Een strategie voor de studie van IL-9-producerende lymfoïde cellen in het Nippostrongylus brasiliensis infectiemodel
3 maart 2023
IL-9-tot expressie brengende T- en ILC2-cellen worden geïnduceerd tijdens N. brasiliensis-infectie , maar hun karakterisering is grotendeels over het hoofd gezien in de geïnfecteerde darm vanwege hun lage frequentie en differentiële kinetiek. Dit protocol beschrijft de isolatie van deze cellen uit verschillende doelorganen en de bevestiging van hun identiteit via flowcytometrie in verschillende infectiestadia.
Dit protocol maakt de isolatie en karakterisering mogelijk van lymfoïde cellen die IL-9 tot expressie brengen in N.brasiliensis niet-lymfoïde geïnfecteerde weefsels, inclusief de geïnfecteerde snede, die recentelijk technisch onzichtbaar was. Dit protocol biedt ook een alternatief om populaties cellen uit perifere weefsels te analyseren die voorheen niet werden opgemerkt bij infecties vanwege de intrinsieke moeilijkheden bij het isoleren van cellen uit deze anatomische locaties. Deze methode maakt de studie mogelijk van moeilijk te isoleren populaties uit N.brasiliensis geïnfecteerde snede en kan worden toegepast op andere worminfecties, waardoor ons begrip van haakworminfecties bij mensen wordt verbreid. Het demonstreren van de procedure zal door Ofelia Mu zijn
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's
Overzicht
Dit protocol beschrijft in detail de isolatie van IL-9-expresserende T-cellen en ILC2-cellen uit diverse doelorganen tijdens een N. brasiliensis-infectie. Er wordt nadruk gelegd op het belang van het karakteriseren van deze cellen, die grotendeels over het hoofd zijn gezien vanwege hun lage frequentie en differentiële kinetiek.
Belangrijkste componenten van de studie
Wetenschappelijk vakgebied
- Immunologie
- Infectieziekten
- Celbiologie
Achtergrond
- IL-9-exprimerende T- en ILC2-cellen spelen een rol bij immuunresponsen.
- Deze cellen worden geïnduceerd tijdens een N. brasiliensis-infectie.
- Karakterisering van deze cellen is cruciaal voor het begrijpen van hun functie.
- Een lage frequentie en differentiële kinetiek bemoeilijken hun studie.
Doel van de studie
- Om IL-9-exprimerende T- en ILC2-cellen uit geïnfecteerde weefsels te isoleren.
- Om de identiteit van deze cellen te bevestigen met behulp van flowcytometrie.
- Om de dynamiek van deze cellen in verschillende stadia van de infectie te onderzoeken.
Gebruikte methoden
- Isolatie van cellen uit verschillende doelorganen.
- Flowcytometrie voor celidentificatie.
- Analyse van celfrequentie en kinetiek tijdens infectie.
- Vergelijking van celpopulaties in verschillende stadia van de infectie.
Belangrijkste Resultaten
- Succesvolle isolatie van IL-9-expresserende T- en ILC2-cellen.
- Karakterisering van deze cellen bevestigd via flowcytometrie.
- Waarnemingen van differentiële kinetiek tijdens infectiestadia.
- Inzichten in de rol van deze cellen in de immuunrespons.
Conclusies
- IL-9-exprimerende T-cellen en ILC2-cellen zijn significant bij een N. brasiliensis-infectie.
- Karakterisering van deze cellen kan het begrip van immuunmechanismen verbeteren.
- Verder onderzoek is nodig om hun functionele rollen te verkennen.
Veelgestelde vragen
Industriële Relevantie voor Management
Nauwkeurige karakterisering van IL-9-producerende lymfoïde cellen in het Nippostrongylus brasiliensis-infectiemodel vult een kritisch gat in de deconvolutie van immuunpaden voor onderzoek naar helminthziekten. Dit protocol maakt gestandaardiseerde, reproduceerbare kwantificering van zeldzame immuuncelpopulaties in meerdere weefsels mogelijk, wat bijdraagt aan de voorspellende betrouwbaarheid bij vroege ontdekking en mechanische risicoreductie. De aanpak verbetert de besluitvorming binnen het portfolio door inzicht te geven in de kinetiek van immuuncellen en weefselspecifieke responsen die relevant zijn voor pipelines voor infectieziekten en inflammatoire aandoeningen.
Strategische Toepassingen in Biofarmaceutische R&D
Vroege Ontdekking & Targetvalidatie
- Maakt onderzoek mogelijk naar IL-9-gestuurde immuunpaden in ziekte-relevante weefsels.
- Ondersteunt functionele targetvalidatie door kwantificering van zeldzame lymfoïde celondergroepen.
- Faciliteert mechanische risicoreductie via kinetische profilering van immuunresponsen.
- Verbetert het voorspellend vertrouwen voor immuunmodulerende strategieën.
Screening & Assayontwikkeling
- Standaardiseert de isolatie en detectie van IL-9-expresserende cellen voor downstream-assays.
- Verbetert de reproduceerbaarheid van de assay door gedetailleerde celopbrengst en weefselspecifieke protocollen.
- Bereidt gevalideerde biologische systemen voor op compound-screening gericht op immuunroutes.
- Maakt kwantitatieve read-outs mogelijk voor de vergelijkende evaluatie van immunomodulatoren.
Translationeel & Preklinisch Onderzoek
- Rijgt immuuncelprofilering in lijn met ziekterelateerde modellen voor translationele continuïteit.
- Ondersteunt de ontdekking van biomarkers door IL-9 celkinetiek in kaart te brengen over verschillende infectiestadia.
- Informeert de risico-gecorrigeerde voortgang van immunotherapeutische kandidaten.
- Biedt mechanistische inzichten voor de selectie en validatie van preklinische modellen.
Integratie van Pipeline & Workflow
Dit protocol is geïntegreerd in het continuüm van ontdekking naar preklinisch onderzoek door robuuste profilering van immuuncellen in infectiemodellen mogelijk te maken, wat zowel de validatie van targets als translationeel onderzoek ondersteunt.
- Discovery Biology: Faciliteert hypothesetesten naar de betrokkenheid van het IL-9-pad bij de gastheerdefensie.
- Screening: Levert reproduceerbare, kwantitatieve resultaten voor assays op basis van immuuncellen.
- Analytics: Biedt flowcytometrie-metingen voor vergelijkingen tussen verschillende condities.
- Translationeel Onderzoek: Slaat een brug tussen ontdekkingsbevindingen en preklinische validatie in ziekterelevante systemen.
- Bedrijfmatige Herutilisatie: Vestigt een herbruikbaar protocol voor immuuncelanalyse in helminthische en verwante infectiemodellen.
Operationele & Bedrijfsimpact
- Wetenschappelijke waarde: Verhoogt het voorspellende vertrouwen en vermindert mechanistische ambiguïteit in studies naar immuunpaden.
- Operationele waarde: Bevordert standaardisatie, reproduceerbaarheid en schaalbaarheid van immuuncelassays.
- Strategische waarde: Maakt gefundeerde go/no-go-beslissingen en kapitaalefficiënte toewijzing van middelen mogelijk.
- Impact op portfolio: Ondersteunt risico-gecorrigeerde prioritering van immunomodulerende targets en kandidaten.
Overwegingen voor implementatie
- Vereist expertise in flowcytometrie en de isolatie van immuuncellen uit complexe weefsels.
- Vereist toegang tot gespecialiseerde instrumentatie voor cel-sortering en analyse.
- Maakt cross-team standaardisatie noodzakelijk voor de adoptie van het protocol en de vergelijkbaarheid van gegevens.
- Kan aanpassing vereisen voor verschillende weefseltypen of infectiemodellen.
- De celopbrengst en detectiesensitiviteit kunnen variëren per orgaan en infectiestadium.
Veelgestelde vragen over biofarmacie
Chapters in this video
0:05
Introduction
1:03
Isolation of Mediastinal Lymph Nodes, Lungs, Mesenteric Lymph Node Chains, and Small Intestine
2:37
Preparation of Single-Cell Suspensions from the Small Intestine, Lung, and Lymph Nodes
6:20
Results: Flow Cytometry Analysis and Gating Strategy for the Identification of Th9 Cells and IL-9+ ILC2 Cells
7:48
Conclusion
