Name: Isolatie, kweek en karakterisering van primaire Schwann-cellen, keratinocyten en fibroblasten uit menselijke voorhuid (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-03-23T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 36 s
Description: Leer de isolatie en kweek van primaire Schwann-cellen, keratinocyten en fibroblasten uit menselijke voorhuid voor huidbiologieonderzoek. Deze methode ondersteunt studies naar wondgenezing en celinteracties.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We willen Dr. Fadia Kamal en Dr. Reyad Elbarbary bedanken voor het feit dat ze ons in staat hebben gesteld om laboratoriuminstrumenten en technische ondersteuning te gebruiken. Dit werk werd ondersteund door subsidies van de NIH (K08 AR060164-01A) en DOD (W81XWH-16-1-0725) aan J. C. E. naast institutionele ondersteuning van het Pennsylvania State University Hershey Medical Center.

Acquisitie en gebruik van gedeïdentificeerd menselijk voorhuidweefsel voor onderzoeksdoeleinden werd beoordeeld en ontving de bepaling van "niet menselijk onderzoek" door de Penn State College of Medicine Institutional Review Board (IRB # 17574).
OPMERKING: Door het onderstaande protocol te volgen, worden 2,4 x 106 keratinocyten, 4,4 x 106 fibroblasten en 1,1 x 106 SC's verkregen uit een enkele voorhuid. Over het algemeen kunnen deze primaire cellen worden gebruikt voor 3 passages, afhankelijk van de experimentele omstandigheden.
1. Isolatie van primaire cellen en kweekomstandigheden
<ol><li>Epidermis- en dermisscheidingsprocedure<ol>
<li>Verkrijg neonatale voorhuid volgens standaardzorgprocedures door een arts volgens goedgekeurde ziekenhuisregelgevingsprotocollen. De arts bepaalt het tijdstip van de besnijdenis na de geboorte en de hoeveelheid verwijderde huid.</li>
		<li>Plaats de weggesneden voorhuid in een microcentrifugebuis met 8-10 ml ijskoud Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) basaal medium en transporteer de voorhuid onmiddellijk naar het celkweeklaboratorium voor celisolatie. Spoel de huid tweemaal met 20-25 ml 1x Dulbecco's fosfaat-gebufferde zoutoplossing (DPBS) die 1x antibioticum/antimycotisch bevat. OPMERKING: Voor maximale levensvatbaarheid van de cel moet de weggesneden voorhuid tot de verwerking bij 4 °C worden geplaatst en moeten de cellen binnen 24 uur worden geoogst.</li>
		<li>Na het spoelen in DPBS /antibiotica, week de voorhuid in 25-30 ml ijskoud DMEM basaal medium gedurende 10-15 minuten in een 10 cm weefselkweekschaal. Voer alle verwerkingsstappen in een weefselkweekkap uit met behulp van steriele techniek.</li>
		<li>Snijd met behulp van een scalpel voorzichtig de voorhuid open en leg de dermis en het onderhuidse vetweefsel bloot.</li>
		<li>Verwijder het onderhuidse vetweefsel met een tang, scalpelmes en schaar, indien nodig. Gooi het vetweefsel weg. Snijd de gereinigde voorhuid in drie tot vijf kleinere stukjes.</li>
		<li>Breng huidstukken over in een steriele conische buis met 16-20 ml dispase-I/DMEM-medium (4 mg/ml in DMEM-basaal medium).</li>
		<li>Meng de huidstukken in de conische buis door inversie, met tussenpozen, gedurende de eerste 30 minuten van de incubatie met dispase-I. Plaats vervolgens de conische buis gedurende 16-18 uur op 4 °C, waarbij u er rekening mee houdt dat u de huidstukken onderdompelt in dispase-I/media. OPMERKING: Dispase-I-oplossing moet vlak voor toevoeging worden bereid met koud DMEM-basaal medium, gefilterd met een zeef van 0,22 μm en bewaard bij 4 °C.</li>
		<li>Verwijder na een nachtelijke vertering met dispase-I de huidstukken en plaats ze op een droge, steriele, kweekschaal. Rol elk stukje huid uit zodat de buitenste epidermale laag de kweekschaal raakt.</li>
		<li>Gebruik twee sets tangen om de opperhuid zorgvuldig van de dermis te scheiden. Begin op de rand van het weefsel en pel de opperhuid weg van de dermis. OPMERKING: Als de epidermislaag moeilijk te scheiden is van de dermis, was de dispase-I-spijsvertering niet voldoende. Opties voor probleemoplossing: 1) breng huidstukken terug naar de dispase-I/DMEM-oplossing en incubeer gedurende nog eens 2-3 uur bij 4 °C; 2) plaats de huidstukjes in verse dispase-I/DMEM en incubeer bij 4 °C gedurende 2-3 uur langer.</li>
		<li>Gebruik de gescheiden epidermis en dermis om keratinocyten (epidermis) en fibroblasten en Schwann-cellen (dermis) te isoleren. OPMERKING: Volg de onderstaande stappen voor specifieke celtypen isolatie en kweekomstandigheden.</li>
	</ol></li>
	<li>Keratinocytenisolatie van de opperhuid<ol>
<li>Voeg 5 ml HEPES bufferzoutoplossing (HBS) toe aan een kweekschaal van 10 cm en voeg de gescheiden epidermisfragmenten toe. Incubeer bij kamertemperatuur (RT) gedurende 10 min.</li>
		<li>Verzamel na HBS-incubatie de HBS-oplossing in een conische buis van 50 ml. Voeg 5 ml trypsineneutralisatiebuffer (TNB) (materiaaltabel) toe in een conische buis van 50 ml en zet apart.</li>
		<li>Voeg 3 ml trypsine-oplossing toe aan de epidermale fragmenten. Incubeer bij 37 °C gedurende 10 min.</li>
		<li>Roer de epidermale fragmenten voorzichtig met een tang totdat de trypsine-oplossing troebel wordt.</li>
		<li>Voeg de trypsineoplossing/keratinocyten toe aan de HBS- en TNB-bevattende buis in stap 1.2.2.</li>
		<li>Voeg voor alle resterende epidermale fragmenten die niet zijn opgelost in de initiële trypsinevertering 3 ml 0,25% trypsine/ethyleendiaminetetra-azijnzuur (EDTA) toe. Incubeer bij 37 °C gedurende 10 minuten en herhaal de stappen 1.2.4 en 1.2.5.</li>
		<li>Voeg 2 ml foetaal runderserum (FBS) toe aan de trypsine/EDTA-oplossing die HBS- en TNB-oplossingsbuizen bevat.</li>
		<li>Centrifugeer de opvangbuis met HBS/TNB/trypsine en keratinocyten bij 870 x g gedurende 5 minuten bij 4 °C.</li>
		<li>Aspirateer het supernatant en resuspend de celkorrel in 3 ml keratinocyten volledig groeimedium (tabel met materialen).</li>
		<li>Filtreer de celsuspensie met een steriel filter van 100 μM in een steriele conische buis van 50 ml om vuil te verwijderen.</li>
		<li>Kwantificeer het celnummer en de levensvatbaarheid van de cel. OPMERKING: Hier werd een gespecialiseerd celbemonsterings- en kleuringsapparaat (Tabel met materialen) gebruikt om het celnummer en de levensvatbaarheid te kwantificeren volgens de instructies van de fabrikant.</li>
		<li>Zaadkweekplaten als dat nodig is voor experimenten. De aanbevolen zaaidichtheid is ~45.000 cellen/cm2.</li>
		<li>Plaats de kweekplaten gedurende 2 dagen in een incubator bij 37 °C in 5% CO2 om keratinocyten aan de schaal te laten hechten.</li>
		<li>Na 2 dagen, aspirateer eventuele niet-gehechte cellen. Ververs de celkweekmedia om de andere dag totdat keratinocyten de gewenste confluïtentie bereiken voor passaging of downstream experimenten (50% -80% confluentie).</li>
	</ol></li>
	<li>Isolatie van Schwann-cellen (SC's) en fibroblasten uit de dermis<ol><li>Pre-coat T25 kolven met poly-L-lysine (PLL, 0,01 μg/μL) met 5 ml 1x DPBS. Plaats de voorgecoate kolven gedurende 3 uur bij 37 °C. Was de PLL-coatingmatrix tweemaal met 1x DPBS (5 ml). OPMERKING: T25-kolven kunnen van tevoren worden voorbereid.</li>
		<li>Spoel de geïsoleerde stukken van de dermis af met 5 ml DMEM basaal medium.</li>
		<li>Hak de dermis in kleine stukjes met een schaar of een scalpel.</li>
		<li>Verteer de gehakte dermis met 5 ml collagenase (2 mg/ml in DMEM basaal medium) bij 37 °C gedurende 2,5 uur. Trituraleer de gehakte dermis voorzichtig met een pipetpunt om de 30 minuten totdat de dermis volledig dissociëert.</li>
		<li>Filter de celsuspensie met een celzeef van 70 μM. Het is noodzakelijk om mechanische kracht toe te passen met behulp van een spuit van 1 ml om de suspensie volledig te filteren.</li>
		<li>Verdun de gefilterde celsuspensie met 5 ml volledig DMEM-medium (DMEM-basaal medium + 5% FBS + 1x antibioticum) om de enzymatische activiteit van collagenase te stoppen.</li>
		<li>Centrifugeer de celsuspensie bij 870 x g gedurende 5 minuten bij RT om de cellen te pelleteren.</li>
		<li>Uit deze celkorrel worden zowel fibroblasten als SC's verkregen. Resuspend de celkorrel in 2 ml DMEM compleet medium om de cellen te delen (1 ml celsuspensie/buis) en centrifugeer bij 870 x g gedurende 5 minuten bij RT.</li>
		<li>Voor SC-cultuur volgt u stap 1.3.10-1.3.17 en voor fibroblastcultuur stap 1.3.18-1.3.22.</li>
		<li>Aspirateer vanaf stap 1.3.8 het supernatant. Resuspend de celkorrel in 5 ml vers DMEM compleet medium.</li>
		<li>Kwantificeer het celnummer en de levensvatbaarheid. OPMERKING: Hier werd een gespecialiseerd celbemonsterings- en kleuringsapparaat (Tabel met materialen) gebruikt om het celnummer en de levensvatbaarheid te kwantificeren volgens de instructies van de fabrikant.</li>
		<li>Zaai de voorgecoate T25-kolven met 5 ml geresuspendeerde cellen met een dichtheid van 4,0 x 103 cellen/ml. Incubeer de kolf bij 37 °C in aanwezigheid van 5% CO2 gedurende de nacht (~12-16 h incubatie).</li>
		<li>Bevestig na 16 uur de celhechting door microscopie (Tabel van materialen) bij 10x vergroting.</li>
		<li>Verwijder de niet-hechtende cellen en was de kolf 3x met 5 ml 1x DPBS.</li>
		<li>Voeg 5 ml 10 μM cytosine arabinoside (antimitotisch middel, doodt fibroblasten) toe aan dmem complete medium. Incubeer de kolf bij 37 °C in aanwezigheid van 5% CO2 gedurende 24 uur.</li>
		<li>Zuig het cytosine arabinoside bevattende medium uit de kolf. Spoel de kolf 3x af met 5 ml 1x DPBS.</li>
		<li>Vul de kweekkolf opnieuw met 5 ml SC's volledig kweekmedium (materiaaltabel) en incubeer bij 37 °C in aanwezigheid van 5% CO2 gedurende 48 uur. Ververs SC complete kweekmedium om de andere dag totdat SC's 80% samenvloeiing bereiken.</li>
		<li>Zuig het supernatant op uit de gedissocieerde dermale laag (stap 1.3.8) en resuspend de celkorrel met 5 ml fibroblast compleet medium (fibroblast basaal medium + 5% FBS + 1x antibioticum).</li>
		<li>Kwantificeer het celnummer en de levensvatbaarheid van de cel. OPMERKING: Hier werd een gespecialiseerd celbemonsterings- en kleuringsapparaat (Tabel met materialen) gebruikt om het celnummer en de levensvatbaarheid te kwantificeren volgens de instructies van de fabrikant.</li>
		<li>Plaat de fibroblasten bij een celdichtheid van 4,0 x 103 cellen/ml in T25-kweekkolven (niet voorgecoat) met behulp van 5 ml fibroblast compleet medium. Incubeer bij 37 °C in aanwezigheid van 5% CO2 's nachts (~12-16 h incubatie).</li>
		<li>Bevestig na 16-24 uur de celhechting door microscopie (Tabel van materialen) bij 10x vergroting. Zuig niet-hechtende cellen uit de kolf en was de kolf tweemaal met 5 ml 1x DPBS.</li>
		<li>Voeg 5 ml vers fibroblastenmedium toe en incubeer bij 37 °C in aanwezigheid van 5% CO2 gedurende 48 uur. Ververs het kweekmedium om de andere dag totdat fibroblasten de gewenste samenvloeiing bereiken voor passaging of downstream assays (50% -80% confluentie).</li>
	</ol></li>
</ol>2. Verificatie van epidermale keratinocyten, dermale SC's en fibroblasten eiwitmarker door immunofluorescentie
<ol><li>Dag 1- Bedek kamerglasglaasjes en maak cellen los<ol>
<li>Pre-coat 4-well kamer glasglijbanen met collageen-I voor keratinocyten, of PLL voor SC's of, slechts 1x DPBS voor fibroblasten (0,5 ml elk goed). Zorg ervoor dat u het hele oppervlak bedekt. Incubeer kamerglijmen bij 37 °C gedurende 2 uur. Bereid tijdens de incubatie de cellen voor.</li>
		<li>Nadat gekweekte cellen 50% -80% confluentie hebben bereikt, wast u de kolven met 1x DPBS 3x (1 ml voor elke put).</li>
		<li>Maak de aangehechte cellen los met 5 ml 0,25% trypsine-EDTA (TE) oplossing door gedurende 2 minuten te broeden bij 37 °C in aanwezigheid van 5% CO2 , totdat de cellen rond beginnen te worden. Visualiseer celloslating met microscopie (Table of Materials) bij 10x vergroting.</li>
		<li>Breng na incubatie TE-oplossing met cellen over naar een conische buis met 5 ml foetaal runderserum (FBS).</li>
		<li>Voeg 5 ml trypsineneutralisatiebuffer (TNB) toe aan de kweekkolf en breng de inhoud over naar de bovengenoemde centrifugebuis (cellen met TE en FBS). Visualiseer celloslating met microscopie (Table of Materials) bij 10x vergroting. OPMERKING: TNB of FBS of beide kunnen worden gebruikt om trypsine-activiteit te neutraliseren.</li>
		<li>Centrifugeer de conische buis met cellen/TE/TNB bij 870 x g gedurende 5 minuten. Breng het supernatant over in een andere buis en resuspend de celkorrel in het overeenkomstige volledige kweekmedium. Meet de levensvatbaarheid van de cel zoals vermeld in stap 1.2.11.</li>
		<li>Spoel de voorgecoate glasplaten van de kamer (stap 2.1.1) 3x af met 1x DPBS (1 ml voor elke put).</li>
		<li>Semi-droog de dia's in de weefselkweekkap en zaad keratinocyten, SC's of fibroblasten met een geschikte dichtheid (30.000 cellen / 0,5 ml / kamer) in een geschikt volledig celkweekmedium.</li>
		<li>Incubeer de kamerglijbanen bij 37 °C 's nachts om cellen te laten hechten.</li>
	</ol></li>
	<li>Dag 2- Het blokkeren van de kamerglasplaat met Bovine Serum Albumin (BSA) en primaire antilichamen incubatie<ol>
<li>Zuig de celmedia op uit de kamerglaasjes en was 3x met 1 ml 1x DPBS.</li>
		<li>Fixeer de aangehechte cellen met 4% paraformaldehyde in 1x DPBS (1 ml voor elke put) en incubeer gedurende 15 minuten bij RT in de weefselkweekkap.</li>
		<li>Zuig 4% paraformaldehyde uit de kamerglijbanen en was de kamerglijbanen 3x met 1x DPBS (1 ml voor elke put).</li>
		<li>Permeabiliseer de celmembranen met 1% TritonX-100 in 1x DPBS (1 ml voor elke put) en incubeer gedurende 15 minuten bij RT.</li>
		<li>Zuig de blokkeringsoplossing uit de kamerglijbanen, was 3x met 1x DPBS (1 ml voor elke put) gedurende 30 s en zuig vervolgens 1x DPBS uit de put.</li>
		<li>Blokkeer de kamerglijbanen met 5% BSA (0,5 ml voor elke put) en incubeer gedurende 45 minuten bij RT.</li>
		<li>Zuig de blokkeringsoplossing uit de kamerglijbanen, was 3x met 1x DPBS (1 ml voor elke put) gedurende 30 s elk en zuig vervolgens 1x DPBS uit de put.</li>
		<li>Verdun de primaire antilichamen met 5% BSA (0,2 ml voor elke put) (Primaire antilichamen verdunningen: Keratinocyten: muiscytokeratine 14 antilichaam (1:100) en cytokeratine 10 antilichaam (1:100); Schwann-cellen: muis S100-antilichaam (1:200) en konijnenzenuwgroeifactorreceptor (p75-NTR) antilichaam (1:500); Fibroblasten: konijn vimentine antilichaam (1:200), en muis alfa-gladde spier actine (α-SMA) antilichaam (1:200)).</li>
		<li>Voeg de primaire antilichamen toe aan de overeenkomstige cellen op de glasplaat van de kamer en incubeer gedurende ongeveer 15-16 uur ('s nachts) bij 4 °C in een bevochtigde kamer.</li>
		<li>Zuig de primaire antilichamen uit de kamerglaasjes, was 3 keer met 1x DPBS (1 ml voor elke put) gedurende 30 s elk en aspirateer vervolgens 1x DPBS uit de put.</li>
		<li>Verdun de secundaire antilichamen (Goat anti-rabbit IgG Secondary Antibody-Alexa Fluor 488 (1:500) en Goat anti-Mouse IgG Secondary Antibody-Alexa Fluor 594 (1:500)) met 0,5% BSA. Voeg het juiste secundaire antilichaam toe aan elke put (0,2 ml voor elke put). Incubateer gedurende 45 minuten bij RT.</li>
		<li>Zuig het secundaire antilichaam uit kamerglaasjes, was 3x met 1x DPBS (1 ml voor elke put) gedurende 30 s elk en zuig vervolgens 1x DBPS uit de put.</li>
		<li>Verwijder de pakking op de 4-puts kamerschuif met behulp van pakkingverwijderaar. Probeer geen lijm op de dia achter te laten, omdat dit het aanbrengen van coverslip verstoort. Voeg een druppel montagemedium toe met 4',6-diamidino-2-fenylindool (DAPI). U kunt ook de putten tegenvlekken met DAPI en een niet-labelbevattend montagemedium gebruiken.</li>
		<li>Plaats de afdekplaat voorzichtig op de glasplaat door luchtbellen te vermijden en sluit het uiteinde van de afdekplaat af met lijm. Observeer immunofluorescentiekleuringspatronen door microscopie (Tabel van Materialen) bij 10x en/of 20x vergroting.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Hawksworth, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advantages+and+disadvantages+of+using+human+cells+for+pharmacological+and+toxicological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Human+%26+Experimental+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Advantages and disadvantages of using human cells for pharmacological and toxicological studies.</a> Human & Experimental Toxicology. 13 (8), 568-573 (1994).</li>
<li>Green, H., Kehinde, O., Thomas, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+of+cultured+human+epidermal+cells+into+multiple+epithelia+suitable+for+grafting%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Growth of cultured human epidermal cells into multiple epithelia suitable for grafting.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 76 (11), 5665-5668 (1979).</li>
<li>Fuchs, E., Green, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+keratin+gene+expression+during+terminal+differentiation+of+the+keratinocyte%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Changes in keratin gene expression during terminal differentiation of the keratinocyte.</a> Cell. 19 (4), 1033-1042 (1980).</li>
<li>Aasen, T., Izpisua Belmonte, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+cultivation+of+human+keratinocytes+from+skin+or+plucked+hair+for+the+generation+of+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Isolation and cultivation of human keratinocytes from skin or plucked hair for the generation of induced pluripotent stem cells.</a> Nature Protocols. 5 (2), 371-382 (2010).</li>
<li>Seluanov, A., Vaidya, A., Gorbunova, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+primary+adult+fibroblast+cultures+from+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Establishing primary adult fibroblast cultures from rodents.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (44), e2033(2010).</li>
<li>Belviso, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+adult+human+dermal+fibroblasts+from+abdominal+skin+and+generation+of+induced+pluripotent+stem+cells+using+a+non-integrating+method%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Isolation of adult human dermal fibroblasts from abdominal skin and generation of induced pluripotent stem cells using a non-integrating method.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (155), e60629(2020).</li>
<li>Silva, W. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+Schwann+cells+in+cutaneous+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+and+Regeneration%22%5BJournal%5D)">Role of Schwann cells in cutaneous wound healing.</a> Wound Repair and Regeneration. 26 (5), 392-397 (2018).</li>
<li>Bray, E. R., Cheret, J., Yosipovitch, G., Paus, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schwann+cells+as+underestimated%2C+major+players+in+human+skin+physiology+and+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Schwann cells as underestimated, major players in human skin physiology and pathology.</a> Experimental Dermatology. 29 (1), 93-101 (2020).</li>
<li>Laverdet, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skin+innervation%3A+important+roles+during+normal+and+pathological+cutaneous+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Histology+and+Histopathology%22%5BJournal%5D)">Skin innervation: important roles during normal and pathological cutaneous repair.</a> Histology and Histopathology. 30 (8), 875-892 (2015).</li>
<li>Jessen, K. R., Mirsky, R., Lloyd, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schwann+cells%3A+Development+and+role+in+nerve+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Perspectives+in+Biology%22%5BJournal%5D)">Schwann cells: Development and role in nerve repair.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 7 (7), 020487(2015).</li>
<li>Bentley, C. A., Lee, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((p75+is+important+for+axon+growth+and+Schwann+cell+migration+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">p75 is important for axon growth and Schwann cell migration during development.</a> The Journal of Neuroscience. 20 (20), 7706-7715 (2000).</li>
<li>Rutkowski, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signals+for+proinflammatory+cytokine+secretion+by+human+Schwann+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroimmunology%22%5BJournal%5D)">Signals for proinflammatory cytokine secretion by human Schwann cells.</a> Journal of Neuroimmunology. 101 (1), 47-60 (1999).</li>
<li>Kumar, A., Brockes, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nerve+dependence+in+tissue%2C+organ%2C+and+appendage+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Neurosciences%22%5BJournal%5D)">Nerve dependence in tissue, organ, and appendage regeneration.</a> Trends in Neurosciences. 35 (11), 691-699 (2012).</li>
<li>Balakrishnan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+into+the+role+and+potential+of+Schwann+cells+for+peripheral+nerve+repair+from+studies+of+development+and+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Molecular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Insights into the role and potential of Schwann cells for peripheral nerve repair from studies of development and injury.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 13, 608442(2020).</li>
<li>Gresset, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Boundary+caps+give+rise+to+neurogenic+stem+cells+and+terminal+glia+in+the+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Boundary caps give rise to neurogenic stem cells and terminal glia in the skin.</a> Stem Cell Reports. 5 (2), 278-290 (2015).</li>
<li>Stratton, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+and+characterization+of+Schwann+cells+from+adult+human+skin+and+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22eNeuro%22%5BJournal%5D)">Purification and characterization of Schwann cells from adult human skin and nerve.</a> eNeuro. 4 (3), (2017).</li>
</ol>

Alle andere auteurs verklaren dat ze geen concurrerende financiële belangen hebben.

Dit protocol beschrijft een methode om drie verschillende celpopulaties te isoleren uit een enkel stuk van de voorhuid, namelijk keratinocyten, fibroblasten en Schwann-cellen. Er zijn een paar isolatieprotocollen beschikbaar om keratinocyten en fibroblasten 2,3,5,6 te isoleren, maar geen enkele beschrijft SC-isolatie. Afgezien van de belangrijkste structurele cellen in de huid, keratinocyten en...

Primaire cellen afgeleid van levend weefsel en gekweekt onder in vitro omstandigheden lijken sterk op de fysiologische toestand1, waardoor ze een ideaal model zijn voor het onderzoeken van fysiologische en pathofysiologische processen. De huid bevat meerdere celtypen, waaronder keratinocyten, fibroblasten, sebocyten, melanocyten en Schwann-cellen (SC's), die kunnen worden geïsoleerd en gekweekt voor in vitro experimenten. Methoden om keratinocyten, fibroblasten en SC's te isoleren en te kweken, uit een enkel stuk huid, zijn niet beschreven. Het doel van dit protocol is tweeledig: 1) het vaststellen van een betrouwbare en reproduceerbare methode voor het isoleren en kweken van dermale SC's en 2) het gebruik van een efficiënte, robuuste methode voor de isolatie van keratinocyten, fibroblasten en SC's van een enkele menselijke voorhuid.
Op dit moment zijn er vastgestelde protocollen om huidkeratocyten 2,3,4 en fibroblasten 5,6 te isoleren. Deze studies beschrijven de isolatie van keratinocyten, fibroblasten of beide van de huid, maar geen protocol gaat in op het vaststellen van culturen van primaire SC's uit de menselijke huid. Recente studies suggereren dat neuronale SC's keratinocyten en fibroblast cellulaire processen moduleren en normale huidfysiologische functies reguleren7. SC's zijn dus van cruciaal belang voor de homeostase van de huid en dragen substantieel bij aan de regulerende fysiologie die het gedrag van naburige huidceltypen beïnvloedt8. Daarom is een protocol dat de isolatie van elk van deze celtypen mogelijk maakt, ideaal voor in vitro experimenten met cel-celcommunicatie of cross-talk tussen celtypen.
Dit protocol beschrijft de vaststelling van individuele celculturen van primaire cellen uit een enkel stuk huid. Dit protocol is vooral handig wanneer de hoeveelheid beschikbaar weefsel beperkt is. Bovendien maakt isolatie van alle drie de celtypen van een enkele donor robuuste vergelijkingen tussen celtypen of co-kweekexperimenten mogelijk, terwijl de invloed van genetica tijdens het gewenste experiment wordt beperkt.

<table><tbody><tr><td>0.22 &micro;M steriele filters (Millex-GP Syringe Filter Unit,polyethersulfone)</td><td>MilliporeSigma</td><td>SLGPR33RS</td><td></td></tr><tr><td>70 &micro;M cel zeefzitten</td><td>CELLTREAT</td><td>229483</td><td></td></tr><tr><td>100 &micro;M cel zeefzitten</td><td>CELLTREAT</td><td>229485</td><td></td></tr><tr><td>1 mL wegwerpspuiten</td><td>BD Luer-Lok</td><td>BD-309659</td><td></td></tr><tr><td>5 mL wegwerpspuiten (Syringe steriele, eenmalig gebruik)</td><td>BD Luer-Lok</td><td>BD309646</td><td></td></tr><tr><td>10 mL wegwerpspuiten</td><td>BD Luer-Lok</td><td>BD305462</td><td></td></tr><tr><td>1% TritonX-100</td><td>Sigma</td><td>X100-1L</td><td>Bereiden op het moment van gebruik</td></tr><tr><td>4% paraformaldehydeoplossing</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>J19943.K2</td><td>Klaar voor gebruik en bewaar bij 4 &deg;C</td></tr><tr><td>5% BSA</td><td>Sigma</td><td>A7906-100G</td><td>Bereiden op het moment van gebruik</td></tr><tr><td>70% ethanol</td><td>Pharmco</td><td>111000200</td><td></td></tr><tr><td>Antibioticum</td><td>ScienCell Research</td><td>503</td><td></td></tr><tr><td>Chemometec Vial1-Cassette</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC1420193</td><td></td></tr><tr><td>Collageenase</td><td>Gibco</td><td>17018-029</td><td></td></tr><tr><td>Dekglas</td><td>Fisherbrand</td><td>12544D 22*50-1.5</td><td></td></tr><tr><td>Dispase I</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D46693</td><td></td></tr><tr><td>DMEM basaal medium</td><td>ScienCell Research</td><td>9221</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's fosfaatgebufferde zoutloze oplossing vrij van Ca2+ en Mg2+ (DPBS)</td><td>Corning</td><td>&nbsp;21-031-CV)</td><td></td></tr><tr><td>Nunc 15 mL Conical Sterile Polypropylene Centrifuge Tubes</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>339651</td><td></td></tr><tr><td>Nunc 50 mL Conical Sterile Polypropylene Centrifuge Tubes</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>339653</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL microcentrifugebuisjes</td><td>Fisherbrand</td><td>02-681-5</td><td></td></tr><tr><td>Fetaal bovien serum (FBS)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10082147</td><td></td></tr><tr><td>Fibroblast compleet medium</td><td>ScienCell Research</td><td>2331</td><td></td></tr><tr><td>Geit anti-muis IgG (H+L) sterk geadsorbeerd secundair antilichaam, Alexa Fluor 594</td><td>Invitrogen</td><td>A11032</td><td>Verdunning (1:500)</td></tr><tr><td>Geit anti-konijn IgG (H+L) geadsorbeerd secundair antilichaam, Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>A11008</td><td>Verdunning (1:500)</td></tr><tr><td>Hanks' gebufferde zoutoplossing (HBSS-buffer)</td><td>Lonza</td><td>CC-5022</td><td></td></tr><tr><td>Menselijke voorhuid</td><td></td><td></td><td>Anoniem menselijk voorhuidweefsel voor onderzoeksdoeleinden (Institutional Review Board- IRB #17574).</td></tr><tr><td>KGM-GOLD keratinocytenmedium (KGM goud en supplementen)</td><td>Lonza</td><td>00192151 en 00192152</td><td></td></tr><tr><td>Muis alpha-smooth spieractine-antilichaam</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14-9760-82</td><td>Verdunning (1:200)</td></tr><tr><td>Muis Cytokeratine14-antilichaam</td><td>Abcam</td><td>ab7800</td><td>Verdunning (1:100)</td></tr><tr><td>Muis S100-antilichaam</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>MA5-12969</td><td>Verdunning (1:200)</td></tr><tr><td>Multikamerige (4 wel glazen schuifje)</td><td>Tab-Tek</td><td>154526</td><td></td></tr><tr><td>NucleoCounter -Via1-Cassette</td><td>Chemometec</td><td>941-0012</td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-Lysine (PLL)</td><td>ScienCell Research</td><td>32503</td><td></td></tr><tr><td>ProLong Gold Anti-fade Mountant met DAPI</td><td>Invitrogen</td><td>P36935</td><td></td></tr><tr><td>Konijn K10-antilichaam</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SAB4501656</td><td>Verdunning (1:100)</td></tr><tr><td>Konijn p75-NTR-antilichaam</td><td>Millipore</td><td>AB1554</td><td>Verdunning (1:500)</td></tr><tr><td>Konijn vimentin</td><td>ProteinTech</td><td>10366-1-AP</td><td>Verdunning (1:200)</td></tr><tr><td>Schwann-celkweekmedium</td><td>ScienCell Research</td><td>1701</td><td></td></tr><tr><td>Precisiepincet DUMONT recht met extra fijne punten Dumostar, 5</td><td>ROTH</td><td>LH75.1</td><td>Steriliseren met 70% alcohol vóór gebruik</td></tr><tr><td>IRIS Schaar, scherp/scherp. Lengte 4&ndash;3/8"(111mm)</td><td>Codman</td><td>54-6500</td><td>Steriliseren met 70% alcohol vóór gebruik</td></tr><tr><td>Gesteriliseerde chirurgische - scherpe kling (Duro Edge Economy Single Edge Blades)</td><td>Razor blade company</td><td>94-0120</td><td>Steriliseren met 70% alcohol vóór gebruik</td></tr><tr><td>T25 kweekkolf</td><td>Corning</td><td>353109</td><td></td></tr><tr><td>Trypsine neutralisatie buffer (TNS)</td><td>Lonza</td><td>CC-5002</td><td></td></tr><tr><td>Trypsine/EDTA</td><td>Lonza</td><td>CC-5012</td><td></td></tr><tr><td>Omgekeerd microscoop</td><td>ZEISS</td><td>Axio Observer 7- Axiocam 506 mono &ndash; Apotome.2 microscoop</td><td>Voor immunofluorescentie van kamerslide met gekleurde cellen</td></tr><tr><td>Omgekeerd microscoop</td><td>ZEISS</td><td>Primovert</td><td>Voor visualisering/waarneming van celanhechten of losmaken</td></tr></tbody></table>

isolatie, kweek en karakterisering van primaire schwann-cellen, keratinocyten en fibroblasten uit menselijke voorhuid

Isolation, Culture, and Characterization of Primary Schwann Cells, Keratinocytes, and Fibroblasts from Human Foreskin

Dit protocol beschrijft isolatiemethoden, kweekomstandigheden en karakterisering van menselijke primaire cellen met een hoge opbrengst en levensvatbaarheid met behulp van snelle enzymatische dissociatie van de huid. Primaire keratinocyten, fibroblasten en Schwann-cellen worden allemaal geoogst uit de menselijke pasgeboren voorhuid, die beschikbaar is volgens standaardzorgprocedures. De verwijderde huid wordt gedesinfecteerd en het onderhuidse vet en de spieren worden verwijderd met behulp van een scalpel. De methode bestaat uit enzymatische en mechanische scheiding van epidermale en dermale lagen, gevolgd door extra enzymatische spijsvertering om eencellige suspensies te verkrijgen van elk van deze huidlagen. Ten slotte worden afzonderlijke cellen gekweekt in geschikte celkweekmedia volgens standaard celkweekprotocollen om de groei en levensvatbaarheid gedurende weken te behouden. Samen maakt dit eenvoudige protocol isolatie, kweek en karakterisering van alle drie de celtypen uit één stuk huid mogelijk voor in vitro evaluatie van huid-zenuwmodellen. Bovendien kunnen deze cellen samen in coculturen worden gebruikt om hun effecten op elkaar en hun reacties op in vitro trauma te meten in de vorm van krassen die robotisch worden uitgevoerd in de cultuur die verband houdt met wondgenezing.

Normale neonatale voorhuid werd gebruikt voor de isolatie van primaire epidermale keratinocyten en dermale SC's en fibroblasten. De geïsoleerde primaire cellen werden gekweekt in respectievelijke celkweekmedia die groeifactoren bevatten. Na het zaaien van SC's en fibroblast in kweekkolven kleefden de meeste cellen binnen 2 uur aan de bodem van de kolf. In het geval van keratinocyten hechten de meeste keratinocyten 24 uur. Geïsoleerde epidermale primaire keratinocyten bereikten 85% confluentie op dag 7 en vertoonden karak...

De studie van wondgenezing geassocieerd met musculoskeletale schade vereist vaak de beoordeling van in vitro interacties tussen Schwann-cellen (SC's), keratinocyten en fibroblasten. Dit protocol beschrijft de isolatie, kweek en karakterisering van deze primaire cellen uit de menselijke voorhuid.

Isolatie, kweek en karakterisering van primaire Schwann-cellen, keratinocyten en fibroblasten uit menselijke voorhuid

This protocol describes isolation methods, culturing conditions, and characterization of human primary cells with high yield and viability using rapid ...

De huid bevat meerdere celtypen, waaronder keratinocyten, fibroblasten en zenuw Schwann-cellen. Dit protocol maakt isolatie van elk van deze celtypen mogelijk voor in vitro experimenten. Isolatie en vestiging van individuele primaire celculturen van een enkele donor maakt robuuste vergelijkingen en co-kweekexperimenten mogelijk, terwijl de effecten van genetische variatie worden beperkt.Met dit protocol maakt de analyse van individuele cellen en hun interacties de analyse van de rol van Schwann-cellen in de homeostase van de huid en pathofysiologie mogelijk. Deze verschillende celpopulaties kunnen worden gebruikt om Schwann-cellen, fibroblasten of keratinocyten individueel of in combinatie te bestuderen in normale huidfysiologie, wondgenezing of in huidziektetoestanden. Jagadeeshaprasad M G, een postdoctoraal onderzoeker in mijn laboratorium, zal me helpen bij het demonstreren van de procedure.Na het verkrijgen van de neonatale voorhuid volgens standaardzorgprocedures, plaatst u de weggesneden voorhuid in een microcentrifugebuis met acht tot 10 milliliter ijskoud DMEM-basaal medium en transporteert u de voorhuid onmiddellijk naar het celkweeklaboratorium voor celisolatie. Spoel de voorhuid tweemaal met 20 tot 25 milliliter Dulbecco's Phosphate Buffered Saline of DPBS, met antibiotica en antimycotica. Week vervolgens de gewassen huid in 25 tot 30 milliliter ijskoud DMEM basaal medium in een 10 centimeter weefselkweekschaal.Snijd na 15 minuten de voorhuid open met een scalpel om de dermis en het onderhuidse vetweefsel bloot te leggen. Gebruik een tang, een scalpelmes en een schaar om het onderhuidse vetweefsel te verwijderen en weg te gooien. Snijd vervolgens de schone voorhuid in drie tot vijf kleinere stukken en incubeer de huidstukken in 16 tot 20 milliliter Dispace één DMEM-medium in een steriele conische buis.Tijdens de eerste 30 minuten incubatie met Dispace mengt men met tussenpozen de huidstukken in de conische buis door inversie. Plaats vervolgens de conische buis gedurende 16 tot 18 uur op vier graden Celsius. Verwijder de volgende dag de huidstukken en leg ze op een droge steriele kweekschaal en rol elk stukje huid uit zodat de buitenste opperhuidlaag de kweekschaal raakt.Beginnend op de rand van het weefsel pelt u de opperhuid weg van de dermis met behulp van twee sets tangen. Voeg de afgescheiden epidermisfragmenten toe aan vijf milliliter HBS in een kweekschaal van 10 centimeter om gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur te incuberen. Verzamel vervolgens de HBS-oplossing in een conische buis van 50 milliliter en voeg vijf milliliter trypsineneutralisatiebuffer of T en B toe aan de conische buis.Zet de buis apart. Voeg aan de epidermale fragmenten in de kweekschaal drie milliliter Trypsin-oplossing toe om gedurende 10 minuten bij 37 graden Celsius te incuberen. Na de incubatie roert u de epidermale fragmenten voorzichtig met een tang totdat de trypsine keratinocytenoplossing troebel wordt.Voeg vervolgens de trypsine keratinocytenoplossing toe aan de HBS T- en B-buis. Voeg na het oplossen van onverteerde epidermale fragmenten met trypsine EDTA-oplossing twee milliliter FBS toe aan de HBS T- en B-buis met trypsine EDTA-oplossing en centrifugeer de twee ongeveer 870 keer G gedurende vijf minuten bij vier graden Celsius. Adem vervolgens het supernatant op en resuspend de celkorrel in drie milliliter keratinocyten, compleet groeimedium, gevolgd door filtratie van de celsuspensie met een steriel filter van 100 micrometer in een steriele conische buis van 50 milliliter.Zodra het celnummer en de levensvatbaarheid van de cel zijn gekwantificeerd, zaait u de cellen in de kweekplaten om in een incubator bij 37 graden Celsius in 5% koolstofdioxide te plaatsen. Na twee dagen aspiraat de niet-gehechte cellen en ververs de celkweekmedia om de andere dag totdat keratinocyten 50 tot 80% confluentie bereiken voor passaging of downstream experimenten. Bestrijk T25-kolven met poly-l-lysine of PLL met vijf milliliter DPBS en plaats de voorgecoate kolven gedurende drie uur op 37 graden Celsius.Was de PLL-coatingmatrix later tweemaal met DPBS. Na het wassen van de geïsoleerde stukken van de dermis met vijf milliliter DMEM basaal medium, hak de dermis in kleine stukjes met een schaar. Verteer de gehakte dermis met vijf milliliter collagenase bij 37 graden Celsius gedurende twee en een half uur, met zachte titratie met een pipetpunt om de 30 minuten totdat de dermis volledig dissociëert.Eenmaal verteerd, filtert u de celsuspensie met een celzeef van 70 micrometer, gevolgd door verdunning van de gefilterde celsuspensie met vijf milliliter volledig DMEM-medium om de enzymatische activiteit van collagenase te stoppen. Centrifugeer vervolgens de celsuspensie op 870 keer G gedurende vijf minuten bij kamertemperatuur en resuspend de celstem in twee milliliter DMEM compleet medium om de cellen te delen. Na het herhalen van het centrificatieproces zoals beschreven, aspirateer je het supernatant om de celkorrel te gebruiken om de Schwann-cellen of fibroblasten te isoleren.Om de Schwan-cellen te isoleren, resuspendeert u de celkorrel in vijf milliliter vers DMEM-volledig medium en kwantificeert u het celnummer en de levensvatbaarheid voordat vijf milliliter van de geresuspendeerde cellen in voorgecodeerde T25-kolven met een dichtheid van 4,0 maal 10 tot de drie cellen per milliliter worden gezaaid. Incubeer de kolf bij 37 graden Celsius en 5% koolstofdioxide. Bevestig na 16 uur de celhechting door microscopie bij 10X vergroting.Verwijder vervolgens de niet-hechtende cellen en was de kolf driemaal met vijf milliliter DPBS. Incubateer vervolgens de cellen met vijf milliliter 10 micromolair cytosine arabinoside in een DMEM compleet medium. Na 24 uur aspiraleer het cytosine arabinoside bevattende medium voordat u de kolf spoelt zoals eerder aangetoond.Vul de kweekkolf met vijf milliliter Schwann-cellen volledig kweekmedium om 48 uur te incuberen, terwijl het medium om de andere dag wordt ververst tot schwanncellen 80% confluentie bereiken. Om de fibroblasten te isoleren, resuspend de verzamelde pellet in vijf milliliter fibroblasten volledig medium. Het kweken van de cellen in niet-gecodeerde T25-kweekkolven gedurende 24 uur, zoals aangetoond voor de Schwann-cellen.Na het aanzuigen van de niet-hechtende cellen en het wassen van de kolf, incubeer de cellen met vijf milliliter verse fibroblasten volledig medium bij 37 graden Celsius en 5% koolstofdioxide gedurende 48 uur. Aangezien de geïsoleerde primaire cellen werden gekweekt in de respectieve celkweekmedia, bereikten de primaire keratinocyten op dag zeven 85% confluïteit en vertoonden ze een karakteristieke celmorfologie met een geplaveide vorm. De Schwann-cellen bereikten 95% confluentie op dag vijf en leken bipolair of tripolair van vorm.De fibroblastenculturen bereikten 95% confluentie op dag vier en de meeste cellen vertoonden een spindelvormige morfologie. De immunofluorescentiekleuring bevestigde celtypespecifieke eiwitexpressie in de celculturen. De keratinocyten waren positief voor K10- en K14-eiwit.De samengevoegde beelden van keratine immunofluorescentie en DAPI nucleaire kleuring gaven 97,8% zuiverheid van de celculturen aan. Evenzo waren de Schwann-cellen positief voor S100 en P75 NTR en hadden ze een zuiverheid van 95,2% in de cultuur. De fibroblasten drukten vimentine positief uit, maar drukten geen alfa-gladde spier Actine, een myofibroblastmarker, tot expressie.De zuiverheid van de cultuur was ongeveer 97,2% Om Shanse's bewijs te verbeteren, kan een voorgecoat poly-l-lysine-gerecht worden gebruikt. En om vezelige besmetting verder te verminderen, werden cytosine arabinoside en antimycotisch middel toegevoegd nadat cellen gedurende een korte tijd waren toegevoegd. Dit is een eenvoudige goedkope experimentele procedure om de drie primaire cellen, zoals shwann-cellen, keratinocyten en fibroblasten, vast te stellen uit een enkele menselijke voorhuid.Dit protocol is ideaal voor in vitro experimenten met celcelcommunicatie of kruisverwijzing tussen celtypen.

isolation-culture-characterization-primary-schwann-cells

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Een snelle, robuuste manier van isoleren levensvatbare volwassen epitheliale stamcellen uit menselijke huid is beschreven. De methode maakt gebruik van enzymatische afbraak van de huid collageen matrix, gevolgd door het plukken van de haarfollikels en isolatie van single cell suspensies of weefsel fragmenten voor celkweek.

Isolatie en Cultuur van Volwassen epitheliale stamcellen uit menselijke huid

Dit artikel presenteert een robuuste protocol voor isolatie en kweek van neurale stamcellen uit menselijke haarzakjes.

Isolatie en Cultuur van neurale stamcellen uit menselijke haarzakjes

This video describes the isolation of keratinocytes—the most prominent cells of human skin's epidermal layer, by employing a combination of enzymatic digestion and mechanical disruption methods. This method helps in the preferential growth of keratinocytes over other skin cell types using a selective growth medium.

Human Skin Keratinocyte Isolation: A Method to Culture Primary Keratinocytes from Skin Samples

This video demonstrates a protocol for isolating and culturing Schwann cells from human dermis tissues. The human dermis contains various cell types, including fibroblasts and Schwann cells. After isolation, the cells are treated with an antimitotic agent to eliminate proliferating fibroblasts, resulting in a pure culture of Schwann cells.

Isolation and Culture of Primary Schwann Cells from a Human Dermis

Epidermale keratinocyten vormen een functionele huidbarrière en worden gepositioneerd in de voorste lijn van de gastheerverdediging tegen externe milieubeledigingen. Hier beschrijven we methoden voor isolatie en primaire cultuur van epidermale keratinocyten van neonatale en volwassen muishuid, en inductie van terminale differentiatie en UVB-geactiveerde ontstekingsrespons van keratinocyten.

Isolatie en Cultuur van Primaire Muis Keratinocyten Uit Neonatale en Volwassen Muis Huid

De menselijke huid fungeert als een eerste lijn van verdediging tegen de externe omgeving. Presenteren we een methode voor het isoleren van primaire menselijke keratinocyten van volwassen huid. Deze geïsoleerde keratinocyten zijn nuttig in talrijke experimentele opstellingen en een zeer geschikt model voor het bestuderen van de moleculaire mechanismen in cutane biologie in vitro.

Generatie en kweken van primaire menselijke keratinocyten van volwassen huid

Hier presenteren we een methode om fibroblasten en Schwann cellen te zuiveren van zintuiglijke en motorische zenuwen in vitro.

Zuivering van fibroblasten en Schwann cellen van sensorische en motorische zenuwen in Vitro

Hier beschrijven we een protocol voor de systematische teelt van epidermale sferoïden in 3D-suspensiecultuur. Dit protocol heeft uitgebreide toepassingen voor gebruik in een verscheidenheid van epitheelweefseltypes en voor het modelleren van verscheidene menselijke ziekten en voorwaarden.

Het opzetten van een epidermale sferoïde cultuursysteem met hoge doorvoer om keratinocytstamcelplasticiteit te modelleren

Het huidige protocol beschrijft de isolatie en cultuur van orale keratinocyten afgeleid van het volwassen muizengehemelte. Een evaluatiemethode met behulp van immunostaining wordt ook gemeld.

Isolatie en kweek van primaire orale keratinocyten uit het volwassen muizengehemelte

Deze studie beschrijft een geoptimaliseerd protocol voor het vaststellen van primaire fibroblasten uit keloïde weefsels die effectief en gestaag zuivere en levensvatbare fibroblasten kunnen leveren.

Isolatie, cultuur en karakterisering van primaire dermale fibroblasten uit menselijk keloïde weefsel

Leer de isolatie en kweek van primaire Schwann-cellen, keratinocyten en fibroblasten uit menselijke voorhuid voor huidbiologieonderzoek. Deze methode ondersteunt studies naar wondgenezing en celinteracties.

Isolatie, kweek en karakterisering van primaire Schwann-cellen, keratinocyten en fibroblasten uit menselijke voorhuid

Meer video's verkennen