Name: Een gemodificeerd muizen heterotopisch harttransplantatieprotocol dat overeenkomt met hedendaagse normen voor aseptische techniek, anesthesie en analgesie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-09-28T13:20:00.000+00:00
Duration: 12 min 40 s
Description: Leer een gemodificeerde heterotopische harttransplantatie bij muizen met moderne aseptische techniek, anesthesie en analgesie. Dit economische model verbetert microchirurgische vaardigheden en bestudeert transplantatie-immuniteit.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs willen graag de uitstekende inspanningen erkennen van het dierenverzorgingspersoneel van de Universiteit van West-Australië en van het Harry Perkins Institute of Medical Research, wiens toewijding en expertise hebben bijgedragen aan de haalbaarheid en het succes van deze operaties.

<ol><li>Mann, F. C., Priestley, J. T., Markowitz, J., Yater, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+the+intact+mammalian+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Transplantation of the intact mammalian heart.</a> Archives of Surgery. 26 (2), 219-224 (1933).</li>
<li>Neptune, W. B., Cookson, B. A., Bailey, C. P., Appler, R., Rajkowski, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complete+homologous+heart+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22A.M.A.+Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Complete homologous heart transplantation.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 66 (2), 174-178 (1953).</li>
<li>Downie, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homotransplantation+of+the+dog+heart%5BTitle%5D)+AND+%22A.M.A.+Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Homotransplantation of the dog heart.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 66 (5), 624-636 (1953).</li>
<li>Blanco, G., Adam, A., Rodriguezperez, D., Fernandez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complete+homotransplantation+of+canine+heart+and+lungs%5BTitle%5D)+AND+%22A.M.A.+Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Complete homotransplantation of canine heart and lungs.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 76 (1), 20-23 (1958).</li>
<li>Abbott, C. P., Lindsey, E. S., Creech, O., Dewitt, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+heart+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">A technique for heart transplantation in the rat.</a> Archives of Surgery. 89, 645-652 (1964).</li>
<li>Ono, K., Lindsey, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+technique+of+heart+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Improved technique of heart transplantation in rats.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 57 (2), 225-229 (1969).</li>
<li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primarily+vascularized+allografts+of+hearts+in+mice.+The+role+of+H-2D%2C+H-2K%2C+and+non-H-2+antigens+in+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection.</a> Transplantation. 16 (4), 343-350 (1973).</li>
<li>Joffre, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+acute+and+chronic+allograft+rejection+with+CD4%2BCD25%2BFoxp3%2B+regulatory+T+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Prevention of acute and chronic allograft rejection with CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T lymphocytes.</a> Nature Medicine. 14 (1), 88-92 (2008).</li>
<li>Gregori, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+T+cells+induced+by+1+alpha%2C25-dihydroxyvitamin+D3+and+mycophenolate+mofetil+treatment+mediate+transplantation+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Regulatory T cells induced by 1 alpha,25-dihydroxyvitamin D3 and mycophenolate mofetil treatment mediate transplantation tolerance.</a> The Journal of Immunology. 167 (4), 1945-1953 (2001).</li>
<li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice%3A+Experience+of+3000+operations+by+one+surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Heart+and+Lung+Transplantation%22%5BJournal%5D)">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: Experience of 3000 operations by one surgeon.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 20 (10), 1123-1128 (2001).</li>
<li>Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+vascularized+murine+cardiac+transplantation+to+study+graft+arteriopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy.</a> Nature Protocols. 2 (3), 471-480 (2007).</li>
<li>Hoogstraten-Miller, S. L., Brown, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+in+aseptic+rodent+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Techniques in aseptic rodent surgery.</a> Current Protocols in Immunology. 82, 1-14 (2008).</li>
<li>Navarro, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+anesthesia%3A+The+art+and+science%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+Journal%22%5BJournal%5D)">Mouse anesthesia: The art and science.</a> ILAR Journal. , (2021).</li>
<li>Adams, S., Pacharinsak, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+anesthesia+and+analgesia%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Mouse+Biology%22%5BJournal%5D)">Mouse anesthesia and analgesia.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 5 (1), 51-63 (2015).</li>
<li>Australian code for the care and use of animals for scientific purposes. NHMRC. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.nhmrc.gov.au/about-us/publications/australian-code-care-and-use-animals-scientific-purposes">https://www.nhmrc.gov.au/about-us/publications/australian-code-care-and-use-animals-scientific-purposes</a> (2013).</li>
<li>Prosser, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+changes+to+tissue-resident+immunity+after+MHC-matched+and+MHC-mismatched+solid+organ+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Dynamic changes to tissue-resident immunity after MHC-matched and MHC-mismatched solid organ transplantation.</a> Cell Reports. 35 (7), 109141(2021).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen belangenconflicten bekend te maken.

Het murine orthotopische harttransplantatiemodel is een robuust preklinisch model dat voornamelijk wordt gebruikt om de effecten van MHC-mismatch op het niveau en de aard van immunologische afstoting en, meer recent, het effect van transplantatie op het behoud van immuniteit van transplantaatweefsel te onderzoeken16. Hoewel we in eerste instantie het Corry et al.7-protocol op de voet volgden, hebben we het protocol verfijnd om best-practice normen voor aseptische techniek, ...

We hebben veel van ons begrip van immunologie en transplantatie te danken aan onderzoek op basis van experimentele modellen van solide orgaantransplantatie met behulp van dierlijke proefpersonen. Sinds de eerste beschrijving van gevasculariseerde harttransplantatie bij zoogdieren1 hebben dergelijke modellen bijgedragen aan kennis in uiteenlopende domeinen, waaronder de therapeutische toepassing van hypothermie2, de voordelen van het gebruik van gespecialiseerde hechtingen3 en technieken voor totale long- en harthomotransplantaties4. De ontwikkeling van harttransplantatiemodellen bij ratten 5,6 bood bredere mogelijkheden voor immunologische experimenten vanwege de beschikbaarheid van verschillende foklijnen. Het aanzienlijk bredere scala aan beschikbare inteelt- en mutante muizenstammen bracht Corry et al.7 ertoe een techniek van murine heterotope harttransplantatie te ontwikkelen vanwege de aanzienlijke voordelen die dit bereik biedt voor transplantatieonderzoek. Dit model is op grote schaal gebruikt en heeft bijgedragen aan een beter begrip van transplantaatafstoting8 en therapeutica9. Sinds de eerste beschrijving is de techniek echter grotendeels ongewijzigd gebleven, afgezien van enkele kleine technische details zoals aanpassingen aan de positie van anastomotische sites10,11.
Sinds de integratie van de techniek van Corry et al.7 in onze experimenten, hebben we veelbelovende gebieden geïdentificeerd voor het verbeteren van het protocol, namelijk die van aseptische techniek, anesthesie en analgesie. Verwacht werd dat verbeteringen op deze gebieden een positief effect zouden hebben op de experimentele resultaten en het dierenwelzijn zouden verbeteren. Dit is eerder aangetoond wanneer aseptische techniek wordt gebruikt bij operaties met kleine dieren, omdat het helpt bij het verminderen van postoperatieve infecties12, wat niet alleen van invloed is op morbiditeit en mortaliteit, maar ook experimenten kan compromitteren die zijn ontworpen om de immuunrespons na transplantatiechirurgie te beoordelen. Vanuit een anesthesie- en analgetisch oogpunt helpt het gebruik van een verfijnd regime om de kosten voor dieren te verlagen en het ethische argument van dit chirurgische model in evenwicht te brengen door de pijn en het lijden van proefpersonen te verzachten. Verder beperken geschikte anesthesie en analgesie de pijngerelateerde stressrespons, waardoor de kwaliteit van postoperatief herstel wordt verbeterd en uiteindelijk het chirurgische succespercentage wordt verhoogd13.
Met als doel zowel het dierenwelzijn als de experimentele uitkomsten te verbeteren, is een protocol ontwikkeld met aanpassingen om deze hiaten te overbruggen. Dit protocol is aangepast aan het oorspronkelijk beschreven door Corry et al.7 met raadpleging van een veterinaire anesthesist en met inachtneming van zowel de effecten als de duur van de effecten van de farmacologische interventies die worden gebruikt in het anesthesie- en analgetische regime. De aanpak was gebaseerd op de principes van evenwichtige anesthesie en multimodale analgesie om passende perioperatieve zorg te garanderen14. Naast de toepassing van aseptische techniek werden de opioïde buprenorfine en het lokale verdovingsmiddel bupivacaïne preventief toegediend. Algemene anesthesie werd uitgevoerd met behulp van het inhalatie-anestheticum isofluraan.

<table><tbody><tr><td>2030 Rycroft irrigating cannula 30 G</td><td>McFarlane</td><td>56005HU</td><td></td></tr><tr><td>Braided surgical silk 7-0</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bulldog clamp curved - 35 mm&nbsp;</td><td>Roboz</td><td>RS-7441-5</td><td></td></tr><tr><td>Bupivacaine 0.25%&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo needle holder catch curved -&nbsp; 145 mm</td><td>Haag-Streit</td><td>11.62.15</td><td></td></tr><tr><td>Chlorhexidine 5% solution</td><td>Ebos</td><td>JJ61371</td><td></td></tr><tr><td>Cotton-tipped applicator - 7.5 cm</td><td>Dove</td><td>SN109510</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol 70% solution</td><td>Ebos</td><td>WH130192EE</td><td></td></tr><tr><td>Gauze 5 x 5 cm white</td><td>Aero</td><td>AGS50</td><td></td></tr><tr><td>Gelfoam 80 mm x 125 mm&nbsp;</td><td>Pfizer</td><td>7481D</td><td></td></tr><tr><td>Hair clipper</td><td>Wahl</td><td>9860L</td><td></td></tr><tr><td>Heparin 1,000 IU in 1 mL</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Iris SuperCut scissors straight - 11.5 cm&nbsp;&nbsp;</td><td>Inka Surgical&nbsp;</td><td>11550.11</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane vaporiser</td><td>Darvall</td><td>9176</td><td></td></tr><tr><td>Micro bulldog clamp - 3.7 cm</td><td>Greman</td><td>14119-G</td><td></td></tr><tr><td>Micro scissors curved 105 mm&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Micropore plain paper surgical tape - 2.5 cm wide</td><td>Ebos</td><td>7810L</td><td></td></tr><tr><td>Microsurgical scissors - curved tip</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Monofilament polyprolene suture - 5/0</td><td>Surgipro</td><td>P-205-X</td><td></td></tr><tr><td>Myweigh i101 Precision Scale 100 g x 0.005 g</td><td>Myweigh</td><td>Kit00053</td><td></td></tr><tr><td>Needle - 30 G x 0.5 inch</td><td>BD</td><td>BD304000</td><td></td></tr><tr><td>Needleholder 15 cm curved "super fine"</td><td>Surgical Specialists</td><td>ST-B-15-8.2</td><td></td></tr><tr><td>Nylene 10/0 x 15 cm on 3.8 mm 3/8 circle round bodied taper (diam 0.07mm) CV300</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Round body suture forceps curved 0.3 mm 120 mm</td><td>B. Braun</td><td>FD281R</td><td></td></tr><tr><td>Round body suture forceps straight 0.3 mm 120 mm</td><td>B. Braun</td><td>FD280R</td><td></td></tr><tr><td>Round handled vannas spring scissors-str/12.5 cm</td><td></td><td>15400-12</td><td></td></tr><tr><td>Spring scissors-Cvd Sm blades</td><td></td><td>15001-08</td><td></td></tr><tr><td>Stevens scissors blunt straight 110 mm</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Surgical backboard</td><td></td><td></td><td>Rigid laminated cardboard. 15 x 15 cm</td></tr><tr><td>Surgical drapes</td><td></td><td></td><td>Cut into two sizes. 25 cm x 25 cm, and 25 cm x 40 cm&nbsp;</td></tr><tr><td>Surgical microscope</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Syringe - 1 mL</td><td>BD</td><td>592696</td><td></td></tr><tr><td>Syringe - 3 mL</td><td>Leica</td><td>M651</td><td></td></tr><tr><td>Toothed forceps</td><td>BD</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>University of Wisconsin Solution</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Warming pad</td><td></td><td></td><td>Far infrared warming pad 20 x 25 cm</td></tr><tr><td>Westcott spring scissors</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Yasargil clip applier bayonet</td><td>Aesculap</td><td>FE582K</td><td></td></tr><tr><td>Yasargil titanium clip perm 6.6 mm</td><td>Aesculap</td><td>A19FT222T</td><td></td></tr><tr><td>Mouse usage</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Strain/SEX/Weight</td><td>Donor</td><td>Recipent</td><td></td></tr><tr><td>BALB/c, female, 19-23 g</td><td>7</td><td>21</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6, female, 17-20 g</td><td>7</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD45.1 BALB/c, female, 17-21 g</td><td>5</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

een gemodificeerd muizen heterotopisch harttransplantatieprotocol dat overeenkomt met hedendaagse normen voor aseptische techniek, anesthesie en analgesie

A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia

De ontwikkeling van experimentele modellen van harttransplantatie bij dieren heeft bijgedragen aan vele vooruitgang op het gebied van immunologie en solide orgaantransplantatie. Hoewel het heterotope gevasculariseerde murine harttransplantatiemodel aanvankelijk werd gebruikt in studies naar transplantaatafstoting met combinaties van niet-overeenkomende inteeltstammen, kan toegang tot genetisch gemodificeerde stammen en therapeutische modaliteiten krachtige nieuwe preklinische inzichten bieden. Fundamenteel is de chirurgische methodologie voor deze techniek niet veranderd sinds de ontwikkeling ervan, vooral met betrekking tot belangrijke factoren zoals aseptische techniek, anesthesie en analgesie, die materiële gevolgen hebben voor postoperatieve morbiditeit en mortaliteit. Bovendien wordt verwacht dat verbeteringen in perioperatief management zullen leiden tot verbeteringen in zowel dierenwelzijn als experimentele resultaten. Dit artikel rapporteert over een protocol dat is ontwikkeld in samenwerking met een materiedeskundige in veterinaire anesthesie en beschrijft de chirurgische techniek met de nadruk op perioperatief management. Daarnaast bespreken we de implicaties van deze verfijningen en geven we details over het oplossen van kritieke chirurgische stappen voor deze procedure.

Om de effectiviteit van de chirurgische techniek te bepalen bij het bevorderen van goede resultaten van wondgenezing en muisherstel, bepaalden vroege experimenten in het laboratorium de overlevingskenmerken van een reeks harttransplantaten met variabele immunogeniciteit voor de ontvanger. Deze omvatten congene (n = 5) en syngene (n = 5) grafts, die dezelfde major histocompatibility complex (MHC) markers delen als de ontvanger, en major mismatch grafts (n = 9), waarbij het transplantaat en de ontvanger verschillende MHC-m...

Dit artikel beschrijft een aangepaste techniek voor heterotope gevasculariseerde harttransplantatie met bijgewerkte aseptische techniek, analgesie en anesthesie.

Een gemodificeerd muizen heterotopisch harttransplantatieprotocol dat overeenkomt met hedendaagse normen voor aseptische techniek, anesthesie en analgesie

The development of experimental models of cardiac transplantation in animals has contributed to many advances in the fields of immunology and solid organ ...

Dit is een economisch en reproduceerbaar model van harttransplantatie. Het kan zowel worden gebruikt om microchirurgische vaardigheden te verbeteren als om het gebruik van genetisch gemodificeerde muizenstammen als donor of ontvanger mogelijk te maken. De techniek omvat in grote lijnen alle pijnbestrijding en anesthetische complexiteit van normale menselijke chirurgie om de morbiditeit na een operatie te beperken.Dit model is van cruciaal belang voor het bestuderen van chirurgisch geïnduceerde immuniteit, het effect van mismatch op transplantaatafstoting en de levensduur van transplantaties. De algemene chirurgische benaderingen van dit model kunnen in een gewijzigde vorm worden toegepast op andere solide orgaantransplantaties van muizen. Microscopische schaal en bijbehorende tijdsdruk zorgen voor een kleine foutmarge.De sleutel tot succes is regelmatig oefenen met professionele supervisie, waarbij specifieke feedback wordt gegeven op probleemgebieden. De procedure wordt gedemonstreerd door mevrouw Liu Liu, een onderzoeksassistent van mijn laboratorium. Dr.Wen Hua Huang, Ms.Jas Kaur en Ms.Xiao Zhang zullen de chirurgische ingrepen assisteren.Na het verdoven en verwijderen van de muis uit de inductiekamer, verwijdert u het haar door de ventrale buik nauw te scheren met behulp van een tondeuse. In het geval van de donor, scheer het gebied dat zich uitstrekt van de genitaliën tot de bovenste rand van de ventrale thorax. Zorg ervoor dat het geschoren gebied de midaxillaire lijn zijdelings bereikt.Controleer de temperatuur door een schoon gesmeerde rectale sonde in het rectum van het dier in te brengen en deze vervolgens met microporiëntape aan de operatieplaat te bevestigen. Beoordeel de anesthetische diepte door reacties te observeren op stimulatie van de poot of staart van druk uitgeoefend door traumatische tang, de palpebrale reflex en spiertonus. Meet de ademhalingsfrequentie door de beweging van de borstwand te observeren terwijl u de ademhalingsinspanning observeert om het getijdenvolume te beoordelen en bereken vervolgens de ademhalingsfrequentie zoals beschreven in het manuscript.Zodra de chirurgische site is gedesinfecteerd met steriele applicatoren met katoenpunt, brengt u chloorhexidine driemaal aan in een cirkelvormige beweging van het centrum van de chirurgische plaats naar de randen, gevolgd door een combinatie van chloorhexidine en ethanol in hetzelfde patroon. Bereid het chirurgische veld voor door steriele chirurgische gordijnen aan weerszijden van de operatieplaat te plaatsen als de plaats om steriele instrumenten te plaatsen. Nadat u een kleine ovaalvormige opening in het gordijn hebt gemaakt, plaatst u het fenestrated gordijn op de voorgestelde incisieplaats.Na het voorbereiden van het dier zoals eerder gedemonstreerd, breng je oogglijmiddel aan. Gebruik een 29-gauge insulinespuit langs de geplande incisieplaats, injecteer subcutaan een op gewicht gebaseerde dosis bupivacaïne in de ventrale buik en zoek naar een rechte lijn van zichtbare blebbing die de omvang van de geplande incisie bedekt. Gebruik vervolgens een steriel chirurgisch scalpelmes om een ventrale middellijnhuidincisie te maken onder acht keer vergroting.Zorg ervoor dat de laparotomie de onderbuik overspant tot aan de ribbenmarge. En plaats een retractor om het chirurgische veld te maximaliseren. Bevochtig het segment steriel gaas met verwarmde 0,9% natriumchlorideoplossing en plaats het op het superieure aspect van de chirurgische plaats.Gebruik nu vochtige steriele wattenstaafjes om de darmen voorzichtig te verwijderen. Leg ze bovenop dit gaas en wikkel het gaas om het orgel. Met behulp van een combinatie van katoenen applicatoren en ronde lichaamshechttangen, bevrijd en mobiliseer de abdominale aorta en inferieure vena cava uit omliggende weefsels met een stompe dissectietechniek.Zorg ervoor dat het vrije gebied zich tussen het infrarenale aspect van de vaten en boven de bifurcatie van de aorta bevindt. Nadat u de achterste buikvaten hebt geïdentificeerd, trekt u de aorta voorzichtig in een richting weg van de wervelkolom met behulp van een tang. Maak cefacalcaal een kanaal aan weerszijden van deze vaten door de gebogen tang achteraan naar de buikvaten te brengen.Ligate elk vat geïdentificeerd en gemobiliseerd in de geplande anastomotische zone met behulp van lengtes van 10-O nylon gebonden met instrumenten in de knopen van de chirurg met een extra worp. Isoleer de anastomotische plaats van circulatie door een chirurgische klem op het hoofd van het buikvat en de kokeruiteinden te installeren. Zorg ervoor dat de klemmen beide vaten in voldoende mate kruisen om volledige occlusie te garanderen.Gebruik een tang in de niet-dominante hand om de aorta stabiel te houden. Voer een aortotomie uit met behulp van een naald van 30 gauge aan het voorste aspect van de aorta. Verleng de aorthotomie met een microchirurgische schaar met rechte punt.Om adenotomie uit te voeren, gebruikt u een rechte tang en past u zachte anterieure tractie toe op de inferieure vena cava op het punt in lijn met het midden van de aortotomie. Gebruik een gebogen microchirurgische schaar met de concave kant naar buiten gericht om een segment van inferieure vena cava van gelijke lengte als de aortotomie te verwijderen. Was de binnenkant van de open bloedvaten met resterend bloed met gehepariniseerde natriumchlorideoplossing.Plaats het donorhart in de buik en zorg ervoor dat de opgaande aorta direct naast de abdominale aortomie ligt en het hart wordt gedraaid, zodat de longslagader kan worden overgetrokken voor de tweede anastomose. Plaats met behulp van 10-O nylon een verblijfhechting tussen de 12:00-positie van de aorthotomie en het overeenkomstige uiteinde van het lumen van de opgaande aorta. Gebruik een tang met rechte punt in een microchirurgische naaldhouder, bind deze vast met drie opeenvolgende worpen van de knoop van een chirurg en snijd de uiteinden door om ongeveer twee millimeter hechtdraad achter te laten.Plaats een tweede verblijfhechting tussen de 6:00-positie van de aorthotomie en het overeenkomstige aspect van de opgaande aorta. Omdat deze hechting ook als basis zal dienen voor volgende lopende hechtingen, laat je minstens 10 millimeter van de staart over voor de ultieme binding. Plaats een doorlopende lopende hechting van 10-O nylon op een oplopende manier om de anatomische rechterrand van de aortotomie en de overeenkomstige vrije rand van de opgaande aorta tegen te werken.Voer deze procedure zorgvuldig uit en gebruik ongeveer vier worpen voor deze lijn. Passeer het vrije uiteinde van de hechting rond de distale verblijfhechting voordat u een tweede doorlopende lopende hechting langs de anatomische linkerkant plaatst om de appositie met de resterende vrije rand van de aortomie te beïnvloeden. Bind de hechting aan de staart af met behulp van een chirurgenknoop met twee extra worpen.Plaats een verblijfhechting tussen de 12:00-positie van de inferieure vena cava, venotomie en het overeenkomstige uiteinde van het lumen van de longslagader. Plaats vanaf dit ankerpunt een doorlopende lopende hechting tussen de anatomische linkerrand van de longslagader en de overeenkomstige rand van de venotomie. Passeer de naald door de 6:00-positie van de venotomie en de overeenkomstige extremiteit van het lumen van de longslagader.Ga op een oplopende manier door de naald door de resterende vrije rand van de longslagader en anatomisch recht van de venotomie. Gebruik gemiddeld vier worpen voor deze lijn en teken vervolgens de laatste vrije randen van de longslagader en venotomie samen. Bind het vrije uiteinde van de hechtdraad aan het anker af en bind met behulp van een instrument de knoop van de chirurg met twee extra worpen en knip de extra draad door.Controleer de bloedvaten op draaien, wat de bloedstroom zou verstoren. Plaats gelschuim over de hechtlijn. Plaats er twee stukken gelschuim van ongeveer twee millimeter omheen en vorm zodat alle zichtbare hechtlijnen bedekt zijn.Laat de vaatklemmen los, te beginnen met de kokerklem en vervolgens de cephal-klem. Als een kleine hoeveelheid bloeding wordt verwacht, plaatst u preventief katoenen applicators over de anastomotische plaatsen om druk uit te oefenen. Controleer na het repareren van de zichtbare lekken het hart op pulsatie.Als het afwezig is, controleer dan de hartvaten op draaien, plaats vervolgens de darmen over en rond het hart en bevochtig de peritoneale holte met verwarmde natriumchlorideoplossing als deze droog lijkt. Met behulp van de continue niet-onderbroken techniek sluit u de buikholte met niet-absorbeerbare 6-O proleenmonofilament door eerst de spierlaag te hechten, gevolgd door de huid. Zodra de ontvanger uit de operatieplaat en uit de verdoving is verwijderd, dient u subcutaan een milliliter warme zoutoplossing toe en plaatst u de ontvanger in een voorbereide kooi met opwarming voor observatie volgens postoperatieve herstelprotocollen.Volledig herstel en acceptatie werden waargenomen in het geval van syngenetische en congene heterotope muizenharttransplantaties gedurende 100 dagen na de operatie. Snelle afstoting werd echter al zeven dagen na de operatie waargenomen in het geval van grote mismatched heterotope muizenharttransplantaties. Tijdens anastomose moet u zich bewust blijven van waar uw hechting zich bevindt binnen het chirurgische veld.Als u dit niet doet, kan dit leiden tot kritieke schade aan structuren of klitten van de hechtdraad. Deze microchirurgische technieken van dissectie en anastomose zijn zeer toepasbaar op andere chirurgische modellen van kleine zoogdieren, waaronder heterotope nier- en orthotopische levertransplantatie, waardoor onderzoekers transplantaatafstoting kunnen bestuderen.

a-modified-murine-heterotopic-heart-transplant-protocol-matching

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

De muis heterotope harttransplantatie model is bewezen door vele onderzoekers een belangrijke methode voor het bestuderen van de mechanismen van de afwijzing en immuunrespons worden. Echter, de betrokken technieken zijn nog steeds uitdagend. Door het wijzigen van standaard technieken die we hebben succes gehad met meer dan 1000 transplantaties.

Heterotope harttransplantatie in Muizen

Het murine cervicale harttransplantatie model is geschikt voor immunologische en ischemie-reperfusie schade studies. We pasten de procedure met een niet-hechtingsmanchet techniek en uitgevoerd meer dan 1000 succesvolle transplantaties met deze benadering.  Hierin geven we meer details van deze techniek om de video te vullen.

Muizen Baarmoederhalskanker harttransplantatie Model met een aangepaste manchet Techniek

Er wordt een techniek gedemonstreerd voor de microchirurgische procedure voor heterotope transplantatie van harten bij muizen, inclusief vereenvoudigde methoden voor donoroogst en anastomose van de bloedvaten van de ontvanger.

Een gewijzigde methode voor Heterotope Mouse Hart transplantatie

Het manuscript beschrijft de stappen die nodig zijn om de heterotopische harttransplantatie uit te voeren in de muis.

Muizen Heterotope Heart Transplant Techniek

De manchettechniek verkort en vergemakkelijkt het model van heterotope cervicale harttransplantatie bij muizen door technisch uitdagende hechtingsanastomosen van kleine bloedvaten te vermijden. De technische details die in dit videopapier worden getoond, zouden onderzoekers in staat moeten stellen dit model in hun laboratoria tot stand te brengen.

Heterotopische Cervical harttransplantatie in Muizen

We beschrijven een model van heterotopische buikharttransplantatie bij ratten, wat wijzigingen van de huidige strategieën impliceert, die leiden tot een vereenvoudigde chirurgische aanpak. Daarnaast beschrijven we een nieuw afstotingsmodel door in-ear injectie van vitale hartspiercellen, waardoor verdere transplantatie immunologische analyses bij ratten mogelijk zijn.

Een immunologisch model voor heterotopische hart- en hartspierceltransplantatie bij ratten

We introduceren een binnenband benadering van de manchettechniek voor muis cervicale heterotopische harttransplantatie om evert het vat over de manchet te helpen. We ontdekten dat de samenwerking tussen twee ervaren chirurgen de operatietijd aanzienlijk verkort.

Optimalisatie van de Cuff Techniek voor Murine Heart Transplantation

We presenteren een protocol voor het gebruik van een normotherme ex vivo sanguineuze perfusiesysteem voor de levering van therapeutica aan een volledig cardiaal allograft in een varkens heterotopisch harttransplantatiemodel.

Een porcine heterotopisch harttransplantatieprotocol voor de levering van therapeutica aan een cardiale allograft

In het huidige protocol wordt een muisharttransplantatiemodel gebruikt voor het onderzoeken van het mechanisme van cardiale allograftafstoting. In dit heterotope harttransplantatiemodel wordt de operatie-efficiëntie verbeterd en wordt de overleving van harttransplantaten verzekerd door een cervicale end-to-end anastomose van hartimplantatie met behulp van een gemodificeerde Cuff-techniek.

Een aangepaste manchettechniek voor muis cervicaal heterotopisch harttransplantatiemodel

Harttransplantatiemodellen bij muizen vertegenwoordigen waardevolle onderzoeksinstrumenten voor het bestuderen van de immunologie van transplantaties. Het huidige protocol beschrijft muis heterotopische cervicale harttransplantatie waarbij manchetten op de gemeenschappelijke halsslagader van de ontvanger en de longslagaderstam van de donor worden geplaatst om laminaire bloedstroom mogelijk te maken.

Muis heterotopische cervicale harttransplantatie met behulp van vasculaire manchetten

Dit protocol presenteert een vereenvoudigde, end-to-side hechtingsanastomosetechniek voor muis-cervicale harttransplantatie, en biedt een robuust en reproduceerbaar model voor het bestuderen van transplantatie-immunologie.

Cervicale heterotopische muisharttransplantatie met behulp van end-to-side anastomosetechniek om transplantatie-immunologie te bestuderen

Leer een gemodificeerde heterotopische harttransplantatie bij muizen met moderne aseptische techniek, anesthesie en analgesie. Dit economische model verbetert microchirurgische vaardigheden en bestudeert transplantatie-immuniteit.

Een gemodificeerd muizen heterotopisch harttransplantatieprotocol dat overeenkomt met hedendaagse normen voor aseptische techniek, anesthesie en analgesie (Video) | JoVE Journal

Een gemodificeerd muizen heterotopisch harttransplantatieprotocol dat overeenkomt met hedendaagse normen voor aseptische techniek, anesthesie en analgesie

Meer video's verkennen