Een calciumfosfaat-geïnduceerd muis abdominaal aorta-aneurysma model

Dit protocol beschrijft het calciumfosfaat geïnduceerde abdominale aorta-aneurysma triple A muismodel om de pathologische kenmerken in de moleculaire mechanismen van abdominaal aorta-aneurysma te bestuderen. Het calciumfosfaat geïnduceerde abdominale aorta-aneurysmamodel is een snel en kosteneffectief model in vergelijking met de angiotensinebuis en de door elastase geïnduceerde abdominale aorta-aneurysmamodellen. Het demonstreren van de procedure zal Zeyu Cai zijn, post-arts hier, een fellow van ons laboratorium.

Snijd om te beginnen 0,3 centimeter brede stroken poedervrije rubberen handschoenen en gaas. Koop vervolgens acht tot tien weken oude C57BL6J Mayo-muizen en huisvest de dieren in een omgeving met airconditioning met een 12 uur durende lichte donkere cyclus en gratis toegang tot voedsel en water. Autoclaaf vervolgens het gaas, wattenstaafjes, scharen en tang voorafgaand aan de operatie en verkrijg Betadine, 70% ethanol en antiseptische handwas.

Scheer de buikhaar van de verdoofde muis met een elektrische tondeuse of ontharingscrème. Veeg vervolgens het geschoren gebied af met Betadine, gevolgd door 70% ethanol meerdere keren in een cirkelvormige beweging. Maak vervolgens een incisie van ongeveer 1,5 centimeter bij de onderbuik langs de middellijn van de buik met behulp van een schaar.

Gebruik een steriel wattenstaafje bevochtigd met normale zoutoplossing en verwijder voorzichtig de darm totdat de infraroodaorta zichtbaar is. Ontleed vervolgens het bindweefsel en vet uit de infraroodaorta voor een gedeelte van ongeveer 0,5 centimeter terwijl u scheuren in de kleine bloedvaten naar de dorsale kant vermijdt. Pak vervolgens een stuk van de met zoutoplossing doordrenkte rubberen handschoenentrip onder de abdominale aorta en de abdominale hoofdader terwijl je overtollige vloeistof afveegt met een wattenstaafje.

Pak daarna een stuk gaas gedrenkt met 0,5 molair calciumchloride op de adventitia van de infrarood abdominale vasculatuur gedurende 10 minuten. Verwijder het gaas en pak een ander stuk gaas gedrenkt in PBS-oplossing gedurende vijf minuten om calciumorthopetumen in C2 te genereren in de adventitia van de aorta. Verwijder vervolgens voorzichtig de rubberen handschoenentrip en het gaas.

Na het resetten van het darmkanaal van de muis, hecht de buikincisie en de huid met een hechting van vijf nul. Plaats de muis vervolgens op een verwarmingskussen totdat de muis weer bij bewustzijn komt. Huis de muis nog 14 dagen en houd de muis na de operatie nauwlettend in de gaten en observeer daarna minstens elke dag.

Snijd na 14 dagen van de operatie de geëuthanaseerde thoracale en buikholtes van de muis ventraal open en snijd het rechter atrium open. Overvloedig de muizen met PBS-buffer door de linker ventrikel van het hart om bloed in de aorta te verwijderen en vervolgens te perfuseren met 4% paraformaldehyde zoals beschreven in het manuscript. Verwijder adventsweefsel en vet voorzichtig onder een stereomicroscoop.

Oogst vervolgens de aorta en plaats deze gedurende 48 uur in een buis met vijf milliliter 4% paraformaldehyde. Speld de aorta vervolgens op een zwarte wasplaat met insectennaalden en ga verder met het verkrijgen van aortabeelden. Na 14 dagen calciumorthopfosfaattoepassing werd de morfologie van de aorta's in beeld gebracht om de vorming van abdominale aorta-aneurysma's te visualiseren.

Er werd waargenomen dat calciumorthopfosfaat leidde tot verwijding van de infrarood abdominale aorta en resulteerde in een dramatische afbraak van elastische vezels zoals geïllustreerd door elastinebreuken. Gebruik een steriel wattenstaafje bevochtigd met normale zoutoplossing om de darm te verwijderen totdat de infraroodaorta zichtbaar is en extraheert vervolgens het bindweefsel en het vet uit de infraroodaorta. Over het algemeen is het door calciumfosforaat geïnduceerde muizen abdominale aorta-aneurysmamodel een snelle en kosteneffectieve benadering om moleculaire mechanismen en de therapeutische strategieën van abdominaal aorta-aneurysma te onderzoeken en kan parallel met de andere modellen worden toegepast om de kenmerken van menselijk abdominaal aorta-aneurysma volledig te imiteren.