Combinatie van reflectie confocale microscopie met optische coherentietomografie voor niet-invasieve diagnose van huidkanker via beeldacquisitie

Dit protocol beschrijft de stappen voor het verkrijgen van beelden voor RCM- en RCM-OCT-apparaten aan het bed. Het is essentieel om afbeeldingen van goede kwaliteit te verkrijgen voor de juiste diagnoses en het beheer van de huidlaesies. Deze apparaten brengen de huid in beeld met histopathologische resolutie in vivo, waardoor onnodige goedaardige biopsieën worden bespaard en vroege huidkankers worden gedetecteerd.

Diagnoses worden aan het bed gesteld, waardoor de wachttijd en angst voor de patiënten worden verminderd. Beeldvorming met deze microscoop helpt ons om de detectie en diagnose van huidlaesies en huidkankers bij patiënten aan het bed niet-invasief te begeleiden. Bovendien helpt de beeldvorming ons om huidlaesies te triage in die oppervlakkig kunnen zijn versus die welke dieper kunnen zijn, wat helpt bij het begeleiden van de behandeling.

Dus de beeldvorming helpt ons om diagnose en behandeling te integreren of te combineren in één patiëntbezoek, wat nu wordt genoemd als een one-stop-shop patiëntenzorgparadigma. Naast het gebruik van beeldvorming om huidlaesies en huidkankers te detecteren en te diagnosticeren, gebruiken we de beeldvorming ook om detectie en diagnose van orale laesies en mondkankers bij patiënten te begeleiden. De procedure wordt gedemonstreerd door mevrouw Ucalene Harris, een histotechnicus uit mijn laboratorium.

Selecteer om te beginnen het WP-RCM-apparaat voor laesies op de platte oppervlakken van de huid, zoals de romp en ledematen, en het HH-RCM-apparaat voor laesies op gebogen oppervlakken, zoals de neus, oorlellen, oogleden en genitaliën. Plaats voor beeldvorming de patiënt op een volledig verstelbare stoel of een vlakke onderzoekstafel met ondersteuning. Reinig vervolgens de laesie en de omliggende huid met een alcoholdoekje.

Voeg een druppel minerale olie toe aan het midden van het plastic raam en verdeel het voorzichtig over de raambreedte. Verwijder de paperback van de zelfklevende kant van het raam, rek de huid voorzichtig uit en bevestig het raam. Om beelden te verkrijgen met behulp van het WP-RCM-apparaat, plaatst u de sonde loodrecht op de laesie.

Verkrijg vervolgens dermoscopiebeelden door de WP-RCM-sonde over de plastic raamdop te laten zweven en schat de beste inbrenghoek voor de sonde. Lijn de kleine witte pijl aan de zijkant van de sonde uit met de pijl aan de zijkant van de dermoscopiecamera. Plaats de dermoscopiecamera in de plastic vensterdop.

Zorg ervoor dat het dermatoscoopbeeld het hele oppervlak van de laesie bedekt en druk op de trigger op de camera om een beeld te verkrijgen. Verwijder vervolgens de dermatoscoop. Plaats vervolgens een hoeveelheid ultrasone gel ter grootte van een erwt in de plastic wegwerp raamdop.

Steek de RCM-sonde in de plastic wegwerpdop totdat een scherpe klik wordt gehoord. Met behulp van het dermoscopiebeeld dat in de vorige stap is verkregen, selecteert u het midden van de laesie en identificeert u de bovenste of helderste laag van de huid, de anucleaire laag van het stratum corneum. Stel de beelddiepte op dit niveau in op nul.

Druk op het stapelpictogram om een stapel in het midden van de laesie te verkrijgen. Selecteer in het vervolgkeuzemenu een anatomische site, gezicht of lichaam. Stel de stapgrootte in op 4,5 micron en de diepte op 250 micron.

Identificeer de dermale-epidermale overgang of DEJ-laag in de stapel en selecteer een vierkant van 8x8 millimeter om de hele laesie te bedekken. Druk vervolgens op het mozaïekpictogram om het eerste mozaïek bij de DEJ te verkrijgen. Om volgende mozaïeken te verkrijgen, klikt u op een structuur op het DEJ-mozaïek om deze in de liveweergave te bekijken.

Scroll naar beneden vanaf de DEJ om mozaïeken bij de dermis te verkrijgen en vervolgens omhoog van de DEJ om mozaïeken in de opperhuid te nemen. Vang één stapel in elk kwadrant en één in het midden van de laesie met een homogeen patroon op dermoscopie, of verkrijg extra stapels voor heterogene laesies. Na het voltooien van een beeldsessie maakt u de beschermende kegel rond de microscooplens los.

Reinig de punt van de objectieflens met een alcoholdoekje en droog de lens. Bevestig de plastic kegel opnieuw aan de microscoopsonde. Om een confocaal diagnostisch evaluatierapport te genereren, klikt u op Nieuwe evaluatie.

Voer de diagnose in de vooraf geselecteerde opties in het vervolgkeuzemenu in. Selecteer de functies die tijdens de beeldvorming worden weergegeven in de controlelijst voor rapporten en selecteer het toepasselijke beheer. Klik op Voltooien en ondertekenen.

Genereer het rapport als PDF en druk het af. om beelden te verkrijgen met behulp van het HH-RCM-apparaat, positioneert u eerst de patiënt en reinigt u de laesieplaats en omcirkelt u de laesie met een papieren ring. Breng een hoeveelheid ultrasone gel ter grootte van een erwt aan op de objectieflens van de HH-RCM en bedek deze met de plastic dop.

Voeg een royale druppel minerale olie toe aan de zijkant van de plastic dop die de huid zal raken. Druk de sonde met stevige druk tegen de laesiezijde op de huid. Gebruik de Z-diepteregelaars op het HH-RCM-apparaat om op en neer te bewegen op verschillende diepten in de laesie.

Verkrijg meerdere single frame-afbeeldingen en stapels in de regio's van belang. Voor grote laesies maakt u continue video's op verschillende lagen door de HH-RCM-sonde over het hele laesieoppervlak te bewegen en op het video-opnamesymbool te klikken. Registreer de beweging van bloedcellen in bloedvaten.

Nadat de beeldvormingssessie is voltooid, drukt u op Gereed beeldvorming. Reinig de laesie met een alcoholdoekje, verwijder de ultrasone gel van de objectieflens van de sonde en bevestig de plastic dop opnieuw. Plaats de patiënt voor beeldvorming en zorg ervoor dat de grens van de laesie vrij is van overmatig haar en actuele onzuiverheden.

Nadat u de sonde hebt voorbereid zoals beschreven in de vorige sectie, klikt u op Beeldinstellingen. Selecteer de lijnbeeldvormingsmodus om een RCM-afbeelding te verkrijgen. Stel de stapgrootte in op vijf micron en het aantal stappen op 40.

Verwerf stapels zoals getoond in de vorige sectie door op Grab te klikken. Klik vervolgens op de knop Bevriezen na voltooiing. Klik op Imaging Settings (Beeldinstellingen) en selecteer Rastermodus om een correlatieve OCT-video voor de laesiearchitectuur te verkrijgen.

Ga naar het tabblad technicus. Als u klaar bent, klikt u op de knop Grijpen en drukt u onmiddellijk op de knop Opslaan. Met behulp van dit protocol werden RCM-beelden van hoge kwaliteit verkregen op relevante diepten in de huid.

Artefacten zoals luchtbellen, oppervlakteresten en bewegingsartefacten die diagnostische evaluatie belemmeren, moeten worden vermeden. Op RCM werden verschillende huidlagen waargenomen, zoals het stratum cornea, samengesteld uit anucleated keratinocyten, en het stratum spinosum, samengesteld uit dicht opeengepakte nucleaire cellen met helder cytoplasma dat een typisch honingraatpatroon creëert. Dit werd gevolgd door de stratum basale, geïdentificeerd door het kasseipatroon gevormd door de melaninekap van de basale keratinocyten.

En de DEJ gekenmerkt door het heldere ringpatroon. De papillaire dermis bestond uit heldere collageenvezels en bloedvaten. RCM-beelden voor veel voorkomende huidkankers, zoals basaalcelcarcinoom, toonden tumorknobbels met schisis en palissering.

Plaveiselcelcarcinoom vertoonde een atypisch honingraatpatroon en knoopsgatvaten. En melanoom toonde clusters van heldere, grote ronde pagetoïde cellen in de opperhuid. Voor basaalcelcarcinoom kon het RCM-beeld geen definitieve tumorknobbel laten zien.

Terwijl RCM-OCT-beelden geïnterpreteerd door zowel stapels als rasters een duidelijke grijze tumorknobbel toonden die verbonden was met de opperhuid, samen met gespleten en verdikte collageenbundels. De diagnose werd bevestigd door H&E Stained Biopsy. Het is belangrijk om diagnostische kwaliteitsmozaïeken uit vijf lagen van de huid te verkrijgen met de WP-RCM Imaging.

Maak een vloeiende video en stapels met HH-RCM en zowel een stapel als een raster in hetzelfde gebied met behulp van het RCM-OCT-apparaat.