Name: Lage dosis gammastralingssterilisatie voor gedecellulariseerde tracheale grafts (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-04-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 17 s
Description: Leer een lage dosis gammastralingssterilisatie voor gedecellulariseerde tracheale grafts met behoud van weefseleigenschappen. Deze methode gebruikt New Zealand white rabbits voor veilige orgaantransplantatie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit artikel werd ondersteund door de 2018 Spanish Society of Thoracic Surgery Grant to National Multicentric Study [Nummer 180101 toegekend aan Néstor J.Martínez-Hernández] en PI16-01315 [toegekend aan Manuel Mata-Roig] door het Instituto de Salud Carlos III. CIBERER wordt gefinancierd door het VI National R&D&I Plan 2018-2011, Iniciativa Ingenio 2010, Consolider Program, CIBER Actions en het Instituto de Salud Carlos III, met steun van het Europees Fonds voor Regionale Ontwikkeling.

De Europese richtlijn 20170/63/EU voor de verzorging en het gebruik van proefdieren werd nageleefd en het onderzoeksprotocol werd goedgekeurd door de ethische commissie van de Universiteit van Valencia (wet 86/609/EEG en 214/1997 en code 2018/VSC/PEA/0122 type 2 van de regering van Valencia, Spanje).
1. Tracheale decellularisatie
OPMERKING: De decellularisatiemethode is elders gemeld20.
<ol><li>Euthanaseer mannelijke volwassen Nieuw-Zeelandse witte konijnen (Oryctolagus cuniculus) met een gewicht van 3,5-4,1 kg met 133 mg / kg pentobarbitalnatrium, met behulp van een injectie van 200 mg / ml door de marginale oorader.</li>
	<li>Terwijl u zorgt voor aseptische omstandigheden, voert u een centrale longitudinale cervicotomie uit, ontleedt u de cervicale spieren en nadert u de luchtpijp. Ontleed het orgaan omtreks- en longitudinaal. Tot slot, transect onder de eerste ring en net boven de carina.</li>
	<li>Snijd met een scalpel de luchtpijpen in stukken van 2 cm. Verwijder met een schaar het omliggende bindweefsel en de binnenste slijmvlieslaag6.</li>
	<li>Dompel de monsters onder in 12 ml fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) die 2% natriumdodecylsulfaat (SDS), 5% penicilline-streptomycine en 5% amfotericine B bevat.</li>
	<li>Onderwerp de luchtpijpen aan constant roeren met een magneetroerder bij 400 tpm gedurende 5 weken bij kamertemperatuur. Vervang de decellularisatieoplossing wekelijks na een osmotische schok van 2 uur, door middel van onderdompeling van de luchtpijp in gedestilleerd water.</li>
	<li>Cryogeniseer de monsters met behulp van een mengsel van 12 ml van 80% foetaal runderserum (FBS) en 20% dimethylsulfoxide (DMSO) in een vriescontainer bij -80 °C.</li>
	<li>Wanneer de luchtpijpen worden gebruikt (na 13-15 dagen), ontdooi ze dan in een waterbad bij 37 °C en was ze door ze onder te dompelen in PBS nadat het ontdooien is voltooid.</li>
</ol>2. Sterilisatie
<ol><li>Bestraling<ol><li>Plaats partijen van vier tracheale stukken van elk 2 cm in een 20 ml methacrylaat in een T25-kweekkolf gevuld met PBS totdat een totaal volume van 30 ml is bereikt. Zorg ervoor dat er geen bellen ontstaan, die energiediffusie in de lucht-vloeistofinterface kunnen veroorzaken.</li>
		<li>Voer bestraling uit met behulp van een lineaire versneller, met fotonen met een nominale energie van 10 MV afvlakkende filtervrije bundels. Breng een dosistempo van 2.400 monitoreenheden per minuut aan in het isocentrum, plaats de luchtpijpen op een bronoppervlakafstand van 100 cm om te worden bestraald, met een scherptediepte van 2,5 cm voor een stralingsveld van 10 cm x 10 cm - zodat de hele container wordt bedekt - overeenkomend met een dosis van 24 Gy / min.</li>
		<li>Escaleer de doses met elke vierdelige batch; vier stukken worden onderworpen aan 0,5 kGy, vier tot 1 kGy, vier tot 2 kG, enz., totdat sterilisatie is bereikt.</li>
	</ol></li>
	<li>Cultuur<ol><li>Introduceer de stukjes in 30 ml Dulbecco's gemodificeerde Eagle's medium (DMEM) met geïnactiveerde 10% FBS zonder antibiotica of antischimmelmiddelen.</li>
		<li>Kweek ze gedurende 2 weken in een standaard weefselincubator bij 37 °C en 5% CO2 en inspecteer ze elke 24 uur. OPMERKING: De verontreinigingsparameters zijn veranderingen in de pH van het kweekmedium en dienovereenkomstig veranderingen in de kleur en troebelheid van het medium. De luchtpijpen werden geoogst van kiemvrije lagomorfen, die niet ziek waren en dus verwachtten verstoken te zijn van anaerobe bacteriën in hun luchtpijpen.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Histologische analyse
OPMERKING: Beits de stukken met hematoxyline en eosine21, Masson's trichromen en orceïne22.
<ol><li>DAPI-kleuring<ol><li>Bepaal de levensvatbaarheid van het weefsel met behulp van DAPI (4′,6-diamidino-2-fenylindool). Deze blauw-fluorescerende vlek bindt sterk aan adenine- en thyminerijke gebieden in DNA-sequenties en maakt het daarom mogelijk om DNA te bekijken via fluorescentiemicroscopie.</li>
		<li>Sluit de weefselmonsters in de optimale snijtemperatuur (OCT) -verbinding in.</li>
		<li>Snijd de monsters met behulp van een cryostaat.</li>
		<li>Was het te verven monster driemaal in gedestilleerd water om het OCT te verwijderen. Plaats het in een montagemedium met een DAPI-oplossing van 30 nM.</li>
		<li>Visualiseer fluorescentie met behulp van fluorescentiemicroscopie.</li>
	</ol></li>
	<li>DNA-gehalte analyse<ol><li>Snijd segmenten van de luchtpijp van ongeveer 3 mm lang met behulp van een scalpel.</li>
		<li>Incubeer gedurende 2 uur in proteïnase K (Tabel met materialen).</li>
		<li>Extraheer het DNA met een DNA-extractiekit, volgens de instructies van de fabrikant.</li>
		<li>Bepaal door middel van spectrofotometrie de concentratie van DNA door de absorptie bij 260/280 te meten met behulp van een spectrofotometer.</li>
		<li>Meet de grootte van de geëxtraheerde DNA-monsters met behulp van capillaire chromatografie met een bioanalysator.</li>
	</ol></li>
</ol>4. Biomechanisch onderzoek
OPMERKING: De weerstand van tracheale tegen langs- en dwarskrachten wordt gemeten door middel van axiale trek- en radiale compressietests23.
<ol><li>Tracheale meting<ol><li>Meet de tracheale lengte, wanddikte en buitendiameter met behulp van een Vernier-remklauw.</li>
		<li>Bereken de gemiddelde waarden uit drie willekeurige metingen van elk van de variabelen.</li>
		<li>Bereken bij de radiale compressietests de anteroposterieure diameter door het punt te detecteren waarop de plaat in contact komt met het monster.</li>
		<li>Voer alle tests uit bij kamertemperatuur.</li>
	</ol></li>
	<li>Trekproeven<ol><li>Voer trekproeven uit op een tractiedesktop universele testmachine (UTM) verplaatsingsregeling, uitgerust met een belasting van 100 N (0,1 N krachtresolutie, 0,001 mm positie en 0,1 s). De testmachine is uitgerust met kracht- en positiesensoren en is verbonden met een computer met software die speciaal is ontworpen door de fabrikant23.</li>
		<li>Leg elke 0,4 s gegevens vast en exporteer deze naar een spreadsheet.</li>
		<li>Bouw trekkaken aangepast aan het gemiddelde kaliber van de konijnenluchtpijpen uit zuivere monolaagse, niet-toxische kristalpolyvinylchloride (PVC) holle buizen met een uitwendige diameter van 1 cm en een wanddikte van 1,5 mm.</li>
		<li>Sectie de geleiders in 3 cm lange segmenten.</li>
		<li>Boor 12 voorgevormde gaten voor de termino-terminale hechting, 2 mm van de rand van de kaken en gescheiden door een afstand van 2,5 mm, om vertekening door de hechtingen te voorkomen.</li>
		<li>Bevestig de PVC-glazen buizen aan de luchtpijp van het konijn door termino-terminale anastomose met een continue hechting door afwisselend voorgevormde gaten (elke 5 mm), op 2 mm afstand van de rand van de luchtpijp en met een 6-0 nylon monofilamenthechting.</li>
		<li>Rek alle stukken uit met een verplaatsingssnelheid van 5,0 mm/min.</li>
		<li>Noteer de variabelen maximale spanning (σ max, in N/mm2) en spanning (εmax, zonder eenheden), samen met de opgeslagen energie per eenheid luchtpijpvolume (W/Vol, in mJ/mm) en Young's modulus (E, in MPa).</li>
	</ol></li>
	<li>Radiale compressietests<ol><li>Voer radiale compressietests uit op een UTM met compressiedesktop, uitgerust met een 15 N-loadcel (krachtresolutie 0,001 N, positie 0,001 mm en tijd 0,1 s) om krachtgegevens (N), positie (mm) en tijd (s) te verkrijgen. Gegevens opnemen en exporteren naar spreadsheet met intervallen van 0,5 s.</li>
		<li>Plaats de luchtpijpen met het vliezige gebied rustend op de onderste plaat. De plaat stijgt geleidelijk omhoog naar de bovenplaat met een constante snelheid van 5 mm/min.</li>
		<li>Bereken elke eenheid per eenheid lengte van het monster (f in N/mm), stijfheid (R in Mpa·mm) en de energie per oppervlakte-eenheid (W / S in mJ/mm2) die nodig is om de luchtpijp volledig af te sluiten.</li>
	</ol></li>
</ol>5. Chirurgische techniek
OPMERKING: De chirurgische techniek is elders op grote schaal gemeld20.
<ol><li>Plaats een steriele intraluminale PVC-stent, maat 14 Fr (waardoor deze vrij kan glijden zonder de wanden te comprimeren), met een marge van 3-4 mm aan elk uiteinde.</li>
	<li>Bevestig de stent met een enkele 6-0 nylon monofilamentsteek door de intercartilagineuze ruimte van het eerste kraakbeen.</li>
	<li>Ga verder met het verdoven van de konijnen.<ol><li>Pre-medicaat de proefpersonen (3,65-4,05 kg mannelijke Nieuw-Zeelandse witte konijnen) met intramusculaire analgetica (35 mg / kg ketamine) met een kalmerend middel, spierverslapper en analgeticum (2,5 mg / kg xylazine).</li>
		<li>Scheer de incisiezone uit de operatiezone en reinig het operatiegebied om het haar te verwijderen.</li>
		<li>Pijnstillers plus antibiotische profylaxe toedienen: 0,05 mg/kg intramusculair buprenorfine en 10 mg/kg enrofloxacine.</li>
		<li>Plaats een veneuze katheter in de marginale oorader van elk konijn.</li>
		<li>Induceer anesthesie met een intraveneuze bolus van 10 mg/kg propofol.</li>
		<li>Controleer de vitale functies van het dier met behulp van een elektrocardiogram met drie leads, pulsoximetrie en niet-invasieve drukmeting. Breng elke 30 minuten fysiologisch serum aan op de ogen om uitdroging te voorkomen terwijl u onder narcose bent.</li>
		<li>Controleer het verdovingsvlak met behulp van de teenknijpmethode.</li>
		<li>Handhaaf de anesthesie met geïnhaleerd isofluraan op 1,5% -2% van de minimale alveolaire concentratie zonder spontane ventilatie te verliezen en bied thermische ondersteuning aan het konijn met een verwarmingskussen.</li>
	</ol></li>
	<li>Desinfecteer de incisiezone meerdere keren in een cirkelvormige beweging met een scrub op basis van jodium. Maak onder aseptische omstandigheden te allen tijde en met steriel materiaal een longitudinale centrale thoracale incisie van 3 cm en oogst bilaterale pedicled flappen bestaande uit borstfascia en een spiercomponent.</li>
	<li>Wikkel de luchtpijpen met de flap in vier konijnen, één op elke hemithorax (dus in totaal acht luchtpijpen).</li>
	<li>Wanneer de operatie is voltooid, keert u de anesthesie om door de toediening van isofluraan te onderbreken.</li>
	<li>Postoperatieve periode<ol><li>Houd de dieren in de operatiekamer totdat ze volledig hersteld zijn van de anesthesie. Wanneer ze volledig zijn hersteld, breng je ze terug naar hun omgeving met andere konijnen.</li>
		<li>Behandel de konijnen met antibiotica (0,5 ml/kg 2,5% enrofloxacine) en pijnstillers (5 mg/ml meloxicam; 0,05 ml/kg metacam) om de 24 uur gedurende 5 dagen.</li>
		<li>Laat de implantaten ter plaatse gedurende de gewenste tijd.</li>
		<li>Voorafgaand aan euthanasie, pre-medica de konijnen met intramusculaire analgetica (35 mg / kg ketamine) en een kalmerend, spierverslapper en pijnstiller (2,5 mg / kg xylazine). Euthanaseer vervolgens de konijnen met 133 mg / kg pentobarbitalnatrium met behulp van een injectie van 200 mg / ml door de marginale oorader en oogst de luchtpijpen.</li>
		<li>Voer biomechanische en histologische tests uit op de luchtpijpen.</li>
	</ol></li>
</ol>6. Statistische analyse
<ol><li>Pas alle modellen aan volgens de Bayesiaanse methode op R-software, versie 3.5.3 R Core (R Foundation for Statistical Computing. 2019).</li>
	<li>Analyseer de onderzoeksvariabelen, behalve f en R, met behulp van meerdere lineaire regressiemodellen.</li>
	<li>Pas voor de variabelen f en R gemengde lineaire regressiemodellen toe. In deze modellen introduceren, naast de variabelen van belang met betrekking tot de behandeling en conditie van elke luchtpijp, het percentage occlusie als een monotoon effect en een onafhankelijke term per luchtpijp als een willekeurige factor.</li>
</ol>

<ol><li>Ch'ng, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstruction+of+the+%28Crico%29trachea+for+malignancy+in+the+virgin+and+irradiated+neck%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Plastic%2C+Reconstructive+%26+Aesthetic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Reconstruction of the (Crico)trachea for malignancy in the virgin and irradiated neck.</a> Journal of Plastic, Reconstructive & Aesthetic Surgery. 65 (12), 1645-1653 (2012).</li>
<li>Johnson, C. M., Guo, D. H., Ryals, S., Postma, G. N., Weinberger, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+feasibility+of+gamma+radiation+sterilization+for+decellularized+tracheal+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Laryngoscope%22%5BJournal%5D)">The feasibility of gamma radiation sterilization for decellularized tracheal grafts.</a> Laryngoscope. 127 (8), 258-264 (2017).</li>
<li>de Donato, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prosthesis+infection%3A+prevention+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Prosthesis infection: prevention and treatment.</a> The Journal of Cardiovascular Surgery. 55 (6), 779-792 (2014).</li>
<li>Vangsness, C. T., Dellamaggiora, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+safety+sterilization+and+tissue+banking+issues+for+soft+tissue+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Clinics+in+Sports+Medicine%22%5BJournal%5D)">Current safety sterilization and tissue banking issues for soft tissue allografts.</a> Clinics in Sports Medicine. 28 (2), 183-189 (2009).</li>
<li>Den Hondt, M., Vanaudenaerde, B. M., Delaere, P., Vranckx, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Twenty+years+of+experience+with+the+rabbit+model%2C+a+versatile+model+for+tracheal+transplantation+research%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Aesthetic+Research%22%5BJournal%5D)">Twenty years of experience with the rabbit model, a versatile model for tracheal transplantation research.</a> Plastic and Aesthetic Research. 3 (7), 223-230 (2016).</li>
<li>Hysi, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+orthotopic+transplantation+of+short+tracheal+segments+without+immunosuppressive+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Cardiothoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Successful orthotopic transplantation of short tracheal segments without immunosuppressive therapy.</a> European Journal of Cardiothoracic Surgery. 47 (2), 54-61 (2015).</li>
<li>Wurtz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracheal+reconstruction+with+a+composite+graft%3A+Fascial+flap-wrapped+allogenic+aorta+with+external+cartilage-ring+support%5BTitle%5D)+AND+%22Interactive+Cardiovascular+and+Thoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Tracheal reconstruction with a composite graft: Fascial flap-wrapped allogenic aorta with external cartilage-ring support.</a> Interactive Cardiovascular and Thoracic Surgery. 16 (1), 37-43 (2013).</li>
<li>White, A., Burns, D., Christensen, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+terminal+sterilization+using+supercritical+carbon+dioxide%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Effective terminal sterilization using supercritical carbon dioxide.</a> Journal of Biotechnology. 123 (4), 504-515 (2006).</li>
<li>Qiu, Q. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+bacterial+spores+and+viruses+in+biological+material+using+supercritical+carbon+dioxide+with+sterilant%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Materials+Research.+Part+B%2C+Applied+Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Inactivation of bacterial spores and viruses in biological material using supercritical carbon dioxide with sterilant.</a> Journal of Biomedical Materials Research. Part B, Applied Biomaterials. 91 (2), 572-578 (2009).</li>
<li>Lange, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pilot+study+of+a+novel+vacuum-assisted+method+for+decellularization+of+tracheae+for+clinical+tissue+engineering+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Tissue+Engineering+and+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Pilot study of a novel vacuum-assisted method for decellularization of tracheae for clinical tissue engineering applications.</a> Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 11 (3), 800-811 (2017).</li>
<li>Wedum, A. G., Hanel, E., Phillips, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultraviolet+sterilization+in+microbiological+laboratories%5BTitle%5D)+AND+%22Public+Health+Reports%22%5BJournal%5D)">Ultraviolet sterilization in microbiological laboratories.</a> Public Health Reports. 71 (4), 331-336 (1956).</li>
<li>Hennessy, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supercritical+carbon+dioxide-based+sterilization+of+decellularized+heart+valves%5BTitle%5D)+AND+%22JACC.+Basic+to+Translational+Science%22%5BJournal%5D)">Supercritical carbon dioxide-based sterilization of decellularized heart valves.</a> JACC. Basic to Translational Science. 2 (1), 71-84 (2017).</li>
<li>Crapo, P. M., Gilbert, T. W., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+tissue+and+whole+organ+decellularization+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">An overview of tissue and whole organ decellularization processes.</a> Biomaterials. 32 (12), 3233-3243 (2011).</li>
<li>Balestrini, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sterilization+of+lung+matrices+by+supercritical+carbon+dioxide%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+C%2C+Methods%22%5BJournal%5D)">Sterilization of lung matrices by supercritical carbon dioxide.</a> Tissue Engineering. Part C, Methods. 22 (3), 260-269 (2016).</li>
<li>AENOR. UNE-EN. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ISO+11737-1%3A2006.+Esterilizaci%C3%B3n+de+productos+sanitarios.+M%C3%A9todos+biol%C3%B3gicos.+Parte+1%3A+Determinaci%C3%B3n+de+la+poblaci%C3%B3n+de+microorganismos+en+los+productos%5BTitle%5D)+AND+%22AENOR.+UNE-EN%22%5BJournal%5D)">ISO 11737-1:2006. Esterilización de productos sanitarios. Métodos biológicos. Parte 1: Determinación de la población de microorganismos en los productos.</a> AENOR. UNE-EN. , Published online 2006 (2006).</li>
<li>Uriarte, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+properties+of+acellular+mouse+lungs+after+sterilization+by+gamma+irradiation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Mechanical+Behavior+of+Biomedical+Materials%22%5BJournal%5D)">Mechanical properties of acellular mouse lungs after sterilization by gamma irradiation.</a> Journal of the Mechanical Behavior of Biomedical Materials. 40, 168-177 (2014).</li>
<li>Sun, W. Q., Leung, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calorimetric+study+of+extracellular+tissue+matrix+degradation+and+instability+after+gamma+irradiation%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Calorimetric study of extracellular tissue matrix degradation and instability after gamma irradiation.</a> Acta Biomaterialia. 4 (4), 817-826 (2008).</li>
<li>Nguyen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reducing+the+radiation+sterilization+dose+improves+mechanical+and+biological+quality+while+retaining+sterility+assurance+levels+of+bone+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Reducing the radiation sterilization dose improves mechanical and biological quality while retaining sterility assurance levels of bone allografts.</a> Bone. 57 (1), 194-200 (2013).</li>
<li>Helder, M. R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-dose+gamma+irradiation+of+decellularized+heart+valves+results+in+tissue+injury+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22The+Annals+of+Thoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Low-dose gamma irradiation of decellularized heart valves results in tissue injury in vitro and in vivo.</a> The Annals of Thoracic Surgery. 101 (2), 667-674 (2016).</li>
<li>Martínez-Hernández, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularized+tracheal+prelamination+implant%3A+A+proposed+bilateral+double+organ+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Artificial+Organs%22%5BJournal%5D)">Decellularized tracheal prelamination implant: A proposed bilateral double organ technique.</a> Artificial Organs. 45 (12), 1491-1500 (2021).</li>
<li>Feldman, A. T., Wolfe, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+processing+and+hematoxylin+and+eosin+staining%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Tissue processing and hematoxylin and eosin staining.</a> Methods in Molecular Biology. 1180, 31-43 (2014).</li>
<li>López Caballero, J., Peña, M., De Federico, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coloraciones+para+fibras+col%C3%A1genas+y+el%C3%A1sticas+del+tejido+conjuntivo.+Coloraciones+para+sustancia+amiloidea%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratorio+de+Anatom%C3%ADa+Patologica%22%5BJournal%5D)">Coloraciones para fibras colágenas y elásticas del tejido conjuntivo. Coloraciones para sustancia amiloidea.</a> Laboratorio de Anatomía Patologica. , McGraw-Hill. 175-195 (1993).</li>
<li>Martínez-Hernández, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+standardised+approach+to+the+biomechanical+evaluation+of+tracheal+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">A standardised approach to the biomechanical evaluation of tracheal grafts.</a> Biomolecules. 11 (10), 1461(2021).</li>
<li>Kajbafzadeh, A. M., Javan-Farazmand, N., Monajemzadeh, M., Baghayee, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determining+the+optimal+decellularization+and+sterilization+protocol+for+preparing+a+tissue+scaffold+of+a+human-sized+liver+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+C%2C+Methods%22%5BJournal%5D)">Determining the optimal decellularization and sterilization protocol for preparing a tissue scaffold of a human-sized liver tissue.</a> Tissue Engineering. Part C, Methods. 19 (8), 642-651 (2013).</li>
<li>Wehmeyer, J. L., Natesan, S., Christy, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+sterile+amniotic+membrane+tissue+graft+using+supercritical+carbon+dioxide%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+C%2C+Methods%22%5BJournal%5D)">Development of a sterile amniotic membrane tissue graft using supercritical carbon dioxide.</a> Tissue Engineering. Part C, Methods. 21 (7), 649-659 (2015).</li>
<li>Ross, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+stem+cells+seeded+into+decellularized+rat+kidney+scaffolds+endothelialize+and+remodel+basement+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Organogenesis%22%5BJournal%5D)">Mouse stem cells seeded into decellularized rat kidney scaffolds endothelialize and remodel basement membranes.</a> Organogenesis. 8 (2), 49-55 (2012).</li>
</ol>

Geen van de auteurs heeft belangenverstrengeling.

Er bestaan verschillende sterilisatiestrategieën. Superkritisch CO2dringt volledig door in weefsels, verzuurt het medium en deconstrueert de cellulaire fosfolipide dubbellaag met eenvoudige eliminatie door middel van drukverlaging van het implantaat 8,14,25. Ultraviolette straling is ook gebruikt en de effectiviteit ervan bij de luchtpijp van knaagdieren is gepubliceerd, hoewel er slechts een paar rapporten in de lite...

Sterilisatie van een implantaat is een basisvoorwaarde voor de levensvatbaarheid ervan; In feite zijn prothesen die succesvol zijn gebleken, die geïmplanteerd in steriele gebieden (bloedvaten, hart, bot, enz.) 1. De luchtpijp heeft twee oppervlakken: een oppervlak in contact met de externe omgeving, dat daarom niet steriel is, en een oppervlak naar het mediastinum, dat steriel is. Daarom is het vanaf het moment dat de luchtpijp wordt geëxtraheerd geen steriel orgaan. Ondanks dat het daaropvolgende decellularisatieproces wordt uitgevoerd in maximale steriele omstandigheden, is het geen sterilisatiestap2. De implantatie van vreemd materiaal op zich brengt een risico op infectie met zich mee vanwege de probacteriële micro-omgeving die het produceert3en een risico tot 0,014% op ziekteoverdracht van de donor naar de ontvanger, zelfs als het materiaal is gesteriliseerd4. Om een correcte vascularisatie van de luchtpijp te garanderen, ondergaat deze in bijna alle experimentele transplantatieprotocollen eerst heterotope implantaat 5,6,7 naar een steriel gebied (spier, fascia, omentum, subcutaan, enz.); Dit komt omdat het implanteren van een niet-steriel element in dit medium zou leiden tot infectie van het gebied3.
Er zijn verschillende mogelijke strategieën om een steriel implantaat te verkrijgen. Met behulp van superkritische CO2is terminale sterilisatie 8,9 bereikt. Andere methoden, zoals ultraviolette straling of behandeling met stoffen zoals perazijnzuur, ethanol, zuurstofperoxide en geëlektrolyseerd water, hebben verschillende succespercentages bij sterilisatie verkregen, bijna altijd afhankelijk van hun doseringen, maar er is aangetoond dat ze de biomechanische kenmerken van implantaten beïnvloeden. Inderdaad, sommige stoffen, zoals ethyleenoxide, kunnen de structuur van de geïmplanteerde matrix aanzienlijk veranderen en kunnen zelfs ongewenste immunogene effecten veroorzaken. Om deze reden kunnen veel van deze strategieën niet worden toegepast op biologische modellen 2,10,11,12,13.
De meest bestudeerde en geaccepteerde sterilisatiestrategie is die van de ISO 11737-1:2006-norm voor de sterilisatie van medische hulpmiddelen die bij mensen zijn geïmplanteerd, met een gammastralingsdosis van 25 kGy. Deze verordening richt zich echter alleen op de sterilisatie van inerte, niet-biologische elementen14,15. Bovendien zijn de doses radiotherapie bij de radicale behandeling van carcinoom drie ordes van grootte lager dan die welke worden gebruikt om medische hulpmiddelen te steriliseren1. Met dit in gedachten kunnen we concluderen dat deze dosis niet alleen de microbiota zou doden, maar ook de biologische structuur van het implantaat zou vernietigen en radicaal zou veranderen. Er is ook de mogelijkheid dat het bij afbraak resterende lipiden zou genereren, die mogelijk cytotoxisch kunnen zijn en de enzymatische afbraak van de steiger 13,14,15,16,17 kunnen versnellen, zelfs bij gebruik van doses zo laag als 1,9 kGy en met schade die recht evenredig is met de ontvangen stralingsdosis 17.
Het doel van dit artikel is dus om te proberen de stralingsdosis te identificeren die het mogelijk maakt om een steriel implantaat te verkrijgen met minimale schadelijke effecten veroorzaakt door bestraling 2,18,19. De strategie die we volgden omvatte de bestraling van gedecellulariseerde en bestraalde luchtpijpen bij verschillende geëscaleerde doses binnen een bereik van kilograys (0,5, 1, 2, 3 kGy, enz.), totdat een negatieve cultuur werd bereikt. Aanvullende tests werden uitgevoerd voor die doses die negatieve culturen bereikten, om sterilisatie te bevestigen. Na het bepalen van de minimale dosis om sterilisatie te verkrijgen, werden de structurele en biomechanische effecten van de bestraling op de luchtpijp gecontroleerd. Alle statistieken werden vergeleken met de controle inheemse konijnen luchtpijpen. De sterilisatie van het construct werd vervolgens in vivo getest door de luchtpijpen in Nieuw-Zeelandse witte konijnen te implanteren.

<table><tbody><tr><td>6-0 nylon monofilament suture&nbsp;</td><td>Monosoft. Covidien; Mansfield, MA, USA</td><td>SN-5698G</td><td></td></tr><tr><td>Amphotericin B 5%</td><td>Gibco Thermo Fisher Scientific; Waltham, MA USA</td><td>15290018</td><td></td></tr><tr><td>Bioanalyzer</td><td>Agilent, Santa Clara, CA, USA</td><td>G2939BA</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfine</td><td>Buprex. Reckitt Benckiser Healthcare; Hull, Reino Unido</td><td>N02AE01</td><td></td></tr><tr><td>Compressie desktop UTM</td><td>Microtest, Madrid, Spanje</td><td>EM1/10/FR</td><td></td></tr><tr><td>Cryostaat</td><td>Leica CM3059, Leica Biosystems, Wetzlar, Duitsland</td><td>CM3059</td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich; MO, USA</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>DMEM&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific; Waltham, MA, USA</td><td>11965084</td><td></td></tr><tr><td>DNA-extractiekit</td><td>DNeasy-extractiekit Quiagen, Hilden, Duitsland</td><td>4368814</td><td></td></tr><tr><td>Enrofloxacine, 2,5%</td><td>Boehringer Ingelheim, Ingelheim am Rhein, Duitsland</td><td>0035-0002</td><td></td></tr><tr><td>Fataal runder serum (FBS)</td><td>GE Healthcare Hyclone; Madrid, Spanje</td><td>SH20898.03IR</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescentiemicroscoop</td><td>Leica DM2500 (Leica, Wetzlar, Duitsland)</td><td>DM2500??</td><td></td></tr><tr><td>Vriescontainer&nbsp;</td><td>Mr Frosty. Thermo Fisher; Madrid, Spanje</td><td>&nbsp;5100-0001</td><td></td></tr><tr><td>Isofluraan</td><td>Isoflo; Proyma Ganadera; Ciudad Real, Spanje&nbsp;</td><td>8.43603E+12</td><td></td></tr><tr><td>Ketamine</td><td>Imalgene. Merial; Toulouse, Frankrijk</td><td>BOE127823</td><td></td></tr><tr><td>Lineaire versneller&nbsp;</td><td>"True Beam". Varian, Palo Alto, California, USA</td><td>H191001</td><td></td></tr><tr><td>Magneetroerer</td><td>Orbital Shaker PSU-10i. Biosan; Riga, Letland</td><td>BS-010144-AAN</td><td></td></tr><tr><td>Meloxicam 5 mg/ml</td><td>Boehringer Ingelheim, Ingelheim am Rhein, Duitsland</td><td>6283-MV</td><td></td></tr><tr><td>Penicilline-streptomycine 5%</td><td>Gibco Thermo Fisher Scientific; Waltham, MA USA</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital natrium</td><td>Dolethal. Vetoquinol; Madrid, Spanje</td><td>3.60587E+12</td><td></td></tr><tr><td>Fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS)</td><td>Sigma-Aldrich; MO, USA</td><td>P2272</td><td></td></tr><tr><td>Propofol</td><td>Propofol Lipuro. B. Braun Melsungen AG; Melsungen, Duitsland</td><td>G 151030</td><td></td></tr><tr><td>Proteinase K</td><td>Gibco Thermo Fisher Scientific; Waltham, Massachusetts, USA</td><td>S3020</td><td></td></tr><tr><td>PVC holle buizen</td><td>Cristallo Extra; FITT, Sandrigo, Italië</td><td>hhdddyyZ</td><td></td></tr><tr><td>PVC-stent&nbsp;</td><td>ArgyleTM Medtronic; Istanbul, Turkije</td><td>019 5305 1</td><td></td></tr><tr><td>R-software, versie 3.5.3 R Core</td><td>R Foundation for Statistical Computing</td><td>R 3.5.3</td><td></td></tr><tr><td>Natriumdodecylsulfaat (SDS)</td><td>Sigma-Aldrich; MO, USA</td><td>8,17,034</td><td></td></tr><tr><td>Spectrofotometer</td><td>Nanodrop, Life Technologies; Isogen Life Science. Utrecht, Nederland</td><td>ND-ONEC-W</td><td></td></tr><tr><td>Spreadsheet</td><td>Microsoft Excel voor Mac, versie 16.23, Redmond, WA, USA</td><td>2864993241</td><td></td></tr><tr><td>Traction Universal Testing Machine&nbsp;</td><td>Testing Machines, Veenendaal, Nederland</td><td>84-01</td><td></td></tr><tr><td>UTM-software</td><td>TestWorks 4, MTS Systems Corporation, Eden Prairie, MN, USA&nbsp;</td><td>100-093-627 F</td><td></td></tr><tr><td>VECTASHIELD-montagemedium&nbsp;</td><td>Vector Labs, Burlingame; CA; USA</td><td>H-1000-10</td><td></td></tr><tr><td>Xylacine</td><td>Xilagesic. Calier; Barcelona, Spanje</td><td>20102-003</td><td></td></tr></tbody></table>

lage dosis gammastralingssterilisatie voor gedecellulariseerde tracheale grafts

Low-Dose Gamma Radiation Sterilization for Decellularized Tracheal Grafts

Een van de belangrijkste aspecten om ervoor te zorgen dat een transplantatie correct evolueert, is de steriliteit van het medium. Gedecellulariseerde tracheale transplantatie omvat het implanteren van een orgaan dat oorspronkelijk in contact stond met de omgeving, waardoor het vanaf het begin niet steriel was. Hoewel het decellularisatieprotocol (door middel van detergentexpositie [2% natriumdodecylsulfaat], continu roeren en osmotische schokken) wordt uitgevoerd in overeenstemming met aseptische maatregelen, biedt het geen sterilisatie. Daarom is een van de belangrijkste uitdagingen het waarborgen van steriliteit voorafgaand aan in vivo implantatie. Hoewel er vastgestelde gammastralingssterilisatieprotocollen zijn voor anorganische materialen, zijn er geen dergelijke maatregelen voor organische materialen. Bovendien kunnen de bestaande protocollen voor anorganische materialen niet worden toegepast op organische materialen, omdat de vastgestelde stralingsdosis (25 kGy) het implantaat volledig zou vernietigen. Dit artikel bestudeert het effect van een geëscaleerde stralingsdosis in een gedecellulariseerde konijnenluchtpijp. We handhaafden het dosisbereik (kGy) en testten geëscaleerde doses totdat we de minimale dosis vonden waarbij sterilisatie wordt bereikt. Na het bepalen van de dosis bestudeerden we de effecten ervan op het orgaan, zowel histologisch als biomechanisch. We stelden vast dat hoewel 0,5 kGy geen steriliteit bereikte, doses van zowel 1 kGy als 2 kGy dat wel deden, waarbij 1 kGy daarom de minimale dosis was die nodig was om sterilisatie te bereiken. Microscopische studies toonden geen relevante veranderingen in vergelijking met niet-gesteriliseerde organen. Axiale biomechanische eigenschappen werden helemaal niet gewijzigd en er werd slechts een lichte vermindering van de kracht per lengte-eenheid waargenomen die het orgaan radiaal kan verdragen. We kunnen daarom concluderen dat 1 kGy volledige sterilisatie van gedecellulariseerde konijnenluchtpijp bereikt met een minimale of geen effecten op het orgaan.

Decellularisatie DAPI-kleuring toont de afwezigheid van DNA en er werden geen DNA-waarden hoger dan 50 ng gedetecteerd in een van de luchtpijpen door elektroforese, waarbij alle fragmenten kleiner waren dan 200 bp20.
Microbiële cultuur Twee van de acht stukken die aan 0,5 kGy werden onderworpen, vertoonden kleurverandering in minder dan 1 week. Geen van de met 1 kGy en 2 kGy bestraalde stukken vertoonde enige kleurverandering (<st...

Het verkrijgen van sterilisatie is essentieel voor tracheale weefseltransplantatie. Hierin presenteren we een sterilisatieprotocol met behulp van lage dosis gammastraling die volledig wordt getolereerd door organen.

Lage dosis gammastralingssterilisatie voor gedecellulariseerde tracheale grafts

One of the main key aspects in ensuring that a transplant evolves correctly is the sterility of the medium. Decellularized tracheal transplantation ...

Dit protocol biedt een volledig sterilisatieproces voor elk niet-steriel orgaan zonder de kenmerken ervan te beïnvloeden. Het belangrijkste doel van deze techniek omvat de mogelijkheid om een orgaan te steriliseren zonder de eigenschappen ervan te beïnvloeden. Hoewel deze techniek zich heeft gericht op luchtpijpen, heeft het aangetoond dat lagere gammastralingsdoses biologische materialen effectief kunnen steriliseren.Een individu kan het probleem onder ogen zien door de laagste effectieve dosis voor de verschillende soorten organen te definiëren. Vervolgens wordt aanbevolen om te beginnen met een lagere dosering en deze te verhogen totdat de sterilisatie is bereikt. Begin met het snijden van de luchtpijp ontleed van geëuthanaseerde Nieuw-Zeelandse witte konijnen, of Oryctolagus cuniculus, in stukken van twee centimeter.Verwijder met een schaar het omliggende bindweefsel en de binnenste slijmvlieslaag. Dompel de monsters onder in 12 milliliter PBS-oplossing die SDS, 5% penicilline streptomycine en 5% amfotericine bevat. Onderwerp de luchtpijpen gedurende vijf weken bij kamertemperatuur aan constant roeren met een magneetroerder bij 400 RPM.Geef wekelijks twee uur osmotische shock door de luchtpijpen onder te dompelen in gedestilleerd water voordat u het medium vervangt. Na vijf weken cryogeniseer je de luchtpijpmonsters met een mengsel van 12 milliliter van 80% FBS en 20% DMSO in een vriescontainer bij min 80 graden Celsius. Ontdooi na 13 tot 15 dagen de luchtpijpen in een waterbad bij 37 graden Celsius.Was ze vervolgens met PBS. Om het monster te bestralen, plaatst u vier tracheale stukken in 20 milliliter PBS in methacrylaat T25-kweekkolven, terwijl u bellenvorming voorkomt. Voer de bestraling uit met behulp van een lineaire versneller met fotonen met een nominale energie van 10 megavolt die filtervrije bundels afvlakken.Pas een dosistempo van 2.400 monitoreenheden per minuut toe en stel andere parameters in zoals beschreven in het manuscript. Eenmaal klaar, kweek het monster in 30 milliliter DMEM aangevuld met 10% geïnactiveerde FBS zonder antibiotica of antischimmelmiddelen. Incubeer de cultuur in een standaard weefselincubator bij 37 graden Celsius en 5% koolstofdioxide gedurende twee weken en inspecteer het elke 24 uur op besmettingsparameters zoals gemiddelde pH, kleur en troebelheidsveranderingen.Voer trekproeven uit op een universele tractiedesktoptestmachine of UTM-verplaatsingsregeling, uitgerust met kracht- en positiesensoren en een computer met speciaal ontworpen software. Leg elke 0,4 seconden gegevens vast en exporteer deze naar een spreadsheet. Bouw trekbekken aangepast aan het gemiddelde kaliber van de konijnenluchtpijpen uit zuivere monolaag niet-toxisch kristalpolyvinylchloride of PVC holle buizen.Sectie de geleidt in drie centimeter lange segmenten. Om de termino-terminale hechting zonder vooringenomenheid uit te voeren, boort u 12 voorgevormde gaten op twee millimeter van de rand van de kaken, gescheiden door 2,5 millimeter. Bevestig vervolgens de PVC-glazen buizen aan de luchtpijp van het konijn door termino-terminale anastomose met een continue 6-0 nylon monofilamenthechting door afwisselend uitgevoerde gaten van vijf millimeter die op twee millimeter afstand van de rand van de luchtpijp aanwezig zijn.Rek alle stukken uit met een verplaatsingssnelheid van 5,0 millimeter per minuut. Noteer vervolgens de variabelen, zoals maximale spanning en spanning, de opgeslagen energie per eenheid luchtpijpvolume en de modulus van Young. Voer radiale compressietests uit op een UTM met compressiedesktop die is uitgerust met een loadcel van 15 newton om krachtgegevens, positie en tijd te verkrijgen.Leg gegevens vast en exporteer ze met tussenpozen van 0,5 seconde naar spreadsheets. Plaats de luchtpijpen met het vliezige gebied rustend op de onderste plaat voor de geleidelijke stijging van de plaat naar de bovenste plaat met een constante snelheid van vijf millimeter per minuut. Bereken elke variabele per lengte-eenheid van het monster, de stijfheid en de energie per eenheid van het oppervlak die nodig is om de luchtpijp volledig af te sluiten.Plaats een steriele intraluminale PVC-stent van maat 14 en zorg voor een marge van drie tot vier millimeter aan elk uiteinde. Bevestig de stent met een enkele 6-0 nylon monofilamentsteek door de intercartilagineuze ruimte van het eerste kraakbeen. Maak onder aseptische omstandigheden en met steriel materiaal een longitudinale centrale thoracale incisie van drie centimeter en oogst bilaterale pedicled flappen bestaande uit borstfascia en een spiercomponent.Wikkel de luchtpijpen met de flap in vier konijnen, één luchtpijp op elke hemathorax. Zodra de operatie is voltooid, keert u de anesthesie om door de toediening van isofluraan te onderbreken. Van de acht stukken die werden blootgesteld aan 0,5 kilogray straling, vertoonden twee stukken binnen een week een verandering in mediakleur.Geen van de stukken die op één of twee kilogrijs werden bestraald, vertoonde echter enige verandering in mediakleur. In vergelijking met de controle werden geen veranderingen in het collageen- of elastische vezelverdelingspatroon gedetecteerd in de geanalyseerde monsters die bij verschillende stralingsdoses werden bestraald. De gegevens die zijn verkregen bij de trekproef op bestraalde luchtpijpen worden hier weergegeven.Spanningsspanningscurves voor gedecellulariseerde en bestraalde luchtpijpen onthulden geen veranderingen in vergelijking met niet-gesteriliseerde luchtpijpen. De compressietests die zijn uitgevoerd op de oorspronkelijke luchtpijpen of controles en de gedecellulariseerde, gecryopreserveerde en bestraalde luchtpijpen worden weergegeven. De overeenkomstige grafieken toonden aan dat bestraling het percentage occlusie niet veranderde in vergelijking met inheemse luchtpijp.Gammastraling veroorzaakte een klinisch minimale maar statistisch significante afname van radiobiomechanische kenmerken en de variabele kracht per lengte-eenheid. Het histologisch onderzoek toonde het sterk georganiseerde bindweefsel in de vorm van het perichondrium van de inheemse luchtpijp. Het kraakbeen was intact en vertoonde geen tekenen van necrose.Bij het implanteren van radiologisch element in een levend wezen zijn de steriliteit van het implantaat en het steriele proces van het grootste belang om infectie en weefselafstoting te voorkomen. Er is een breed scala aan organen die moeten worden geïmplanteerd na het genereren van weefsel, en ze moeten steriel zijn. Het volgen van dit proces kan een volledige sterilisatie bereiken zonder de belangrijkste kenmerken van het orgaan te beïnvloeden.

low-dose-gamma-radiation-sterilization-for-decellularized-tracheal

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

Belangrijke doorbraken in de identificatie van stamcellen wordt voortdurend gemaakt. Voor het vertalen van deze ontdekkingen, moet echter nieuwe methoden voor cellulaire levering worden bedacht. Hier heb ik melden dat de luchtwegen een veilige route voor stamceltransplantatie naar de longen te geven.

Tracheotomie: een methode voor de transplantatie van stamcellen voor de Lung

This video demonstrates a method of producing decellularized extracellular matrix or ECM scaffolds by applying antegrade perfusion of detergents through the vasculature. The structural ECM scaffolds can then be used to analyze ECM remodeling associated with cardiopulmonary disease.

Cardiopulmonary Complex Decellularization: A Technique for Decellularizing Heart and Lungs from Murine Model

Het artikel beschrijft een methode voor de productie van een acellulair matrix rat darm. De afleiding van intestinale steigers is belangrijk voor toekomstige toepassingen in tissue engineering, stamcel biologie en drugstesten.

Een Decellularisatie Methode voor de productie van een natuurlijke Acellular Intestinale Matrix

Decellularisatie van hele organen produceert natuurlijke biologische scaffolds die kunnen worden gebruikt voor regeneratieve geneeskunde. Er wordt een beschrijving gepresenteerd van een niet-menselijke primaatmodel van longregeneratie waarbij hele longen worden gedecellulariseerd en vervolgens worden gezaaid met volwassen stamcellen en endotheelcellen in een bioreactor die vasculaire circulatie en vloeibare media-ventilatie vergemakkelijkt.

Niet-menselijke primaat longdecellurisatie en recellerisatie met behulp van een gespecialiseerde bioreactor voor grote organen

Dit protocol richt efficiënt muis embryonale stamcellen afgeleide definitieve endoderm aan de luchtwegen rijpen epitheelcellen. Deze differentiatie techniek maakt gebruik van 3-dimensionale cellen ontdane long scaffolds rechtstreekse long lijn specificatie, in een gedefinieerd serumvrij cultuurmedium setting.

Generatie van ESC afgeleide Mouse epitheelcellen behulp van cellen ontdane Lung Steigers

Graft stenose vormt een kritische obstakel in weefsel ontworpen airway vervanging. Om te onderzoeken cellulaire mechanismen ten grondslag liggen aan stenose, gebruiken we een lymfkliertest model van weefsel ontworpen tracheale vervanging met geplaatste beenmerg mononucleaire cellen (BM-MNC). Hier, detail we onze protocol, met inbegrip van de steiger productie, BM-MNC isolatie, graft zaaien en implantatie.

Zaaien en implantatie van een Biosynthetic weefsel-engineered tracheale Graft in een muismodel

Laryngotracheale stenose is het resultaat van pathologische litteken afzetting die de tracheale luchtweg kritisch vernauwt en geen effectieve medische therapieën mist. Met behulp van een PLLA-PCL (70% poly-L-lactide en 30% polycaprolactone) stent als een lokale drug delivery systeem, potentiële therapieën gericht op het verminderen van litteken proliferatie in de luchtpijp kan worden bestudeerd.

Ontwerp van een biocompatibele drug-Eluting tracheale stent in muizen met Laryngotracheale stenose

Dit protocol introduceert een methode om een steiger te ontwikkelen met behulp van gedecellulariseerde rattennieren. Het protocol omvat decellularisatie- en recellularisatieprocessen om de biologische beschikbaarheid te bevestigen. Decellularisatie wordt uitgevoerd met Triton X-100 en natriumdodecylsulfaat.

Voorbereiding van gedecellulariseerde niersteigers bij ratten

Het protocol beschrijft een beeldvormingsgerichte bioreactor die de selectieve verwijdering van het endogene epitheel uit de rattenluchtpijp en homogene verdeling van exogene cellen op het lumenoppervlak mogelijk maakt, gevolgd door langdurige in vitro kweek van het celweefselconstruct.

Imaging-guided bioreactor voor het genereren van bio-technisch luchtwegweefsel

Het muizen intrapulmonale tracheale transplantatie (IPTT) model is waardevol voor het bestuderen van obliteratieve luchtwegaandoeningen (OAD) na longtransplantatie. Het biedt inzicht in longspecifiek immunologisch en angiogeen gedrag bij luchtwegvernietiging na allotransplantatie met een hoge reproduceerbaarheid. Hier beschrijven we de IPTT-procedure en de verwachte resultaten.

Intrapulmonale tracheale transplantatie bij muizen: een model voor het onderzoeken van obliteratieve luchtwegaandoeningen na longtransplantatie

Dit artikel beschrijft hoe bio-engineered muizenlongen kunnen worden gemaakt met behulp van decellularisatie- en recellularisatiemethoden. Het beschrijft ook de daaropvolgende orthotope longtransplantatie.

Transplantatie van bio-engineered long met behulp van gedecellulariseerde muizenlongen en primaire menselijke endotheelcellen

Leer een lage dosis gammastralingssterilisatie voor gedecellulariseerde tracheale grafts met behoud van weefseleigenschappen. Deze methode gebruikt New Zealand white rabbits voor veilige orgaantransplantatie.

Lage dosis gammastralingssterilisatie voor gedecellulariseerde tracheale grafts

Meer video's verkennen