Name: Generatie van een muis kunstmatig decidualisatiemodel met ovariëctomie voor endometriumdecidualisatieonderzoek (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-07-27T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 38 s
Description: Leer een kunstmatig decidualisatiemodel genereren met ovariëctomie bij muizen voor endometriumonderzoek. Deze methode biedt een betrouwbaar en reproduceerbaar dierlijk model om hormonale invloeden op decidualisatie te bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs willen de steun erkennen van de National Nature Science Foundation of China (82001629, XQS), de Youth Program of Natural Science Foundation van de provincie Jiangsu (BK20200116, XQS) en jiangsu province postdoctoral research funding (2021K277B, XQS).

Alle beschreven dierproeven werden goedgekeurd door het Affiliated Drum Tower Hospital van het Nanjing University Medical School's Committee on the Use and Care of Animals (nr. 20171202). Alle operaties volgen de juiste dierverzorgings- en gebruiksinstantie en nationale richtlijnen.
OPMERKING: Muizen werden grootgebracht in een specifieke pathogeenvrije (SPF) omgeving, met een temperatuur van 22 °C ± 1 °C, een relatieve vochtigheid van 50% ± 1%, een licht/donkercyclus van 12 uur/12 uur en vrije toegang tot voedsel en water.
1. Ovariëctomie bij muizen
<ol><li>Steriliseer de chirurgische instrumenten met een sterilisator voor hoge temperatuur en hoge druk 1 dag voor de operatie.</li>
	<li>Weeg 8 weken oude C57BL/6-muizen en injecteer intraperitoneaal (i.p) 1% natriumpentobarbital dienovereenkomstig om de muizen te verdoven. De gebruikte dosis is 40 mg/kg17. Deze dosis biedt 40-60 minuten sedatie, die voldoet aan de vereisten van een ovariëctomie. Voor preoperatieve analgesie, injecteer muizen met 5 mg / kg meloxicam (s.c). OPMERKING: Succesvolle anesthesie bij muizen kan worden aangegeven door het verdwijnen van diepe spierreflexen en een gestage ademhaling. Tekenen van succesvolle anesthesie zijn onder meer geen knipperen bij het aanraken van de binnenste canthus, niet slikken bij het trekken van de tong, geen beenbuiging bij het knijpen van de huid tussen de tenen en geen stuiteren bij het nodig hebben van de staart.</li>
	<li>Breng de beschermende oogzalf aan op de oogbollen om uitdroging tijdens de anesthesie te voorkomen.</li>
	<li>Start de operatie wanneer muizen volledig verdoofd zijn. Plaats en bevestig de muizen in buikligging op het operatieoppervlak en scheer het haar op de rug nadat je ze hebt bevochtigd met een sopje. Desinfecteer de huid na het scheren met 70% ethanol.</li>
	<li>Zoek de operatie-incisieplaats op 0,5 cm (of 1,0 cm onder de rib) op de bovenrand van de dijwortel van beide achterpoten evenwijdig aan de wervelkolom (figuur 1A). OPMERKING: Een juiste incisielocatie is essentieel voor het snel lokaliseren van de eierstok.</li>
	<li>Neem de incisieplaats als het midden en desinfecteer het incisiegebied 3x met jodophor en plaats vervolgens een chirurgisch gordijn rond het incisiegebied.</li>
	<li>Maak een longitudinale incisie van ongeveer 0,5-1,0 cm met een schaar. Snijd de fascia en scheid passief de spieren met een pincet.</li>
	<li>Zoek een stuk van het witte vetkussen in het incisieveld dicht bij de onderpool van de nier door de dunne spierlaag (figuur 1B). OPMERKING: Het witte vetkussen is de meest voor de hand liggende indicator van de locatie van de eierstok.</li>
	<li>Klem de vetmassa vast met hemostatische clips en trek de eierstok omwikkeld door het vetkussen uit de incisie.</li>
	<li>Klem de overgang van de eierstok en de eileider vast met een gebogen pincet en verwijder de eierstok langs de ovariële steel met een schaar. Stop het bloeden met behulp van een elektrocoagulatiepen of een naald van een spuit van 1 ml die op de alcohollamp wordt verwarmd. OPMERKING: Zorg ervoor dat u de eileider bewaart, die het anatomische oriëntatiepunt is voor de daaropvolgende injectie van sesamolie in de baarmoederhoorns.</li>
	<li>Spoel de chirurgische incisie met een normale zoutoplossing om weefselhechting te voorkomen, gebruik een hechting van 4-0 om respectievelijk de spier en de huid te naaien en desinfecteer de chirurgische incisie opnieuw met jodofor.</li>
	<li>Plaats de muizen in buikligging in de kooi en reanimeer ze gedurende ongeveer 2 uur in een incubator van 25 °C uitgerust met een lichtbron en een ventilatiesysteem.</li>
	<li>Let na de operatie op de muizen, zet ze alleen terug op de oorspronkelijke voederplaats totdat ze volledig herstellen en geef ze voldoende water en voedsel.</li>
</ol>2. Postoperatieve rust en oestrogeen- en progesteronformulering
<ol><li>Zorg ervoor dat de muizen 2 weken rusten na ovariëctomie.</li>
	<li>Voeg in een ultraschone kast oestrogeen (2 ng / μL) en progesteron (0,2 ng / μL) toe aan sesamolie in RNA-enzymvrije centrifugebuizen.</li>
	<li>Plaats de centrifugebuizen in een thermostatisch waterbad bij 37 °C en schud de buizen continu om het oplossen te versnellen.</li>
	<li>Na volledige oplossing verdeelt u de sesamolie-oplossing in 100 μL aliqouts voor gemakkelijk gebruik. Bewaar de bereide oestrogeen- en progesteronoplossingen in de koelkast bij 4 °C.</li>
</ol>3. Geïnduceerd kunstmatig decidualisatiemodel
<ol><li>Injecteer subcutaan (s.c) 100 ng oestrogeen in 50 μL sesamolie in elke muis gedurende 3 dagen, gevolgd door 2 dagen rust15. OPMERKING: Zorg ervoor dat het oestrogeen en progesteron zijn geformuleerd en op verschillende plaatsen zijn geplaatst. Elke besmetting van oestrogeen door progesteron kan leiden tot falen.</li>
	<li>Injecteer (s.c.) 1 mg progesteron en 10 ng oestrogeen in 50 μL sesamolie in elke muis gedurende nog eens 3 dagen15.</li>
	<li>Bedien de muizen om het kunstmatige decidualisatiemodel15 6 uur na de derde oestrogeen-progesteron gecombineerde injectie te induceren.</li>
	<li>Zoek de baarmoederhoorn aan de onderkant van de eileiders en injecteer 20 μL sesamolie langzaam samen met de baarmoederhoorn, duw het weefsel terug, hecht de incisie en laat de muis herstellen. De benadering van de operatie is hetzelfde als de ovariëctomie van de muis15. OPMERKING: Ga alleen verder met de tweede operatie in het geval van een succesvolle ovariëctomie (huidincisie is goed genezen, de eierstok is volledig weggesneden en het resterende uiteinde van de eileider is niet aan de omliggende weefsels gehecht). OPMERKING: Voor het induceren van het AD-model is 20 μL sesamolie geschikt; meer dan 20 μL sesamolie zal gemakkelijk de andere kant binnendringen.</li>
	<li>Injecteer (s.c.) 50 μL sesamolie met 1 mg progesteron en 10 ng oestrogeen (H.) gedurende nog eens 4 dagen. Zie details in figuur 215,18.</li>
</ol>4. Monsterverzameling
<ol><li>Euthanaseer de muizen (n = 6) door kooldioxide-verstikking en verzamel de baarmoeder. Observeer de vorm van de bilaterale uteri, maak foto's en weeg de baarmoederhoorns (figuur 3A, B).</li>
	<li>Bevestig 3-5 mm van het baarmoederweefsel met 10% formaline, sluit het in paraffine in en snijd ze. Kleuring de secties met hematoxyline en eosine om de morfologische veranderingen waar te nemen19 (figuur 4A).</li>
	<li>Sluit nog eens 3-5 mm van het baarmoederweefsel in in een optimale snijtemperatuurverbinding (OCT), vries in vloeibare stikstof en bewaar in een koelkast van −80 °C. Bevroren doorsnede het weefsel tot 10 μm en detecteer alkalische fosfatase-activiteit in het baarmoederweefsel met behulp van de azokoppelingsmethode20 (figuur 4B). OPMERKING: Bevredigende resultaten kunnen worden verkregen met behulp van bevroren secties om ALP-inhoud te detecteren, niet paraffinesecties.</li>
	<li>Extraheer de totale RNA's van de baarmoeder met Trizol-reagens en voer kwantitatieve real-time PCR (qPCR) uit op een real-time PCR-systeem (Table of Materials) met qPCR-mastermix (Table of Materials) om de relatieve mRNA-expressie van prolactinefamilie 8 subfamilielid 2 (Prl8a2), alkalische fosfataselever / bot / nier (Alpl) en insuline-achtig groeifactorbindend eiwit 1 (Igfbp1) 15 te detecteren door normalisatie naar 18S mRNA-niveaus (Figuur 4C-E ). Volg de PCR-voorwaarden: fase 1, 95 °C gedurende 30 s; Fase 2, 95 °C gedurende 10 s en 60 °C gedurende 30 s; Herhaal de cyclus 40x. Een volledige lijst van primersequenties is opgenomen in tabel 1.</li>
	<li>Analyseer qPCR-gegevens met behulp van de 2-ΔΔCT-methode en een t-testmethode voor statistische analyse in de juiste software. In deze studie werd p < 0,05 als statistisch significant beschouwd.</li>
</ol>

<ol><li>Carson, S. A., Kallen, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+and+management+of+infertility%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Diagnosis and management of infertility: A review.</a> JAMA. 326 (1), 65-76 (2021).</li>
<li>Yatsenko, S. A., Rajkovic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+of+human+female+infertility+dagger%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Genetics of human female infertility dagger.</a> Biology of Reproduction. 101 (3), 549-566 (2019).</li>
<li>Sang, Y., Li, Y., Xu, L., Li, D., Du, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+mechanisms+of+endometrial+decidualization+and+pregnancy-related+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biochimica+et+Biophysica+Sinica%22%5BJournal%5D)">Regulatory mechanisms of endometrial decidualization and pregnancy-related diseases.</a> Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 52 (2), 105-115 (2020).</li>
<li>Ng, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endometrial+decidualization%3A+The+primary+driver+of+pregnancy+health%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Endometrial decidualization: The primary driver of pregnancy health.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (11), 4092(2020).</li>
<li>Birgit, G., Brosens, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclic+decidualization+of+the+human+endometrium+in+reproductive+health+and+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrine+Reviews%22%5BJournal%5D)">Cyclic decidualization of the human endometrium in reproductive health and failure.</a> Endocrine Reviews. 35 (6), 851-905 (2014).</li>
<li>Owusu-Akyaw, A., Krishnamoorthy, K., Goldsmith, L. T., Morelli, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+mesenchymal-epithelial+transition+in+endometrial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction+Update%22%5BJournal%5D)">The role of mesenchymal-epithelial transition in endometrial function.</a> Human Reproduction Update. 25 (1), 114-133 (2019).</li>
<li>Paulson, E. E., Comizzoli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endometrial+receptivity+and+embryo+implantation+in+carnivores-commonalities+and+differences+with+other+mammalian+species%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Endometrial receptivity and embryo implantation in carnivores-commonalities and differences with other mammalian species.</a> Biology of Reproduction. 104 (4), 771-783 (2021).</li>
<li>Kelleher, A. M., Milano-Foster, J., Behura, S. K., Spencer, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uterine+glands+coordinate+on-time+embryo+implantation+and+impact+endometrial+decidualization+for+pregnancy+success%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Uterine glands coordinate on-time embryo implantation and impact endometrial decidualization for pregnancy success.</a> Nature Communications. 9 (1), 2435(2018).</li>
<li>Tian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attenuated+monoamine+oxidase+a+impairs+endometrial+receptivity+in+women+with+adenomyosis+via+downregulation+of+FOXO1dagger%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Attenuated monoamine oxidase a impairs endometrial receptivity in women with adenomyosis via downregulation of FOXO1dagger.</a> Biology of Reproduction. 105 (6), 1443-1457 (2021).</li>
<li>Large, M. J., DeMayo, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+regulation+of+embryo+implantation+and+endometrial+decidualization+by+progesterone+receptor+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">The regulation of embryo implantation and endometrial decidualization by progesterone receptor signaling.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 358 (2), 155-165 (2012).</li>
<li>Dunn, C. L., Kelly, R. W., Critchley, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decidualization+of+the+human+endometrial+stromal+cell%3A+an+enigmatic+transformation%5BTitle%5D)+AND+%22Reproductive+BioMedicine+Online%22%5BJournal%5D)">Decidualization of the human endometrial stromal cell: an enigmatic transformation.</a> Reproductive BioMedicine Online. 7 (2), 151-161 (2003).</li>
<li>Zhu, H., Hou, C. C., Luo, L. F., Hu, Y. J., Yang, W. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endometrial+stromal+cells+and+decidualized+stromal+cells%3A+Origins%2C+transformation+and+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Gene%22%5BJournal%5D)">Endometrial stromal cells and decidualized stromal cells: Origins, transformation and functions.</a> Gene. 551 (1), 1-14 (2014).</li>
<li>Jose, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endometrial+and+decidual+stromal+precursors+show+a+different+decidualization+capacity%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%22%5BJournal%5D)">Endometrial and decidual stromal precursors show a different decidualization capacity.</a> Reproduction. 160 (1), 83-91 (2020).</li>
<li>Pan-Castillo, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphophysical+dynamics+of+human+endometrial+cells+during+decidualization%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Morphophysical dynamics of human endometrial cells during decidualization.</a> Nanomedicine. 14 (7), 2235-2245 (2018).</li>
<li>Wang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+mouse+decidualization+models+at+the+molecular+level%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of mouse decidualization models at the molecular level.</a> Genes. 11 (8), 935(2020).</li>
<li>De Clercq, K., Hennes, A., Vriens, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+mouse+endometrial+epithelial+and+stromal+cells+for+in+vitro+decidualization%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation of mouse endometrial epithelial and stromal cells for in vitro decidualization.</a> Journal of Visualized Experiments. (121), e55168(2017).</li>
<li>Kerger, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvascular+oxygen+delivery+and+interstitial+oxygenation+during+sodium+pentobarbital+anesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Microvascular oxygen delivery and interstitial oxygenation during sodium pentobarbital anesthesia.</a> Anesthesiology. 86 (2), 372-386 (1997).</li>
<li>Filant, J., Spencer, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endometrial+glands+are+essential+for+blastocyst+implantation+and+decidualization+in+the+mouse+uterus%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Endometrial glands are essential for blastocyst implantation and decidualization in the mouse uterus.</a> Biology of Reproduction. 88 (4), 93(2013).</li>
<li>Sheng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mitochondrial+protease+LONP1+maintains+oocyte+development+and+survival+by+suppressing+nuclear+translocation+of+AIFM1+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">The mitochondrial protease LONP1 maintains oocyte development and survival by suppressing nuclear translocation of AIFM1 in mammals.</a> EBioMedicine. 75, 103790(2022).</li>
<li>Grogg, E., Pearse, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coupling+azo+dye+methods+for+histochemical+demonstration+of+alkaline+phosphatase%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Coupling azo dye methods for histochemical demonstration of alkaline phosphatase.</a> Nature. 170 (4327), 578-579 (1952).</li>
<li>Labarta, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+serum+and+endometrial+progesterone+in+determining+endometrial+receptivity%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Analysis of serum and endometrial progesterone in determining endometrial receptivity.</a> Human Reproduction. 36 (11), 2861-2870 (2021).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Decidualisatie bij muizen is een spontaan proces afhankelijk van de aanwezigheid van embryo's, wat verschilt van mensen. Het is echter gebleken dat kunstmatige stimulatie zoals baarmoederinjectie van glasparels en baarmoederscheuring decidualisatie van het baarmoederslijmvlies kan veroorzaken in plaats van embryo's. Bovendien ontdekten onderzoekers dat veel factoren decidual kunnen induceren of deelnemen aan decidualisatie, zoals de injectie van steroïde hormonen, prostaglandinen en groeiremmende factoren in de baarmoede...

Met de ontwikkeling van door de mens geassisteerde voortplantingstechnologie heeft het huidige klinische zwangerschapspercentage van in-vitrofertilisatie-embryotransfer (IVF-ET) dat van natuurlijke zwangerschap bereikt of zelfs overtroffen. Desondanks ondergaan veel patiënten in de klinische praktijk voor geassisteerde voortplanting nog steeds meerdere embryotransfers, maar slagen er niet in om de zwangerschap naar wens te bereiken. Het specifieke moleculaire mechanisme is echter nog steeds onduidelijk, dus klinische interventie is niet effectief, wat een van de belangrijke uitdagingen is voor reproductieve geneeskunde 1,2.
Endometriumfactoren zijn verantwoordelijk voor ongeveer tweederde van de oorzaken van IVF-falen3. Implantatie van menselijk embryo is verdeeld in drie fasen: positionering, adhesie en invasie 4,5,6. Het maternale endometrium ondergaat een reeks veranderingen om tegemoet te komen aan de komst van het embryo. Het vormen van een implantatie "vensterperiode" biedt gunstige omstandigheden voor embryo-implantatie 7,8.
Bij de meeste zoogdieren, nadat de blastocyst zich hecht aan het luminale epitheel van de baarmoeder, beginnen de stromale cellen rond de blastocyst zich snel te vermenigvuldigen en te differentiëren, en de snelle remodellering van het mesenchym verandert van vorm en functie, wat leidt tot embryo-implantatie 5,9,10. De snelle toename van het volume en gewicht van de plaats zorgt ervoor dat de blastocyst wordt ingebed in het baarmoederstroma, een proces dat bekend staat als decidualisatie11. Het endometriumstroma differentieert en remodelleert ter voorbereiding op de zwangerschap, terwijl de overgang van stromale cellen ruimte en nieuwe signaalverbindingen biedt voor deciduale cellen om hun functies uit te voeren12,13. Stromale cellen transformeren in deciduale cellen en scheiden veel iconische factoren af, zoals prolactine (PRL), insuline-achtig groeifactorbindend eiwit 1 (Igfbp1), enzovoort. Studies hebben aangetoond dat abnormale decidualisatie een van de belangrijkste redenen is voor het falen van embryo-implantatie, maar de oorzaak van abnormale decidualisatie is nog steeds onduidelijk en moet verder worden opgehelderd 1,14.
Het kunstmatige decidualisatiemodel van de muis is essentieel voor het bestuderen van het fysiologische proces en de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen aan decidualisatie. Kunstmatige decidualisatie (AD) verwijst voornamelijk naar het proces van endometriumdecidualisatie dat is vastgesteld door kunstmatige methoden om zwangerschap of de menstruatiecyclus te simuleren. In termen van morfologie is er weinig algemeen verschil tussen zwangerschapsdecidualisatie en kunstmatige decidualisatie15,16. De baarmoederklieren bestaan in het baarmoederslijmvlies voordat decidua zich vormen en verdwijnen na decidualisatie. Wat de genexpressie betreft, wordt slechts een klein verschil vastgesteld tussen natuurlijke zwangerschapsdecidualisatie (NPD) en AD15. Bijgevolg kan het kunstmatige decidualisatiemodel bij muizen zwangerschapsdecidualisatie simuleren om de onbekende pathogenese en nieuwe behandeling van menselijke reproductieve ziekten te verkennen.
NPD, AD en in vitro decidualisatie (IVD) zijn drie methoden om muisdecidualisatie te bereiken. Het NPD-model is afhankelijk van natuurlijke zwangerschap en ligt het dichtst bij de fysiologische toestand van de moeder, inclusief de effecten van embryo's. Het vergelijken van de verschillen tussen implantatie- en niet-implantatieplaatsen is een meer fysiologische en handige benadering voor het bestuderen van decidualisatie. Het AD-model werd ontwikkeld door een intra-uteriene injectie van sesamolie te gebruiken als een stimulerend middel om decidualisatie te induceren in een pseudopregnant vrouwelijke muis gepaard met vasectomie mannetjes om de impact van embryo's te voorkomen. Zowel NPD- als AD-modellen spelen een essentiële rol in verschillende onderzoeksdoeleinden, maar ze kunnen paringsfalen en verschillen binnen de groep niet voorkomen die worden veroorzaakt door de verschillende activiteiten van het maternale hormoonmetabolisme. IVD is een methode die afhankelijk is van de behandeling van gecombineerd oestrogeen en progesteron op cellulair niveau, waarvoor strengere experimentele omstandigheden en operationele capaciteit vereist zijn. Het in vitro model kan de decidual respons echter niet volledig simuleren onder fysiologische omstandigheden15. Daarom stellen we een eenvoudige en verbeterde inductiemethode voor die is aangepast van traditionele AD om het effect van endogene hormonen op decidualisatie te verminderen. Gebaseerd op het verzekeren van het succes van decidualisatie-inductie, is het dichter bij de fysiologische toestand en meer geschikt voor experimenten die embryofactoren moeten uitsluiten.

<table><tbody><tr><td>Estrogen</td><td>Sigma</td><td>E2758</td><td>Hormoonsupplement</td></tr><tr><td>Progesterone</td><td>Sigma</td><td>P0130</td><td>Hormoonsupplement</td></tr><tr><td>Sesame oil&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>S3547</td><td>Hormoonsupplement</td></tr><tr><td>Sodium pentobarbital&nbsp;</td><td>Dainippon Sumitomo Pharma Co.,Ltd.</td><td></td><td>Anesthesie</td></tr><tr><td>Meloxicam injectie</td><td>Qilu Animal Health Products Co., Ltd</td><td></td><td>Pijnstilling</td></tr><tr><td>Alkaline phophatase kleurkit(kaplow's/azo koppelingsmethode)</td><td>Solarbio</td><td>G1480</td><td>Alkaline phophatase kleur</td></tr><tr><td>Eosine</td><td>Servicebio</td><td>G1005-2</td><td>HE kleur</td></tr><tr><td>Hematoxylinen</td><td>Servicebio</td><td>G1005-1</td><td>HE kleur</td></tr><tr><td>ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix</td><td>Vazyme</td><td>Q711-02</td><td>qPCR</td></tr><tr><td>70% ethanol</td><td>Lircon</td><td>ZH1120090</td><td>Desinfect</td></tr><tr><td>Jodofoor</td><td>Runzekang</td><td>RZK-DF</td><td>Desinfect</td></tr><tr><td>Erytromycine oogzalf</td><td>Guangzhou Baiyunshan</td><td></td><td>Bescherming muisogen</td></tr><tr><td>4-0 hechtdraad</td><td>Ethicon</td><td>W329</td><td>Incisiesutuur</td></tr><tr><td>10% formaline</td><td>Yulu</td><td>L25010118</td><td>Weefselfixatie</td></tr><tr><td>Optimal cutting temperature compound</td><td>Sakura</td><td>4583</td><td>Sectie</td></tr><tr><td>Trizol reagens</td><td>Ambion</td><td>15596018</td><td>qPCR</td></tr></tbody></table>

generatie van een muis kunstmatig decidualisatiemodel met ovariëctomie voor endometriumdecidualisatieonderzoek

Generation of a Mouse Artificial Decidualization Model with Ovariectomy for Endometrial Decidualization Research

Endometriumdecidualisatie is een uniek differentiatieproces van het endometrium, nauw verwant aan menstruatie en zwangerschap. Aantasting van decidualisatie leidt tot verschillende endometriumstoornissen, zoals onvruchtbaarheid, terugkerende miskraam en vroeggeboorte. De ontwikkeling en het gebruik van het endometriumdecidualisatiemodel in reproductieve studies zijn al lange tijd een hoogtepunt voor reproductieve onderzoekers. De muis is uitgebreid gebruikt bij het bestuderen van voortplanting en decidualisatie. Er zijn drie gevestigde muismodellen met betrekking tot decidualisatie, namelijk natuurlijke zwangerschapsdecidualisatie (NPD), kunstmatige decidualisatie (AD) en in vitro decidualisatie (IVD). Onder hen wordt AD beschouwd als een betrouwbaar model voor muisdecidualisatie, dat gemakkelijk te implementeren is en dicht bij NPD ligt. Dit artikel richt zich op een aangepaste methode van het generatie- en toepassingsproces van het kunstmatige decidualisatiemodel van de muis met ovariëctomie om ovariële effecten te voorkomen, die zeer reproduceerbare resultaten kunnen verkrijgen met kleine variaties binnen de groep. Deze methode biedt een goed en betrouwbaar diermodel voor de studie van endometriumdecidualisatie.

De muis decidualisatie model indexen omvatten de algemene morfologie van de baarmoeder, de massaverhouding van de gedecidualiseerde en niet-gedecidualiseerde baarmoeder, de histologische morfologie van het endometrium en het expressieniveau van decidualisatie marker moleculen. De algemene morfologie van de kunstmatige gedecidualiseerde baarmoeder van muizen geïnduceerd door olie ligt dichter bij die van de baarmoeder tijdens de zwangerschap. Het baarmoederlichaam wordt dik en de baarmoederholte wordt kleiner dan de niet-...

Hier beschrijven we de methode voor het genereren van een kunstmatig decidualisatiemodel met behulp van de ovariëctomische muis, een klassiek endometriumdecidualisatie-experiment op het onderzoeksgebied van endometriumdecidualisatie.

Generatie van een muis kunstmatig decidualisatiemodel met ovariëctomie voor endometriumdecidualisatieonderzoek

Endometrial decidualization is a unique differentiation process of the endometrium, closely related to menstruation and pregnancy. Impairment of ...

Aantasting van de decentralisatie leidt tot virus van endometriumstoornissen zoals bij sterfte, een terugkerende miskraam. Deze methode biedt een goed en betrouwbaar diermodel voor de studie van endometriumdecentralisatie. Dit kunstmatige decentralisatiemodel met ovariëctomie kan de invloed van angelina op hormonen vermijden, wat vaak zeer reproduceerbare resultaten kan opleveren met kleine verschillen binnen de groep.Om te beginnen met het steriliseren van de chirurgische instrumenten met een hoge temperatuur en hoge druk sterilisator een dag voor de operatie. Breng de beschermende oogzalf aan op de oogbollen om uitdroging tijdens de anesthesie te voorkomen. Start de operatie wanneer muizen volledig verdoofd zijn.Plaats de muizen in buikligging op het operatieoppervlak en scheer het haar op de rug nadat je ze hebt bevochtigd met een sopje. Desinfecteer de huid met 70% ethanol. Zoek de operatie-incisieplaats op 0,5 centimeter aan de bovenrand van de dijwortel van beide achterpoten evenwijdig aan de wervelkolom.Neem de incisieplaats als het midden en desinfecteer het incisiegebied drie keer met jodophor. Maak een longitudinale incisie van ongeveer 0,5 tot één centimeter met een schaar. Snijd de fascia en scheid passief de spieren met een pincet.Zoek een stuk van het witte vetkussen in het incisieveld dicht bij de onderpool van de nier door de dunne spierlaag. Klem de vetmassa vast met hemostatische clips en trek de eierstok omwikkeld door het vetkussen uit de incisie. Klem de overgang van de eierstok en eileiders vast met een gebogen pincet en verwijder de eierstok langs de ovariële pedikel met een schaar.Stop het bloeden met behulp van een elektrocoagulatiepen of een naald van een spuit van één milliliter die op de alcohollamp wordt verwarmd. Spoel de chirurgische incisie met een normale zoutoplossing om weefselhechting te voorkomen. Gebruik een hechting van 4-0 om respectievelijk de spier en de huid te zaaien en desinfecteer de chirurgische incisie opnieuw met jodofor.Plaats de muizen in buikligging in de kooi en reanier ze in een couveuse van 25 graden Celsius. Voorzien van een lichtbron en ventilatiesysteem voor ongeveer twee uur. Let na de operatie op de muizen.Zet ze alleen terug op de oorspronkelijke voederplaats totdat ze volledig herstellen en geef ze voldoende water en voedsel. Injecteer subcutaan 100 nanogram oestrogeen in 50 microliter sesamolie in elke muis gedurende drie dagen gevolgd door twee dagen rust. Injecteer een milligram progesteron en 10 nanogram oestrogeen in 50 microliter sesamolie in elke muis gedurende nog eens drie dagen.Bedien de muizen om het kunstmatige residualisatiemodel zes uur na de derde gecombineerde injectie met oestrogeen progesteron te induceren. Zoek de baarmoederhoorn aan de onderkant van de eileiders en injecteer 20 microliter sesamolie langzaam langs de baarmoederhoorn. Duw het weefsel terug, hecht de incisie en laat de muis herstellen.Fixeer drie tot vijf milliliter van het baarmoederweefsel met 10% formaline ingebed in paraffine en snijd ze. Bevlek de secties met hematoxyline en eosine om de morfologische veranderingen waar te nemen. Sluit nog eens drie tot vijf millimeter van het baarmoederweefsel in optimale snijtemperatuur in, bevries in vloeibare stikstof en bewaar in een vriezer van min 80 graden Celsius.Bevroren sectie het weefsel in 10 micrometer en detecteer alkalische fosfatase-activiteit in het baarmoederweefsel door de Azo-koppelingsmethode. De algemene morfologie van de kunstmatige gedecentraliseerde baarmoeder van muizen geïnduceerd door olie ligt dichter bij die van de baarmoeder tijdens de zwangerschap. Het baarmoederlichaam wordt dik en de baarmoederholte wordt kleiner dan de niet-geïnduceerde kant.Het volume en gewicht van de geïnduceerde baarmoederhoorn zijn aanzienlijk hoger dan die van de niet-geïnduceerde kant. Hematoxyline en eosine kleuring van het baarmoederweefsel toonde aan dat de klieren verdwijnen en de eindendometriumstromale cellen op de geïnduceerde gescheurde gedifferentieerd in grote ronde cytoplasmatische en meerkernige decidual cellen met onduidelijke celgrenzen. De niet-geïnduceerde zijsecties tonen de morfologie van het endometriumweefsel onder een normale fysiologische toestand.Het resultaat van de Azo-koppelingsmethode toonde aan dat het alkalische fosfatasegehalte van de olie-geïnduceerde zijde significant hoger was dan dat van de niet-geïnduceerde zijde. De QPCR-resultaten toonden aan dat de mRNA-expressie van PRL-8-A-2, ALPL en IGFBP-1 in de geïnduceerde hoorn significant hoger was dan die in de niet-geïnduceerde, wat suggereert dat olie kunstmatige decentralisatie bij muizen kan induceren. Homo-suppletie is een langdurig proces dat speciale aandacht vereist, besmetting tussen homo's, wat de sleutel tot succes is.Op basis van dit model kan baarmoederhoorninjectie van Adenovirus worden uitgevoerd die het relevante mechanisme van specifieke moleculen die de residualisatie reguleren, kan bestuderen.

generation-mouse-artificial-decidualization-model-with-ovariectomy

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ontwikkelingsbiologie

Een beschrijving van de chirurgische inductie van endometriose bij muizen en ratten door auto-transplantatie van baarmoeder weefsel om de arteriële cascade van de intestinale mesenterium.

Muismodel van chirurgisch geïnduceerde Endometriose door Auto-transplantatie van baarmoeder weefsel

In this video, we describe a surgical procedure to harvest intact ovary from a mouse model.

Intact Ovary Harvest from Mouse: A Surgical Procedure to Isolate Complete Ovary from Murine Model

Deze studie presenteert een gestandaardiseerde en gevalideerde methode voor de isolatie en kweek van primaire muis endometriale stroma- en epitheelcellen, die kan worden gebruikt in een cocultuursysteem om in vitro decidualisatie te bestuderen.

Isolatie van Mouse Endometrial epitheliale en stromale cellen voor<em&gt; In Vitro</em&gt; decidualisatie

Deze studie geeft een gevalideerde en geoptimaliseerde procedure voor de isolatie en de cultuur van menselijke baarmoederslijmvlies stromale cellen uit te voeren in vitro decidualization assay. Verder biedt deze studie een gedetailleerde methode om efficiënt vechtpartij een specifiek gen siRNAs, waarbij in menselijk baarmoederslijmvlies stromale cellen.

Isolatie van menselijke baarmoederslijmvlies stromale cellen voor In Vitro Decidualization

Hier presenteren we een protocol voor live-imaging van fluorescently geëtiketteerde menselijke baarmoederslijmvlies fragmenten geënt in muizen. De methode kunt bestuderen van de gevolgen van de drugs van keuze voor endometriotic laesie grootte door middel van controle en kwantificering van de fluorescentie die wordt uitgestoten door de fluorescerende verslaggever op...

Noninvasive controle van de grootte van de laesie in een heteroloog muismodel van endometriose

Veel knaagdiermodellen van endometriose worden beperkt door technische complexiteit, reproduceerbaarheid en/of behoefte aan immuungecompromitteerde dieren of speciale reportermuizen. We presenteren een vereenvoudigd systeem van laesie-inductie met behulp van elke experimentele muis met een onafhankelijk verifieerbaar, objectief scoresysteem en zonder vereiste voor ovariëctomie of overlevingsoperaties.

Een syngeneïsch murinemodel van endometriose met natuurlijk fietsende muizen

Dit protocol beschrijft methodologieën om endometriumepitheelorganoïden van muizen vast te stellen voor genexpressie en histologische analyses.

Het vaststellen van 3D-endometriumorganoïden uit de baarmoeder van de muis

Zwangerschapsvorming is een dynamisch proces met complexe embryo- en baarmoederkruisverwijzing. De precieze bijdragen van de maternale baarmoederomgeving aan deze processen blijven een actief onderzoeksgebied. Hier worden gedetailleerde protocollen verstrekt om te helpen bij het ontwerpen van in vivo diermodellen om deze onderzoeksvragen aan te pakken.

Methoden voor het bestuderen van baarmoederbijdragen aan zwangerschapsinstelling in een ovariectomiemodel

Follikelstimulerend hormoon (FSH) in verschillende extragonadale weefsels en organen wordt in verband gebracht met de pathogenese van meerdere ziekten. Het ovariëctomische en met FSH behandelde muismodel (OVF) kan worden gebruikt om de extragonadale werking van FSH te onderzoeken.

Onderzoek naar onafhankelijke effecten van follikelstimulerend hormoon in vivo in een muismodel

Deze studie introduceert een nieuw muismodel dat speciaal is ontworpen om endometrioom te simuleren, een klinisch significant subtype van endometriose. Door gebruik te maken van C57BL/6J-muizen wil het model de pathofysiologische mechanismen die ten grondslag liggen aan endometrioomgerelateerde onvruchtbaarheid ophelderen en een verfijnd hulpmiddel bieden om de huidige kenniskloof in de reproductieve geneeskunde te overbruggen.

Oprichting van een experimenteel muismodel van endometrioom om de gerelateerde onvruchtbaarheid te bestuderen

Dit artikel beschrijft een gedetailleerd protocol voor het produceren van een betrouwbaar en reproduceerbaar dun baarmoederslijmvlies met een zeer laag sterftecijfer en minimale intra-uteriene verklevingen door binnen 1-3 minuten 95% ethanol in de baarmoeder van de muis te injecteren.

Een muismodel van dun endometrium opstellen

Leer een kunstmatig decidualisatiemodel genereren met ovariëctomie bij muizen voor endometriumonderzoek. Deze methode biedt een betrouwbaar en reproduceerbaar dierlijk model om hormonale invloeden op decidualisatie te bestuderen.

Generatie van een muis kunstmatig decidualisatiemodel met ovariëctomie voor endometriumdecidualisatieonderzoek

Meer video's verkennen