High-Speed Human Temporal Bone Sectioning voor de beoordeling van COVID-19-geassocieerde middenoorpathologie

Dit protocol verkort de tijd voor temporele botverwerking van 9 tot 10 maanden tot 10 tot 14 dagen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het de snelle beoordeling van otopathologie mogelijk maakt, wat in ons geval relevant is voor de beoordeling van COVID-19-geassocieerde middenoorpathologie. Deze techniek kan bijzonder nuttig zijn voor tijdgevoelige studies van het temporale bot.

In de toekomst kan het verder worden geoptimaliseerd voor gebruik bij het bestuderen van binnenoorpathologie. Begin de oogst tijdens de autopsie en verdeel de hersenzenuwen scherp naar de interne gehoorgang. Maak de eerste benige incisie met de osteotome parallel aan en net mediaal aan het plaveiselgedeelte van het temporale bot.

Voer vervolgens de tweede benige incisie parallel aan de eerste uit aan de mediale rand van het temporale bot. Maak de derde incisie op drie tot vier centimeter voorste en evenwijdig aan de petrousrug. Maak vervolgens de vierde incisie ongeveer evenwijdig aan de derde op twee centimeter na de petrousrug.

Gebruik scherpe dissectie om het zachte weefsel dat langs de inferieure rand van het monster is bevestigd te bevrijden en verwijder het temporale bot. Dompel na de oogst het weefsel onmiddellijk onder in 200 tot 300 milliliter van 10% gebufferd formaline. Zet vervolgens een precisiemicrozaag met dubbele diamantbladen op een afstand van vijf millimeter.

Voor snelle weefselontkalking snijdt u elk monster in drie secties, zodat het centrale deel van het temporale bot vijf millimeter dik is en die aan beide uiteinden drie tot vijf millimeter dik zijn. Plaats de secties in 200 tot 300 milliliter 0,37-molaire EDTA gedurende zeven tot 10 dagen bij kamertemperatuur om te verzachten. Hematoxyline- en eosinekleuring van het middenoorslijmvlies en de buis van Eustachius toonde aan dat het weefsel bewaard blijft na verwerking met behulp van dit protocol.

Immunohistochemische analyses toonden de aanwezigheid aan van ACE2, transmembraanprotease serine en furine-eiwitten in deze weefsels, die een mogelijke wortel vormen voor SARS-CoV2-infectie in het respiratoire epitheel van het middenoor. Het is belangrijk om het temporale botweefsel in de diamantzaag op de juiste manier te positioneren. Alternatieve technieken die met deze methode kunnen worden gecombineerd, zijn immunohistochemie voor verschillende eiwitten, verschillende weefselvlekken en transcriptomica.

Deze techniek stelde ons in staat om snel te beoordelen op de aanwezigheid van de eiwitten die betrokken zijn bij SARS-CoV2-infectie in het middenoor tijdens de COVID-19-pandemie.