Name: Een muizenmodel van chloorhexidine gluconaat-geïnduceerde peritoneale schade (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-04-28T14:45:00.000+00:00
Duration: 4 min 25 s
Description: Leer een eenvoudig muizenmodel voor peritoneale dialyse om peritoneale fibrose te bestuderen met behulp van chloorhexidine gluconaat. Dit protocol verbetert de zichtbaarheid en bruikbaarheid voor onderzoek naar PD-therapie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We bedanken Shin-Han Tseng oprecht voor de kritische discussie en gedeeltelijke uitvoering van het onderzoek. Deze studie werd ondersteund door EDAHP110003 en NCKUEDA110002 van de Research Foundation of E-DA Hospital en de National Cheng Kung University, Taiwan.

Alle muisexperimenten werden goedgekeurd door het Laboratory Animal Center van het E-DA Hospital / I-Shou University en werden behandeld volgens de "Guide for the Care and Use of Laboratory Animals" (NRC, USA 2011). Mannelijke C57BL/6 muizen, 7-8 weken oud, werden gebruikt voor de huidige studie.
1. Chemische bereiding
<ol><li>Bereid de chemische irriterende stof door 0,1% chloorhexidinegluconaat (CG, zie materiaaltabel) te verdunnen in 15% ethanol.</li>
</ol>2. Behandeling van dieren
<ol><li>Wijs drie muizen toe als controlegroep. Voer intraperitoneale injectie (i.p.) uit van 1 ml / kg 0,9% normale zoutoplossing (NS) om de andere dag gedurende 3 weken, voor een totaal van negen keer.</li>
	<li>Wijs drie muizen toe aan de peritoneale fibrosegroep. Induceer peritoneale fibrose met chloorhexidinegluconaat (CG) door ip-injecties van 0,1% CG in 15% ethanol (stap 1.1) toe te dienen in een dosis van 12,5 μL/g lichaamsgewicht. Voer dit om de andere dag uit gedurende 3 weken, voor een totaal van negen keer.</li>
</ol>3. Peritoneale functietests (gemodificeerde peritoneale evenwichtstest)
<ol><li>Bereid een dialyseoplossing met 4,25% glucose. Trek 0,5 ml dialysaatmonster met een spuit en controleer vervolgens de glucoseconcentratie in het dialysaatmonster. OPMERKING: De glucoseconcentratie wordt bepaald volgens de hexokinase/G6PD-methode. Dialysaatmonsters werden benaderd voor L-type Glu 2-assay en onderzocht met een biochemische analysator (zie Tabel met materialen). Dit is de initiële glucoseconcentratie van dialysaten.</li>
	<li>Verdoof de muizen door intramusculaire injectie van Zoletil en Xylazine (bereid in een volumeverhouding van 1:2, zie tabel met materialen) in een dosis van 20 μL/20 gw. Gebruik bovendien veterinaire zalf op de ogen om uitdroging onder anesthesie te voorkomen.</li>
	<li>Voer i.p. instillatie van de dialyseoplossing uit (2 ml/20 g lichaamsgewicht).</li>
	<li>Beoordeel en verifieer na 30 minuten de diepte van de anesthesie met gebrek aan teenknijpreflex. Voer vervolgens een verticale incisie uit in de middellijn van de buik (onder het xiphoid-proces), open vervolgens de buik van de muis en verzamel de intraperitoneale vloeistof met een spuit (gedefinieerd als "volume 1"). Meet vervolgens het gewicht van een schoon en droog katoen en plaats het katoen in de buikholte van de muizen om de resterende intraperitoneale vloeistof te absorberen. Meet ten slotte het katoengewicht opnieuw. OPMERKING: De gewichtstoename van katoen is gelijk aan het gewicht van de resterende intraperitoneale vloeistof. Reken vervolgens om naar het verkregen volume (soortelijk gewicht: 1 g/cm3; gedefinieerd als "volume 2"). Het uiteindelijke dialysaatvolume is volume 1 plus volume 2.</li>
	<li>Gebruik 0,5 ml dialysaatmonster (einddialysaat) om de glucoseconcentratie te meten. Dit is de uiteindelijke glucoseconcentratie van dialysaten.</li>
	<li>Bereken de netto ultrafiltratie met behulp van de formule15: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63903/63903eq01.jpg" style="margin: auto;"></li>
	<li>Bereken de peritoneale permeabiliteit met behulp van de volgende formule15: <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/63903/63903eq02.jpg" style="margin: auto;"></li>
</ol>4. Weefselvoorbereiding van de buikwandspier en lever en histologische analyse
<ol><li>Offer de muizen op via hartpunctie (flebotomie)3,16.</li>
	<li>Snijd de buikwand (1 cm x 1 cm) en totale hepatectomie. Fixeer de buikwand en leverweefsels van de muizen 's nachts in 10% neutraal gebufferd formaline.</li>
	<li>Bereid 3 μm dikke paraffinesecties van de buikwandspier en lever voor en voer histologische analyse uit volgens eerder gepubliceerd rapport17.</li>
	<li>Evalueer het pariëtale peritoneum van de buikwand en het viscerale peritoneum van de leveroppervlakken van de muizen met behulp van morfometrie18.</li>
	<li>Voer statistische analyses uit met behulp van statistieken en grafische software (zie Materiaaltabel). Druk alle gegevens uit als gemiddelde ± SD en analyseer op statistische significantie met behulp van een t-test19. Definieer waarden met P < 0,05 als significante resultaten.</li>
</ol>

<ol><li>Han, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+outcome+of+CAPD%3A+twenty-five+years%27+experience+in+a+single+Korean+center%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Improving outcome of CAPD: twenty-five years' experience in a single Korean center.</a> Peritoneal Dialysis International. 27 (4), 432-440 (2007).</li>
<li>Kawaguchi, Y., Hasegawa, T., Nakayama, M., Kubo, H., Shigematu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Issues+affecting+the+longevity+of+the+continuous+peritoneal+dialysis+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International+Supplements%22%5BJournal%5D)">Issues affecting the longevity of the continuous peritoneal dialysis therapy.</a> Kidney International Supplements. 62, 105-107 (1997).</li>
<li>Lee, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitamin+D+can+ameliorate+chlorhexidine+gluconate-induced+peritoneal+fibrosis+and+functional+deterioration+through+the+inhibition+of+epithelial-to-mesenchymal+transition+of+mesothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Vitamin D can ameliorate chlorhexidine gluconate-induced peritoneal fibrosis and functional deterioration through the inhibition of epithelial-to-mesenchymal transition of mesothelial cells.</a> BioMed Research International. 2015, 595030(2015).</li>
<li>Nakamoto, H., Kawaguchi, Y., Suzuki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+technique+survival+on+peritoneal+dialysis+better+in+Japan%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Is technique survival on peritoneal dialysis better in Japan.</a> Peritoneal Dialysis International. 26 (2), 136-143 (2006).</li>
<li>Schaefer, F., Klaus, G., Muller-Wiefel, D. E., Mehls, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+practice+of+peritoneal+dialysis+in+children%3A+results+of+a+longitudinal+survey.+Mid+European+Pediatric+Peritoneal+Dialysis+Study+Group+%28MEPPS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Current practice of peritoneal dialysis in children: results of a longitudinal survey. Mid European Pediatric Peritoneal Dialysis Study Group (MEPPS).</a> Peritoneal Dialysis International. 19, Suppl 2 445-449 (1999).</li>
<li>Woodrow, G., Turney, J. H., Brownjohn, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technique+failure+in+peritoneal+dialysis+and+its+impact+on+patient+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Technique failure in peritoneal dialysis and its impact on patient survival.</a> Peritoneal Dialysis International. 17 (4), 360-364 (1997).</li>
<li>Schmidt, D. W., Flessner, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+and+treatment+of+encapsulating+peritoneal+sclerosis%3A+basic+and+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis and treatment of encapsulating peritoneal sclerosis: basic and translational research.</a> Peritoneal Dialysis International. 28, Suppl 5 10-15 (2008).</li>
<li>Augustine, T., Brown, P. W., Davies, S. D., Summers, A. M., Wilkie, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Encapsulating+peritoneal+sclerosis%3A+clinical+significance+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Nephron+Clinical+Practice%22%5BJournal%5D)">Encapsulating peritoneal sclerosis: clinical significance and implications.</a> Nephron Clinical Practice. 111 (2), 149-154 (2009).</li>
<li>Di Paolo, N., Nicolai, G. A., Garosi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+peritoneum%3A+from+histological+studies+to+mesothelial+transplant+through+animal+experimentation%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">The peritoneum: from histological studies to mesothelial transplant through animal experimentation.</a> Peritoneal Dialysis International. 28, Suppl 5 5-9 (2008).</li>
<li>Fusshoeller, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histomorphological+and+functional+changes+of+the+peritoneal+membrane+during+long-term+peritoneal+dialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Histomorphological and functional changes of the peritoneal membrane during long-term peritoneal dialysis.</a> Pediatric Nephrology. 23 (1), 19-25 (2008).</li>
<li>Goffin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+membrane+structural+and+functional+changes+during+peritoneal+dialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Dialysis%22%5BJournal%5D)">Peritoneal membrane structural and functional changes during peritoneal dialysis.</a> Seminars in Dialysis. 21 (3), 258-265 (2008).</li>
<li>Ito, T., Yorioka, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+damage+by+peritoneal+dialysis+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Peritoneal damage by peritoneal dialysis solutions.</a> Clinical and Experimental Nephrology. 12 (4), 243-249 (2008).</li>
<li>Io, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SAHA+suppresses+peritoneal+fibrosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">SAHA suppresses peritoneal fibrosis in mice.</a> Peritoneal Dialysis International. 35 (3), 246-258 (2015).</li>
<li>Yoh, K., Ojima, M., Takahashi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Th2-biased+GATA-3+transgenic+mice+developed+severe+experimental+peritoneal+fibrosis+compared+with+Th1-biased+T-bet+and+Th17-biased+RORgammat+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Animals%22%5BJournal%5D)">Th2-biased GATA-3 transgenic mice developed severe experimental peritoneal fibrosis compared with Th1-biased T-bet and Th17-biased RORgammat transgenic mice.</a> Experimental Animals. 64 (4), 353-362 (2015).</li>
<li>Karl, Z. J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+Equilibration+Test%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Peritoneal Equilibration Test.</a> Peritoneal Dialysis International. 7 (3), 138-148 (1987).</li>
<li>Lee, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinical+implication+of+vitamin+D+nanomedicine+for+peritoneal+dialysis-related+peritoneal+damage%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">The clinical implication of vitamin D nanomedicine for peritoneal dialysis-related peritoneal damage.</a> International Journal of Nanomedicine. 14, 9665-9675 (2019).</li>
<li>Goldner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modification+of+the+masson+trichrome+technique+for+routine+laboratory+purposes%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Modification of the masson trichrome technique for routine laboratory purposes.</a> The American Journal of Pathology. 14 (2), 237-243 (1938).</li>
<li>Cheng, F. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+application+of+magnetite+nanoparticle-mediated+vitamin+D3+delivery+for+peritoneal+dialysis-related+peritoneal+damage%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Novel application of magnetite nanoparticle-mediated vitamin D3 delivery for peritoneal dialysis-related peritoneal damage.</a> International Journal of Nanomedicine. 16, 2137-2146 (2021).</li>
<li>Ross, A., Willson, V. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRoss%2C+A+%22Basic+and+Advanced+Statistical+Tests%3A+Writing+Results+Sections+and+Creating+Tables+and+Figures%22">Basic and Advanced Statistical Tests: Writing Results Sections and Creating Tables and Figures</a>. , SensePublishers. 13-16 (2017).</li>
<li>Suga, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preventive+effect+of+pirfenidone+against+experimental+sclerosing+peritonitis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Preventive effect of pirfenidone against experimental sclerosing peritonitis in rats.</a> Experimental and Toxicologic Pathology. 47 (4), 287-291 (1995).</li>
<li>Ishii, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+sclerosing+encapsulating+peritonitis+model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+Dialysis+Transplantation%22%5BJournal%5D)">An experimental sclerosing encapsulating peritonitis model in mice.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 16 (6), 1262-1266 (2001).</li>
<li>Nishino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antisense+oligonucleotides+against+collagen-binding+stress+protein+HSP47+suppress+peritoneal+fibrosis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">Antisense oligonucleotides against collagen-binding stress protein HSP47 suppress peritoneal fibrosis in rats.</a> Kidney International. 64 (3), 887-896 (2003).</li>
<li>Mishima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+expression+of+heat+shock+protein+47+in+rat+model+of+peritoneal+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Enhanced expression of heat shock protein 47 in rat model of peritoneal fibrosis.</a> Peritoneal Dialysis International. 23 (1), 14-22 (2003).</li>
<li>Kushiyama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+liposome-encapsulated+clodronate+on+chlorhexidine+gluconate-induced+peritoneal+fibrosis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+Dialysis+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Effects of liposome-encapsulated clodronate on chlorhexidine gluconate-induced peritoneal fibrosis in rats.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 26 (10), 3143-3154 (2011).</li>
<li>Nishino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+lymphocyte+infiltration+in+the+progression+of+mouse+peritoneal+fibrosis+model%5BTitle%5D)+AND+%22Renal+Failure%22%5BJournal%5D)">Involvement of lymphocyte infiltration in the progression of mouse peritoneal fibrosis model.</a> Renal Failure. 34 (6), 760-766 (2012).</li>
<li>Lua, I., Li, Y., Pappoe, L. S., Asahina, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myofibroblastic+conversion+and+regeneration+of+mesothelial+cells+in+peritoneal+and+liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Myofibroblastic conversion and regeneration of mesothelial cells in peritoneal and liver fibrosis.</a> The American Journal of Pathology. 185 (12), 3258-3273 (2015).</li>
<li>Kitamura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigallocatechin+gallate+suppresses+peritoneal+fibrosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Chemico-Biological+Interactions%22%5BJournal%5D)">Epigallocatechin gallate suppresses peritoneal fibrosis in mice.</a> Chemico-Biological Interactions. 195 (1), 95-104 (2012).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

In deze studie wordt een muis PD-model gepresenteerd door i.p. injectie van CG, en de resultaten toonden peritoneale fibrose en functionele achteruitgang in dit model, dat de toestand van de PD-patiënt nabootste.
Er zijn verschillende kritieke stappen in het protocol. Ten eerste moet voor het uitvoeren van een i.p. injectie van CG of NS de buikwandhuid van de muis worden opgepakt met een tang om door punctie geïnduceerde intraperitoneale orgaanschade te voorkomen. Ten tweede, bij het verzamele...

Peritoneale dialyse (PD) is een vorm van niervervangende therapie. PD heeft echter problemen die niet kunnen worden opgelost. Langdurige PD-behandeling kan bijvoorbeeld peritoneale schade veroorzaken, wat uiteindelijk leidt tot ultrafiltratiefalen en stopzetting van de behandeling 1,2,3,4,5,6. Peritoneale fibrose is een van de ernstigste complicaties 7,8. Peritoneale fibrose wordt gekenmerkt door de afzetting en accumulatie van extracellulaire matrix binnen het interstitium, en neo-angiogenese en vasculopathie van het peritoneum 9,10.
De belangrijkste oorzaken van deze peritoneale veranderingen zijn terugkerende peritonitis en niet-biocompatibiliteit van het dialysaat, die hyperosmotisch, hoge glucose, lage pH en accumulatie van glucoseafbraakproducten zijn11,12. Daarom kunnen geschikte dierexperimentele modellen onderzoekers helpen de fysiologische en pathologische veranderingen van het peritoneum tijdens PD-therapie beter te bestuderen. Daarom is het opzetten van een PD-model voor dieren belangrijk voor het verbeteren van PD-technologie en dialyse-effectiviteit en het verlengen van de overleving van de patiënt. Deze studie was gericht op het genereren van een PD-muismodel door intraperitoneale (i.p.) injectie van chloorhexidinegluconaat (CG), zoals eerder beschreven13,14. Dit PD-muismodel is eenvoudig, gemakkelijk te gebruiken en haalbaar in vergelijking met andere PD-diermodellen.

<table><tbody><tr><td>0.9% Normal Saline</td><td>Y F CHEMICAL CORP., New Taipei City, Taiwan</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>10% neutraal gebufferde formaline</td><td>Taiwan Burnett International Co., Ltd., Taipei City, Taiwan</td><td>00002A</td><td></td></tr><tr><td>Automatische biochemische analyzer</td><td>Hitachi Ltd., Tokyo, Japan</td><td>Labospect Series 008</td><td>voor het bepalen van glucoseconcentratie</td></tr><tr><td>Chlorhexidine digluconaat oplossing, 20% in H2O</td><td>Sigma-Aldrich, MO, USA</td><td>C9394</td><td>verdund tot 0,1% met 15% ethanol voor injectie</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Avantor Performance Materials, LLC, PA, USA</td><td>BAKR8006-05</td><td>verdund tot 15% met fysiologische zoutoplossing voor werkconcentratie</td></tr><tr><td>Glucose (Dianeal)</td><td>Baxter International, Inc., IL, USA</td><td>FNB9896</td><td>Commerciële dialyseoplossing (4,25%)</td></tr><tr><td>GraphPad Prism 8.0</td><td>GraphPad Software, Inc., CA, US</td><td></td><td></td></tr><tr><td>L-type Glu 2-assay</td><td>FUJIFILM Wako, Japan</td><td>461-32403</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine 20</td><td>Juily Pharmaceutical Co., Ltd., New Taipei City, Taiwan</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Zoletil 50</td><td>Virbac Laboratories, Carros, Frankrijk</td><td>-</td><td></td></tr></tbody></table>

een muizenmodel van chloorhexidine gluconaat-geïnduceerde peritoneale schade

A Mice Model of Chlorhexidine Gluconate-Induced Peritoneal Damage

Peritoneale fibrose is een belangrijke complicatie van peritoneale dialyse (PD). Om dit probleem te onderzoeken en aan te pakken, is een geschikt diermodel van PD vereist. Het huidige protocol stelt een chloorhexidinegluconaat (CG) geïnduceerd peritoneale fibrosemodel vast dat de toestand van een patiënt met PD nabootst. Peritoneale fibrose werd geïnduceerd door intraperitoneale injectie van 0,1% CG in 15% ethanol gedurende 3 weken (om de andere dag toegediend), voor een totaal van negen keer bij mannelijke C57BL / 6-muizen. Peritoneale functionele tests werden vervolgens uitgevoerd op dag 22. Nadat de muizen waren geofferd, werden het pariëtale peritoneum van de buikwand en het viscerale peritoneum van de lever geoogst. Ze waren dikker en fibrotischer wanneer ze microscopisch werden geanalyseerd na de trichrome kleuring van Masson. De ultrafiltratiesnelheid nam af en glucosemassatransport duidde op een CG-geïnduceerde toename van de peritoneale permeabiliteit. Het aldus vastgestelde PD-model kan toepassingen hebben bij het verbeteren van PD-technologie, dialyse-werkzaamheid en het verlengen van de overleving van de patiënt.

In figuur 1A,B was het pariëtale peritoneum van de buikwand aanzienlijk dikker en fibrotischer onder Masson's trichrome kleuring17, wat aangeeft dat in de CG-blootgestelde groep peritoneale fibrose ernstiger is dan in de controlezoutgroep (NS). In figuur 2A,B was het viscerale peritoneum van de leveroppervlakken ook aanzienlijk dikker en fibrotischer, wat bewijst dat in de CG-blootgestelde groep peritoneale fibrose ernsti...

Het huidige protocol stelt een peritoneale dialyse (PD) muismodel vast van chloorhexidinegluconaat (CG) -geïnduceerde peritoneale fibrose. Het huidige model is eenvoudig en gemakkelijk te gebruiken in vergelijking met andere PD-diermodellen.

Een muizenmodel van chloorhexidine gluconaat-geïnduceerde peritoneale schade

Peritoneal fibrosis is an important complication of peritoneal dialysis (PD). To investigate and address this problem, an appropriate animal model of PD ...

Het vaststellen van een diermodel voor peritoneale dialyse, PD, is erg belangrijk. We hopen dat het de technologie en de werkzaamheid van PD-therapie kan verbeteren en uiteindelijk de overleving van de patiënt kan verbeteren. Dit peritoneale dialysemuismodel is eenvoudig, gemakkelijk te gebruiken en zichtbaar in vergelijking met andere peritoneale dialysediermodellen.Een geschikt peritoneaal dialysediermodel kan onderzoekers helpen om de peritoneale, fysiologische en pathologische verandering tijdens PD-therapie te bestuderen. Demonstratie van de procedure zal Fang-Ling Liao zijn, een onderzoeksassistent uit mijn laboratorium. Bereid om te beginnen de chemische irriterende stof voor door 0,1% chloorhexidinegluconaat te verdunnen in 15% ethanol.Wijs vervolgens drie muizen toe als de controlegroep en injecteer één milliliter per kilogram 0,9% normale zoutoplossing intraperitoneaal om de andere dag gedurende drie weken gedurende in totaal negen keer. Wijs vervolgens drie muizen toe aan de peritoneale fibrosegroep en induceer peritoneale fibrose door een intraperitoneale injectie van 0,1% chloorhexidinegluconaatoplossing toe te dienen die eerder is bereid in een dosis van 12,5 microliter per kilogram lichaamsgewicht. Bereid voor peritoneale functietests een dialyseoplossing met 4,25% glucose.Gebruik vervolgens een spuit om 0,5 milliliter dialysaatmonster te trekken. Bereid een injectie van zoletil en xylazine voor en verdoof de muizen door een intramusculaire injectie toe te dienen. Voer intraperitoneale installatie van de dialyseoplossing uit in een dosis van twee milliliter per 20 gram lichaamsgewicht.Maak een kleine incisie in de middellijn van de buik en verzamel de belangrijkste intraperitoneale vloeistof met een spuit. Voer na 30 minuten een verticale incisie uit in de middellijn van de buik onder het xiphoid-proces en open de buik van de muis om de resterende intraperitoneale vloeistof met een spuit te verzamelen. Meet vervolgens het gewicht van een schoon en droog wattenstaafje.Doe het katoen in de buikholte van de muis om de resterende intraperitoneale vloeistof te absorberen en verwijder deze vervolgens. Meet het katoengewicht opnieuw. De trichrome kleuring van Masson toonde aan dat het pariëtale peritoneum van de buikwand in de aan chloorhexidinegluconaat blootgestelde groep aanzienlijk dikker en fibrotisch was dan de controlegroep.Het viscerale peritoneum van de leveroppervlakken was ook significant dikker en fibrotisch in de aan chloorhexidinegluconaat blootgestelde groep dan in de controlezoutgroep, wat aangeeft dat peritoneale fibrose ernstiger is in de aan chloorhexidinegluconaat blootgestelde groep. De aan chloorhexidinegluconaat blootgestelde groep vertoonde een verlaagde ultrafiltratiesnelheid en verhoogd glucosemassatransport, wat aangeeft dat de peritoneale permeabiliteit toeneemt in de met chloorhexidinegluconaat blootgestelde muizen Gebruik tijdens het uitvoeren van een intraperitoneale injectieprocedure de tang en kies de buikhuid van de muis om door punctie geïnduceerde intraperitoneale orgaanschade te voorkomen.

a-mice-model-of-chlorhexidine-gluconate-induced-peritoneal-damage

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Source: de Vries, C. R., et.al. A Delayed Inoculation Model of Chronic Pseudomonas aeruginosa Wound Infection. J. Vis. Exp. (2020)This video demonstrates the delayed inoculation of luminescent Pseudomonas aeruginosa into a mouse bearing two full-thickness dorsal skin wounds covered by a transparent film dressing. This facilitates biofilm formation and the establishment of chronic infection. Regular bioluminescence monitoring enables quantification of bacterial burden and tracking of infection...

Developing a Mouse Model of Chronic Pseudomonas aeruginosa Skin Wound Infection 

Hier beschrijven we een roman diabetische lymfkliertest model met behulp van haarloze muizen voor real-time, niet-invasieve, bewaking van biofilm wond infecties van bioluminescente Pseudomonas aeruginosa. Deze methode kan worden aangepast aan de infectie van andere bacteriesoorten en genetisch gemodificeerde micro-organismen, met inbegrip van meerdere soorten biofilms, evalueren en testen van de werkzaamheid van antibiofilm strategieën.

Aan de kant van licht komen: In Vivo Monitoring van Pseudomonas aeruginosa Biofilm infecties in chronische wonden in een diabetische haarloze lymfkliertest Model

Dit artikel toont de methode voor de chirurgische plaatsing in muizen van een intraperitoneaal katheter aangesloten op een toegangspoort die is gepositioneerd aan de achterkant van het dier. Bovendien verklaart het de procedure voor een 5/6 Nefrectomie te lijken op de uremisch staat van PD-patiënten.

Chirurgische technieken voor de plaatsing van de katheter en 5/6 Nefrectomie in lymfkliertest modellen van peritoneale dialyse

Chronische wonden zijn ontwikkeld uit acute wonden op een diabetische muismodel door het induceren van hoge niveaus van oxidatieve stress na een full-dikte cutane wond. De wond wordt behandeld met remmers voor katalase en glutathion peroxidase, resulterend in verminderde genezing en biofilm ontwikkeling door bacteriën aanwezig in de huid microbiome.

Protocol voor het maken van chronische wonden bij diabetische muizen

Hier presenteren we een protocol voor het lokaal opwekken van apicale parodontitis bij muizen. We laten zien hoe we een gat in de tand van de muis boren en de pulp ervan blootstellen, om lokale ontstekingen te veroorzaken. Analysemethoden om de aard van deze ontsteking te onderzoeken, zoals micro-CT en histologie, worden ook aangetoond.

Het inducerende apicale periodontitis bij muizen

Het huidige protocol beschrijft een gestandaardiseerde chirurgische methode voor het elastase-geïnduceerde AAA-model door de directe toepassing van elastase op de adventitia van infrarode abdominale aorta bij muizen.

Muis Abdominale Aorta Aneurysma Model Geïnduceerd door Perivasculaire Toepassing van Elastase

Dit artikel beschrijft wijzigingen van een procedure om een peritoneale dialysekatheter in een muizenmodel te implanteren om grote technische problemen te voorkomen die met de conventionele technieken worden waargenomen.

Een retrograde implantatiebenadering voor peritoneale dialysekatheterplaatsing bij muizen

Deze studie presenteert twee cruciale experimentele technieken: de constructie van een muiswondmodel voor het beoordelen van wondsluiting en de voorbereiding van suspensies van enkele cellen uit muishuid om de celviabiliteit te behouden.

Muizenwondmodellen en het bereiden van single-cell suspensies

Dit manuscript presenteert een protocol voor het opstellen van een abdominaal aorta-aneurysmamodel van muizen met behulp van calciumchloride en elastase, waarbij de voordelen van eerdere modelleringsmethoden worden gecombineerd. Dit model kan worden gebruikt om de pathofysiologische mechanismen te onderzoeken die ten grondslag liggen aan abdominale aorta-aneurysma's.

Een abdominaal aorta-aneurysmamodel van muizen door periadventitiële infiltratie van calciumchloride en elastase

Intraperitoneale toediening van geneesmiddelen is een veilige en effectieve niet-invasieve benadering voor het induceren van pancreasletsel. Deze studie vergeleek vijf verschillende intraperitoneale injectieprotocollen bij muizen om verschillende gradaties van pancreasletsel te induceren en stelde een model van ernstig pancreasletsel vast om de pathologische veranderingen en behandelingsstrategieën voor ernstige acute pancreatitis (SAP) te onderzoeken.

Het voorbereiden van een muizenmodel van ernstige acute pancreatitis via een combinatie van caeruleïne en lipopolysaccharide intraperitoneale injectie

Leer een eenvoudig muizenmodel voor peritoneale dialyse om peritoneale fibrose te bestuderen met behulp van chloorhexidine gluconaat. Dit protocol verbetert de zichtbaarheid en bruikbaarheid voor onderzoek naar PD-therapie.

Een muizenmodel van chloorhexidine gluconaat-geïnduceerde peritoneale schade

Meer video's verkennen