Synoviale vloeistofanalyse om artrose te identificeren

Synoviale vloeistofanalyse kan de mate van ontsteking en de aanwezigheid van pathogene kristallen onthullen tijdens de eerste evaluatie van patiënten met musculoskeletale symptomen en gewrichtsuitvloeiingen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is de eenvoud en betrouwbaarheid. In een paar stappen kan de clinicus belangrijke diagnostische informatie over de ziekte van de patiënt verkrijgen.

De identificatie van specifieke kristallen is van vitaal belang voor diagnose en behandeling. Uraatkristallen duiden op jicht, terwijl calciumpyrofosfaat en andere calciumkristallen wijzen op calciumgerelateerde artropathieën of een ernstigere vorm van artrose. Neem om te beginnen het synoviale vloeistofmonster dat is verzameld tijdens artrocentese van gezwollen gewrichten van patiënten.

Annoteer het volume van het monster in milliliter en breng het afzonderlijk over in een buis met antistollingsmiddel EDTA en een andere buis zonder additief. In de vermoedelijke gevallen van infectie, breng aseptisch een paar milliliter van het synoviale vloeistofmonster over in een kweekfles voor microbiologisch onderzoek. Om het monster macroscopisch te onderzoeken, neemt u een buis met het monster en definieert u de kleur van het monster, die kan variëren van bleek tot donkergeel.

Noteer de aanwezigheid van bloed, indien aanwezig. Bepaal de mate van helderheid van het monster door het te observeren in de achtergrondverlichting en door te bepalen hoe gemakkelijk het is om een afgedrukte pagina te lezen door de buis met het monster. Beoordeel vervolgens de viscositeit van het monster door het uit een wegwerppipet te druppelen.

Terwijl het verschijnen van een lange sliert vloeistof duidt op een hoge viscositeit, is de vorming van druppels indicatief voor een lage viscositeit. Observeer het monster door de buis met licht op de achtergrond op de aanwezigheid van deeltjes, waaronder weefselfragmenten of fibrine. Om het totale aantal witte bloedcellen te bepalen, trekt u 0,5 microliter van het monster uit de buis met EDTAA met behulp van een Malassez-Potain-pipet.

Gebruik dezelfde pipet om 9,5 microliter 0,1% methyleenblauwe oplossing te trekken. Meng het monster en de methyleenblauwe oplossing in de pipet door middel van zachte inversie. Gooi de eerste paar druppels weg voordat u het mengsel in de telkamer van een hemocytometer giet.

Tel nu de cellen in twee opeenvolgende kwadraten van de negen en vermenigvuldig het verkregen getal met 100. Druk het totale aantal witte bloedcellen uit als het aantal leukocyten per kubieke millimeter. Gebruik het synoviale vloeistofmonster uit de buis zonder additief om het differentiële aantal witte bloedcellen van de synoviale vloeistofmonsters te bepalen.

Om het differentiële celgetal te bepalen met behulp van supravitale kleuring, neemt u een kant-en-klare dia die vooraf is gecoat met kristalviolet en methyleenblauw en plaatst u een kleine druppel monster in het midden van de dia. Bedek vervolgens de monsterdruppel met een coverslip en plaats een druppel microscoop-onderdompelingsolie op de coverslip. Als u traditionele kleuring wilt gebruiken voor het schatten van het aantal differentiële cellen, begint u met het plaatsen van een kleine druppel van het monster aan het einde van een schone dia.

Gebruik nu een tweede dia of een coverslip om de druppel met een voorwaartse beweging langs de dia te verspreiden. Laat het uitstrijkje drogen in de lucht. Onderzoek de dia met het luchtgedroogde uitstrijkje onder 1, 000X olie onderdompelingsobjectief.

Schat het aantal differentiële cellen door 100 opeenvolgende cellen te tellen terwijl de polymorfonucleaire cellen, de monocyten en de lymfocyten van elkaar worden onderscheiden. Reinig een glasplaat met optisch of zacht papier dat is doordrenkt met ethanol. Breng een kleine druppel van het monster niet gemengd met een additief op de glazen plaat en bedek het met een coverslip voordat u de dia onder de microscoop plaatst.

Stel de dia onder de microscoop scherp met behulp van een vergrotingsobjectief met een laag vermogen en onderzoek deze zorgvuldig onder een helder veld met een 40X-objectief. Kijk binnen en buiten de cellen om de kristallen te identificeren op basis van hun grootte en vorm, die ruitvormig, naaldvormig of staafvormig kunnen zijn. Plaats vervolgens het polarisatiefilter tussen de lichtbron en het monster.

Als u een donkere achtergrond wilt maken, draait u de polarisator totdat de optische as loodrecht op de analysator staat. Zodra een birefringent kristal is geïdentificeerd, plaatst u de compensator tussen de polarisator en het monster en beweegt u het parallel of loodrecht op de optische as van het kristal. Observeer de kleur die door het kristal wordt onthuld.

Voor Alizarin Red-kleuring, meng een druppel van het synoviale vloeistofmonster met een gelijk volume van eerder bereide Alizarin Red-oplossing op een schone dia. Bedek de dia met een coverslip en onderzoek met een vergroting van 400x onder een microscoop om de kristallen te identificeren. De macroscopische kenmerken van synoviale vloeistofmonsters gaven de mate van ontsteking aan.

Een monster met lichtgele kleur en meer helderheid wordt over het algemeen geassocieerd met niet-inflammatoire aandoeningen zoals artrose. Aan de andere kant duidt een monster met een donkergele kleur en een troebel uiterlijk op de aanwezigheid van cellen, puin, hyaluronzuur en fibrinefragmenten die geassocieerd zijn met inflammatoire effusies. De leukocyten die werden waargenomen in synoviale vloeistofmonsters van artrosepatiënten waren meestal monocyten en andere mononucleaire cellen zoals synoviocyten.

Calciumpyrofosfaatkristallen werden gedetecteerd in synoviale vloeistofmonsters, wat wijst op relatief hogere niveaus van inflammatoire cytokines. Bovendien onthulde een positieve Alizarin Red-kleuring de aanwezigheid van basische calciumfosfaatkristallen in de monsters. Het is erg belangrijk om de dia onder gewoon licht zorgvuldig te onderzoeken bij het zoeken naar kristallen.

Vergeet niet dat pyrofosfaatkristallen vaak zwak birefringent zijn en kunnen worden gemist onder gepolariseerd licht. De aanwezigheid van calciumkristallen in synoviale vloeistof en hun associatie met een ernstigere vorm van ziekte hebben onderzoekers ertoe gebracht nieuwe mechanismen in de pathogenese en de progressie van artrose te onderzoeken.