Name: Automatische scheiding en verzameling van kankergerelateerde stoffen uit klinische monsters (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-01-13T14:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 49 s
Description: Leer een geautomatiseerd protocol voor de scheiding en verzameling van kankergerelateerde stoffen uit klinisch bloed. Deze methode minimaliseert contaminatie en maximaliseert de zuiverheid van celvrij DNA en circulerende tumorcellen voor downstream onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit manuscript werd gedeeltelijk ondersteund door het Korea Medical Device Development Fund (KMDF, Grant No. RS-2020-KD000019) en het Korea Health Industry Development Institute (KHIDI, Grant No. HI19C0521020020).

Alle volbloedmonsters werden verkregen van longkankerpatiënten. Het onderzoek en de analyse bij Clinomics worden uitgevoerd door het Cancer Genomics Research Institute en de goedkeuring van het IRB-onderzoek door de overheid wordt geleid door de Asan Medical Center Institutional Review Committee (IRB NO. 2021-0802) met het IRB-nummer geregistreerd voor onderzoek bij Clinomics.
1. Monstervoorbereiding
<ol><li>Verzamel 9 ml volbloed in een EDTA- of cfDNA-stabiele bloedafnamebuis.</li>
	<li>Meng goed door de buis ongeveer 10 keer op en neer te draaien.</li>
	<li>Bewaar de monsters bij kamertemperatuur (RT; voor kortdurende opslag) of 4 °C (voor langdurige opslag). Niet invriezen en ontdooien.</li>
</ol>2. Voorbereiding van het apparaat
<ol><li>Druk op de aan/uit-schakelaar om het instrument in te schakelen. OPMERKING: Er verschijnt een laadscherm op het touchpad en het instrument wordt geïnitialiseerd. Houd de handen uit de buurt van het instrument tijdens de initialisatie. Het cartridgeselectiescherm wordt weergegeven nadat de initialisatie van het instrument is voltooid.</li>
	<li>Selecteer de voorbeeldmodus die u wilt gebruiken. Wijzig het aantal voorbeelden door op de pijl te drukken.</li>
</ol>3. Werking van het apparaat en monsterverzameling
<ol><li>Laden van de LBx-1 cartridge<ol><li>Selecteer het type cartridge op het touchscreenpaneel van het instrument. Wijzig het aantal voorbeelden door op de pijlknop te drukken.</li>
		<li>Open de deur van het instrument en plaats alle te gebruiken patronen in volgorde van het nummer op de patroonhouder. Zorg ervoor dat u de cartridge en de cartridgehouder correct plaatst. Als de patroon niet correct is geplaatst, kan dit aanzienlijke schade aan het instrument veroorzaken.</li>
		<li>Voor in totaal vier cartridges plaatst u de dummycartridge in de lege ruimte van de cartridgehouder.</li>
		<li>Gebruik het steunwiel om de cartridge te monteren en draai de borgmoer vast om deze vast te zetten.</li>
		<li>Sluit de deur en druk op de RUN-knop op het touchpad-scherm. Het instrument sluit de kleppen op de patronen, wat ongeveer 30 s duurt.</li>
		<li>Volg het bericht om de deur te openen, verwijder het steunwiel en verwijder de met de klep gesloten cartridge uit de cartridgehouder.</li>
		<li>Plaats de patroon op tafel en bereid voor om het volbloedmonster te injecteren. Pipetteer maximaal 10 ml volbloedmonster met behulp van een serologische pipet. LET OP: Gevaren van het omgaan met bloed. Tijdens de hele procedure van het hanteren van bloedmonsters en reagentia, is het belangrijk om een laboratoriumjas en laboratoriumhandschoenen te dragen. Het verstrekte VIB moet grondig worden bestudeerd door de laboratoriummedewerkers.</li>
		<li>Steek de pipetpunt diep in de monsterinlaat van de patroon en injecteer langzaam het volbloedmonster. OPMERKING Bij gebruik van meer dan of gelijk aan 9 ml volbloedmonster is geen toevoeging van fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) nodig. Wanneer u minder dan 9 ml volbloedmonster gebruikt, voeg pbs toe om het totale volume op 9 ml te brengen. Als u bijvoorbeeld 7,2 ml volbloed gebruikt, voeg dan 1,8 ml PBS toe aan de monsterinlaat. Een serologische pipet of een pipetpunt kan worden gebruikt voor de injectie van volbloed en PBS. Bij gebruik van minder dan 8 ml volbloedmonster, kan de buffy vacht niet worden hersteld, zelfs niet door 1 ml PBS toe te voegen. Gebruik voor gDNA-voorbereiding 200 μL volbloed, dat vóór deze stap werd gescheiden.</li>
		<li>Plaats de te gebruiken cartridges in volgorde van het nummer op de cartridgehouder. Gebruik het steunwiel om de cartridge te monteren en draai de borgmoer vast om deze vast te zetten. Sluit de deur en druk op de knop OK . OPMERKING: Plasma en buffy vacht worden automatisch gescheiden van volbloed, wat ongeveer 30 minuten duurt. LET OP Gevaar tijdens gebruik. Het openen van de deur of het aanraken van het instrument tijdens roterende operaties met hoge snelheid kan ernstige verwondingen veroorzaken. Er is ook een risico op letsel als gevolg van asymmetrische belasting van de rotor. Als ongebruikelijke trillingen en geluiden optreden wanneer het instrument begint in de geassisteerde celverrijking of expertmodus, kan de plaatsing van de cartridge asymmetrisch zijn. Druk onmiddellijk op de aan/uit-toets om de cartridge te stoppen en correct te installeren.</li>
		<li>Zoek naar het bericht op het scherm vergezeld van een alarmgeluid, dat verschijnt wanneer de scheiding van plasma en buffy coat is voltooid.</li>
		<li>Stop het alarm door de deur te openen of op de STOP-knop te drukken. Open de deur, verwijder de patroon en plaats deze op tafel.</li>
		<li>Herstel 3 ml plasma uit de plasma-uitlaat met behulp van een pipetpunt van 1 ml. Herstel de buffy laag van 3 ml uit de buffy coat outlet met behulp van een 1 ml pipetpunt.</li>
	</ol></li>
	<li>De LBx-2 cartridge plaatsen<ol><li>Selecteer de naam van de cartridge op het aanraakscherm van het instrument. Wijzig het aantal voorbeelden door op de pijlknop te drukken.</li>
		<li>Open de deur en plaats de te gebruiken cartridges in volgorde van het nummer op de cartridgehouder.</li>
		<li>Voor in totaal vier cartridges plaatst u de dummycartridge in de lege ruimte van de cartridgehouder.</li>
		<li>Gebruik het steunwiel om de cartridge te monteren en draai de borgmoer vast om deze vast te zetten. Zorg ervoor dat u de cartridge correct in de cartridgehouder plaatst. Als de patroon niet correct is geplaatst, kan dit aanzienlijke schade aan het instrument veroorzaken.</li>
		<li>Sluit de deur en druk op de RUN-knop op het touchpad-scherm. Het instrument sluit de kleppen op de cartridge, wat ongeveer 30 s duurt.</li>
		<li>Volg het bericht om de deur te openen, verwijder het steunwiel en verwijder de klepdichte cartridge uit de cartridgehouder en plaats deze op tafel.</li>
		<li>Plaats de patroon op tafel en bereid u voor om de dichtheidsgradiëntoplossing en het volbloedmonster te injecteren. Controleer het volume van de dichtheidsgradiëntoplossing en pbs die moeten worden geïnjecteerd, afhankelijk van het volume van het volbloedmonster (aanvullende tabel 1).</li>
		<li>Pipetteer de dichtheidsgradiëntoplossing met behulp van een serologische pipet. Steek de pipetpunt diep in de inlaat van de patroon en injecteer langzaam de oplossing voor de dichtheidsgradiënt.</li>
		<li>Na het injecteren van de dichtheidsgradiëntoplossing pipetteert u het volbloedmonster met een serologische pipet. Steek de pipetpunt diep in de monsterinlaat van de patroon en injecteer langzaam het volbloedmonster. OPMERKING: Wanneer u minder dan 9 ml van het volbloedmonster gebruikt, voeg PBS toe door naar deze tabel te verwijzen (aanvullende tabel 1).</li>
		<li>Plaats de te gebruiken cartridges in volgorde volgens het nummer op de cartridgehouder. Gebruik het steunwiel om de cartridge te monteren en draai de borgmoer vast om deze vast te zetten. Sluit de deur en druk op de knop OK .</li>
		<li>Plasma en PBMC worden automatisch gescheiden van volbloed, wat ongeveer 30 minuten duurt. Zoek naar het bericht dat verschijnt vergezeld van een alarmgeluid, wanneer de scheiding van plasma en PBMC is voltooid.</li>
		<li>Stop het alarm door de deur te openen of op de STOP-knop te drukken. Open de deur, verwijder de patroon en plaats deze op tafel.</li>
		<li>Herstel 3 ml plasma uit de plasma-uitlaat met behulp van een pipetpunt van 1 ml. Herstel 3 ml van de PBMC uit de PBMC-uitlaat met behulp van een pipetpunt van 1 ml.</li>
	</ol></li>
	<li>De FAST-auto cartridge laden<ol><li>Selecteer de cartridge op het aanraakscherm van het instrument. Wijzig het aantal voorbeelden door op de pijlknop te drukken.</li>
		<li>Open de deur en plaats de te gebruiken cartridges in volgorde van het nummer op de cartridgehouder. Voor in totaal vier cartridges plaatst u de dummycartridge in de lege ruimte van de cartridgehouder.</li>
		<li>Gebruik het steunwiel om de cartridge te monteren en draai de borgmoer vast om deze vast te zetten.</li>
		<li>Sluit de deur en druk op de KNOP RUN op het scherm van het touchpad. Het instrument sluit de kleppen op de cartridge, wat ongeveer 30 s duurt.</li>
		<li>Volg het bericht om de deur te openen, verwijder het steunwiel en verwijder de met de klep gesloten cartridge uit de cartridgehouder.</li>
		<li>Plaats de patroon op tafel en bereid u voor op het injecteren van de PBS-oplossing en het volbloedmonster. Pipet 6 ml PBS-oplossing met behulp van een serologische pipet. Steek de pipetpunt diep in de PBS-inlaat van de cartridge en injecteer langzaam 6 ml van de PBS-oplossing.</li>
		<li>Na het injecteren van de PBS-oplossing pipet u 3 ml volbloed of PBMC-monster verkregen uit LBx-2 met behulp van een serologische pipet, die eerder werd gespoeld met 1% BSA om kleven van het residu te voorkomen. Steek de pipetpunt diep in de monsterinlaat van de patroon en injecteer langzaam het volbloedmonster.</li>
		<li>Plaats de te gebruiken cartridges in volgorde van het nummer op de cartridgehouder. Gebruik het steunwiel om de cartridge te monteren en draai de borgmoer vast om deze vast te zetten. Sluit de deur en druk op de knop OK .</li>
		<li>CTC's worden automatisch verrijkt uit volbloed, wat ongeveer 15 minuten duurt. Zoek naar een bericht dat vergezeld gaat van een alarmgeluid wanneer de verrijking van CTC's is voltooid. Stop het alarm door de deur te openen of op de STOP-knop te drukken.</li>
		<li>Open de deur, verwijder de patroon en plaats deze op tafel. Steek de achterplaatverwijderaar (BPR) in de vier gaten aan de voorkant van de cartridge. Druk op de donkerblauwe vleugel met de duimen van beide handen en druk vervolgens op het lichtblauwe lichaam totdat het klikt.</li>
		<li>Verwijder de cartridgebehuizing voorzichtig door deze op te tillen. Pak het filtermembraan heel voorzichtig aan de rand op met een pincet. Zorg ervoor dat u de buitenrand (het 1 mm brede randgedeelte) van het filtermembraan gebruikt om het filtermembraan te knijpen en vast te houden.</li>
		<li>Plaats het filtermembraan (waarop verrijkte CTC's zich bevinden) voorzichtig in een buis van 1,5 ml voor nucleïnezuurbereiding. Herstel indien nodig het gefilterde bloed naar de bloeduitlaat met behulp van een pipetpunt van 1 ml.</li>
	</ol></li>
</ol>4. Onderhoud van het systeem
<ol><li>Voorbereiding voor reiniging en desinfectie van het instrument<ol><li>Reinig alle toegankelijke oppervlakken van het instrument en de accessoires eenmaal per week met behulp van ethanol en gedroogd weefsel, en ook onmiddellijk wanneer besmet.</li>
		<li>Reinig de kom en rotorschacht regelmatig met alcohol (ethanol en isopropanol) of ontsmettingsmiddelen op basis van alcohol.</li>
	</ol></li>
	<li>Reinigen en desinfecteren van het instrument OPMERKING: Voor algemene probleemoplossing en andere opmerkingen over het apparaat raadpleegt u Aanvullende tabel 2.<ol><li>Schakel het instrument uit met behulp van de hoofdschakelaar. Koppel de stekker los van de voeding.</li>
		<li>Open de deur en reinig en desinfecteer alle toegankelijke oppervlakken van het instrument, inclusief de stroomkabel, met een vochtige doek en de aanbevolen reinigingsmiddelen.</li>
		<li>Controleer de rotoras op schade. Inspecteer het instrument op corrosie en schade.</li>
		<li>Sluit het instrument alleen aan op de voeding als het van binnen en van buiten volledig droog is.</li>
	</ol></li>
	<li>Koppel de stekker los en verwijder de zekeringhouder. De zekeringhouder bevindt zich boven het stopcontact. Vervang de gebruikte zekering door een reservezekering uit de container.</li>
</ol>

<ol><li>Babayan, A., Pantel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+liquid+biopsy+approaches+for+early+detection+and+monitoring+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Medicine%22%5BJournal%5D)">Advances in liquid biopsy approaches for early detection and monitoring of cancer.</a> Genome Medicine. 10 (1), 21(2018).</li>
<li>Crowley, E., Di Nicolantonio, F., Loupakis, F., Bardelli, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liquid+biopsy%3A+monitoring+cancer-genetics+in+the+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Liquid biopsy: monitoring cancer-genetics in the blood.</a> Nature Reviews Clinical Oncology. 10 (8), 472-484 (2013).</li>
<li>Bardelli, A., Pantel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liquid+biopsies%2C+what+we+do+not+know+%28yet%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Liquid biopsies, what we do not know (yet).</a> Cancer Cell. 31 (2), 172-179 (2017).</li>
<li>Mattox, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+liquid+biopsies+for+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Applications of liquid biopsies for cancer.</a> Science Translational Medicine. 11 (507), (2019).</li>
<li>Heitzer, E., Perakis, S., Geigl, J. B., Speicher, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+of+liquid+biopsies+for+the+early+detection+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Precision+Oncology%22%5BJournal%5D)">The potential of liquid biopsies for the early detection of cancer.</a> NPJ Precision Oncology. 1 (1), 36(2017).</li>
<li>Scudellari, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myths+that+will+not+die%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Myths that will not die.</a> Nature. 582 (7582), 322-326 (2015).</li>
<li>Prasad, V., Fojo, T., Brada, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precision+oncology%3A+origins%2C+optimism%2C+and+potential%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Oncology%22%5BJournal%5D)">Precision oncology: origins, optimism, and potential.</a> The Lancet Oncology. 17 (2), 81-86 (2016).</li>
<li>Prasad, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perspective%3A+The+precision-oncology+illusion%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Perspective: The precision-oncology illusion.</a> Nature. 537 (7619), 63(2016).</li>
<li>Siravegna, G., Marsoni, S., Siena, S., Bardelli, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrating+liquid+biopsies+into+the+management+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Integrating liquid biopsies into the management of cancer.</a> Nature Reviews Clinical Oncology. 14 (9), 531-548 (2017).</li>
<li>Bettegowda, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+circulating+tumor+DNA+in+early-and+late-stage+human+malignancies%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Detection of circulating tumor DNA in early-and late-stage human malignancies.</a> Science Translational Medicine. 6 (224), 24(2014).</li>
<li>Udomruk, S., Orrapin, S., Pruksakorn, D., Chaiyawat, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size+distribution+of+cell-free+DNA+in+oncology%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Reviews+in+Oncology%2FHematology%22%5BJournal%5D)">Size distribution of cell-free DNA in oncology.</a> Critical Reviews in Oncology/Hematology. 166, 103455(2021).</li>
<li>Paterlini-Brechot, P., Benali, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+tumor+cells+%28CTC%29+detection%3A+clinical+impact+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">Circulating tumor cells (CTC) detection: clinical impact and future directions.</a> Cancer Letters. 253 (2), 180-204 (2007).</li>
<li>Loeian, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liquid+biopsy+using+the+nanotube-CTC-chip%3A+capture+of+invasive+CTCs+with+high+purity+using+preferential+adherence+in+breast+cancer+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">Liquid biopsy using the nanotube-CTC-chip: capture of invasive CTCs with high purity using preferential adherence in breast cancer patients.</a> Lab on a Chip. 19 (11), 1899-1915 (2019).</li>
<li>Rikkert, L. G., Van Der Pol, E., Van Leeuwen, T. G., Nieuwland, R., Coumans, F. A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Centrifugation+affects+the+purity+of+liquid+biopsy-based+tumor+biomarkers%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+Part+A%22%5BJournal%5D)">Centrifugation affects the purity of liquid biopsy-based tumor biomarkers.</a> Cytometry Part A. 93 (12), 1207-1212 (2018).</li>
<li>Sharma, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+tumor+cell+isolation%2C+culture%2C+and+downstream+molecular+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+advances%22%5BJournal%5D)">Circulating tumor cell isolation, culture, and downstream molecular analysis.</a> Biotechnology advances. 36 (4), 1063-1078 (2018).</li>
<li>Bennett, C. W., Berchem, G., Kim, Y. J., El-Khoury, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free+DNA+and+next-generation+sequencing+in+the+service+of+personalized+medicine+for+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Cell-free DNA and next-generation sequencing in the service of personalized medicine for lung cancer.</a> Oncotarget. 7 (43), 71013(2016).</li>
<li>Lowes, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+tumor+cells+%28CTC%29+and+cell-free+DNA+%28cfDNA%29+workshop+2016%3A+scientific+opportunities+and+logistics+for+cancer+clinical+trial+incorporation%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Circulating tumor cells (CTC) and cell-free DNA (cfDNA) workshop 2016: scientific opportunities and logistics for cancer clinical trial incorporation.</a> International Journal of Molecular Sciences. 17 (9), 1505(2016).</li>
<li>Bryzgunova, O. E., Konoshenko, M. Y., Laktionov, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concentration+of+cell-free+DNA+in+different+tumor+types%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Molecular+Diagnostics%22%5BJournal%5D)">Concentration of cell-free DNA in different tumor types.</a> Expert Review of Molecular Diagnostics. 21 (1), 63-75 (2021).</li>
<li>Park, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+tumour+cells+as+an+indicator+of+early+and+systemic+recurrence+after+surgical+resection+in+pancreatic+ductal+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Circulating tumour cells as an indicator of early and systemic recurrence after surgical resection in pancreatic ductal adenocarcinoma.</a> Scientific Reports. 11 (1), 1-12 (2021).</li>
<li>Heidrich, I., Ačkar, L., Mossahebi Mohammadi, P., Pantel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liquid+biopsies%3A+Potential+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Liquid biopsies: Potential and challenges.</a> International Journal of Cancer. 148 (3), 528-545 (2021).</li>
<li>Celec, P., Vlková, B., Lauková, L., Bábíčková, J., Boor, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free+DNA%3A+the+role+in+pathophysiology+and+as+a+biomarker+in+kidney+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Reviews+in+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cell-free DNA: the role in pathophysiology and as a biomarker in kidney diseases.</a> Expert Reviews in Molecular Medicine. 20, 1(2018).</li>
<li>Thierry, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origin+and+quantification+of+circulating+DNA+in+mice+with+human+colorectal+cancer+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Research%22%5BJournal%5D)">Origin and quantification of circulating DNA in mice with human colorectal cancer xenografts.</a> Nucleic Acids Research. 38 (18), 6159-6175 (2010).</li>
<li>Moreira, V. G., de la Cera Martínez, T., Gonzalez, E. G., Garcia, B. P., Menendez, F. V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increase+in+and+clearance+of+cell-free+plasma+DNA+in+hemodialysis+quantified+by+real-time+PCR%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Chemistry+and+Laboratory+Medicine+%28CCLM%29%22%5BJournal%5D)">Increase in and clearance of cell-free plasma DNA in hemodialysis quantified by real-time PCR.</a> Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (CCLM). 44 (12), 1410-1415 (2006).</li>
<li>Gauthier, V. J., Tyler, L. N., Mannik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+clearance+kinetics+and+liver+uptake+of+mononucleosomes+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Blood clearance kinetics and liver uptake of mononucleosomes in mice.</a> Journal of Immunology. 156 (3), 1151-1156 (1996).</li>
<li>Meng, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+tumor+cells+in+patients+with+breast+cancer+dormancy%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Circulating tumor cells in patients with breast cancer dormancy.</a> Clinical Cancer Research. 10 (24), 8152-8162 (2004).</li>
<li>Alix-Panabières, C., Pantel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+in+circulating+tumour+cell+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">Challenges in circulating tumour cell research.</a> Nature Reviews Cancer. 14 (9), 623-631 (2014).</li>
<li>Zhou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+circulating+tumor+cells+in+non-small-cell-lung-cancer+patients+using+a+multi-flow+microfluidic+channel%5BTitle%5D)+AND+%22Microsystems+%26+Nanoengineering%22%5BJournal%5D)">Isolation of circulating tumor cells in non-small-cell-lung-cancer patients using a multi-flow microfluidic channel.</a> Microsystems & Nanoengineering. 5 (1), 8(2019).</li>
<li>Sajay, B. N. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+an+optimal+and+unbiased+approach+for+tumor+cell+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Microdevices%22%5BJournal%5D)">Towards an optimal and unbiased approach for tumor cell isolation.</a> Biomedical Microdevices. 15 (4), 699-709 (2013).</li>
<li>Bailey, P. C., Martin, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+on+CTC+biology+and+clinical+impact+emerging+from+advances+in+capture+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Insights on CTC biology and clinical impact emerging from advances in capture technology.</a> Cells. 8 (6), 553(2019).</li>
<li>Ahn, S. M., Simpson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Body+fluid+proteomics%3A+Prospects+for+biomarker+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics-Clinical+Applications%22%5BJournal%5D)">Body fluid proteomics: Prospects for biomarker discovery.</a> Proteomics-Clinical Applications. 1 (9), 1004-1015 (2007).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen belangenconflicten met betrekking tot dit werk.

De hoeveelheid en concentratie van cfDNA en CTC hangt af van het individu, het stadium en het type kanker. Het hangt ook af van de toestand van de patiënt 2,4,5,10,20. Met name in de vroege of precancereuze stadia van kanker zijn de concentraties van kankergerelateerde stoffen erg laag, dus er is een grote kans dat het niet kan worden gedetecteerd. Niettemin h...

Vroege en nauwkeurige detectie van verschillende ziekten, waaronder kanker, is de belangrijkste factor bij het vaststellen van een behandelingsstrategie 1,2,3,4. Met name vroege opsporing van kanker hangt nauw samen met verhoogde overlevingskansen voor de patiënt 5,6,7,8. Onlangs hebben vloeibare biopsieën in de schijnwerpers gestaan voor de vroege opsporing van kanker. Solide tumoren ondergaan angiogenese en geven verschillende stoffen af aan het bloed. Met name circulerende DNA's (ctDNA's), circulerende RNA's (ctRNA's), eiwitten, blaasjes zoals exosomen en circulerende tumorcellen (CTC's) zijn gevonden in het bloed van kankerpatiënten 2,9. Hoewel er verschillen zijn in de hoeveelheid van deze stoffen, worden ze consequent waargenomen, niet alleen in de vroege stadia, maar ook in de latere stadia 6,10. Deze individuele verschillen zijn echter erg groot; de hoeveelheid celvrij DNA (cfDNA) dat ctDNA bevat, is bijvoorbeeld minder dan 1.000 ng en het aantal CTC's is minder dan 100 in 10 ml volbloed van kankerpatiënten 11,12,13. Veel studies hebben kanker gekarakteriseerd met behulp van deze stoffen die in kleinere hoeveelheden aanwezig zijn (d.w.z. cfDNA, ctDNA en CTC's). Om nauwkeurige resultaten te verkrijgen, is het belangrijk om kleine hoeveelheden stoffen met een hoge zuiverheid13,14 nauwkeurig te scheiden. Conventionele centrifugatiemethoden worden vaak gebruikt, maar ze zijn moeilijk te hanteren en hebben een lage zuiverheid, afhankelijk van de vaardigheid van de gebruiker. Sinds de ontdekking van CTC's zijn verschillende scheidingstechnieken ontwikkeld, zoals centrifugatie of scheiding van dichtheidsgraad, immunokraal en microfluïdische methoden. Sinds de ontdekking van CTC's zijn er verschillende containmenttechnieken ontwikkeld. Deze technieken zijn echter vaak beperkt wanneer het nodig is om cellen te isoleren van de verschillende chips en membranen die worden gebruikt om ze te isoleren15. Ook vereisen de tagging-methoden apparatuur zoals FACS en zijn er grenzen aan het downstream-proces als gevolg van tagging-verontreiniging.
Onlangs is het gebruik van vloeibare biopsieën toegenomen en worden er verschillende onderzoeken uitgevoerd voor de vroege opsporing van kanker. Hoewel deze methode eenvoudig is, zijn er nog steeds moeilijkheden bij downstream-analyse en verschillende studies proberen deze moeilijkheden te overwinnen 16,17. Bovendien vereisen veel sites, waaronder ziekenhuizen, geautomatiseerde, reproduceerbare en zeer zuivere methoden die gemakkelijk te gebruiken zijn. Hier hebben we een lab-on-a-disc ontwikkeld voor de geautomatiseerde scheiding van stoffen uit bloedmonsters na een vloeibare biopsie. Deze apparaten zijn gebaseerd op het principe van centrifugatie, microfluïdica en celopname ter grootte van een porie. Er zijn drie soorten schijven: LBx-1 kan plasma en buffy coat verkrijgen, terwijl LBx-2 plasma en PBMC kan verkrijgen uit volbloed met een volume van minder dan 10 ml; FAST-auto kan ook CTC's verkrijgen met behulp van een membraan dat van de schijf kan worden verwijderd. Maximaal vier van elke schijf kunnen in één keer worden gebruikt. Bovenal is het voordeel van dit apparaat en deze methode dat het een verscheidenheid aan van kanker afgeleide stoffen uit hetzelfde monster kan verkrijgen met behulp van een kleine hoeveelheid bloed. Dit betekent dat het bloed van de patiënt slechts één keer hoeft te worden afgenomen. Bovendien heeft het het voordeel dat fouten als gevolg van verschillen in de bloedafnameperiode worden uitgesloten. Dit platform is eenvoudig te gebruiken en biedt nauwkeurige resultaten voor vloeibare biopsieën en downstream-toepassingen. In dit protocol wordt het gebruik van het apparaat en de cartridge geïntroduceerd.

<table><tbody><tr><td>1% BSA (Bovine Serum Albumin)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A3059</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL Microcentrifuge Tube</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-C-S</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Conical Tube</td><td>SPL</td><td>50015</td><td></td></tr><tr><td>4150 TapeStation System</td><td>Agilent</td><td>G2992AA</td><td>Cell-free DNA Screen Tape (Agilent, 5067-5630), Cell-free DNA Sample Buffer (Agilent, 5067-5633)</td></tr><tr><td>Apostle MiniMax High Efficiency Cell-Free DNA Isolation Kit&nbsp;</td><td>Apostle</td><td>A17622-250</td><td>5 mL X 50 preps version</td></tr><tr><td>BD Vacutainer blood collection tubes</td><td>BD</td><td>367525</td><td>EDTA Blood Collection Tube (10 mL)</td></tr><tr><td>BioViewCCBS</td><td>Clinomics</td><td></td><td>BioView Clinomics-Customized Bioview System. Allegro Plus microscope-based customization equipment</td></tr><tr><td>CD45 Monoclonal Antibody (HI30), PE-Alexa Fluor 610</td><td>Invitrogen</td><td>MHCD4522</td><td></td></tr><tr><td>FAST Auto cartridge</td><td>Clinomics</td><td>CLX-M3001</td><td></td></tr><tr><td>LBx-1 cartridge</td><td>Clinomics</td><td>CLX-M4101</td><td></td></tr><tr><td>LBx-2 cartridge</td><td>Clinomics</td><td>CLX-M4201</td><td></td></tr><tr><td>OPR-2000 instrument</td><td>Clinomics</td><td>CLX-I2001</td><td></td></tr><tr><td>Cover Glass</td><td>Marienfeld Superior</td><td>HSU-0101040</td><td></td></tr><tr><td>DynaMag 2 Magnet Stand</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12321D</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll Paque Solution</td><td>GE healthcare</td><td>17-1440-03</td><td>density gradient solution</td></tr><tr><td>Filter Tip, 10 &micro;L</td><td>Axygen</td><td>AX-TF-10</td><td>Pipette tips with aerosol barriers are recommended to help prevent cross contamination.</td></tr><tr><td>Filter Tip, 200 &micro;L</td><td>Axygen</td><td>AX-TF-200</td><td>Pipette tips with aerosol barriers are recommended to help prevent cross contamination.</td></tr><tr><td>Filter Tip, 100 &micro;L</td><td>Axygen</td><td>AX-TF-100</td><td>Pipette tips with aerosol barriers are recommended to help prevent cross contamination.</td></tr><tr><td>Filter Tip, 1000 &micro;L</td><td>Axygen</td><td>AX-TF-1000</td><td>Pipette tips with aerosol barriers are recommended to help prevent cross contamination.</td></tr><tr><td>FITC anti-human CD326 (EpCAM) Antibody</td><td>BioLegend</td><td>324204</td><td></td></tr><tr><td>FITC Mouse Anti-Human Cytokeratin</td><td>BD Biosciences</td><td>347653</td><td></td></tr><tr><td>Formaldehyde solution (35 wt. % in H2O)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>433284</td><td></td></tr><tr><td>Kimtech Science Wipers</td><td>Yuhan-Kimberly</td><td>41117</td><td></td></tr><tr><td>Latex glove</td><td>Microflex</td><td>63-754</td><td></td></tr><tr><td>Magnetic Bead Separation Rack</td><td>V&amp;P Scientific</td><td>VP 772F2M-2</td><td></td></tr><tr><td>Manual Pipetting&nbsp; (0.5-10 &micro;L)</td><td>Eppendorf</td><td>3120000020</td><td></td></tr><tr><td>Manual Pipetting&nbsp; (2-20 &micro;L)</td><td>Eppendorf</td><td>3120000038</td><td></td></tr><tr><td>Manual Pipetting&nbsp; (10-100 &micro;L)</td><td>Eppendorf</td><td>3120000046</td><td></td></tr><tr><td>Manual Pipetting&nbsp; (20-200 &micro;L)</td><td>Eppendorf</td><td>3120000054</td><td></td></tr><tr><td>Manual Pipetting&nbsp; (100-1000 &micro;L)</td><td>Eppendorf</td><td>3120000062</td><td></td></tr><tr><td>Mounting Medium With DAPI&nbsp; - Aqueous, Fluoroshield</td><td>abcam</td><td>ab104139</td><td></td></tr><tr><td>Normal Human IgG Control</td><td>R&amp;D Systems</td><td>1-001-A</td><td></td></tr><tr><td>OLYMPUS BX-UCB</td><td>Olympus</td><td>9217316</td><td></td></tr><tr><td>Pan Cytokeratin Monoclonal Antibody (AE1/AE3), Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>53-9003-82</td><td></td></tr><tr><td>PBS (Phosphate Buffered Saline Solution)</td><td>Corning</td><td>21-040CVC</td><td></td></tr><tr><td>Portable Pipet Aid</td><td>Drummond</td><td>4-000-201</td><td></td></tr><tr><td>Slide Glass</td><td>Marienfeld Superior</td><td>HSU-1000612</td><td></td></tr><tr><td>StainTray Staining box</td><td>Simport</td><td>M920</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Serological Pipette (10 mL)</td><td>SPL</td><td>91010</td><td></td></tr><tr><td>Triton&nbsp;X-100 solution</td><td>Sigma Aldrich</td><td>93443</td><td></td></tr><tr><td>TWEEN&nbsp;20</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P7949</td><td></td></tr><tr><td>Whole Blood</td><td></td><td></td><td>Stored at 4-8 &deg;C by collecting in EDTA or cfDNA stable tube : If the whole blood is insufficient in 9 mL, add PBS (phosphate buffered saline) as much as necessary.</td></tr><tr><td>X-Cite 120Q (Fluorescence Lamp Illuminator)</td><td>Excelitas</td><td>010-00157</td><td></td></tr></tbody></table>

automatische scheiding en verzameling van kankergerelateerde stoffen uit klinische monsters

Automatic Separation and Collection of Cancer-Related Substances from Clinical Samples

Onlangs zijn vloeibare biopsieën gebruikt om verschillende ziekten te diagnosticeren, waaronder kanker. Lichaamsvloeistoffen bevatten veel stoffen, waaronder cellen, eiwitten en nucleïnezuren afkomstig uit normale weefsels, maar sommige van deze stoffen zijn ook afkomstig uit het zieke gebied. Het onderzoek en de analyse van deze stoffen in de lichaamsvloeistoffen spelen een cruciale rol bij de diagnose van verschillende ziekten. Daarom is het belangrijk om de vereiste stoffen nauwkeurig te scheiden en worden verschillende technieken ontwikkeld om voor dit doel te worden gebruikt.
We hebben een lab-on-a-disc type apparaat en platform ontwikkeld met de naam CD-PRIME. Dit apparaat is geautomatiseerd en heeft goede resultaten voor monstervervuiling en monsterstabiliteit. Bovendien heeft het voordelen van een goede acquisitieopbrengst, een korte bedrijfstijd en een hoge reproduceerbaarheid. Bovendien kunnen, afhankelijk van het type schijf dat moet worden gemonteerd, plasma met celvrij DNA, circulerende tumorcellen, perifere mononucleaire bloedcellen of buffy-lagen worden gescheiden. Zo kan de verwerving van een verscheidenheid aan materialen die aanwezig zijn in de lichaamsvloeistoffen worden gedaan voor een verscheidenheid aan downstream-toepassingen, waaronder de studie van omics.

Het doel van deze techniek is om kankergerelateerde stoffen gemakkelijk en automatisch te isoleren uit volbloed. In het bijzonder kan iedereen deze techniek gebruiken in alle geschikte gebieden van onderzoek en analyse. De gelijktijdige en reproduceerbare scheiding van meerdere stoffen in een enkel bloedmonster is significant in vloeibare biopten. De LBx-1 en LBx-2 schijven worden gebruikt voor het isoleren van plasma en buffy coat of PBMC uit volbloed. Figuur 1 toont de materialen gescheide...

Dit artikel beschrijft de toepassing van geautomatiseerde apparatuur om stoffen, zoals celvrij DNA en circulerende tumorcellen, eenvoudig en efficiënt te scheiden en te verzamelen uit volbloed.

Automatische scheiding en verzameling van kankergerelateerde stoffen uit klinische monsters

Recently, liquid biopsies have been used to diagnose various diseases, including cancer. Body fluids contain many substances, including cells, proteins, ...

Ons protocol is gebruiksvriendelijk. Met behulp van deze techniek kan iedereen gemakkelijk componenten uit het bloed isoleren. Vervuiling kan worden geminimaliseerd en materialen kunnen nauwkeurig worden gescheiden.Met automatisering en de vaststelling van dit protocol kunnen onderzoekers gemakkelijk kankergerelateerde stoffen met een hoge zuiverheid verkrijgen, wat nuttig is voor verschillende downstream-studies. In het bijzonder wordt verwacht dat het belangrijke voordelen zal bieden voor eindgebruikersonderzoek. Jay Jeong, een senior onderzoeker en assistent-manager bij het Cancer Genomics Research Institute, demonstreert hun procedure.Om te beginnen laadt u de LBx 1-cartridge door het cartridgetype te selecteren op het touchscreenpaneel van het instrument. Druk op de pijlknop om het aantal monsters te wijzigen. Open vervolgens de instrumentdeur en plaats alle te gebruiken cartridges in volgorde van het nummer op de cartridgehouder.Voor in totaal vier cartridges plaatst u de dummycartridge in de lege ruimte van de cartridgehouder. Gebruik het steunwiel om de cartridge te monteren en draai de borgmoer vast om deze vast te zetten. Sluit de deur en druk op de run-knop op het touchpad-scherm.Het instrument sluit de kleppen op de patronen, wat ongeveer 30 seconden duurt. Volg het bericht om de deur te openen. Verwijder het steunwiel en verwijder de met de klep gesloten cartridge uit de cartridgehouder.Pipetteer maximaal 10 milliliter van een volbloedmonster met behulp van een serologische pipet. Steek de pipetpunt diep in de monsterinlaat van de patroon en injecteer langzaam het volbloedmonster. Nadat u de patronen in het instrument hebt geplaatst, sluit u de deur van het instrument en drukt u op de knop OK.Plasma en buffy jassen worden automatisch gescheiden van volbloed, wat ongeveer 30 minuten duurt. Zodra het plasma en de buffy coat zijn gescheiden, verschijnt er een bericht op het scherm vergezeld van een alarmgeluid. Stop het alarm door de deur te openen of op de stopknop te drukken.Open de deur. Verwijder de cartridge en plaats deze op tafel. Herstel drie milliliter plasma uit de plasma-uitlaat met behulp van een pipetpunt van één milliliter.Herstel vervolgens drie milliliter van de buffy-vacht uit de buffy coat-uitlaat met behulp van een pipetpunt van één milliliter. Laad vervolgens de LBx 2-cartridge door de cartridgenaam op het touchscreenpaneel van het instrument te selecteren. Druk op de pijlknop om het aantal monsters te wijzigen en volg dezelfde procedure als voor de LBx 1-cartridge om de cartridge in de cartridgehouder te plaatsen.Nadat u de cartridge hebt geplaatst en de deur hebt gesloten, drukt u op de run-knop op het touchpad-scherm. Volg de eerder beschreven procedure om de met de klep gesloten cartridge uit de cartridgehouder te verwijderen en op tafel te plaatsen. Pipetteer de dichtheidsgradiëntoplossing met behulp van een serologische pipet.Steek de pipetpunt diep in de inlaat van de patroon en injecteer de oplossing langzaam. Pipetteer vervolgens het volbloedmonster en injecteer het langzaam in de monsterinlaat. Nadat u de cartridge hebt geplaatst en vastgezet, sluit u de deur en drukt u op de knop OK.Zodra het plasma en de PBMC automatisch van volbloed worden gescheiden, verschijnt er een bericht vergezeld van een alarmgeluid. Open de deur en verwijder de patroon. Herstel drie milliliter plasma uit de plasma-uitgang met behulp van een pipetpunt van één milliliter en herstel vervolgens drie milliliter van de PBMC-uitgang.Evenzo, voor de FAST-auto cartridge, na het verwijderen van de klep-gesloten cartridge uit de cartridgehouder, injecteert u zes milliliter van de PBS-oplossing in de PBS-inlaat van de cartridge. Pipetteer vervolgens drie milliliter volbloed of buffy coat verkregen uit LBx 1, of PBMC-monster verkregen uit LBx 2, en injecteer het monster langzaam in de monsterinlaat van de patroon. Nadat u de cartridge hebt geplaatst en vastgezet, sluit u de deur en drukt u op de knop OK.Zodra de automatische verrijking van CTC's is voltooid, stopt u het alarm. Verwijder de cartridge en plaats de achterplaatverwijderaar, of BPR, in de vier gaten aan de voorkant van de cartridge. Druk op de donkerblauwe vleugel met de duimen van beide handen en druk vervolgens op het lichtblauwe lichaam totdat het klikt.Verwijder de cartridgebehuizing voorzichtig door deze op te tillen. Pak het filtermembraan heel voorzichtig bij de rand met een pincet en plaats het membraan in een buis van 1,5 milliliter voor nucleïnezuurbereiding of op een schuifglas voor de kleuring. Herstel indien nodig het gefilterde bloed naar de bloeduitlaat met behulp van een pipetpunt van één milliliter.De geëxtraheerde cfDA's werden geëvalueerd met behulp van Bioanalyzer en cfDNA-schermtapes werden gebruikt in combinatie met een elektronische ladder. De groene lijn werd gebruikt om de ladder en het monster uit te lijnen. De driehoekmarkeringen geven de DNA-band aan.De meeste cfDNA's hebben een lengte van 166 basenparen en sommige bestaan in gehele veelvouden van lengte. Meestal meet de concentratie van cfDNA tot de grootte van 50 tot 700 basenparen. Hoewel er een verschil is in de hoeveelheid verkregen uit elk individueel monster, zoals 8,47 nanogram per milliliter en 5,2 nanogram per milliliter, waren de resultaten van cfDNA-extractie in alle gevallen goed voor zowel de concentratie als de grootteverdeling.Deze resultaten geven aan dat de LBx 1-methode plasma dat cfDNA bevat nauwkeurig scheidt. In FAST-auto werd het membraan verwijderd en gekleurd met fluorescerende antilichamen om CTC's en witte bloedcellen te detecteren. Het gebrandschilderde membraan, geplaatst op glazen dia's, werd waargenomen onder een fluorescentiemicroscoop.Na membraankleuring vertonen cellen DAPI- of nucleair-positieve signalen in blauw, terwijl EpCAM en CK of CTC's positief in het groen worden gemarkeerd en CD45- of WBC-positieve in rood worden gemarkeerd. Het is niet moeilijk om het membraan te verwijderen. Het is echter noodzakelijk om voorzichtig te zijn met het verlies en de besmetting van CTC's.Volbloed, PBMC en buffy coat zijn allemaal beschikbaar. In plaats daarvan hoeft u alleen maar het hele volume in te stellen. Andere vloeistoffen kunnen ook worden gebruikt, hoewel testen vereist is.Deze techniek kan direct in ziekenhuizen worden gebruikt en de stof kan snel worden verkregen.

automatic-separation-collection-cancer-related-substances-from

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

Circulerende tumorcellen worden geïsoleerd uit het bloed van patiënten met kanker kan brengen zonder dat cellulaire schade. Isolatie van tumorcellen vindt plaats via een bimoleculaire oppervlak van E-selectine naast antilichamen tegen epitheliale markers. Een nanobuis coating bevordert specifiek kankercellen hechting resulteert in een hoge capture zuiverheden.

Snelle Isolatie van Viable circulerende tumorcellen van de patiënt Blood Samples

Circulerende tumorcellen (CTC's) zijn prognostische in verschillende uitgezaaide tumoren. Dit manuscript beschrijft de gouden standaard CellSearch systeem (CSS) CTC opsomming platform en hoogtepunten gemeenschappelijke misclassificatie fouten. Daarnaast worden twee aangepast protocollen beschreven gebruiker gedefinieerde marker karakterisering van CTCs en CTC opsomming in preklinische muismodellen van metastase met deze technologie.

Aanpassing van semiautomated doorgeven Tumor Cell (CTC) Testen voor Klinisch en preklinisch onderzoek naar toepassingen

Diepgaande analyses van kankercel-proteomen vergemakkelijken de identificatie van nieuwe doelen voor geneesmiddelen en diagnostische biomarkers. We beschrijven een experimentele workflow voor kwantitatieve analyse van (fosfo-)proteomen in kankercelsubpopulaties afgeleid van vloeibare en vaste tumoren. Dit wordt bereikt door cellulaire verrijkingsstrategieën te combineren met kwantitatieve Super-SILAC-gebaseerde massaspectrometrie.

Kwantitatieve Massaspectrometrische Profilering van Kanker-cel proteoom Afgeleid Van vloeibare en vaste tumoren

Kutane tumoren worden vaak weggegooid na Mohs micrografische chirurgie. Hier wordt een protocol beschreven dat klinisch ondersteunend personeel effectief kan verwerken en opslaan van huidkanker ( bv. Plaveiselcelcarcinoom, basale celcarcinoom en melanoom) monsters voor stroomafwaartse laboratoriumtoepassingen zonder in te grijpen bij klinische operaties.

Oprichting van een Biorepository op een kliniek

De karakterisering van circulerende tumorcellen (Ctc's) is een populair onderwerp in translationeel onderzoek. Dit protocol beschrijft een semiautomatische immunofluorescentie (IF)-test voor PD-L1-karakterisering en inventarisatie van Ctc's in niet-kleincellige longkanker (NSCLC)-patiënt monsters.

Semi-automatische PD-L1 karakterisering en opsomming van circulerende tumor cellen van niet-kleincellige longkanker patiënten door immunofluorescentie

Het manuscript presenteert on-site bemonstering van menselijke hersentumoren met vaste fase microextractie, gevolgd door hun biochemische profilering naar de ontdekking van biomarkers.

On-Site bemonstering en extractie van hersentumoren voor metabolomics en lipidomics analyse

Biobanken zijn cruciale bronnen voor biomedisch onderzoek en de Biobank for Translational and Digital Medicine Unit van het European Institute of Oncology is een model op dit gebied. Hier geven we een gedetailleerde beschrijving van de standaard operationele procedures van biobanken voor het beheer van verschillende soorten menselijke biologische monsters.

Biobank voor translationele geneeskunde: standaard operationele procedures voor optimaal monsterbeheer

De vloeibare biopsie heeft een revolutie teweeggebracht in onze benadering van oncologische translationele studies, waarbij monsterverzameling, kwaliteit en opslag cruciale stappen zijn voor de succesvolle klinische toepassing ervan. Hier beschrijven we een gestandaardiseerd en gevalideerd protocol voor downstream circulerende DNA-toepassingen die in de meeste translationele onderzoekslaboratoria kunnen worden toegepast.

Een gestandaardiseerd preanalytisch protocol voor vloeibare biopsie voor downstream circulerende DNA-toepassingen

De klinische microfluïdische chip is een belangrijke biomedische analysetechniek die de voorbewerking van bloedmonsters van klinische patiënten vereenvoudigt en immunofluorescentiekleurig circulerende tumorcellen (CTC's) in situ op de chip kleurt, waardoor een snelle detectie en identificatie van een enkele CTC mogelijk is.

Klinisch microfluïdisch chipplatform voor de isolatie van veelzijdige circulerende tumorcellen

Dit protocol standaardiseert SDS-PAGE-analyse voor gepersonaliseerde eiwitcoronaprofilering op nanodeeltjes, waardoor reproduceerbare, schaalbare en goedkope detectie van kankerspecifieke signaturen mogelijk is. Ontworpen voor vroege diagnose van pancreasductaal adenocarcinoom, biedt het een praktisch, GERUSTGESTELD alternatief voor complexe proteomische methoden in zowel onderzoek als klinische omgevingen.

Gestandaardiseerde SDS-PAGE workflow voor gepersonaliseerde eiwitcoronaprofilering bij vroege kankerdetectie

Leer een geautomatiseerd protocol voor de scheiding en verzameling van kankergerelateerde stoffen uit klinisch bloed. Deze methode minimaliseert contaminatie en maximaliseert de zuiverheid van celvrij DNA en circulerende tumorcellen voor downstream onderzoek.

Automatische scheiding en verzameling van kankergerelateerde stoffen uit klinische monsters

Meer video's verkennen