Name: Teeltmethoden van Spirocheten uit Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex en Relapsing Fever Borrelia (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 37 s
Description: Leer teeltmethoden voor Borrelia-spirocheten uit het Borrelia burgdorferi sensu lato-complex en terugkerende koorts Borrelia. Dit protocol toont betrouwbare in vitro-cultuurtechnieken voor microbiologisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd gedeeltelijk ondersteund door de Natural Science and Engineering Research Council of Canada en de Canadian Lyme disease Foundation (AB en VL), de Swedish Research Council (SB, M-LF en IN), TAČR GAMA 2 project - "Support of application potential verification 2.0 at the Biology Centre CAS" (TP01010022) (MG en NR), en door een subsidie van het Ministerie van Volksgezondheid van de Tsjechische Republiek NV19-05-00191 (MG en NR). We danken S. Vranjes (2021, Rudenko lab) voor de afbeelding in Figuur 4 en J. Thomas-Ebbett (2021, Lloyd lab) voor de beelden in Figuur 5. We bedanken alle onderzoekers die hebben bijgedragen aan het veld en verontschuldigen ons bij degenen wiens werk we niet konden citeren vanwege ruimtebeperkingen.

Er werden geen belangenconflicten verklaard.

De laboratoriumkweek van bacteriën is de springplank voor onderzoek. Het diepgaande voordeel dat wordt verleend door het vermogen om te kweken, wordt geïllustreerd door de strijd, meer dan een eeuw die pas onlangs in succes culmineerde, om Treponema pallidum te kweken, de spirocheet die de etiologische agent van syfilis is44. Borrelia spirocheten zijn ook een uitdaging voor cultuur, maar cultuur is mogelijk 23,24,34,44,45,46,47,48,49.<sup class=...

Borrelia is een geslacht van spirocheetbacteriën dat drie belangrijke clades omvat: de Lyme-borreliose (LB) -groep, de relapsing fever (RF) -groep en een minder goed gekarakteriseerde groep die schijnbaar beperkt is tot reptielen. Borrelia-taxonomie is in beweging met de komst van moleculaire methodologieën die genoom- en proteoomvergelijkingen mogelijk maken, zoals geldt voor de meeste andere taxonomische groepen 1,2,3,4,5,6,7. De LB-groep (ook wel de ziekte van Lyme-groep genoemd) wordt van oudsher Borrelia burgdorferi sensu lato genoemd naar zijn best gekarakteriseerde lid Borrelia burgdorferi sensu stricto.  Dit artikel gebruikt de momenteel meest gebruikte terminologie: de LB, de RF en de reptielen-geassocieerde groep, en beschrijft de kweekprotocollen voor de LB- en de RF-groepen.
Zoals te verwachten is voor een lid van de familie Spirochaetaceae, kan Borrelia de opvallend lange en dunne spiraalvorm aannemen, meestal 20-30 μm lang en 0,2-0,3 μm breed. Borrelia-cellen zijn echter zeer pleomorf en kunnen vele andere vormen aannemen in zowel cultuur als in vivo 1,8 als gevolg van hun complexe cellulaire en genetische structuur. In zijn spirochetale vorm is de morfologie van de vlakke sinusgolf het resultaat van zijn axiale endoflagella die roteert in de periplasmatische ruimte tussen de binnenste en buitenste membranen. Deze structuur stelt de cellen in staat om zeer beweeglijk te zijn, waarbij het buitenmembraan eiwitten bevat die de cel in staat stellen om te interageren met gastheerweefsels 9,10. De expressie van de buitenste membraaneiwitten is strak gereguleerd en beïnvloedt niet alleen de invasie van gastheerweefsel, maar ook de interactie met het immuunsysteem van de gastheer11. Deze complexe genexpressie stelt de Borrelia-cellen in staat om te pendelen tussen de zeer verschillende omgevingen van gewervelde gastheren en ongewervelde vectoren. Het genoom van Borrelia is ongebruikelijk onder prokaryoten, bestaande uit een lineair in plaats van een cirkelvormig chromosoom. Naast het lineaire chromosoom bevatten Borrelia-soorten 7-21 plasmiden, sommige lineair en sommige cirkelvormig. De plasmiden herbergen de meerderheid van de genen die nodig zijn voor gastheeraanpassing en virulentie, en de circulaire plasmiden afgeleid van profagen worden verondersteld verantwoordelijk te zijn voor de meerderheid van de horizontale genstroom tussen spirochetale cellen12,13. In overeenstemming met een rol in gastheeradaptatie, verliezen sommige, mogelijk veel of alle, leden van de Lyme-borreliosegroep plasmiden in cultuur14. De best bestudeerde "laboratorium aangepaste" stam van B. burgdorferi, B31, heeft slechts zeven van de negen plasmiden gevonden in wilde isolaten van deze soort15. Evenzo verliest B. garinii plasmiden in cultuur16. Sommige studies hebben aangetoond dat RF-soorten en B. miyamotoi plasmiden behouden wanneer ze worden gekweekt14,17, maar recent werk toont veranderde plasmiden en infectiviteit met langdurige in vitro kweek 18.
Op cultuur gebaseerde methoden blijven de gouden standaard voor de laboratoriumdetectie van bacteriële infecties, voor zowel onderzoek als klinisch werk14,17. De kweek van pathogenen uit lichaamsvloeistoffen of weefsels detecteert direct replicerende pathogenen en levert bronmateriaal voor onderzoek14,17. Dit protocol demonstreert de methodologie en recepten die nodig zijn om de spirocheten van de LB-groep en RF Borrelia en B. miyamotoi met succes te kweken. Het basismedium voor het kweken van Borrelia spirocheten is het Barbour-Stoenner-Kelly medium (BSK-II of het in de handel verkrijgbare BSK-H), met of zonder antibiotica om de groei van vervuilende prokaryoten te verminderen. Dit medium werd aangepast van een medium dat oorspronkelijk werd gebruikt om RF Borrelia19 te ondersteunen, verder aangepast door Stoenner20 en vervolgens door Barbour21. Sindsdien zijn er veel modificaties ontwikkeld, elk met effecten op de bacteriële fysiologie die de groei, infectiviteit en pathogeniciteit kunnen beïnvloeden22. Dit medium ondersteunt op betrouwbare wijze de groei van spirocheten in gevestigde culturen en is gebruikt om spirocheten te isoleren uit teken-, zoogdier- en klinische monsters23. De meer recent ontwikkelde variatie, gemodificeerd Kelly-Pettenkofer (MKP) medium, kan zorgen voor een beter isolatiesucces, morfologie en beweeglijkheid bij het isoleren van nieuwe Borrelia-isolaten uit omgevingsmonsters, wanneer het aantal spirocheten dat aanwezig is in het monster dat beschikbaar is om de cultuur te zaaien laagis 23,24. In alle gevallen is het succes van de teelt kritisch afhankelijk van het vers bereide medium en het gebruik van geschikte ingrediënten; Niet alle commerciële ingrediënten produceren een medium van hoge kwaliteit. Geënte culturen kunnen gemakkelijk worden geïncubeerd zonder te schudden in een conventionele 32-34 °C incubator in de aanwezigheid van een kleine hoeveelheid resterende omgevingszuurstof. Borrelia spirocheten zijn anaëroben, maar worden in de natuur blootgesteld aan schommelingen in zuurstof- en koolstofdioxideconcentraties en reageren met veranderingen in genexpressie26,27,28,29. Genexpressie, groei en andere metabole studies moeten dus controleren op zuurstof- en koolstofdioxideniveaus met behulp van een zuurstofgestuurde incubator of anaerobe kamer. In cultuur worden culturen wekelijks, of vaker, gecontroleerd op de aanwezigheid van spirocheten met darkfieldmicroscopie of fasecontrastmicroscopie. Kweekuitstrijkjes kunnen worden gekleurd met zilvervlekken, immunohistochemie of door het gebruik van fluorescerend gelabelde stammen29,30. PCR gevolgd door DNA-sequencing is een gevoelige en specifieke methode om de Borrelia-soort te detecteren en genetisch te identificeren of te bevestigen30,31,32,33.
Er bestaan veel kleine variaties op BSK-II en sommige zijn in de handel verkrijgbaar. Het hier in deel 1 beschreven protocol is overgenomen uit Barbour (1984)21. Vloeibaar MKP-medium is een recenter ontwikkeld medium en wordt beschreven in rubriek 2. Het wordt bereid volgens een eerder gerapporteerd protocol33,34, dat, net als BSK-medium, uit twee stappen bestaat: bereiding van basismedium en bereiding van volledig medium. Borrelia kweekmedium kan worden bereid met of zonder antibiotica, zoals beschreven in rubriek 3; de antibioticawet ter vermindering van verontreinigende bacteriën die worden geïntroduceerd bij het inenten met klinische of omgevingsmonsters, zoals beschreven in rubriek 4; bij inenten met pure Borrelia sp. cultuur zijn antibiotica mogelijk niet nodig. Het maken van Borrelia-aandelen op lange termijn is vaak belangrijk en een protocol hiervoor wordt beschreven in hoofdstuk 5. Rubriek 6 beschrijft het gebruik van deze media om zuivere Borrelia sensu lato-klonen te isoleren uit klinische of omgevingsmonsters. Er zijn een aantal benaderingen mogelijk36; Hieronder is er een die effectief blijkt te zijn. Het beplatingsmedium dat in dit protocol wordt gebruikt, is een modificatie van BSK-II-platingmedium37 en MKP-medium 34 (met konijnenserum verhoogd tot 10%38).

<table><tbody><tr><td>1.7 mL tubes</td><td>VWR</td><td>87003-294</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>0.2&nbsp;&micro;m Sterile spuitfilter&nbsp;</td><td>VWR</td><td>28145-501</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>10 &micro;L barrièrepipettip</td><td>Neptune</td><td>BT10XLS3</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>10 mL Serologische pipetten&nbsp;</td><td>Celltreat</td><td>229011B</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>1000 &micro;L barrièrepipettip</td><td>Neptune</td><td>BT1000.96</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>15 mL buis</td><td>Celltreat</td><td>188261</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>20 &micro;L barrièrepipettip</td><td>Neptune</td><td>BT20</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>20 mL Sterile spuit&nbsp;</td><td>BD</td><td>309661</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>200 &micro;L barrièrepipettip</td><td>Neptune</td><td>BT200</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>25 mL Schroefdop Cultuurbuizen</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-933C</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>25 mL Serologische pipetten</td><td>Celltreat</td><td>229025B</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>3 mL Sterile spuit</td><td>BD</td><td>309657</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>35% BSA&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>A-7409</td><td>Bron is belangrijk - zie opmerking</td></tr><tr><td>5 mL Serologische pipetten&nbsp;</td><td>Celltreat</td><td>229006B</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>50 mL buis</td><td>Celltreat</td><td>229421</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>6.5 ml MKP glasbuizen&nbsp;</td><td>Schott</td><td>Schott Nr. 26 135 115</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>Amikacine</td><td>Sigma</td><td>PHR1654</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>Amphotericin B</td><td>Sigma</td><td>A9528-100MG</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>Bactrim/rimethoprim/sulfamethoxazol</td><td>Sigma</td><td>PHR1126-1G</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>BBL Brucella bouillon&nbsp;</td><td>BD</td><td>211088</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>Bioveiligheidscabinet</td><td>Labconco</td><td>302419100</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>Bloedopvangbuizen (gele top - ACD)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BD&nbsp;Vacutainer Glass Blood Collection Tubes with Acid Citrate Dextrose (ACD)</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>BSK-H Medium [met 6% Konijnen serum]&nbsp;</td><td>Darlynn biologicals</td><td>BB83-500</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>centrifuge&nbsp;</td><td>Eppendorf</td><td>model 5430</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>Citroenzuur TrinatriumzoutDihydraat</td><td>Sigma</td><td>C-8532 100 g</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>CMRL</td><td>Gibco BRL</td><td>21540 500 mL</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>CMRL-1066</td><td>Gibco</td><td>21-510-018</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>Cryogene buizen (Nalgene)</td><td>Fisher Scientific</td><td>5000-0020</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>Deep Petri met stapelring 100 mm &times; 25 mm</td><td>Sigma</td><td>P7741</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>Digitale incubator</td><td>VWR</td><td>model 1545</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>ThermoFisher</td><td>D12345</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>Filters voor filter sterilisatie</td><td>Millipore 0.22&mu;m GPExpressPLUS Membraan</td><td>SCGPU05RE</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>Gelatine</td><td>Difco BD</td><td>214340 500 g</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>Glas Cultuurbuizen</td><td>Fisher Scientific</td><td>99449-20</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Sigma</td><td>G-7021 1 kg</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Sigma</td><td>G5516</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>Hemafuge (Hematocrit &amp; Immuno hematologie centrifuge )</td><td>Labwissen</td><td>Model 3220</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>H-3784 100 g</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>N-acetylglucoseamine</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>A-3286 25 g</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>Neopepton</td><td>Difco&nbsp; BD</td><td>211681 500 g</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>Neubauer Hematocytometer</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>Z359629</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>Phase contrast microscoop&nbsp;</td><td>Leitz</td><td></td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>Fosfomycine</td><td>Sigma</td><td>P5396-1G</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>Fosfomycine</td><td>Sigma</td><td>P5396</td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>Pipetboy</td><td>Integra</td><td></td><td>Standaard artikel - elke leverancier zal het doen</td></tr><tr><td>Precisie Standaard We

teeltmethoden van spirocheten uit borrelia burgdorferi sensu lato complex en relapsing fever borrelia

Cultivation Methods of Spirochetes from Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex and Relapsing Fever Borrelia

De Borrelia bestaat uit drie groepen soorten, die van de Lyme borreliose (LB) groep, ook bekend als B. burgdorferi sensu lato (s.l.) en onlangs opnieuw geclassificeerd in Borreliella, de relapsing fever (RF) groep Borrelia, en een derde reptielen-geassocieerde groep spirocheten. Op cultuur gebaseerde methoden blijven de gouden standaard voor de laboratoriumdetectie van bacteriële infecties voor zowel onderzoek als klinisch werk, omdat de kweek van pathogenen uit lichaamsvloeistoffen of weefsels direct replicerende pathogenen detecteert en bronmateriaal voor onderzoek biedt. Borrelia en Borreliella spirocheten zijn kieskeurig en langzaam groeiend en worden daarom niet vaak gekweekt voor klinische doeleinden; Cultuur is echter noodzakelijk voor onderzoek. Dit protocol demonstreert de methodologie en recepten die nodig zijn om LB- en RF-spirocheten met succes te kweken, inclusief alle erkende soorten uit het B. burgdorferi s.l.-complex, waaronder B. afzelii, B. americana, B. andersonii, B. bavariensis, B. bissettii / bissettiae, B. burgdorferi sensu stricto (s.s.), B. californiensis, B. carolinensis, B. chilensis, B. finlandensis, B. garinii, B. japonica, B. kurtenbachii, B. lanei, B. lusitaniae, B. maritima, B. mayonii, B. spielmanii, B. tanukii, B. turdi, B. sinica, B. valaisiana, B. yangtzensis en RFspirocheten, B. anserina, B. coriaceae, B. crocidurae, B. duttonii, B. hermsii, B. hispanica, B. persica, B. recurrentis en B. miyamotoi. Het basismedium voor het kweken van LB- en RF-spirocheten is het Barbour-Stoenner-Kelly (BSK-II of BSK-H) medium, dat de groei van spirocheten in gevestigde culturen betrouwbaar ondersteunt. Om nieuw geïsoleerde Borrelia-isolaten te kunnen kweken uit van teken of gastheer afgeleide monsters waarbij het initiële spirocheetgetal laag is in het entmateriaal, heeft gemodificeerd Kelly-Pettenkofer (MKP) -medium de voorkeur. Dit medium ondersteunt ook de groei van B. miyamotoi. Het succes van de teelt van RF-spirocheten hangt ook kritisch af van de kwaliteit van de ingrediënten.

Borrelia-cultuurmedia BSK en MKP, en varianten, zijn rijke cultuurmedia met ingrediënten die sequentieel moeten worden bereid en gesteriliseerd. Indien correct bereid, moet BSK-medium roodoranje en helder zijn (figuur 1). Troebelheid en neerslag die na opwarming aanhouden, duiden op problematische ingrediënten, gemiddelde productie of verontreiniging; Een dergelijk medium kan het beste worden weggegooid. Als gelatine wordt toegevoegd aan BSK en met MKP, zal het medium gelatineus zij...

In vitro kweek is een directe detectiemethode voor de aanwezigheid van levende bacteriën. Dit protocol beschrijft methoden voor de kweek van diverse Borrelia spirocheten, waaronder die van het Borrelia burgdorferi sensu lato-complex, recidiverende koorts Borrelia-soorten en Borrelia miyamotoi. Deze soorten zijn kieskeurig en langzaam groeiend, maar kunnen worden gekweekt.

Teeltmethoden van Spirocheten uit Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex en Relapsing Fever Borrelia

The Borrelia consists of three groups of species, those of the Lyme borreliosis (LB) group, also known as B. burgdorferi sensu lato (s.l.) and recently ...

Borrelia is een geslacht van spirocheetbacteriën dat drie belangrijke soorten omvat. De Lyme Borreliose-groep, de Relapsing Fever-groep en de minder goed gekarakteriseerde groep die bij reptielen wordt aangetroffen. Veel Borrelia-soorten zijn pathogeen.De kweek van bacteriën is de gouden standaard voor de detectie van infecties. Dit geldt voor zowel onderzoek als klinisch werk. De kweek van bacteriën uit lichaamsvocht en weefsels bevestigt dat de bacteriën zowel levensvatbaar als replicerend zijn.Dit protocol demonstreert de methodologie en recepten die nodig zijn om de Lyme Borreliose-groep van spirocheten, Relapsing Fever Borrelia en Borrelia miyamotoi met succes te kweken en te behouden. Er worden methoden verstrekt voor de kweek van eerder geïsoleerde soorten en stammen, evenals nieuwe isolaten en monoklonale isolaten uit milieu- of zoogdierbronnen. Marie-Line Faucillion, postdoctoraal onderzoeker, en Ingela Nilsson, technicus van het Bergstrom Lab, Anne Berthold, onderzoeksmedewerker van het Lloyd Lab, en Maryna Golovchenko, onderzoeksmedewerker van het Rudenko Lab, zullen de procedure demonstreren.Verkrijg om te beginnen de reagentia die nodig zijn om een liter Barbara-Stoner

cultivation-methods-spirochetes-from-borrelia-burgdorferi-sensu-lato

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

De ziekte van Lyme studies vereisen vaak generatie van de teken besmet met de ziekteverwekker Borrelia burgdorferi, een proces dat normaal gesproken duurt enkele weken. Hier laten we zien een micro-injectie-based tick infectie procedure die kan worden bereikt binnen enkele uren. We tonen ook aan een immunofluorescentie methode voor het in situ lokalisatie van B. burgdorferi in teken.

Methoden voor snelle overdracht en localisatie van Lyme pathogenen in de Tick Gut

Source: Eggers, C. H. Phage-Mediated Genetic Manipulation of the Lyme Disease Spirochete Borrelia burgdorferi. J. Vis. Exp. (2022)This video demonstrates the preparation of a genetically modified Borrelia burgdorferi culture engineered with dormant bacteriophage DNA carrying an antibiotic resistance gene. Following antibiotic selection and incubation, a chemical inducer triggers DNA damage, leading to excision, replication, and assembly of new virions containing the resistance gene. After a...

Preparation and Induction of Borrelia burgdorferi Cultures for Viral Particle Production

Source: Berthold, A., et al. Cultivation Methods of Spirochetes from Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex and Relapsing Fever Borrelia. J. Vis. Exp.(2022)This video demonstrates the cultivation of pathogenic spirochetes from infected skin tissue to model dermal infection. It highlights their localization in the dermis, interaction with the extracellular matrix, and survival during selective culture conditions.

Cultivation of Pathogenic Spirochetes to Investigate Skin Infection

De ziekte van Lyme is de meest gerapporteerde vector overgedragen ziekte in Noord-Amerika. De verwekker, Borrelia burgdorferi is een spirocheet bacterie overgedragen door Ixodes teken. Transmissie en detectie van infectie bij diermodellen wordt geoptimaliseerd door het gebruik van teek voeding, die hier beschreven.

Voederen van Ticks on Animals voor Transmissie en Xenodiagnosis in Lyme Disease Research

Genestelde PCR is een eenvoudig, gevoelige en specifieke techniek die kan worden toegepast op de teek die DNA geëxtraheerd om sonde voor Borrelia burgdorferi, de verwekker van de ziekte van Lyme. De eerste PCR experiment maakt gebruik van gen-specifieke primers voor het genereren van lange waarbij, die vervolgens worden sjablonen voor een latere reactie met behulp van interne inleidingen.

Opsporen van de ziekte van Lyme-spirocheet, Borrelia Burgdorferi, in teken met behulp van genestelde PCR

In vitro transcriptie assays kunnen de mechanismen van transcriptionele regulatie in Borreliella burgdorferi ontcijferen. Dit protocol beschrijft de stappen om B. burgdorferi RNA polymerase te zuiveren en in vitro transcriptiereacties uit te voeren. Experimentele benaderingen met behulp van in vitro transcriptietests vereisen betrouwbare zuivering en opslag van actief RNA-polymerase.

Essentiële componenten van Borreliella (Borrelia) burgdorferi In Vitro Transcriptie Assays

Het vermogen van bacteriofaag om DNA tussen bacteriële cellen te verplaatsen, maakt ze effectieve hulpmiddelen voor de genetische manipulatie van hun bacteriële gastheren. Hier wordt een methodologie gepresenteerd voor het induceren, herstellen en gebruiken van φBB-1, een bacteriofaag van Borrelia burgdorferi, om heterologe DNA te transduceren tussen verschillende stammen van de ziekte van Lyme spirocheet.

Faag-gemedieerde genetische manipulatie van de ziekte van Lyme Spirochete Borrelia burgdorferi

Een driekanaals dual-reporter fluorescentiestroomanalysesysteem werd gebruikt om een op kralen gebaseerde multiplex-immunoassay te ontwikkelen die tegelijkertijd serummonsters evalueert voor IgG en IgM die worden opgewekt tegen meerdere antigenen van verschillende Borrelia-soorten die Lyme-borreliose veroorzaken in Europa en Noord-Amerika.

Gelijktijdige detectie van verschillende antilichaamklassen in een gemultiplexte serologische test

Dit artikel presenteert de methodologie voor het blootstellen van mensen aan larvale Ixodes scapularis voor klinisch onderzoek. De techniek is relatief eenvoudig, acceptabel voor de onderzoeksvrijwilligers en kan worden aangepast aan de experimentele behoeften. Dergelijk onderzoek met menselijke proefpersonen moet worden uitgevoerd volgens protocollen voor klinisch onderzoek die zijn goedgekeurd door de bevoegde regelgevende instanties.

Een model voor experimentele blootstelling van mensen aan larvale Ixodes scapularis-teken

We ontwikkelden een menselijk ex vivo transwell-systeem dat in staat is acute ontstekings-, infectieuze en structurele veranderingen in het synovium te evalueren.

Een preklinisch model van synovitis met ex vivo menselijk synoviaal weefsel met behouden functie en architectuur

Leer teeltmethoden voor Borrelia-spirocheten uit het Borrelia burgdorferi sensu lato-complex en terugkerende koorts Borrelia. Dit protocol toont betrouwbare in vitro-cultuurtechnieken voor microbiologisch onderzoek.

Teeltmethoden van Spirocheten uit Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex en Relapsing Fever Borrelia

Meer video's verkennen