Name: Meting van endotheelafhankelijke vasorelaxatie in de thoracale aorta van de muis met behulp van tensometrische kamermyografie met klein volume (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-08-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 47 s
Description: Leer endotheelafhankelijke vasorelaxatie meten in de thoracale aorta van de muis met behulp van tensometrische myografie. Deze betrouwbare methode ondersteund vasculaire biologieonderzoek naar endotheelfunctie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door financiering van de National Institutes of Health (R15HL145646) en Midwestern University College of Graduate Studies.

<ol><li>Wenceslau, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+the+measurement+of+vascular+function+and+structure+in+isolated+arteries+and+veins%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Guidelines for the measurement of vascular function and structure in isolated arteries and veins.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 321 (1), 77-111 (2021).</li>
<li>Deanfield, J. E., Halcox, J. P., Rabelink, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+function+and+dysfunction%3A+Testing+and+clinical+relevance%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Endothelial function and dysfunction: Testing and clinical relevance.</a> Circulation. 115 (10), 1285-1295 (2007).</li>
<li>Lerman, A., Zeiher, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+function%3A+Cardiac+events%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Endothelial function: Cardiac events.</a> Circulation. 111 (3), 363-368 (2005).</li>
<li>Rajendran, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vascular+endothelium+and+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">The vascular endothelium and human diseases.</a> International Journal of Biological Sciences. 9 (10), 1057-1069 (2013).</li>
<li>Galley, H. F., Webster, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+the+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Anaesthesia%22%5BJournal%5D)">Physiology of the endothelium.</a> British Journal of Anaesthesia. 93 (1), 105-113 (2004).</li>
<li>Orita, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+evaluation+of+phosphate%2C+bicarbonate%2C+and+Hepes+buffered+storage+solutions+on+hypothermic+injury+to+immature+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Drugs+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">In vitro evaluation of phosphate, bicarbonate, and Hepes buffered storage solutions on hypothermic injury to immature myocytes.</a> Cardiovascular Drugs and Therapy. 8 (6), 851-859 (1994).</li>
<li>Liu, Y. H., Bian, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bicarbonate-dependent+effect+of+hydrogen+sulfide+on+vascular+contractility+in+rat+aortic+rings%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Cell+Physiology%22%5BJournal%5D)">Bicarbonate-dependent effect of hydrogen sulfide on vascular contractility in rat aortic rings.</a> American Journal of Physiology. Cell Physiology. 299 (4), 866-872 (2010).</li>
<li>Griffiths, K., Madhani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+wire+myography+to+investigate+vascular+tone+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%3A+Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">The use of wire myography to investigate vascular tone and function.</a> Methods in Molecular Biology: Atherosclerosis. 2419, 361-367 (2022).</li>
<li>Pfeiffer, S., Leopold, E., Schmidt, K., Brunner, F., Mayer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+nitric+oxide+synthesis+by+NG-nitro-L-arginine+methyl+ester+%28L-NAME%29%3A+Requirement+for+bioactivation+to+the+free+acid%2C+NG-nitro-L-arginine%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Inhibition of nitric oxide synthesis by NG-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME): Requirement for bioactivation to the free acid, NG-nitro-L-arginine.</a> British Journal of Pharmacology. 118 (6), 1433-1440 (1996).</li>
<li>Bacon, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+dysfunction+in+systemic+vasculitis%3A+New+developments+and+therapeutic+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Rheumatology%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell dysfunction in systemic vasculitis: New developments and therapeutic prospects.</a> Current Opinion in Rheumatology. 17 (1), 49-55 (2005).</li>
<li>Gallo, G., Volpe, M., Savoia, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+dysfunction+in+hypertension%3A+Current+concepts+and+clinical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Endothelial dysfunction in hypertension: Current concepts and clinical implications.</a> Frontiers in Medicine. 8, 798958(2021).</li>
<li>Mikolajczyk, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+important+role+of+endothelium+and+extracellular+vesicles+in+the+cellular+mechanism+of+aortic+aneurysm+formation%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">The important role of endothelium and extracellular vesicles in the cellular mechanism of aortic aneurysm formation.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (23), 13157(2021).</li>
<li>Vallance, P., Hingorani, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+nitric+oxide+in+humans+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Experimental+Pathology%22%5BJournal%5D)">Endothelial nitric oxide in humans in health and disease.</a> International Journal of Experimental Pathology. 80 (6), 291-303 (1999).</li>
<li>Tousoulis, D., Kampoli, A. M., Tentolouris, C., Papageorgiou, N., Stefanadis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+nitric+oxide+on+endothelial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Vascular+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">The role of nitric oxide on endothelial function.</a> Current Vascular Pharmacology. 10 (1), 4-18 (2012).</li>
<li>Gibson, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+aerobic+exercise+blocks+elastin+fiber+fragmentation+and+aortic+dilatation+in+a+mouse+model+of+Marfan+syndrome+associated+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">Mild aerobic exercise blocks elastin fiber fragmentation and aortic dilatation in a mouse model of Marfan syndrome associated aortic aneurysm.</a> Journal of Applied Physiology. 123 (1), 147-160 (2017).</li>
<li>Xiao, X., Ping, N. N., Li, S., Cao, L., Cao, Y. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimal+initial+tension+for+rat+basilar+artery+in+wire+myography%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+Research%22%5BJournal%5D)">An optimal initial tension for rat basilar artery in wire myography.</a> Microvascular Research. 97, 156-158 (2015).</li>
<li>Chung, A. W., Yang, H. H., Yeung, K. A., van Breemen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+and+pharmacological+approaches+to+investigate+the+pathogenesis+of+Marfan+syndrome+in+the+abdominal+aorta%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Research%22%5BJournal%5D)">Mechanical and pharmacological approaches to investigate the pathogenesis of Marfan syndrome in the abdominal aorta.</a> Journal of Vascular Research. 45 (4), 314-322 (2008).</li>
<li>Zhong, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age+impairs+soluble+guanylyl+cyclase+function+in+mouse+mesenteric+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Age impairs soluble guanylyl cyclase function in mouse mesenteric arteries.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (21), 11412(2021).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen hebben.

Het gebied van vasculaire biologie is sterk afhankelijk van hulpmiddelen die onderzoekers helpen de functionele en structurele integriteit van de bloedvatwand te beoordelen. Het vraagt ook speciale aandacht voor de directe en indirecte interacties tussen de drie lagen van bloedvaten: de intima, media en adventitia. Onder die drie lagen wordt de intima gevormd door een monolaag van endotheelcellen en heeft een zeer belangrijke functie bij het reguleren van vasculaire gezondheid en hemostase.
He...

De laatste decennia is het kleine kamermyografiesysteem gebruikt om de reactiviteit van verschillende lagen bloedvatwanden te meten als reactie op verschillende farmacologische middelen en neurotransmitters in een ex vivo, real-time setting. Vasculaire reactiviteit is een belangrijk onderdeel van een gezond functioneel bloedvat en is van cruciaal belang voor de regulatie van de bloedstroom en perfusie in perifere en cerebrale vasculatuur1. Binnen de bloedvatwand is de interactie tussen endotheel- en gladde spierlagen een belangrijke determinant van de vasculaire tonus, die ook voortdurend wordt beïnvloed door structurele veranderingen in de bindweefsellaag rond de bloedvatwand (adventitia).
De endotheellaag regelt vasomotie door een paar vaatverwijdende factoren vrij te geven, waaronder stikstofmonoxide (NO), prostacycline (BGA2) en van endotheel afgeleide hyperpolariserende factor (EDHF), of door vasoconstrictieve middelen zoals endotheline-1 (ET-1) en tromboxaan (TXA2)2,3,4 te produceren. Onder deze factoren is NO uitgebreid bestudeerd en de belangrijke regulerende rollen in andere kritieke cellulaire functies zoals ontsteking, migratie, overleving en proliferatie zijn sterk geciteerd in de wetenschappelijke literatuur 2,5.
Op het gebied van vasculaire biologie heeft kamermyografie vasculaire fysiologen en farmacologen een waardevol en betrouwbaar hulpmiddel geboden om de endotheelfunctie te meten in een strak gecontroleerd semi-fysiologisch systeem1. Momenteel zijn er twee verschillende myograafsystemen beschikbaar voor wetenschappers: draad (of pin) tensometrische (isometrische) myografie en drukmyografie. In een draadmyografiesysteem wordt het bloedvat uitgerekt tussen twee draden of pinnen, waardoor de isometrische meting van kracht- of spanningsontwikkeling in de wand van het bloedvat mogelijk is, terwijl drukmyografie een voorkeursplatform is voor metingen van vasculaire reactiviteit in kleine weerstandsslagaders, waar veranderingen in bloeddruk worden beschouwd als de belangrijkste stimulans voor veranderingen in vasculaire tonus en vasomotion. Er is een algemene overeenstemming dat, voor kleine weerstandsslagaders zoals mesenteriale en cerebrale slagaders, drukmyografie een aandoening creëert die dichter bij de fysiologische omstandigheden in het menselijk lichaam ligt. De kleine kamermyograaf kan worden gebruikt voor vaten met zeer kleine diameters (200-500 μm) tot veel grotere vaten zoals de aorta.
Hoewel de draadmyograaf een krachtig systeem is voor het registreren van de spanning van bloedvaten onder isometrische omstandigheden, is de drukmyograaf een geschikter systeem voor het meten van veranderingen in de diameter van het vat als reactie op veranderingen in isobare omstandigheden. De diameterveranderingen in het vat als reactie op veranderingen in druk of stroming zijn veel groter in een kleine spierslagader (arteriole) in vergelijking met grote elastische slagaders zoals de aorta. Om deze redenen wordt de drukmyograaf beschouwd als een beter hulpmiddel voor kleine bloedvaten met aanzienlijke vasoreactiviteit1. Een van de andere praktische sterke punten van multi-kamer tensometrische myografie met kleine volumekamers is dat men de bijdrage van verschillende mechanismen aan vasculaire reactiviteit kan onderscheiden door meerdere (maximaal vier) segmenten van dezelfde slagader en van hetzelfde dier te bestuderen om variabiliteit te verminderen en robuuste en sluitende gegevens te produceren. Het is ook relatief eenvoudig technisch in te stellen en te onderhouden. Vaten van bijna elke grootte kunnen worden bestudeerd met een draadmyograaf. Het is een meer kosteneffectieve oplossing voor het beoordelen van de vasculaire functie en is een goed alternatief voor drukmyografie in experimenten waarbij de lengte van het ontlede vat te kort is voor het drukmyograafprotocol.
Dit rapport biedt een gedetailleerd protocol voor de beoordeling van de endotheelfunctie in de geïsoleerde thoracale aortaring van muizen met behulp van montagepennen in de tensometrische myografietechniek van de kleine volumekamer met behulp van het DMT-620 multikamer myograafsysteem (DMT-USA). Dit protocol maakt gebruik van een 6 maanden oude mannelijke C57BL6-muis met een gemiddeld gewicht tussen 25-35 g. Gelukkig kan dit protocol worden toegepast op verschillende diertypen en gewichten, gezien het brede scala aan scheepstypen en diameters waarvoor dit protocol kan worden gebruikt.

<table><tbody><tr><td>Acetylcholine</td><td>SigmaAldrich</td><td>A6625-100G</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>SigmaAldrich</td><td>C4901-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Carbogen gas</td><td>Matheson</td><td>H103847</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting scissors</td><td>FST</td><td>91460-11</td><td></td></tr><tr><td>DMT 620 Multi chamber myograph system</td><td>DMT</td><td>DMT 620</td><td>Multi chamber myograph system</td></tr><tr><td>Dumont forceps</td><td>FST</td><td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>SigmaAldrich</td><td>E5134-10G</td><td></td></tr><tr><td>Glucose</td><td>SigmaAldrich</td><td>G8270-1KG</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>SigmaAldrich</td><td>H7006-1KG</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>SigmaAldrich</td><td>P9541-1KG</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>SigmaAldrich</td><td>P5655-1KG</td><td></td></tr><tr><td>LabChart</td><td>ADI instruments</td><td></td><td>Data acquisition software</td></tr><tr><td>Light source</td><td>Volpi</td><td>14363</td><td></td></tr><tr><td>L-Name</td><td>Fischer Scientific</td><td>50-200-7725</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>SigmaAldrich</td><td>M2643-500G</td><td></td></tr><tr><td>Microscope</td><td>Leica</td><td>S6D</td><td>stereo zoom microscope</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>SigmaAldrich</td><td>S5886-5KG</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>SigmaAldrich</td><td>S5761-500G</td><td></td></tr><tr><td>Organ bath system</td><td>DMT</td><td>720MO</td><td></td></tr><tr><td>Phenylephrine</td><td>SigmaAldrich</td><td>P6126-10G</td><td></td></tr><tr><td>Pump</td><td>Welch</td><td>2546B-01</td><td></td></tr><tr><td>Software</td><td>ADI instruments</td><td>LabChart 8.1.20</td><td></td></tr><tr><td>Spring Scissors</td><td>FST</td><td>15003-08</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184 Kit</td><td>Electron Microscopy Services</td><td>24236-10</td><td>silicone elastomer kit</td></tr><tr><td>Tank Regulator</td><td>Fischer Scientific</td><td>10575147</td><td></td></tr><tr><td>Water bath system</td><td>Fischer Scientific</td><td>15-462-10</td><td></td></tr></tbody></table>

meting van endotheelafhankelijke vasorelaxatie in de thoracale aorta van de muis met behulp van tensometrische kamermyografie met klein volume

Measurement of Endothelium-Dependent Vasorelaxation in the Mouse Thoracic Aorta Using Tensometric Small Volume Chamber Myography

Tensometrische myografie met een kleine volumekamer is een veelgebruikte techniek om de vasculaire contractiliteit van kleine en grote bloedvaten bij proefdieren en kleine slagaders geïsoleerd uit menselijk weefsel te evalueren. De techniek stelt onderzoekers in staat om geïsoleerde bloedvaten te behouden in een strak gecontroleerde en gestandaardiseerde (bijna-fysiologische) omgeving, met de mogelijkheid om zich aan te passen aan verschillende omgevingsfactoren, terwijl ze de geïsoleerde bloedvaten uitdagen met verschillende farmacologische middelen die vasoconstrictie of vaatverwijding kunnen induceren. De myograafkamer biedt ook een platform om vasculaire reactiviteit te meten als reactie op verschillende hormonen, remmers en agonisten die de functie van gladde spieren en endotheellagen afzonderlijk of tegelijkertijd kunnen beïnvloeden. De bloedvatwand is een complexe structuur die bestaat uit drie verschillende lagen: de intima (endotheellaag), media (gladde spier- en elastinevezels) en adventitia (collageen en ander bindweefsel). Om een duidelijk inzicht te krijgen in de functionele eigenschappen van elke laag, is het van cruciaal belang om toegang te hebben tot een experimenteel platform en systeem dat een gecombineerde benadering mogelijk maakt om alle drie de lagen tegelijkertijd te bestuderen. Een dergelijke benadering vereist toegang tot een semi-fysiologische toestand die de in vivo omgeving in een ex vivo omgeving zou nabootsen. Tensometrische myografie met kleine volumes heeft een ideale omgeving geboden om de impact van omgevingssignalen, experimentele variabelen of farmacologische agonisten en antagonisten op vasculaire eigenschappen te evalueren. Al vele jaren gebruiken wetenschappers de tensometrische myograaftechniek om de endotheelfunctie en gladde spiercontractiliteit te meten als reactie op verschillende middelen. In dit rapport wordt een tensometrisch myometrisch myograafsysteem met een kleine volumekamer gebruikt om de endotheelfunctie in de geïsoleerde muisaorta te meten. Dit rapport richt zich op hoe tensometrische myografie van de small volume chamber kan worden gebruikt om de functionele integriteit van het endotheel in kleine segmenten van een grote slagader zoals de thoracale aorta te evalueren.

Het hier uitgelegde tensometrische myografieprotocol voor kleine kamers is de standaardmethode voor het meten van vasculaire reactiviteit in kleine en grote slagaders en maakt gelijktijdige metingen van vasculaire reactiviteit mogelijk in maximaal vier bloedvatsegmenten van hetzelfde experimentele kleine proefdier. In dit rapport gebruiken we het systeem specifiek om de endotheelfunctie in de geïsoleerde muisaorta te meten (figuur 1). In dit protocol worden geïsoleerde aortasegmenten gemonte...

Het huidige protocol beschrijft de concepten en technische toepassing van de tensometrische myograaftechniek met behulp van een meerkamermyograafsysteem in de experimentele ex vivo beoordeling van de aorta-endotheelfunctie van muizen.

Meting van endotheelafhankelijke vasorelaxatie in de thoracale aorta van de muis met behulp van tensometrische kamermyografie met klein volume

Small volume chamber tensometric myography is a commonly used technique to evaluate the vascular contractility of small and large blood vessels in ...

We demonstreren de isometrische of tensometrische myografie als het gouden standaardprotocol om de reactiviteit van kleine weerstand of grote buisbloedvaten in een goed gecontroleerde fysiologische toestand te meten. De metingen zijn zeer reproduceerbaar en betrouwbaar. De techniek is zeer waardevol om onderzoekers in staat te stellen verschillende lagen bloedvaten afzonderlijk te bestuderen of tegelijkertijd de interactie tussen verschillende lagen van de bloedvatwand te onderzoeken.De procedure wordt gedemonstreerd door Robert Folk, de specialist in het onderzoekslaboratorium van mijn laboratorium. Begin met het waterbad aan te zetten en in te stellen op 37 graden Celsius. Plaats twee bekers die op de juiste manier zijn geëtiketteerd in het waterbad, één met 600 milliliter HEPES-PSS-oplossing en één met 150 milliliter kaliumrijke oplossing.Belucht een bekerglas met 300 milliliter HEPES-PSS-oplossing met carbogengas gedurende ten minste 10 minuten. Voeg 30 milliliter van de beluchte HEPES-PSS-oplossing toe aan een centrifugebuis van 50 milliliter, etiketteer deze op de juiste manier en plaats deze op ijs. Bewaar de resterende beluchte HEPES-PSS-oplossing op ijs voor gebruik tijdens het aortadissectieproces.Schakel de vierkamer myograafeenheid in op 5 milliliter HEPES-PSS-oplossing op elke myograafkamer en stel de warmte in op 37 graden Celsius. Laat de oplossing in elke kamer gedurende 30 minuten beluchten en controleer of de kamers de gewenste 37 graden Celsius hebben bereikt. Schakel de hardware en computer voor myograafgegevensverzameling in.Breng de thoracale kooi die van de geëuthanaseerde muizen is weggesneden over op een heldere siliconen elastomeer-gecoate petrischaal gevuld met ijskoude beluchte HEPES-PSS-buffer en speld deze aan beide zijden vast. Snijd onder de microscoop voorzichtig het hart en de bijgevoegde aorta uit de ribbenkast en breng over naar een schone met siliconenelastomeer bedekte schaal en verwijder vervolgens voorzichtig vet bindweefsel en gestolde bloed uit de aorta. Ontleed en isoleer met een scherpe kleine schaar de hele aorta vanaf het booggebied tot de bodem van de dalende aorta.Snijd de ontlede aorta in vier segmenten van elk 2 millimeter. Gebruik de mini-liniaal in de schaal als referentie. In kamers die al 5 milliliter verwarmde en beluchte HEPES-PSS-buffer bevatten, schuift u elk van de 2-millimeter aortasegmenten voorzichtig op de twee montagepennen met behulp van een tang.Wanneer u de kamer terug in de myograafeenheid plaatst, beweegt u de pinnen langzaam uit elkaar door de micrometer tegen de klok in te draaien, zodat het aortasegment niet van de pinnen glijdt. Breng elke myograafkamer terug naar de unit en begin met het beluchten van de kamers bij 37 graden Celsius gedurende 20 minuten. Giet de kamers af en voeg 5 milliliter verse, warme, beluchte HEPES-PSS-oplossing toe aan elke kamer.Pas indien nodig de krachtmetingen aan om de optimale spanning van 6 millinewton af te lezen. Laat het weefsel nog 15 tot 20 minuten rusten. Open de software voor gegevensverzameling.Wijzig de trackingnummers van 50 in 1 tot 500 in 1 en druk op Start. Voordat u een nieuw experiment start, moet u het juiste label toevoegen aan de software voor gegevensverzameling. Giet de kamers nog een keer af voordat u 5 milliliter kaliumrijke oplossing aan elke kamer toevoegt.Giet de kamers opnieuw af zodra de contractiele reactie op de kaliumrijke oplossing een plateau bereikt voor het genereren van kracht. Was het weefsel driemaal met HEPES-PSS-oplossing. Voeg 5 milliliter kaliumrijke oplossing toe aan elke kamer.Giet de kamers af zodra de contractiele reactie op een kaliumrijke oplossing een plateau bereikt voor het genereren van kracht en was het weefsel driemaal met HEPES-PSS en laat het weefsel vervolgens 15 tot 20 minuten rusten. Contracteer de aortasegmenten vooraf met het vasoconstrictormiddel PE in een sub-maximale dosis. Laat de PE-geïnduceerde contractiecurve een plateau bereiken voor spanningsontwikkeling.Voeg een plateau van spanningsontwikkeling toe aan PE bij 5 microliter toenemende doses acetylcholine werkvoorraadoplossingen in intervallen van 3 minuten om de uiteindelijke concentraties van acetylcholine vast te stellen van 50 picomolair tot 10 micromolair in de myograafkamer zoals beschreven in het tekstmanuscript. Na het voltooien van het dosisresponsexperiment draineert u de kamers, wast u de aortasegmenten driemaal met warme en beluchte HEPES-PSS-oplossing en laat u de weefsels gedurende 30 minuten rusten. Na het laten rusten van de aortasegmenten gedurende 30 minuten, giet u de kamers af en voegt u een verse, warme kaliumrijke oplossing toe aan elke kamer, giet vervolgens de kamers af en was het weefsel met HEPES-PSS-oplossing wanneer de contractierespons op een kaliumrijke oplossing een F-plateau bereikt, zoals eerder aangetoond.Incubeer de aortasegmenten vooraf met L-NAME door 10 microliter van de bereide 100-millimolaire werkvoorraadoplossing toe te voegen om de bijdrage van stikstofmonoxideproductie aan de waargenomen acetylcholine-geïnduceerde vasorelaxatie te beoordelen. Zonder de L-naam te verwijderen, voegt u de sub-maximale dosis PE toe aan de kamer om aortacontractie te induceren. Wacht tot de PE-geïnduceerde contractiecurve een plateau bereikt voor spanningsontwikkeling en voeg vervolgens acetylcholine toe aan de myograafkamer om een uiteindelijke concentratie van 500 nanomolair te bereiken.Wacht een paar minuten om eventuele veranderingen in de krachtontwikkeling te registreren totdat het gevormde plateau stabiel is. Giet de kamers af en was het weefsel driemaal met warm beluchte HEPES-PSS-oplossing. Plaats de myograafkamer onder de microscoop en laat voorzichtig een klein draadje door het lumen van de aorta lopen.Beweeg de draad voorzichtig door het lumen voor een korte periode. Snijd de aorta in aortaringen van 2 millimeter en monteer die ringen op de myograafkamer. Stel de optimale spanning in op 6 millinewton en laat het weefsel 30 minuten rusten in een beluchte warme HEPES-PSS-buffer, giet vervolgens de kamers af en voeg 5 milliliter verse warm beluchte HEPES-PSS-oplossing toe aan elke kamer.Nul de kracht voor alle myograafkamers en draai de micrometer langzaam tegen de klok in om de afstand tussen de pinnen te vergroten totdat de geregistreerde kracht de gewenste optimale spanning voor de muisaorta bereikt. Druk het weefsel nog eens 15 tot 20 minuten op de optimale spanning en giet de kamers vervolgens nogmaals af voordat u 5 milliliter kaliumrijke oplossing aan elke kamer toevoegt. Giet de kamers opnieuw af en was het weefsel driemaal met HEPES-PSS-oplossing zodra de contractierespons op de kaliumrijke ionenoplossing een plateau bereikt.Laat het weefsel 15 tot 20 minuten rusten en trek vervolgens de aortasegmenten vooraf samen met PE, het vasoconstrictormiddel. Wanneer de PE-geïnduceerde kracht een plateau bereikt, voegt u de sub-maximale concentratie van acetylcholine toe aan de myograafkamer om een uiteindelijke concentratie van 500 nanomolair te bereiken. Wacht 3 minuten om ervoor te zorgen dat het geregistreerde plateau voor PE-geïnduceerde krachtontwikkeling niet verandert voordat u het experiment beëindigt.De integriteit en levensvatbaarheid van elk geïsoleerd vat werden beoordeeld door de contractiele krachtgeneratie te registreren. De piek van de geregistreerde kracht werd later gebruikt om de krachtgeneratie voor hetzelfde segment te normaliseren als reactie op de agonisten. De endotheel-gemedieerde vasorelaxatiemetingen toonden gladde spier gemedieerde contractie en krachtgeneratie.Toen de PE-geïnduceerde contractie een plateau bereikte, bereikten toenemende doses acetylcholine de maximale vasorelaxatie in het geïsoleerde segment. De stikstofmonoxideremmer L-NAME blokkeerde volledig de door acetylcholine geïnduceerde vasorelaxatie in de vooraf gecontracteerde aorta, wat aangeeft dat acetylcholine aorta vasorelaxatie induceert door de productie van stikstofmonoxide te verhogen. Bovendien blokkeerde het verwijderen van de endotheellaag uit de aortasegmenten ook acetylcholine-geïnduceerde vasorelaxatie, wat de rol van het endotheel in de ontspanning van bloedvaten onderstreepte.Zorg ervoor dat u voorzichtig bent tijdens het hanteren, reinigen en ontleden van het bloedvat. Het is van cruciaal belang om de farmacologische agonisten en remmers met zorg toe te voegen om de bloedvatringen die op de myograafkamers zijn gemonteerd niet te verstoren. De informatie kan helpen bij het ontwerpen van experimenten om mogelijke therapeutische benaderingen te verkennen om de disfunctie van de lagen van een specifiek bloedvat aan te pakken.

measurement-endothelium-dependent-vasorelaxation-mouse-thoracic-aorta

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Een geautomatiseerde myography methode voor kracht metingen in geïsoleerde mesenteriale bloedvaten wordt beschreven. Er werken een Mulvany-Halpern Auto Dual Wire Myograph 510A om reacties te bepalen fenylefrine en extracellulair calcium. De methode zorgt voor consistente bepaling van de isometrische reacties op agonisten in kleine vaten van de diameters van 60 - 300 urn, onafhankelijk van elkaar.

A. mesenterica samentrekking en ontspanning Studies met behulp van geautomatiseerde Wire Myography

In druk myography wordt een intacte klein segment van een vaartuig aan twee kleine canules geplaatst en een druk van een geschikte luminale druk. Hier beschrijven we de methode om vasorelaxatie respons van de muis 3...

Beoordelen van Muizen Resistance Artery functie gebruiken Pressure myography

Pressure myography wordt gebruikt om vasoactiviteit van kleine slagaders die aanhoudende vernauwing ontwikkelen wanneer onder druk te beoordelen. Het manuscript geeft een gedetailleerd protocol te beoordelen geïsoleerde segmenten van kleine mesenterische arteriën van ratten vaatactiviteit en het effect van de intraluminale druk op de vasculaire diameter.

Het beoordelen Myogene Response en vasoactiviteit In Resistance Mesenteriale slagaders behulp Pressure myography

Endotheliale dysfunctie wordt geassocieerd met tal van ziekten en is voorspellend voor ongunstige cardiovasculaire gebeurtenissen bij de mens. Flow-gemedieerde vaatverwijding (MKZ) is een niet-invasieve ultrasone methode voor het evalueren van de endotheelfunctie. Methodologische keuzes en de ervaring van de resultaten kunnen beïnvloeden. Een systematische aanpak van MKZ in menselijke studies wordt hier besproken.

Echografie Beoordeling van endotheel-afhankelijke Flow-gemedieerde vaatverwijding van de arteria brachialis in Clinical Research

We beschrijven een techniek voor het meten van de aortica-stijfheid uit zijn druk-diameter relatie in vivo bij muizen. De diameter van de aorta wordt geregistreerd door middel van echografie en de aortadruk wordt invasief gemeten met een solid-state drukkatheter. De bloeddruk wordt incrementeel gewijzigd en de resulterende diameter wordt gemeten.

Meten Oplopend stijfheid van de aorta In Vivo In Muizen met behulp van echografie

Videomicroscopy systemen worden gebruikt voor het onderzoeken van de functionele eigenschappen van geïsoleerde adipeus weefsel arteriolen in reactie op fysiologische en farmacologische stimuli. Deze techniek kan worden gebruikt om te onderzoeken microvasculaire fenotypen in verschillende adipeus weefsel domeinen bij zwaarlijvige mensen.

Beoordeling van menselijk vetweefsel microvasculaire functie met behulp van Videomicroscopy

Dit manuscript wordt beschreven in vitro videomicroscopie protocollen voor de beoordeling van de vasculaire functie in rat weerstand van de cerebrale bloedvaten. Het manuscript wordt ook beschreven technieken voor het evalueren van microvessel dichtheid met fluorescently geëtiketteerde lectine en weefsel perfusie met behulp van Laser Doppler flowmetrie.

Evaluatie van vasculaire controlemechanismen met behulp van videomicroscopie van geïsoleerde resistentie slagaders van ratten

De draad myograph techniek wordt gebruikt om vasculaire vlotte spier functies en de scherm nieuwe drugs te onderzoeken. Wij rapporteren een gedetailleerd protocol voor het meten van de isometrische contractility van de muis mesenterische slagader en voor het screenen van de nieuwe skeletspierrelaxantia van vasculaire glad spierweefsel.

Isometrische Contractility meting van de muis mesenterische slagader met behulp van draad Myography

Hoge intensiteit opleiding in hypoxie is een protocol dat voor het opwekken van vasculaire aanpassingen mogelijk gunstig is bij sommige patiënten en ter verbetering van de atleten herhaald sprint vermogen heeft bewezen. Hier, testen wij de haalbaarheid van opleiding muizen met behulp van dat protocol en identificeren die vasculaire aanpassingen met ex vivo vasculaire functie beoordeling.

Supramaximal hypoxische intensiteitsoefening en vasculaire functie beoordeling in muizen

Het protocol beschrijft het gebruik van draad myography te evalueren van de Transmurale isometrische spanning van mesenterica slagaders geïsoleerd van muizen, met speciale aandacht voor de modulatie door factoren vrijkomen van endothelial cellen en perivasculaire vetweefsel.

Beoordeling van de vasculaire Toon responsiviteit met behulp van geïsoleerde mesenterica slagaders met een focus op modulatie door Perivasculaire vetweefsel

Leer endotheelafhankelijke vasorelaxatie meten in de thoracale aorta van de muis met behulp van tensometrische myografie. Deze betrouwbare methode ondersteund vasculaire biologieonderzoek naar endotheelfunctie.

Meting van endotheelafhankelijke vasorelaxatie in de thoracale aorta van de muis met behulp van tensometrische kamermyografie met klein volume (Video) | JoVE Journal

Meting van endotheelafhankelijke vasorelaxatie in de thoracale aorta van de muis met behulp van tensometrische kamermyografie met klein volume

Meer video's verkennen