen, onderdrukken hiv-1-replicatie tot het punt dat de virale lading bij succesvol behandelde personen op lange termijn niet detecteerbaar blijft34. De resultaten van de behandeling van hiv-geïnfecteerde gehumaniseerde muizen met klinisch relevante cART-regimes lijken op die waargenomen bij hiv-1 geïnfecteerde art-behandelde personen22: HIV-1-niveaus worden onderdrukt onder de detectiegrenzen en onderbreking van cART resulteert in een rebound van HIV-replicatie uit het latente reservoir35. Subcutane (SC)27,36,37 of intraperitoneale (IP)37,38,39 injectie is de route die vaak wordt gebruikt voor cART-behandeling bij gehumaniseerde muizen. Intensieve dagelijkse injectie veroorzaakt echter stress bij dieren door fysieke terughoudendheid40. Het is ook arbeidsintensief en potentieel onveilig voor onderzoekers vanwege verhoogde blootstelling aan HIV tijdens het gebruik van scherpe voorwerpen. Orale toediening is ideaal om de absorptie, distributie en uitscheiding na te bootsen van cART-geneesmiddelen die worden ingenomen door HIV-1-geïnfecteerde personen. Orale toediening omvat meestal aangepaste en vaak moeizame procedures om de antiretrovirale geneesmiddelen in gesteriliseerd (noodzakelijk vanwege de immunodeficiëntie van de muizen) voedsel 24,37,41 of water 42,43,44,45,46 , die al dan niet chemisch compatibel zijn met veel antiretrovirale geneesmiddelen, of resulteren in iets dat de muizen niet gemakkelijk zouden eten of drinken (wat de dosis- en medicijnniveaus in het lichaam zou beïnvloeden). De nieuwe perorale cART-toedieningsmethode die hier wordt voorgesteld, overtreft eerdere toedieningspogingen vanwege de compatibiliteit met verschillende soorten antiretrovirale geneesmiddelen, de veiligheid en het gemak van voorbereiding en toediening, en de vermindering van stress en angst bij dieren als gevolg van de dagelijkse injectie.
Tenofovirdisoproxilfumaraat (TDF), Elvitegravir (ELV) en Raltegravir (RAL) zijn slecht in water oplosbare geneesmiddelen. Interessant is dat een verhoogde biologische beschikbaarheid van TDF wordt waargenomen met vet voedsel, wat suggereert dat competitieve remming van lipasen door vet voedsel een zekere bescherming voor TDF47 kan bieden. Daarom werden DietGel Boost-bekers geselecteerd om reguliere knaagdier chow te vervangen als de leveringsmethode op basis van hun bescheiden vetgehalte (20,3 g per 100 g) in vergelijking met gewone knaagdier chow (10 g per 100 g) en een typisch muis vetrijk dieet (40-60 g per 100 g)48. Het totale gewicht van één kopje is 75 g; dus elke beker bevat de hoeveelheid voedsel en dus het medicijn, voldoende voor vijf muizen gedurende 3 dagen.

<table><tbody><tr><td>60 mm petrischaal</td><td>Thermo Scientific Nunc</td><td>150288</td><td>Voor het verdelen van ART-voer</td></tr><tr><td>APC anti-human CD8 Antilichaam</td><td>Biolegend</td><td>344722</td><td>Voor flowcytometrie</td></tr><tr><td>BD LSRFortessa</td><td>BD biosciences</td><td></td><td>Voor het verzamelen van flow-data</td></tr><tr><td>CD34 microbeads</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-046-702</td><td>Voor NSG-BLT muizen generatie</td></tr><tr><td>Centrifugebuizen</td><td>Falcon</td><td>14-432-22</td><td>Voor het oplossen van ART</td></tr><tr><td>DietGel Boost</td><td>ClearH2O</td><td>72-04-5022</td><td>Voor het maken van ART-voer</td></tr><tr><td>Elvitegravir</td><td>Gilead</td><td></td><td>Geschonken van Gilead</td></tr><tr><td>Emtricitabine</td><td>Gilead</td><td></td><td>Geschonken van Gilead</td></tr><tr><td>FITC anti-human CD3 Antilichaam</td><td>Biolegend</td><td>317306</td><td>Voor flowcytometrie</td></tr><tr><td>Flowjo software</td><td>FlowJo</td><td></td><td>Voor flowcytometrie-data-analyse</td></tr><tr><td>HIV-1 voorwaarts primer: 5&prime;-CAATGGCAGCAATTTCACCA-3&prime;;</td><td>IDT</td><td>Aangepast</td><td>Voor virale lading RT-PCR</td></tr><tr><td>HIV-1 sonde: 5&prime;-[6-FAM]CCCACCAACAGGCGGCCT TAACTG [Tamra-Q]-3&prime;;</td><td>IDT</td><td>Aangepast</td><td>Voor virale lading RT-PCR</td></tr><tr><td>HIV-1 omgekeerde primer: 5&prime;-GAATGCCAAATTCCTGCTTGA-3&prime;;</td><td>IDT</td><td>Aangepast</td><td>Voor virale lading RT-PCR</td></tr><tr><td>Menselijke foetale weefsel</td><td>Advanced Bioscience Resources, Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Muizen, stam NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>5557</td><td>Voor het construeren van de gehumaniseerde muizen</td></tr><tr><td>Pacific Blue anti-human CD45</td><td>Biolegend</td><td>304022</td><td>Voor flowcytometrie</td></tr><tr><td>PerCP anti-human CD4 Antilichaam</td><td>Biolegend</td><td>300528</td><td>Voor flowcytometrie</td></tr><tr><td>QIAamp Viral RNA Kits</td><td>Qiagen</td><td>&nbsp;52904</td><td>Voor het meten van virale lading</td></tr><tr><td>Raltegravir</td><td>Merck</td><td></td><td>Geschonken van Merck</td></tr><tr><td>Steriele celschrapers</td><td>Thermo Scientific</td><td>179693</td><td>Voor het verdelen van ART-voer</td></tr><tr><td>TaqMan RNA-To-Ct 1-Step Kit</td><td>Applied Biosystems</td><td>4392653</td><td>Voor plasma virale lading detectie</td></tr><tr><td>Tenofovir disoproxil fumaraat</td><td>Gilead</td><td></td><td>Geschonken van Gilead</td></tr><tr><td>Trimethoprim-Sulfamethoxazole</td><td>Pharmaceutical Associates</td><td>NDC 0121-0854-16</td><td>Voor het houden van ART-voer steriel. Elke 5mL theelepel bevat 200 mg Sulfamethoxazole, USP 40 mg Trimethoprim, USP NMT 0.5% Alcohol</td></tr></tbody></table>

orale gecombineerde antiretrovirale behandeling bij hiv-1 geïnfecteerde gehumaniseerde muizen

Oral Combinational Antiretroviral Treatment in HIV-1 Infected Humanized Mice

De pandemie van het humaan immunodeficiëntievirus (HIV-1) blijft zich wereldwijd onverminderd verspreiden en momenteel is er geen vaccin beschikbaar tegen HIV. Hoewel gecombineerde antiretrovirale therapie (cART) succesvol is geweest in het onderdrukken van virale replicatie, kan het het reservoir van HIV-geïnfecteerde personen niet volledig uitroeien. Een veilige en effectieve genezingsstrategie voor HIV-infectie vereist multipronged methoden, en daarom zijn de vooruitgang van diermodellen voor HIV-1-infectie cruciaal voor de ontwikkeling van hiv-genezingsonderzoek. Gehumaniseerde muizen recapituleren de belangrijkste kenmerken van hiv-1-infectie. Het gehumaniseerde muismodel kan worden geïnfecteerd door HIV-1 en virale replicatie kan worden gecontroleerd met cART-regimes. Bovendien resulteert cART-onderbreking in een snelle virale rebound bij gehumaniseerde muizen. Toediening van cART aan het dier kan echter ineffectief, moeilijk of toxisch zijn en veel klinisch relevante cART-regimes kunnen niet optimaal worden gebruikt. Naast het feit dat het potentieel onveilig is voor onderzoekers, veroorzaakt toediening van cART door een veelgebruikte intensieve dagelijkse injectieprocedure stress door fysieke beperking van het dier. De nieuwe orale cART-methode voor de behandeling van HIV-1 geïnfecteerde gehumaniseerde muizen die in dit artikel worden beschreven, resulteerde in onderdrukking van viremie onder het detectieniveau, verhoogde snelheid van CD4 + -herstel en verbeterde algehele gezondheid bij HIV-1 geïnfecteerde gehumaniseerde muizen.

Ervan uitgaande dat een gemiddelde muis met een gewicht van 25 g 4 g voedsel per dag consumeert, komt de dagelijkse geneesmiddeldosis via orale inname overeen met 2,88 mg / kg TFV, 83 mg / kg FTC en 768 mg / kg RAL. Om te testen of het geoptimaliseerde voedselregime giftig is en de algehele gezondheid beïnvloedt in vergelijking met dagelijkse injectie van cART, werd het gewicht van muizen wekelijks vóór en tijdens cART gecontroleerd via orale of subcutane injectie. Er waren geen significante gewichtsverschillen vóór toed...

Dit protocol beschrijft een nieuwe methode om orale gecombineerde antiretrovirale geneesmiddelen te leveren die met succes hiv-1-RNA-replicatie bij gehumaniseerde muizen onderdrukken.

Orale gecombineerde antiretrovirale behandeling bij hiv-1 geïnfecteerde gehumaniseerde muizen

The human immunodeficiency virus (HIV-1) pandemic continues to spread unabated worldwide, and currently, there is no vaccine available against HIV. ...

Dit protocol beschrijft een nieuwe methode om orale combinatie antiretrovirale geneesmiddelen, of ART, te leveren die met succes hiv-RNA-replicatie in gehumaniseerde muizen onderdrukt. De nieuwe orale ART-methode overtreft eerdere leveringspogingen vanwege de veiligheid, het gemak van voorbereiding en toediening en verminderde dierlijke stress als gevolg van een dagelijkse injectie. De voorgestelde orale toedieningsmethode om HIV-RNA-replicatie bij gehumaniseerde muizen te onderdrukken, zal zeer waardevol zijn voor preklinische proof-of-concept-studies om nieuwe genezingsbehandelingen te ontwikkelen die de medicijnafgifte bij chronische HIV-geïnfecteerde personen nauw nabootsen.Valerie Rezak, labmanager en technicus van ons laboratorium, demonstreert de procedure. Begin met het wegen van individuele medicijnen. Maak 10 voedselbekers met cART met behulp van steriele celschrapers om 250 milligram FTC, 375 milligram TDF en 500 milligram RAL of ELV af te wegen in individuele, steriele centrifugebuizen van 50 milliliter in een bioveiligheidskast.Voeg DMSO toe aan de FTC- en TDF-buis om een eindconcentratie van 250 milligram per milliliter te vormen, en in de RAL- of ELV-buis tot een uit

oral-combinational-antiretroviral-treatment-hiv-1-infected-humanized

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Het genereren en karakteriseren van tumorspecifieke T-cellen met gehumaniseerde muizen wordt hier beschreven. Human thymusweefsel en genetisch gemodificeerde humane hematopoietische stamcellen worden getransplanteerd in immunodeficiënte muizen. Dit resulteert in de bereiding van een op menselijke immuunsysteem waardoor in vivo onderzoek van anti-tumor immuunrespons.

Met behulp van de BLT Gehumaniseerd Muis als een Stem Cell gebaseerde Gene Therapy tumormodel

This video demonstrates an assay to evaluate the effectiveness of oral combined antiretroviral therapy (oral cART) in a human immunodeficiency virus-1 (HIV-1)-infected humanized mouse model. A combination of drugs targeting HIV-1, including nucleoside reverse transcriptase inhibitors and integrase strand transfer inhibitors, is administered along with a nutritional supplement and antibiotics. Following the consumption of this mixture by the humanized mice infected with HIV-1, the effective...

Oral Combinational Antiretroviral Therapy to Treat HIV-1 Infection in a Humanized Mouse Model

The video demonstrates a technique to generate a humanized mouse model with stem-cell-based engineered immunity against the human immunodeficiency virus (HIV). Human fetal thymus tissue and engineered hematopoietic stem cells (HSCs) are implanted into the kidney capsule of a severely immunocompromised mouse. The HSCs, which express chimeric antigen receptors (CARs) against HIV, are mixed in a gelatinous protein mixture that promotes their co-localization with thymus tissue. Post-procedure, the...

Constructing a Humanized Mouse Model with Engineered Immunity against HIV

Dit protocol beschrijft de methoden voor het construeren van een gehumaniseerd muismodel voor beenmerg/lever/thymus met stamcelgebaseerde geëngineerde immuniteit tegen HIV-infectie.

Stamcel-Based Engineered immuniteit tegen HIV infectie in het gehumaniseerde muismodel

Dit protocol biedt een methode om vast te stellen gehumaniseerd muizen (hu-NSG) via Intrahepatische injectie van menselijke hematopoietische stamcellen in straling-geconditioneerd neonatale NSG muizen. De hu-NSG muis is gevoelig voor HIV-infectie en combinatorische antiretrovirale therapie (cART) en dient als een geschikt pathofysiologisch model voor HIV-replicatie en latentie onderzoeken.

Gehumaniseerd knik/SCID/IL2rγnull (hu-NSG) muis Model voor HIV-replicatie en Latency Studies

Dit protocol biedt een betrouwbare methode om gehumaniseerde muizen te vestigen met zowel menselijk immuunsysteem als levercellen. Dubbele gereconstitueerde immunodeficiënte muizen bereikt via intrasplenische injectie van humane hepatocyten en CD34+ hematopoietische stamcellen zijn vatbaar voor humaan immunodeficiëntie virus-1 infectie en even leverschade zoals waargenomen in HIV-geïnfecteerde patiënten.

Oprichting van de dubbele gehumaniseerde TK-nog muis model voor HIV-geassocieerde lever pathogenese

Hier beschreven zijn drie experimentele benaderingen voor het bestuderen van de dynamiek van HIV-infectie in gehumaniseerde muizen. De eerste maakt de studie van chronische infectie gebeurtenissen, terwijl de twee laatsten voor de studie van acute gebeurtenissen na primaire infectie of virale reactivatie.

Chronische, acute en Gereactiveerde HIV-infectie in gehumaniseerde Immunodeficiënte Muismodellen

We hebben een protocol ontwikkeld voor de generatie en evaluatie van een gehumaniseerd en menselijk immunodeficiëntievirus besmet NOG muismodel op basis van stamceltransplantatie, intravaginale blootstelling aan het menselijke immunodeficiëntievirus en druppeldigitale PCR RNA Kwantificering.

Gehumaniseerde NOG Muizen voor intravaginale HIV Blootstelling en behandeling van HIV-infectie

HIV tropisme kan worden afgeleid uit de V3 gebied van de virale envelop. V3 is PCR geamplificeerde in drievoud met geneste RT-PCR, in volgorde, en geïnterpreteerd met behulp van bio-software. Monsters met met 1 of meer sequentie (s) met een lage G2P scores worden geclassificeerd als niet-R5-virus.

Genotypische Inferentie van HIV-1 tropisme de populatie-gebaseerde Sequencing van V3

Cytotoxiciteit assays op natural killer cellen lytische reacties maatregel om de HIV-geïnfecteerde cellen wordt beperkt door de zuiverheid van de doelcellen. Tonen we hier de isolatie van een sterk gezuiverde populatie van HIV-1 geïnfecteerde primaire T-cel ontploffing door gebruik te maken van het vermogen van HIV-1 s tot down-moduleren CD4.

Bereiding en het gebruik van HIV-1 geïnfecteerde primaire CD4 + T-cellen als doelcellen in Natural Killer Cell Cytotoxische Assays

Leer een nieuwe orale methode voor combinatie-antiretrovirale therapie bij gehumaniseerde muizen. Deze techniek onderdrukt HIV-1 RNA-replicatie effectief en vermindert stress vergeleken met dagelijkse injecties.

Orale gecombineerde antiretrovirale behandeling bij hiv-1 geïnfecteerde gehumaniseerde muizen

Meer video's verkennen