Transdermale meting van glomerulaire filtratiesnelheid in mechanisch geventileerde biggen

TGFR biedt een real-time beoordeling van nierfuncties. In vergelijking met traditionele markers kan TGFR veranderingen in de nierfunctie bij dezelfde dieren meerdere keren volgen. Bovendien vereist de techniek geen bloed- of urineafname.

Met de recente vooruitgang in xenotransplantatie zal meer onderzoek worden uitgevoerd met behulp van het varkensmodel. Dus we geloven dat deze tool essentieel zal zijn voor translationeel onderzoek, en het is waarschijnlijker dat het de komende jaren klinisch zal worden gebruikt. Het experiment wordt uitgevoerd op drie tot zeven dagen oude biggen.

De dieren zijn gevoelig voor onderkoeling, hypovolemie en andere complicaties als gevolg van een operatie. Daarom is nauwlettend toezicht vereist gedurende de hele procedure. Ook vereist de methodologie oefening omdat het tracheostomie en vaatcantnulaties omvat.

Nadat u het dier op de procedure hebt voorbereid, gebruikt u een chirurgisch mes om een linker paramediane verticale incisie van vijf tot zes centimeter te maken, omdat de blindedarm bij varkens in de linker paralumbaire fossa ligt. Ontleed de buikwandlagen en voorkom letsel aan de oppervlakkige epigastrische vaten. Zodra de peritoneale laag is ingesneden, gebruikt u een retractor om de toegang tot de intraabdominale structuren te verbeteren en de spiraalvormige dikke darm in het kwadrant linksboven in de buik te identificeren.

Om de blindedarm te lokaliseren, volgt u de spiraalvormige dikke darm caudaal en dorsaal. De spiraalvormige dikke darm aan de basis van de blindedarm is verbonden met het darmbeen. Ligate de blindedarm net distale naar de ileocecale overgang.

Maak met behulp van een naald van 18 gauge zeven lekke banden in de blindedarm en extrudeer uitwerpselen in het peritoneale gebied. Sluit de buiklagen met een 3/0 zijden hechting, met behulp van eenvoudige onderbroken of continue hechtingen. Een nietmachine kan ook worden gebruikt om de huidlaag te sluiten, indien beschikbaar.

Na acht uur cecale ligatie, start u de transdermale GFR-meting. Gebruik mb-servicesoftware versie 3.0 om de bemonsteringsfrequentie op het GFR-apparaat aan te passen. Sluit het transdermale GFR-apparaat met behulp van de USB-connector aan op de computer.

Open de MB-servicesoftware. Klik op verbinden en pas de timing aan op 4.000 milliseconden. Klik op schrijven om de instellingen op te slaan en klik vervolgens op Verbinding verbreken.

Bevestig de dubbelzijdige zelfklevende pleisters met een duidelijk venster aan één kant van het apparaat. Sluit de batterij aan op het apparaat en zorg ervoor dat de lichtgevende diode boven het transparante venster ligt om tracerdetectie mogelijk te maken. Zodra de batterij is bevestigd, plakt u de zelfklevende pleister onmiddellijk met het apparaat op zijn plaats.

Zorg ervoor dat het goed beveiligd is. Omdat de biggen diep verdoofd zijn, kan de tape onnodig zijn om het apparaat op zijn plaats te houden. Bereid 50 milligram per milliliter FITC-sinistrine-oplossing met zoutoplossing en trek de juiste dosering in een spuit.

Bevestig de spuit met medicatie aan de ene kant van een driewegstopkraan en een zoutoplossingspoeling aan de andere kant van de stopkraan. Duw het FITC-sinistrine, onmiddellijk gevolgd door vijf milliliter zoutoplossing bolus voordat u de driewegstopkraan naar de biggenader sluit. Houd het apparaat vier uur aan de big.

Om bewegingsartefacten gedurende deze tijd te voorkomen, houdt u de big onder anesthesie zoals beschreven in het manuscript. Verwijder aan het einde van de vier uur het apparaat en koppel de batterij onmiddellijk los. Sluit het transdermale GFR-apparaat aan op de computer met behulp van de USB-connector die door de leverancier is geleverd.

Open de MB lab software om gegevens van het apparaat op te halen. Als u de onbewerkte gegevens wilt opslaan, klikt u op Verbinden en selecteert u Lezen. Wacht vervolgens tot het apparaat klaar is met lezen.

Klik op Naam wijzigen en klik ten slotte op Opslaan. Verwerk en evalueer de opgeslagen gegevens in de analysesoftware volgens de instructies van de handleiding. Open in het kort de MB-studio en klik op laden om de opgeslagen gegevens te importeren.

Pas de offset-, start- en stopposities aan met behulp van de geautomatiseerde markeringen. Verwijder indien nodig artefacten. Selecteer het model met drie compartimenten en klik op fit om binnen enkele minuten een uitlezing te krijgen met fitc-sinistrineklaring en bereken de TGFR met behulp van deze vergelijking.

Zowel de schijn- als de sepsisdieren hadden vergelijkbare gewichten. Na 12 uur sepsis werden verhoogde serumspiegels van C-reactief proteïne, een marker voor sepsis, waargenomen in de sepsisgroep. FITC-sinistrineklaringscurves werden 12 uur na de operatie getoond voor schijn- en septische biggen.

Septische varkens met een verminderde nierfunctie vertoonden een verhoogd gebied onder de curve. De biggen met sepsis vertoonden een verminderde klaring van FITC-sinistrine, wat wijst op acuut nierletsel. De gemiddelde halfwaardetijd voor FITC-sinistrin in de schijn- en sepsisgroepen was respectievelijk 114 en 537 minuten.

De gemiddelde GFR in de schijngroep was significant hoger dan in de sepsisgroep. Het serumcreatininegehalte op nul en 12 uur was vergelijkbaar in de schijngroep. Er werd echter een significante toename waargenomen in het creatininegehalte bij de septische varkens na 12 uur.

Zorg ervoor dat de batterij correct is aangesloten op de biggen. Als de batterijen losraken, werkt het apparaat niet. Probeer het FITC-sinistrine in één vloeibare bolus te injecteren om meerdere pieken te voorkomen.

Zorg er ook voor dat het apparaat correct is aangesloten op de biggen om bewegingsartefacten te voorkomen. Met een real-time meting van GFR kunnen we de nierfunctie goed evalueren om AKI in een vroeg stadium te detecteren en mogelijk therapeutische middelen evalueren die worden onderzocht.