Name: Het vaststellen van 3-dimensionale sferoïden uit van de patiënt afgeleide tumormonsters en het evalueren van hun gevoeligheid voor geneesmiddelen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-12-16T13:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 38 s
Description: Leer 3D-tumorsferoïden genereren uit primaire kankercellen voor onderzoek naar geneesmiddelgevoeligheid. Deze kosteneffectieve methode ondersteunt gepersonaliseerde behandelingen en verbetert het begrip van tumorbiologie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De verzameling van menselijke tumormonsters die werden gebruikt voor de primaire tumorcelculturen werd uitgevoerd volgens de door de institutionele beoordelingsraad (IRB) goedgekeurde protocollen in het Rabin Medical Center met schriftelijke geïnformeerde toestemming van de patiënten. Patiënten die in aanmerking kwamen voor deelname aan de studie waren mannelijke en vrouwelijke volwassen en pediatrische kankerpatiënten met niet-gemetastaseerde borst-, darm-, lever-, long-, neuro-endocriene, eierstok- of pancreaskanker, kinderkanker of gemetastaseerde kanker. Het enige uitsluitingscriterium was het gebrek aan capaciteit om geïnformeerde toestemming te geven.
1. Generatie en verzameling van sferoïden
OPMERKING: De isolatie van primaire tumorcellen kan worden uitgevoerd zoals beschreven door Kodak et al.8. Belangrijk is dat primaire tumorcellen die worden gebruikt voor het genereren van de sferoïden direct kunnen worden afgeleid van patiëntmonsters verkregen door biopsie, resectie, enz., Of indirect met behulp van tumormonsters van patiënt-afgeleide xenograft (PDX) -modellen, zoals beschreven door Moskovits et al.9.
<ol><li>Bereid een eencellige suspensie van aanhangende primaire tumorcelculturen van 75% -100% samenvloeiing door een kleine kolf (T25) te nemen met een eencellige aanhangende primaire celcultuur, de celkweekmedia te verwijderen, te wassen met PBS en vervolgens 1 ml 1x Accutase (een celloslatingsoplossing) toe te voegen (zie de tabel met materialen) gedurende 3 minuten bij 37 °C.</li>
	<li>Neutraliseer de Accutase-oplossing door 5 ml celkweekmedium toe te voegen (RPMI-1640 kweekmedium aangevuld met 10% FBS, 1:100 penicilline-streptomycine, 1% niet-essentiële aminozuren en 1% L-glutamine; zie de tabel met materialen).</li>
	<li>Zuig de cellen op met een serologische pipet van 10 ml en deponeer ze in een conische buis van 15 ml. Centrifugeer de buis op 800 x g gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur.</li>
	<li>Verwijder het celkweekmedium, voeg 5 ml vers celkweekmedium toe aan de celkorrel en meng voorzichtig.</li>
	<li>Tel de levensvatbare cellen met een hemocytometer10. Neem hiervoor een aliquot van 50 μL van de celsuspensie en meng deze met 50 μL trypan blauw. Tel de levende cellen (de cellen die negatief zijn voor de blauwe kleur) en bereken het totale aantal levende cellen in de suspensie.</li>
	<li>Bereid een "3D-kweekmedium" voor (een celkweekmedium aangevuld met 5% keldermembraanmatrix; zie de materiaaltabel). OPMERKING: Het "3D-cultuurmedium" is vloeistofachtig bij kamertemperatuur. Bij 37 °C wordt de consistentie meer gelachtig (zodat de cellen bij elkaar blijven), hoewel het nog steeds kan worden gepipetteerd (omdat het slechts 5% keldermembraanmatrix bevat).</li>
	<li>Bereken het aantal cellen dat nodig is voor de bepaling en het totale benodigde volume; elke put moet 2.000-8.000 cellen bevatten in 200 μL medium.</li>
	<li>Bereid een celsuspensie met het gewenste aantal cellen (bijv. 4.000 cellen) in 200 μL van het "3D-kweekmedium" en meng voorzichtig met de pipet om een homogene verdeling te garanderen.</li>
	<li>Breng de suspensie over in een pipetteerreservoir. Voeg met behulp van een meerkanaalspipet 200 μL van de celsuspensie toe aan elke put van een ultralage 96-putplaat (zie de materiaaltabel). Meng vóór elke verzameling van de cellen de suspensie goed.</li>
	<li>Centrifugeer de plaat gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur op 300 x g om de clustering van de cellen af te dwingen, waardoor de celaggregatie wordt verbeterd, en incubeer de plaat bij 37 °C in een 5% CO2 bevochtigde incubator.</li>
	<li>Ververs elke 2-3 dagen het "3D-cultuurmedium". Centrifugeer de plaat op 300 x g gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur, verwijder voorzichtig 50% van het medium (100 μL) en gooi het weg en voeg 100 μL vers "3D-kweekmedium" toe om de bestaande oplossing te vervangen. Herhaal stap 1.11 en plaats de plaat terug in de 37 °C, 5% CO2 bevochtigde incubator. OPMERKING: Het medium moet worden verwijderd wanneer de plaat op 45° wordt gehouden en het medium mag alleen uit het bovenste deel worden verzameld om te voorkomen dat de cellen worden verzameld. Een vacuümafzuigsysteem mag niet worden gebruikt. Het verse medium moet langzaam en voorzichtig worden toegevoegd om de sferoïden, die zich al beginnen te vormen, niet te verstoren.</li>
	<li>Inspecteer de cellen elke 1-2 dagen onder een microscoop om de vorming van sferoïden te controleren. Meet de diameter van de gevormde sferoïden met behulp van het hulpmiddel "schaal" in de beeldvormingssoftware (zie de materiaaltabel). OPMERKING: Microscopische inspectie moet eerst onregelmatige ronde tot ovale lichamen onthullen die een bolvormige vorm aannemen naarmate de tijd vordert11,12.<ol><li>Wanneer de sferoïde diameter 100-200 μm bereikt, voert u de experimenten met de werkzaamheid van het geneesmiddel uit. OPMERKING: De experimenten met de werkzaamheid van het geneesmiddel worden uitgevoerd wanneer de sferoïden deze diameter bereiken, omdat op dat moment de meerderheid van de cellen zich vermenigvuldigt, wat bevorderlijk is voor het evalueren van de respons op de behandeling. Sferoïden met een grotere diameter bevatten een necrotische kern en een rustlaag11,12, wat resulteert in een kleiner deel van de prolifererende cellen die reageren op de behandeling.</li>
	</ol></li>
	<li>Gebruik voor het verzamelen van sferoïden een pipet van 1.000 μL om de sferoïden uit elke put te verzamelen en deponeer ze in een conische buis van 15 ml. OPMERKING: Sferoïden zijn inherent kwetsbaar en vereisen een voorzichtige behandeling. Wanneer u het medium met de sferoïden in de conische buis overbrengt, houdt u de buis op 45° en pipet u langzaam op de wand van de buis. Sferoïden zijn zichtbaar voor het oog.</li>
	<li>Centrifugeer de conische buis gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur op 300 x g en zuig het supernatant voorzichtig op en gooi het weg met behulp van een pipet.</li>
	<li>Voeg 0,5 ml van het celkweekmedium toe en resuspensie de pellet goed maar voorzichtig. Vermijd het maken van bubbels.</li>
	<li>Voer sferoïde tellen uit volgens de onderstaande stappen.<ol><li>Gebruik een plaat met 96 putten en teken een plusteken aan de onderkant van een put om de put in kwadranten te verdelen (om de telling bij te houden).</li>
		<li>Voeg 50 μL van de suspensie toe aan de put en tel de sferoïden handmatig onder de microscoop (met behulp van een 10x objectieflens).</li>
		<li>Tel de sferoïden in elk kwadrant, pas op dat u niet dubbel telt en bereken het totale aantal sferoïden in de put. OPMERKING: Voor de nauwkeurigheid van de telling, tel ten minste 50 sferoïden in een put. Als er minder dan 50 sferoïden zijn, meng dan voorzichtig de suspensie om een homogene verdeling te garanderen en tel opnieuw met behulp van een groter volume van de suspensie toegevoegd aan een nieuwe put. Als alternatief, als er minder dan 50 sferoïden in een put zijn, kunnen de sferoïden worden gecentrifugeerd en voorzichtig worden geresuspendeerd in een volume van <0,5 ml. Als er meer dan 100 sferoïden zijn, voeg dan celkweekmedium toe aan de sferoïde suspensie, meng voorzichtig en vertel.</li>
		<li>Bereken de sferoïdeconcentratie (sferoïde telling/telvolume [μL]) en bereken vervolgens het totale aantal sferoïden in de suspensie (sferoïdeconcentratie × totale volume).</li>
	</ol></li>
</ol>2. Drug efficacy assay (MTT assay)
NOOT: Voor details, zie van Meerloo et al.13. Ook moet voor de MTT-test alleen het celkweekmedium worden gebruikt en niet het "3D-kweekmedium" (het toevoegen van de keldermembraanmatrix is niet nodig en kan mogelijk de MTT-test verstoren).
<ol><li>Bereid in een nieuwe buis een sferoïde suspensie in een concentratie van 200 sferoïden per 200 μL celkweekmedium (RPMI-1640 kweekmedium aangevuld met 10% FBS, 1:100 penicilline-streptomycine, 1% niet-essentiële aminozuren en 1% L-glutamine).<ol><li>Bereid voor elke medicamenteuze behandeling een voorraad sferoïden voor in een buis van 15 ml. Bereken de hoeveelheid die nodig is voor elk medicijn door het aantal putten dat nodig is voor herhalingen: (5-8) × 200 μL. Voeg het medicijn toe aan de buis tot de uiteindelijke concentratie die nodig is. OPMERKING: Zie de representatieve resultatensectie met betrekking tot de geneesmiddelen die voor deze studie worden gebruikt en hun dosering. Ook worden de commerciële details van de geneesmiddelen vermeld in de tabel met materialen.</li>
	</ol></li>
	<li>Breng 200 μL van de sferoïde suspensie over in de putjes van een ultralage 96-putplaat en incubeer de plaat bij 37 °C in een 5% CO 2-bevochtigde incubator. Gebruik niet de externe rijen en kolommen van de 96-putplaat voor de test, omdat deze putten worden gekenmerkt door verhoogde verdamping, wat kan leiden tot verhoogde variabiliteit tussen de herhalingsexperimenten; voeg in plaats daarvan PBS toe aan deze putten. OPMERKING: Het is belangrijk dat de cultuur van de sferoïden homogeen is voordat de cultuur wordt gealiquoteerd in de 96-putplaat. Ook moet een controlevoorwaarde (d.w.z. onbehandelde sferoïden) in elk experiment worden opgenomen.</li>
	<li>Na het incuberen van de sferoïden met het onderzoeksgeneesmiddel gedurende 24-72 uur, centrifugeert u de plaat gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur op 300 x g en verwijdert u voorzichtig 170 μL van het celkweekmedium, waardoor 30 μL (inclusief de sferoïden) op de bodem van de put achterblijft. OPMERKING: Het verwijderen van de 170 μL celkweekmedium moet zorgvuldig worden gedaan, om de sferoïden niet te verwijderen. Houd de plaat op 45° en plaats één hand (met een donkere handschoen voor contrast) onder de putjes zodat de sferoïden zichtbaar zijn (witte stippen).</li>
	<li>Bereid de MTT-oplossing (0,714 mg/ml in fenolvrije RPMI, zie de tabel met materialen).</li>
	<li>Voeg 70 μL MTT-oplossing toe aan elk putje tot een eindvolume van 100 μL per put (de uiteindelijke MTT-concentratie in de put is 0,05 mg per 100 μL). Bereid bovendien "Blanke" putten voor met MTT-oplossing zonder cellen. OPMERKING: MTT is lichtgevoelig. Daarom moet het licht in de kap worden uitgeschakeld en moet de buis met de MTT-oplossing worden bedekt met aluminiumfolie.</li>
	<li>Incubeer de plaat bij 37 °C in een 5% CO2 bevochtigde incubator gedurende 3-4 uur totdat een verandering in de kleur van de oplossing in de putten (paarse kleur vertegenwoordigt levende cellen) wordt waargenomen.</li>
	<li>Wanneer een verandering wordt waargenomen, voegt u 100 μL stopoplossing (0,1N HCl in isopropanol) toe aan elke put en mengt u voorzichtig de inhoud van de putten zonder bubbels te creëren.</li>
	<li>Lees de absorptie van de plaat af in een Fluorometer-ELISA-lezer (zie de Materiaaltabel) bij een golflengte van 570 nm en een achtergrondgolflengte van 630-690 nM. OPMERKING: Als de beschikbare fluorometer-ELISA-lezer de 96-putplaat met ultralage bevestiging niet kan lezen, breng dan de inhoud van elke put over naar een overeenkomstige 96-putplaat met vlakke bodem.</li>
	<li>Bereken de levensvatbaarheid van de cel volgens de onderstaande stappen.<ol><li>Bereken voor elke put het "specifieke signaal" ("specifiek signaal" = het signaal bij 570 nm - het signaal bij 630-690 nm). Bereken vervolgens de gemiddelde waarde van de "Blanke" putten en trek deze waarde af van elke put.</li>
		<li>Bereken het gemiddelde van de "specifieke signalen" in de controleputten die cellen bevatten die niet met het onderzoeksgeneesmiddel zijn behandeld ("AV-SS-unt").</li>
		<li>Bereken de levensvatbaarheid (percentage) van cellen in elke put ten opzichte van de putten met onbehandelde cellen. OPMERKING: Levensvatbaarheid = (specifiek signaal in elke put/"AV-SS-unt") × 100</li>
	</ol></li>
</ol>3. Monitoren en analyseren van de morfologische veranderingen in de sferoïden
OPMERKING: Wat de MTT-test betreft, mag bij deze evaluatie alleen het celkweekmedium en niet het "3D-kweekmedium" worden gebruikt (het toevoegen van de keldermembraanmatrix is niet nodig en kan de analyse mogelijk verstoren).
<ol><li>Na het tellen van de sferoïden, verdunt u de suspensie in celkweekmedium (RPMI-1640 kweekmedium aangevuld met 10% FBS, 1:100 penicilline-streptomycine, 1% niet-essentiële aminozuren en 1% L-glutamine) tot ongeveer 1-2 sferoïden per 20 μL.</li>
	<li>Plaats 80 μL celkweekmedium in de putjes van een ultralage 96-putplaat en voeg vervolgens 20 μL van de sferoïde suspensie toe aan de putjes. OPMERKING: De putten bevatten daarom 1-2 sferoïden in een volume van 100 μL.</li>
	<li>Controleer de putten zorgvuldig onder de microscoop en markeer de putten die één sferoïde bevatten, omdat ze voor deze analyse zullen worden gebruikt.</li>
	<li>Bereid het onderzoeksgeneesmiddel voor in een concentratie die tweemaal de concentratie van belang is. Voeg 100 μL van de geneesmiddeloplossing toe aan de relevante putten (de totale concentratie in de put is dan 1x).</li>
	<li>Leg een afbeelding van elke put vast op dag 0 (voordat u het onderzoeksgeneesmiddel toevoegt) en gebruik de "schaal" -tool in de beeldvormingssoftware (zie de tabel met materialen) om de diameters van de sferoïden te bepalen.</li>
	<li>Incubeer de plaat bij 37 °C in een 5% CO2 bevochtigde incubator en onderzoek de morfologie en meet de diameter van de sferoïden (met behulp van de "schaal" -tool) dagelijks gedurende 3-7 dagen, afhankelijk van wanneer het geneesmiddeleffect wordt waargenomen (bijv. Celverspreiding, invasieve peulen, structuurvernietiging, enz.).</li>
	<li>Plot aan het einde van het experiment de veranderingen in sferoïde diameters (ten opzichte van dag 0) in de loop van de tijd. OPMERKING: Verandering (percentage) = (sferoïde diameter op een specifieke dag/de diameter van die sferoïde op dag 0) × 100</li>
</ol>

<ol><li>Katt, M. E., Placone, A. L., Wong, A. D., Xu, Z. S., Searson, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+tumor+models%3A+Advantages%2C+disadvantages%2C+variables%2C+and+selecting+the+right+platform%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Bioengineering+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">In vitro tumor models: Advantages, disadvantages, variables, and selecting the right platform.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 4, 12(2016).</li>
<li>Yoshida, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+patient-derived+tumor+xenograft+models+and+tumor+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hematology+%26+Oncology%22%5BJournal%5D)">Applications of patient-derived tumor xenograft models and tumor organoids.</a> Journal of Hematology & Oncology. 13 (1), 4(2020).</li>
<li>Ledur, P. F., Onzi, G. R., Zong, H., Lenz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+conditions+defining+glioblastoma+cells+behavior%3A+What+is+the+impact+for+novel+discoveries%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Culture conditions defining glioblastoma cells behavior: What is the impact for novel discoveries.</a> Oncotarget. 8 (40), 69185-69197 (2017).</li>
<li>Richter, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+donor+to+the+lab%3A+A+fascinating+journey+of+primary+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">From donor to the lab: A fascinating journey of primary cell lines.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 9, 711381(2021).</li>
<li>Esparza-Lopez, J., Martinez-Aguilar, J. F., Ibarra-Sanchez, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deriving+primary+cancer+cell+cultures+for+personalized+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Revista+de+Investigacio%CC%81n+Cli%CC%81nica%22%5BJournal%5D)">Deriving primary cancer cell cultures for personalized therapy.</a> Revista de Investigación Clínica. 71 (6), 369-380 (2019).</li>
<li>Choi, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+human+cancer+models+for+biomedical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">In vitro human cancer models for biomedical applications.</a> Cancers. 14 (9), 2284(2022).</li>
<li>Eglen, R. M., Randle, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+discovery+goes+three-dimensional%3A+Goodbye+to+flat+high-throughput+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Assay+and+Drug+Development+Technologies%22%5BJournal%5D)">Drug discovery goes three-dimensional: Goodbye to flat high-throughput screening.</a> Assay and Drug Development Technologies. 13 (5), 262-265 (2015).</li>
<li>Kodack, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+patient-derived+cancer+cells+and+their+potential+for+personalized+cancer+patient+care%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Primary patient-derived cancer cells and their potential for personalized cancer patient care.</a> Cell Reports. 21 (11), 3298-3309 (2017).</li>
<li>Moskovits, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Palbociclib+in+combination+with+sunitinib+exerts+a+synergistic+anti-cancer+effect+in+patient-derived+xenograft+models+of+various+human+cancers+types%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">Palbociclib in combination with sunitinib exerts a synergistic anti-cancer effect in patient-derived xenograft models of various human cancers types.</a> Cancer Letters. 536, 215665(2022).</li>
<li>Ricardo, R., Phelan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Counting+and+determining+the+viability+of+cultured+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Counting and determining the viability of cultured cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (16), e752(2008).</li>
<li>Brajša, K., Trzun, M., Zlatar, I., Jelić, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+cell+cultures+as+a+new+tool+in+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Periodicum+Biologorum%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional cell cultures as a new tool in drug discovery.</a> Periodicum Biologorum. 118 (1), 59-65 (2016).</li>
<li>Han, S. J., Kwon, S., Kim, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+of+applying+multicellular+tumor+spheroids+in+preclinical+phase%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell+International%22%5BJournal%5D)">Challenges of applying multicellular tumor spheroids in preclinical phase.</a> Cancer Cell International. 21 (1), 152(2021).</li>
<li>van Meerloo, J., Kaspers, G. J., Cloos, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+sensitivity+assays%3A+The+MTT+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Cell sensitivity assays: The MTT assay.</a> Methods in Molecular Biology. 731, 237-245 (2011).</li>
<li>Walzl, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+resazurin+reduction+assay+can+distinguish+cytotoxic+from+cytostatic+compounds+in+spheroid+screening+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomolecular+Screening%22%5BJournal%5D)">The resazurin reduction assay can distinguish cytotoxic from cytostatic compounds in spheroid screening assays.</a> Journal of Biomolecular Screening. 19 (7), 1047-1059 (2014).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Het huidige protocol beschrijft een eenvoudige methode voor het genereren van 3D primaire celculturen (sferoïden) afgeleid van menselijke tumormonsters. Deze sferoïden kunnen worden gebruikt voor verschillende analyses, waaronder het evalueren van potentiële kandidaat-geneesmiddelen en medicijncombinaties, het identificeren van potentiële biomarkers of therapeutische doelen en het onderzoeken van de mechanismen van respons en resistentie. Het protocol maakt gebruik van primaire tumorcellen die rechtstreeks zijn afgeleid ...

In vitro en in vivo studies vertegenwoordigen complementaire benaderingen voor het ontwikkelen van kankerbehandelingen. In vitro modellen maken de controle van de meeste experimentele variabelen mogelijk en vergemakkelijken kwantitatieve analyses. Ze dienen vaak als goedkope screeningplatforms en kunnen ook worden gebruikt voor mechanistische studies1. Hun biologische relevantie is echter inherent beperkt, omdat dergelijke modellen slechts gedeeltelijk de micro-omgeving van de tumor weerspiegelen1. In vivo modellen, zoals patiënt-afgeleide xenografts (PDX), vangen daarentegen de complexiteit van de tumormicro-omgeving en zijn meer geschikt voor translationele studies en individualisering van de behandeling bij patiënten (d.w.z. het onderzoeken van de respons op geneesmiddelen in een model afgeleid van een individuele patiënt)1. In vivo modellen zijn echter niet bevorderlijk voor high-throughput benaderingen voor geneesmiddelenscreening, omdat de experimentele parameters niet zo strak kunnen worden gecontroleerd als in in vitro modellen en omdat hun ontwikkeling tijdrovend, arbeidsintensief en kostbaar is 1,2.
In vitro modellen zijn al meer dan 100 jaar beschikbaar en cellijnen zijn al meer dan 70 jaar beschikbaar3. In de afgelopen decennia is de complexiteit van de beschikbare in vitro modellen van solide tumoren echter dramatisch toegenomen. Deze complexiteit varieert van 2-dimensionale (2D) cultuurmodellen (monolaagstructuren) die ofwel tumor-afgeleide gevestigde cellijnen of primaire cellijnen zijn tot de meer recente benaderingen met 3-dimensionale (3D) modellen1. Binnen de 2D-modellen is een belangrijk onderscheid tussen de gevestigde en primaire cellijnen4. Gevestigde cellijnen worden vereeuwigd; Daarom kan dezelfde cellijn wereldwijd gedurende vele jaren worden gebruikt, wat vanuit een historisch perspectief samenwerking, de accumulatie van gegevens en de ontwikkeling van vele behandelingsstrategieën vergemakkelijkt. Genetische afwijkingen in deze cellijnen hopen zich echter op met elke passage, waardoor hun biologische relevantie in gevaar komt. Bovendien weerspiegelt het beperkte aantal beschikbare cellijnen niet de heterogeniteit van tumoren bij patiënten 4,5. Primaire kankercellijnen zijn rechtstreeks afgeleid van gereseceerde tumormonsters verkregen via biopsieën, pleurale effusies of resecties. Daarom zijn primaire kankercellijnen biologisch relevanter omdat ze elementen van de micro-omgeving van de tumor en tumorkenmerken behouden, zoals intercellulair gedrag (bijv. Cross-talk tussen gezonde en kankercellen) en de stamachtige fenotypen van kankercellen. De replicerende capaciteit van primaire cellijnen is echter beperkt, wat leidt tot een smalle kweektijd en het aantal tumorcellen beperkt dat kan worden gebruikt voor analyses 4,5.
Modellen met 3D-culturen zijn biologisch relevanter dan 2D-cultuurmodellen, omdat de in vivo omstandigheden behouden blijven. Zo behouden 3D-cultuurmodellen de natuurlijke celvorm en -groei en repliceren ze elementen van de tumoromgeving, zoals hypoxie, necrose en celadhesie. De meest gebruikte 3D-modellen in kankeronderzoek omvatten meercellige sferoïden, op steigers gebaseerde structuren en matrix-ingebedde culturen 4,6,7.
Het huidige protocol genereert 3D-tumorcultuurmodellen (meercellige sferoïden) uit primaire kankercellen en evalueert hun gevoeligheid voor geneesmiddelen met behulp van twee complementaire benaderingen: een cel-levensvatbaarheidstest (MTT) en microscopisch onderzoek. De representatieve resultaten die hierin worden gepresenteerd, zijn van borst- en darmkanker; Dit protocol is echter breed toepasbaar op andere solide tumortypen (bijv. Cholangiocarcinoom, maag-, long- en alvleesklierkanker) en is ook kosteneffectief, omdat het in zijn geheel kan worden uitgevoerd in een typisch kankeronderzoek / celbiologisch laboratorium zonder te vertrouwen op gespecialiseerde apparatuur. De meercellige sferoïden die met behulp van deze aanpak worden gegenereerd, kunnen worden gebruikt om potentiële kandidaat-geneesmiddelen te beoordelen, potentiële biomarkers of therapeutische doelen te identificeren en de mechanismen van respons en resistentie te onderzoeken.
Dit protocol is verdeeld in drie secties: (1) het genereren, verzamelen en tellen van de sferoïden ter voorbereiding op hun gebruik als model voor het testen van de werkzaamheid van geneesmiddelen; (2) MTT-test om de werkzaamheid van het geneesmiddel op de sferoïden te beoordelen; en (3) de microscopische evaluatie van morfologische veranderingen na de behandeling van de sferoïden met geneesmiddelen als een andere benadering voor het evalueren van de werkzaamheid van geneesmiddelen (figuur 1).

<table><tbody><tr><td>5 Fluorouracil</td><td>TEVA Israel</td><td>lot 16c22NA</td><td>Fluorouracil, Adrucil</td></tr><tr><td>Accutase</td><td>Gibco</td><td>A1110501</td><td>StemPro Accutase Cell Dissociation</td></tr><tr><td>Cisplatin</td><td>TEVA Israel</td><td>20B06LA</td><td>Abiplatin,&nbsp;</td></tr><tr><td>Cultrex&nbsp;</td><td>Trevigen</td><td>3632-010-02</td><td>Basement membrane matrix, type 3</td></tr><tr><td>DMSO (dimethyl sulfoxide)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D2650-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Fetal bovine serum (FBS)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>2391595</td><td></td></tr><tr><td>Flurometer&nbsp;ELISA reader</td><td>Biotek</td><td>Synergy H1</td><td>Gen5 3.11</td></tr><tr><td>Hydrochloric acid (HCl)&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>320331</td><td>voor stopoplossing</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA</td><td>&nbsp;Versie 1.52a</td><td>Open-source software ImageJ</td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Gadot</td><td>P180008215</td><td>voor stopoplossing</td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Gibco</td><td>1843977</td><td></td></tr><tr><td>MTT&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M5655-1G</td><td>3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazoliumbromide</td></tr><tr><td>Non-essential amino acids&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>Palbociclib&nbsp;&nbsp;</td><td>Med Chem Express</td><td>CAS # 571190-30-2</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>14190094</td><td>Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS)*Zonder Calcium en Magnesium</td></tr><tr><td>Penicillin-streptomycin&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>2119399</td><td></td></tr><tr><td>Phenol-vrij RPMI 1640</td><td>Biological industries, Israel</td><td>01-103-1A</td><td></td></tr><tr><td>Pippeting reservoir</td><td>Alexred</td><td>RED LTT012025</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640 kweekmedium&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>11530586</td><td></td></tr><tr><td>Sunitinib</td><td>Med Chem Express</td><td>CAS # 341031-54-7</td><td></td></tr><tr><td>Trastuzumab</td><td>F. Hoffmann - La Roche Ltd, Basel, Zwitserland</td><td>10172154 IL</td><td>Herceptin</td></tr><tr><td>Trypan blauw 0,5% oplossing</td><td>Biological industries, Israel</td><td>03-102-1B</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-lage aanhechting 96-wells plaat</td><td>Greiner Bio-one</td><td>650970</td><td></td></tr><tr><td>Vinorelbine</td><td>Ebewe</td><td>11733027-03</td><td>Navelbine</td></tr></tbody></table>

het vaststellen van 3-dimensionale sferoïden uit van de patiënt afgeleide tumormonsters en het evalueren van hun gevoeligheid voor geneesmiddelen

Establishing 3-Dimensional Spheroids from Patient-Derived Tumor Samples and Evaluating their Sensitivity to Drugs

Ondanks opmerkelijke vooruitgang in het begrijpen van tumorbiologie, faalt de overgrote meerderheid van de kandidaat-oncologische geneesmiddelen die deelnemen aan klinische onderzoeken, vaak als gevolg van een gebrek aan klinische werkzaamheid. Dit hoge faalpercentage verlicht het onvermogen van de huidige preklinische modellen om de klinische werkzaamheid te voorspellen, voornamelijk vanwege hun ontoereikendheid in het weerspiegelen van tumorheterogeniteit en de micro-omgeving van de tumor. Deze beperkingen kunnen worden aangepakt met 3-dimensionale (3D) cultuurmodellen (sferoïden) die zijn vastgesteld op basis van menselijke tumormonsters die zijn afgeleid van individuele patiënten. Deze 3D-culturen vertegenwoordigen de biologie van de echte wereld beter dan gevestigde cellijnen die de heterogeniteit van de tumor niet weerspiegelen. Bovendien zijn 3D-culturen beter dan 2-dimensionale (2D) cultuurmodellen (monolaagstructuren) omdat ze elementen van de tumoromgeving repliceren, zoals hypoxie, necrose en celadhesie, en de natuurlijke celvorm en -groei behouden. In de huidige studie werd een methode ontwikkeld voor het bereiden van primaire culturen van kankercellen van individuele patiënten die 3D zijn en groeien in meercellige sferoïden. De cellen kunnen rechtstreeks worden afgeleid van patiënttumoren of van de patiënt afgeleide xenografts. De methode is breed toepasbaar op solide tumoren (bijv. Dikke darm, borst en long) en is ook kosteneffectief, omdat het in zijn geheel kan worden uitgevoerd in een typisch kankeronderzoek / celbiologisch laboratorium zonder afhankelijk te zijn van gespecialiseerde apparatuur. Hierin wordt een protocol gepresenteerd voor het genereren van 3D-tumorcultuurmodellen (meercellige sferoïden) uit primaire kankercellen en het evalueren van hun gevoeligheid voor geneesmiddelen met behulp van twee complementaire benaderingen: een cel-levensvatbaarheidstest (MTT) en microscopisch onderzoek. Deze meercellige sferoïden kunnen worden gebruikt om potentiële kandidaat-geneesmiddelen te beoordelen, potentiële biomarkers of therapeutische doelen te identificeren en de mechanismen van respons en resistentie te onderzoeken.

Dit protocol presenteert procedures voor het genereren van een homogene cultuur van sferoïden uit primaire tumorcellen, het kwantitatief evalueren van de werkzaamheid van geneesmiddelen op sferoïdecultuur (MTT-test) en het bepalen van het effect van studiegeneesmiddelen op sferoïde morfologie. Gegevens van de representatieve experimenten in sferoïden gegenereerd uit colon- en borstkankercelculturen worden gepresenteerd. Vergelijkbare experimenten werden uitgevoerd met behulp van andere tumortypen, waaronder cholangiocarc...

Het huidige protocol beschrijft het genereren van 3D-tumorcultuurmodellen van primaire kankercellen en het evalueren van hun gevoeligheid voor geneesmiddelen met behulp van cel-levensvatbaarheidstests en microscopische onderzoeken.

Het vaststellen van 3-dimensionale sferoïden uit van de patiënt afgeleide tumormonsters en het evalueren van hun gevoeligheid voor geneesmiddelen

Despite remarkable advances in understanding tumor biology, the vast majority of oncology drug candidates entering clinical trials fail, often due to a ...

Ons protocol is belangrijk omdat het een generatie 3D-tumorcultuurmodellen van primaire kankercellen beschrijft, en dit model vertegenwoordigt de echte tumorbiologie beter dan cellijnen. Deze aanpak is van toepassing op een verscheidenheid aan solide tumoren. Het is ook kosteneffectief omdat het van begin tot eind kan worden uitgevoerd in een typisch celbiologisch laboratorium.De 3D-tumormodellen die met deze aanpak worden gegenereerd, ondersteunen onderzoek naar de gevoeligheid en resistentie van tumoren tegen kankertherapieën of een combinatie van therapieën. Deze aanpak genereert 3D-modellen van primaire kankercellen. Daarom kan het identificeren welke therapie waarschijnlijk effectief is voor een bepaalde patiënt en zo helpen zijn of haar behandeling te personaliseren.De procedure wordt gedemonstreerd door Ella Itzhaki, een promovenda uit mijn laboratorium. Neem om te beginnen een kleine T25-kolf met een eencellige aanhangende primaire celcultuur en verwijder de celkweekmedia. Was de cellen met PBS en voeg een milliliter 1x Accutase toe gedurende drie minuten bij 37 graden Celsius om een eencellige suspensie van aanhangende primaire tumorcelculturen van 75 tot 100% samenvloeiing te bereiden.Neutraliseer de Accutase-oplossing door vijf milliliter celkweekmedium toe te voegen. Zuig de cellen op met een serologische pipet van 10 milliliter en deponeer ze in een conische buis van 15 milliliter. Centrifugeer de buis op 800g gedurende vijf minuten bij kamertemperatuur.Verwijder het celkweekmedium en voeg acht milliliter vers celkweekmedium toe aan de celkorrel en meng voorzichtig. Om de levensvatbare cellen met een hemocytometer te tellen, neemt u een aliquot van 50 microliter van de celsuspensie en mengt u deze met 50 microliter trypanblauw. Tel vervolgens de levende cellen en bereken het totale aantal levende cellen in de suspensie.Bereid vervolgens het 3D-cultuurmedium voor. En na het berekenen van het aantal cellen dat nodig is voor de test en het totale benodigde volume, bereidt u celsuspensie voor met het gewenste aantal cellen in 200 microliter van het 3D-kweekmedium. Meng voorzichtig met de pipet om een homogene verdeling te garanderen.Breng de suspensie over naar een pipetteerreservoir en voeg 200 microliter van de celsuspensie toe aan elke put van een ultralage 96-putplaat met een meerkanaals pipet. Centrifugeer de plaat op 300 g gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur om de clustering van de cellen af te dwingen, waardoor de celaggregatie wordt verbeterd, en incuber de plaat bij 37 graden Celsius in een 5% koolstofdioxide bevochtigde incubator. Na het centrifugeren opnieuw op 300 g gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur, verwijdert u voorzichtig 50% van het medium en gooit u het weg en voegt u 100 microliter vers 3D-kweekmedium toe om de bestaande oplossing te vervangen.Herhaal deze stap en plaats de plaat terug in de 37 graden Celsius en 5% kooldioxide bevochtigde incubator. Inspecteer de cellen om de één tot twee dagen onder een microscoop om de vorming van sferoïden te controleren. Meet de diameter van de gevormde sferoïden met behulp van het schaalgereedschap in de beeldvormingssoftware.En zodra de sferoïde diameter 100 tot 200 micrometer bereikt, voert u de experimenten met de werkzaamheid van het geneesmiddel uit. Gebruik voor het verzamelen van sferoïden een pipet van 1.000 microliter om de sferoïden uit elke put te verzamelen en deponeer ze in een conische buis van 15 milliliter. Centrifugeer de conische buis gedurende vijf minuten bij kamertemperatuur op 300 g en zuig het supernatant voorzichtig op en gooi het weg met behulp van een pipet.Voeg 0,5 milliliter van het celkweekmedium toe en resuspensie de pellet goed maar voorzichtig. Om sferoïde tellen uit te voeren, gebruikt u een 96-putplaat en tekent u een plusteken aan de onderkant van een put om de put in kwadranten te verdelen. Voeg 50 microliter van de suspensie toe aan de put.En met een 10x objectieflens tel je de sferoïden handmatig onder de microscoop. Tel de sferoïden in elk kwadrant en bereken het totale aantal sferoïden in de put. Bereken vervolgens de sferoïdeconcentratie door het aantal sferoïden te verdubbelen door het volume te tellen en bereken het totale aantal sferoïden in de suspensie.Bereid in een nieuwe buis sferoïde suspensie in een concentratie van 200 sferoïden per 200 microliter celkweekmedium. Bereid voor elke medicamenteuze behandeling de voorraad sferoïden voor in een andere buis. Bereken de totale hoeveelheid die nodig is voor elk medicijn door het aantal putten dat nodig is voor herhalingen en voeg het medicijn toe aan de buis tot de uiteindelijke benodigde concentratie.Breng 200 microliter van de sferoïde suspensie over in de putten van een ultralage 96-putplaat en incuber de plaat bij 37 graden Celsius in een 5% koolstofdioxide bevochtigde incubator. Na het incuberen van de sferoïden met het onderzoeksgeneesmiddel gedurende 24 tot 72 uur, centrifugeert u de plaat gedurende vijf minuten bij kamertemperatuur op 300 g en verwijdert u voorzichtig 170 microliter van het celkweekmedium, waardoor 30 microliter op de bodem van de put achterblijft. Bereid de MTT-oplossing voor en voeg 70 microliter van de oplossing toe aan elke put tot een eindvolume van 100 microliter per put.De uiteindelijke MTT-concentratie in de put is 0,05 milligram per 100 microliter. Bereid bovendien lege putten voor met MTT-oplossing zonder cellen. Incubeer de plaat bij 37 graden Celsius in een 5% koolstofdioxide bevochtigde incubator gedurende drie tot vier uur totdat een verandering in de kleur van de oplossing in de putten wordt waargenomen.Wanneer een verandering wordt waargenomen, voegt u 100 microliter Stop-oplossing toe aan elke put en mengt u voorzichtig de inhoud van de putten zonder bubbels te creëren. Lees de absorptie van de plaat in een parameter ELISA-lezer bij een golflengte van 570 nanometer en een achtergrondgolflengte van 630 tot 690 nanometer. Om de levensvatbaarheid van de cel te berekenen, berekent u het specifieke signaal voor elke put.Bereken vervolgens de gemiddelde waarde van de lege putten en trek deze waarde van elke put af. Bereken het gemiddelde van de specifieke signalen in de controleputten die cellen bevatten die niet met het onderzoeksgeneesmiddel zijn behandeld. Bereken ten slotte de levensvatbaarheid van cellen in elke put ten opzichte van de putten met onbehandelde cellen.De vorming van sferoïden uit een primaire darmkankercelcultuur in de loop van de tijd door het aantal aanvankelijk gezaaide cellen wordt hier weergegeven. Uit deze figuur kan worden afgeleid dat het aantal gegenereerde sferoïden afhankelijk is van het aantal cellen dat aanvankelijk in elke put is gezaaid. Sferoïden van de primaire darmkankercellen na 10 dagen in cultuur met initiële celzaaiing van 2.000 per put worden hier weergegeven.Na langdurige kweek van de darmkankersferoïden begonnen ze zich aan elkaar te hechten en vormden ze clusters van sferoïden en druifachtige structuren die een homogene cultuur voorkwamen en dus het gebruik van de sferoïden in de MTT-testen verboden. De effecten van palbociclib, sunitinib en hun combinatie op sferoïden uit primaire tumorcellen, waaronder darm- en borstkanker, worden hier weergegeven. Een MTT-test werd uitgevoerd op sferoïden afgeleid van darm- en borstkankercellen.De MTT-signalen werden genormaliseerd naar waarden van met DMSO behandelde cellen. De waarden vertegenwoordigen de gemiddelden van vier tot acht replicaties. De effecten van de verschillende behandelingen op de celgroei werden ook microscopisch geëvalueerd op dag nul en na drie dagen behandeling van de sferoïden afkomstig van darmkanker en borstkankercellen.De effecten van trastuzumab plus vinorelbine en 5 fluorouracil plus cisplatine op sferoïden afgeleid van borstkanker in de loop van de tijd worden weergegeven in deze figuur. De verandering in de diameter van de sferoïden ten opzichte van dag nul door de duur van de behandeling wordt hier weergegeven. Elke behandelingsgroep omvatte vier tot zes putten met één sferoïde in elke put.De gemiddelde verandering wordt hier weergegeven. Sferoïden zijn belangrijke hulpmiddelen voor veel studies die verder gaan dan de reactie op de behandeling van kanker. Deze studies richten zich bijvoorbeeld op medicijnafgifte en zelfs op fundamentele biologische vragen zoals cel-celinteracties.Het is van cruciaal belang om een sferoïde-generatieproces te starten met een eencellige suspensie. Het is ook van cruciaal belang om ultralage bevestigingsplaten te gebruiken met een medium dat een basismembraanmetriek van 5% bevat.

establishing-3-dimensional-spheroids-from-patient-derived-tumor

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

Invasie van omliggende normale weefsels is een typerend kenmerk van kwaadaardige tumoren. We bieden hier een eenvoudige, semi-geautomatiseerde microplaattest van invasie in een natuurlijke 3D biomatrix die met een aantal modellen van gevorderde menselijke kankers is geëxemplifeerd.

Driedimensionale (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Van patiënten afgeleide xenografts van glioblastoma multiforme kunnen worden geminiaturiseerd tot levende microtumoren met behulp van een 3D-menselijke biogel-kweeksysteem. Deze in vivo-achtige 3D-tumortest is geschikt voor het testen van de reactie op geneesmiddelen en moleculair profileren, inclusief kinoomanalyse.

Genereren van Microtumors Met behulp van 3D Human Biogel Cultuur System en Patient afgeleide glioblastoma Cellen voor Kinomic Profiling and Drug Response Testen

We beschrijven de evolutie van een sferoïde gebaseerde, driedimensionale in vitro model waarmee we kunnen testen van de huidige standaard voor experimentele therapie regimes voor hoofd en nek plaveiselcelcarcinoom op cellijnen, die gericht zijn op het evalueren van therapie gevoeligheid en weerstand op primaire cellen van menselijke specimens in de toekomst.

Therapie testen in een sferoïde gebaseerde 3D cel cultuur Model voor hoofd en nek plaveiselcelcarcinoom

Over een breed scala van indicaties van de ziekte, meer fysiologisch relevante modellen worden ontwikkeld en uitgevoerd in drug discovery-programma's. Het nieuwe modelsysteem hier beschreven demonstreert hoe driedimensionale tumor spheroïden kunnen worden gekweekt en vertoond in een high-throughput 1536-well plaat-gebaseerd systeem om te zoeken naar nieuwe oncologie drugs.

Generatie van High-Throughput driedimensionale Tumor spheroïden voor Drug Screening

Optische coherentie tomografie (OCT), een driedimensionale imaging technologie, werd gebruikt om te controleren en te karakteriseren de kinetiek van de groei van meercellige tumor spheroïden. Precieze volumetrische kwantificering van tumor spheroïden met behulp van een voxel tellen aanpak, en label-vrije dood weefsel detectie in de spheroïden op basis van intrinsieke optische demping daarentegen werden gedemonstreerd.

Longitudinale morfologische en fysiologische Monitoring van driedimensionale Tumor spheroïden met behulp van optische coherentie tomografie

Dit protocol beschrijft het genereren van door patiënten afgeleide spheroïden en downstreamanalyses, waaronder de kwantificering van proliferatie, cytotoxiciteits testen, Flowcytometrie, immunofluorescentie kleuring en confocale beeldvorming, om de geneesmiddelen te beoordelen potentiële kandidaten als anti-neoplastische Therapeutics. Dit protocol ondersteunt precisie geneeskunde met identificatie van specifieke geneesmiddelen voor elke patiënt en stadium van de ziekte.

Fysiologisch patiënt afgeleide 3D-Spheroids voor anti-neoplastische geneesmiddelen screening om kanker stamcellen te targeten

Hier presenteren we een aantal eenvoudige methoden voor de evaluatie van de levensvatbaarheid en de dood in 3D kanker cel sferoïden, die de fysisch-chemische gradiënten van in vivo tumoren veel beter dan de 2D-cultuur na te bootsen. Het sferoïde model maakt het dus mogelijk om de effectiviteit van kanker medicijnen te evalueren met een verbeterde vertaling naar in vivo omstandigheden.

Beoordeling van de levensvatbaarheid van cellen en de dood in 3D sferoïde culturen van kankercellen

Dit artikel demonstreert een gestandaardiseerde methode voor het construeren van driedimensionale tumorsferoïden. Een strategie voor sferoïde observatie en beeldgebaseerde deep-learning analyse met behulp van een geautomatiseerd beeldvormingssysteem wordt ook beschreven.

Generatie van 3D-tumorsferoïden voor geneesmiddelenevaluatiestudies

Hier presenteren we een methode om verbindingen te identificeren die het ADCC-mechanisme moduleren, een belangrijk kankerceldodend mechanisme van antitumorantilichamen. Het cytotoxische effect van NK-cellen wordt gemeten in sferoïden van borstkankercellen in aanwezigheid van Trastuzumab. Beeldanalyse identificeert levende en dode killer- en doelcellen in sferoïden.

Kwantificering van antilichaamafhankelijke cellulaire cytotoxiciteit in een tumorsferoïde model: aanvraag voor ontdekking van geneesmiddelen

Hier zetten we een metabool profileringsplatform op dat driedimensionale (3D) glioomsferoïden integreert met op beeldvorming gebaseerde normalisatie via extracellulaire fluxanalyse. Deze benadering maakt een nauwkeurigere beoordeling mogelijk van tumormetabole reacties op medicamenteuze behandelingen en biedt inzicht in mogelijke resistentiemechanismen.

Vooruitgang in de metabole profilering van driedimensionale hersentumorsferoïden voor screening op geneesmiddelen

Leer 3D-tumorsferoïden genereren uit primaire kankercellen voor onderzoek naar geneesmiddelgevoeligheid. Deze kosteneffectieve methode ondersteunt gepersonaliseerde behandelingen en verbetert het begrip van tumorbiologie.

Het vaststellen van 3-dimensionale sferoïden uit van de patiënt afgeleide tumormonsters en het evalueren van hun gevoeligheid voor geneesmiddelen (Video) | JoVE Journal

Het vaststellen van 3-dimensionale sferoïden uit van de patiënt afgeleide tumormonsters en het evalueren van hun gevoeligheid voor geneesmiddelen

Meer video's verkennen