Dissectietechnieken en histologische bemonstering van het hart in grote diermodellen voor hart- en vaatziekten

De structurele verschillen in het hart tussen soorten en individuen, evenals discrepanties in de literatuur, vereisen een grondig begrip van de anatomie van het hart en de naleving van strikte methodologie. Deze techniek kan de uniformiteit van de waarnemer verbeteren en de vergelijkbaarheid en de reproduceerbaarheid van experimenteel onderzoek naar hart- en vaatziekten vergroten. Een persoon die niet bekend is met deze techniek kan moeite hebben met het identificeren van alle componenten van het hart.

Mijn aanbeveling is om wat tijd te besteden aan het kennismaken met de anatomie van het hart. Omdat de complexe anatomie van het hart moeilijk te begrijpen is, is een visuele presentatie van de methode vereist. Om te beginnen, weeg het proefdier voordat u het op de obductietafel aan de linkerkant plaatst.

Voer vervolgens een extern onderzoek van het onderwerp uit door de cutis en het slijmvlies te inspecteren en te palperen, waarbij alle veranderingen in kleur, consistentie en volume worden opgemerkt. Maak vervolgens met een mes een scherpe incisie van zeven centimeter in de rechter oksel. Nadat u de coxofemorale kruising hebt gevonden, opent u de capsule met een mes en snijdt u het ligament van de kop van het dijbeen door.

Verleng de huidincisie in de oksel craniale naar de mandibulaire symfyse en caudaal naar het peroneum. Verwijder de huid met het scalpel en stel de thoracale en buikwand bloot vanaf de ventrale middellijn tot het niveau van de werveltransversale processen. Maak vervolgens met behulp van het scalpel en de tang een flap door de buikwand, ventrocaudal naar de rechter ribbenboog.

Open vervolgens, na het caudale aspect van het rechter hypochondrium, de buikholte met een schaar. Blijf de incisie caudally langs het rechter paralumbale gebied verlengen tot de externe iliacale top. Verleng daarna de incisie tot het inbrengen van de linea alba door de schaamstreek en onderzoek kort de buikorganen in situ om elke verandering in hun kleur, consistentie, volume en positie op te merken.

Prik vervolgens met behulp van het scalpel en de tang het diafragma op het hoogste punt door. Verwijder vervolgens met een botsnijdende tang de rechter ribbenkast door eerst het parasternale kraakbeensegment te snijden en vervolgens het dorsale segment van de ribben proximaal aan de costovertebrale gewrichten. Onderzoek het hart in situ om de grootte, kleur, positie en verbindingen met aangrenzende weefsels te noteren.

Zoek ook naar eventuele verandering in consistentie door palpatie. Open vervolgens met een schaar de pericardholte met een lengtegedeelte van de basis tot de top van het hart. Onderzoek de pericardholte en het epicardium op eventuele veranderingen in kleur, consistentie en volume.

Laat vervolgens met een schaar het hart los door de superieure vena cava minstens een centimeter boven de ingang in het rechteratrium te snijden, de crista terminalis te behouden en de dwarsdoorsnedes van de aorta, pulmonale stam en beide vena cavae te leveren. Onderzoek de externe contour van het orgaan, het uiterlijk van het epicardium, dat van het myocardium door de transparantie van het epicardium en het uiterlijk van de grote bloedvaten. Om de instroom-uitstroommethode voor hartdissectie uit te voeren, plaatst u het hart met het atrium naar boven en gebruikt u een schaar en tandeloze tang, breed gesneden van de caudale vena cava in het rechteratrium.

Nadat u het hart naar het rechter auriculaire aanhangsel hebt gesneden om de crista terminalis of de sinoatriale knoop bloot te leggen, inspecteert u de tricuspidalisklep vanuit het dorsale zicht. Door vervolgens een sectie van het rechteratrium naar de kruising tussen de rechter ventrikel en het intraventriculaire septum te snijden, toont u de rechter atrioventriculaire klep. Snijd vervolgens de rechter ventrikelvrije wand langs het intraventriculaire septum tot de oorsprong van de longstam.

Na grondig onderzoek van de rechter atrioventriculaire kleppen, inclusief de chordae tendineae en de papillaire spieren, snijdt u de chordae tendineae. Plaats vervolgens de tang langs de longstam en snijd de romp in de lengterichting om het pulmonale uitstroomkanaal, de oorsprong van de longstam en de semilunaire kleppen te onderzoeken. Om de bicuspideklep vanuit het dorsale zicht te inspecteren, snijdt u het linkeratrium van de longaders naar de punt van de linker oorschelp.

Plaats vervolgens het hart met het interventriculaire septum naar beneden gericht en maak een grote incisie in de ventriculaire vrije wand van de ventrikelbasis naar de harttop. Snijd vervolgens de chordae tendineae van de cusp van de linker atrioventriculaire klep. Open ten slotte de aorta door een tang door het linker ventrikeluitstroomkanaal te plaatsen.

Gebruik zoutoplossing om alle bloedstolsels te verwijderen en het hart te wegen. Voor het nemen van monsters voor histologie, maak eerst twee longitudinale parallelle sneden, ongeveer vijf millimeter uit elkaar, met een scalpel met het rechter atrium, tricuspidalisklep en de rechter ventriculaire vrije wand. Maak vervolgens twee vergelijkbare parallelle sneden met betrekking tot het linkeratrium, mitralisklep, dorsale papillaire spier en linker ventrikel.

Binnen het dorsale bovenste derde deel van het hart, transversaal sectie de basis van het hart volgens een lijn, inclusief het interventriculaire septum, rechter atrium, aorta, aortaklep en tricuspidalisklep. En maak twee parallelle longitudinale sneden met betrekking tot de basis van de aorta en het interventriculaire septum. Knip vervolgens het rechteratrium rond de crista terminalis.

Om zes stukken van de sinoatriale knoop te verkrijgen, maakt u verschillende parallelle secties ongeveer drie tot vier millimeter uit elkaar, transversaal georiënteerd op de lengteas van de crista. Snijd vervolgens de verkregen weefsels in histologische cassettes en dompel de weefsels gedurende ten minste 48 uur onder in 10% neutraal gebufferd formaline. Om de kransslagaders te bemonsteren, gebruikt u een tang en een scalpel om de kransslagaders uit de paraconale groef te ontleden en ze 's nachts in 10% neutraal gebufferd formaline te fixeren.

Ontkalk het weefsel indien nodig in een één-op-één mengsel van 8% mierenzuur en zoutzuur. Maak vervolgens verschillende dwarssneden op ongeveer drie millimeter van elkaar. Plaats de secties in een histologische cassette en plaats de cassette in 10% neutraal gebufferd formaline voor inbedding.

Nadat het hart gedurende ten minste 48 uur in 10% neutraal gebufferd formaline is gefixeerd, plaatst u twee tandeloze rechte dissectietangen. Eentje door de craniale cava, rechter atrium, tricuspidalisklep en rechter ventrikel. En de andere door de longader, linker atrium, mitralisklep en linker ventrikel.

Gebruik de ruimte tussen de tang als geleiding en gebruik een snijmes om van de basis naar de top van het hart te snijden. Snijd ongeveer vijf millimeter uit elkaar een ander longitudinaal deel van het hartsegment dat de aorta omvat. Scheid vervolgens de hartbasis volledig van de top.

Nadat u elk weefselsegment in een histologische cassette hebt geplaatst, plaatst u de cassettes in 10% neutraal gebufferd formaline totdat ze zijn ingesloten. Dit protocol maakte een succesvolle visualisatie van de externe kenmerken en interne structuren van het hart mogelijk. Met behulp van deze techniek kunnen hartweefselmonsters met succes worden verzameld voor histologisch onderzoek van verschillende dieren zoals honden en katten.

Wees altijd voorzichtig bij het loslaten van het hart, omdat het sommige interessante structuren kan beschadigen. En ook tijdens het ontleden, oogsten en inbedden van de sinoatriale knoop. Hoewel deze methode is gemaakt om aritmiemodellering, hypertrofische cardiomyopathie, myocardinfarct en hartintoxicatie te diagnosticeren, kan deze worden gebruikt om elke hartaandoening te diagnosticeren.