Name: HPLC in combinatie met chemische vingerafdrukken voor multi-patroonherkenning voor het identificeren van de authenticiteit van Clematidis Armandii Caulis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-11T14:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 29 s
Description: Leer HPLC met chemische vingerafdrukken voor het identificeren van authentieke Clematidis Armandii Caulis en het onderscheiden van vervalsingen. Deze methode ondersteunt kwaliteitsonderzoek van medicinale materialen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door het project van Sichuan Traditional Chinese Medicine Administration (nr. 2020JC0088, nr. 2021MS203).

1. Methoden voor chemische vingerafdrukdetectie
<ol><li>Chromatografische omstandigheden<ol><li>Bereid de mobiele fase van acetonitril (A) / water (B) voor. Stel een gradiëntprogramma in als volgt in de HPLC-software: 0-20 min, 3% A-10% A; 20-25 min, 10% A-13% A; 25-65 min, 13% A-25% A; 65-75 min, 25%A-40%A; 75-76 min, 40%A-3%A; 76-85 min, 3%A-3%A.</li>
		<li>Houd het debiet van de mobiele fase op 1,0 ml/min.</li>
		<li>Voer de chromatografische scheiding uit op een C18-kolom (250 mm x 4,6 mm, 5 μm) die op 30 °C wordt gehouden.</li>
		<li>Stel het injectievolume in op 10 μL.</li>
		<li>Detecteer de monsters op een golflengte van 205 nm. OPMERKING: Voor de specifieke instellingen van chromatografische omstandigheden, raadpleegt u de operationele procedures van de werksoftware van hoogwaardige vloeistofchromatografie (Materiaaltabel).</li>
	</ol></li>
	<li>Bereiding van de monsteroplossing<ol><li>Maal de grondstoffen tot een uniforme deeltjesgrootte door ze door een nylon gaas met een binnendiameter van 850 μm ± 29 μm te laten gaan.</li>
		<li>Breng 2 g van de gemalen grondstof (nauwkeurig gewogen) in een erlenmeyer van 50 ml met een stop en voeg 50 ml methanol toe. Plaats de stop op de kolf en ultrasoon (600 W, 40 kHz) gedurende 30 minuten.</li>
		<li>Koel vervolgens de kolf af tot kamertemperatuur (RT). Weeg de monsters opnieuw en compenseer het oorspronkelijke gewicht door het verloren extract te vervangen.</li>
		<li>Giet 4 ml van de methanoloplossing die de medicinale extracten bevat in een maatkolf van 10 ml. Voeg 6 ml H2O toe, meng en laat het 10 minuten bezinken.</li>
		<li>Filter ten slotte het supernatant door een filtermembraan van 0,45 μm en plaats het op stand-by.</li>
	</ol></li>
	<li>Validatie van vingerafdrukdetectiemethoden<ol><li>Bereid het monster voor zoals hierboven beschreven (stap 1.2) en onderwerp het zes keer per dag aan een HPLC-analyse (stap 1.1). Om de precisie te evalueren, berekent u de relatieve standaarddeviatie (RSD) van de relatieve retentietijd en relatieve piekgebieden zoals beschreven in stap 1.3.5.</li>
		<li>Evalueer de stabiliteit van de monsteroplossing door dezelfde monsteroplossing te analyseren die is opgeslagen bij RT gedurende 0, 2, 4, 6, 8, 12 en 24 uur, en bereken de RSD van de relatieve retentietijd en relatieve piekgebieden zoals beschreven in stap 1.3.5.</li>
		<li>Neem zes replica's van hetzelfde monster (CMT-4), bereid de monsteroplossing volgens de bovenstaande procedure (stap 1.2) en detecteer de vingerafdruk in HPLC volgens stap 1.1. Bereken de RSD van de relatieve retentietijd en relatieve piekgebieden en evalueer de herhaalbaarheid ervan zoals beschreven in stap 1.3.5.</li>
		<li>Gebruik vervolgens piekgetal 10 in figuur 1B als referentiepiek en bereken de RSD van de relatieve retentietijd en het relatieve piekgebied van elke gemeenschappelijke piek zoals beschreven in stap 1.3.5.</li>
		<li>Gebruik de onderstaande formules om de relatieve retentietijd en het relatieve piekoppervlak van elke gemeenschappelijke piek te berekenen: Tre = Tkarakteristiek/Treferentie Eenre = Eenkenmerk/Eenreferentie Waarbij Tre = relatieve retentietijd, T-kenmerk = karakteristieke piekretentietijd, T-referentie = referentiepiekretentietijd, Are = relatief piekgebied, Akarakteristiek = karakteristiek piekgebied en A-referentie = referentiepiekgebied. OPMERKING: De vaststelling van vingerafdrukken van traditionele Chinese geneeskunde vereist over het algemeen het selecteren van een chromatografische piek die gemakkelijk te verkrijgen is en een hoge resolutie heeft. Dit wordt gebruikt als referentiepiek om de vingerafdrukken te identificeren en hun stabiliteit en reproduceerbaarheid te onderzoeken.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Vaststelling van Chuanmutong vingerafdruk- en gelijkenisanalyse
<ol><li>Gebruik 10 partijen authentieke monsters en vijf partijen overspelige stoffen zoals Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. Wang (CC), Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. en Wils. (DC), Clematis Peterae Hand.-Mazz. (DE), Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils (XS), en Clematis finetiana Levl. et Vaniot. (SMT) als monsters voor vingerafdrukanalyse.</li>
	<li>Bereid de monsteroplossingen voor zoals beschreven in stap 1.2. Voer een vingerafdrukanalyse uit van alle monsteroplossingen door HPLC volgens de voorwaarden die worden beschreven in stap 1.1.</li>
	<li>Importeer de relevante gegevens in het gelijkenisbeoordelingssysteem van chromatografische vingerafdrukken van de traditionele Chinese geneeskunde (SESCF-TCM, versie 2012). Het systeem zal de pieken met een redelijke hoogte en een goede resolutie in de chromatogrammen van alle monsters aanwijzen als gemeenschappelijke pieken. OPMERKING: De SESCF-TCM-software kan worden gedownload na registratie op de website van de Chinese Pharmacopoeia Commission (http://114.247.108.158:8888/login).<ol><li>Klik in de software op de knop Referentiespectrum instellen in het menu.</li>
		<li>Stel vervolgens in het venster Parameterinstellingen de breedte van het tijdvenster in op 0,5 en selecteer Methode voor het genereren van spectrum regelen als de mediane methode.</li>
		<li>Klik op Multi-point Calibration in het hoofdmenu en selecteer vervolgens Peak Matching als Full Spectrum Peak Matching.</li>
		<li>Klik ten slotte op Generate Control om de referentiechromatografische vingerafdruk van de authentieke soort Chuanmutong te genereren.</li>
	</ol></li>
	<li>Importeer de retentietijd en het piekgebied van 10 partijen authentieke Chuanmutong-monsters en vijf partijen vervalsingen in SESCF-TCM voor analyse. De specifieke bewerkingen zijn als volgt:<ol><li>Klik in de software op de knop Referentiespectrum instellen in het hoofdmenu.</li>
		<li>Stel in het venster Parameterinstellingen de referentiechromatografische vingerafdruk van de authentieke soort Chuanmutong in als referentie, selecteer de Control Spectrum Generation Method als de mediane methode en stel de tijdvensterbreedte in op 0,5.</li>
		<li>Klik op Multi-point Calibration in het hoofdmenu en selecteer vervolgens Peak Matching als Full Spectrum Peak Matching.</li>
		<li>Klik ten slotte op Gelijkenis berekenen om de gelijkenis te berekenen op basis van de referentiechromatogramafdrukken van Chuanmutong. Bereken ten slotte de gelijkenis van vingerafdrukken met behulp van het Chinese Medicine Chromatographic Fingerprint Evaluation System (2012-versie). OPMERKING: Voor de specifieke bewerkingen raadpleegt u de operationele specificaties voor het Chromatographic Fingerprint Evaluation System (2012-versie).</li>
	</ol></li>
</ol>3. Multi-patroon herkenningsanalyse van Chuanmutong-vingerafdruk
<ol><li>Clusteranalyse (CA)<ol><li>Gebruik de piekgebieden van 12 gemeenschappelijke pieken in de vingerafdrukken van 10 batches authentieke Chuanmutong-monsters en hun vijf batches overspelige stoffen als variabelen en voer ze in statistische analysesoftware in voor systematische clusteranalyse (CA).</li>
		<li>Kies de tussengroepenmethode en gebruik de Pearson-correlatiecoëfficiënt als classificatiebasis om een clusteranalysediagram van Chuanmutong en zijn overspeligen te tekenen. De specifieke bewerkingen zijn als volgt:<ol><li>Klik in de statistische analysesoftware op Bestand om gegevens te importeren.</li>
			<li>Klik op Analyse in het menu en klik vervolgens op Systeemclustering in Classificatie.</li>
			<li>Selecteer het gemeenschappelijke piekgebied als variabele en stel het aantal clusters in op vier.</li>
			<li>Klik op Methode, selecteer de clustermethode als Intergroepsverbinding, selecteer het meetinterval als Pearson-correlatie en klik op OK om de CA-kaart te tekenen.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
	<li>Analyse van de belangrijkste componenten (PCA)<ol><li>Importeer het relatieve gemeenschappelijke piekgebied van de authentieke variëteiten en hun overspeligen in de analysesoftware voor PCA-analyse en gebruik de PCA-scorekaart om de scorematrixkaart van steekproefverschillen te evalueren. De specifieke bewerkingen zijn als volgt:<ol><li>Open de data-analysesoftware, klik op Bestand in het menu en maak een nieuw regulier project. Importeer het piekgebied van 12 algemene pieken in een spreadsheet (bijvoorbeeld Excel-indeling) uit het HPLC-systeem. Klik vervolgens op Voltooien om de gegevensimport te voltooien.</li>
			<li>Klik op Nieuw om een nieuw model te maken om het modeltype met PCA in te stellen. Klik op Autofit en Toevoegen om in de gegevens te passen en klik vervolgens op Scores om de PCA-scorekaart te krijgen.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
	<li>Orthogonale partiële kleinste-kwadraten discriminatie analyse (OPLS-DA)<ol><li>Gebruik de orthogonale partiële kleinste-kwadraten discriminatie analysemethode met supervisiemodus om de relatieve gemeenschappelijke piekoppervlaktepieken van de authentieke Chuanmutong-variëteiten en overspeligen verder te analyseren en een OPLS-DA-classificatiescorekaart van alle monsters te tekenen. De specifieke bewerkingen zijn als volgt:<ol><li>Klik in data-analysesoftware in het menu op Bestand om een bestand te importeren en een nieuw regulier project te maken. Importeer het piekgebied van 12 algemene pieken in een spreadsheet vanuit het HPLC-systeem en klik vervolgens op Voltooien om de gegevensimport te voltooien.</li>
			<li>Klik op Nieuw om een nieuw model te maken om het modeltype met PCA in te stellen. Klik op Autofit en Toevoegen om in de gegevens te passen. Klik vervolgens op Scores om de PCA-scorekaart te krijgen.</li>
			<li>Klik op Nieuw en kies Nieuw als Model One om het modeltype in te stellen met OPLS-DA.</li>
			<li>Klik op Schaal en stel type in met Par voor iedereen. Klik eerst op Autofit en klik vervolgens op Scores om de OPLS-DA scorekaart te krijgen.</li>
		</ol></li>
		<li>Om de invloed van elke gemeenschappelijke piek in Chuanmutong op de classificatieresultaten en het verschil tussen authentieke Chuanmutong-materialen en gerelateerde overspeligen te bepalen, gebruikt u het variabele belang in de projectie (VIP) voor analyse.</li>
		<li>Teken de VIP-kaart van de verschillende componenten van Chuanmutong. Gebruik de resulterende VIP-kaart om de impact van elke variabele op de classificatie te beoordelen en om componenten af te schermen die aanzienlijk bijdragen aan de verschillen tussen groepen. De specifieke bewerkingen zijn als volgt:<ol><li>Klik in de data-analysesoftware op Analyseren in het menu en klik op Permutaties, stel het aantal permutaties in op 200 en krijg de R2 en Q2 van de OPLS-DA scorekaart.</li>
			<li>Klik op VIP en kies VIP Predictive om de VIP-kaart te krijgen.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
</ol>4. Bepaling van β-sitosterol in Chuanmutong door HPLC
<ol><li>Chromatografische omstandigheden (zie stap 1.1)<ol><li>Bereid de mobiele fase voor: methanol-water (97:3).</li>
		<li>Stel het debiet van de mobiele fase in op 1,0 ml/min.</li>
		<li>Voer de chromatografische scheiding uit op een C18-kolom (250 mm x 4,6 mm, 5 μm) die op 30 °C wordt gehouden.</li>
		<li>Stel het injectievolume in op 10 μL.</li>
		<li>Detecteer de component op een golflengte van 204 nm.</li>
	</ol></li>
	<li>Bereiding van de monsteroplossing<ol><li>Bereid de standaard standaardoplossing van β-sitosterol (0,1 mg/ml) door een nauwkeurig gewogen hoeveelheid van de overeenkomstige referentienorm in methanol op te lossen.</li>
		<li>Maal het analysemonster van de grondstof tot een uniforme deeltjesgrootte door het monster door het nylongaas met een binnendiameter van 180 μm ± 7,6 μm te laten lopen.</li>
		<li>Breng 2 g van de gemalen grondstof (nauwkeurig gewogen) in een kolf met ronde bodem en voeg er 50 ml chloroform aan toe.</li>
		<li>Sluit de kolf aan op een refluxcondensor en verwarm deze gedurende 60 minuten in een kokend waterbad (matig koken). Filtreer de extractieoplossing met een filterpapier van 15-20 μm.</li>
		<li>Verdamp het filtraat tot bijna droogheid op een kokend waterbad (matig kokend) gedurende ongeveer 10 minuten.</li>
		<li>Los het residu op en vul het volume aan tot 5 ml met methanol. Laat het supernatant ten slotte door een filtermembraan van 0,45 μm lopen en zet het op stand-by.</li>
	</ol></li>
	<li>Validatie van de methode<ol><li>Neem de stamoplossing van β-sitosterol bereid in substap 4.2.1, verdun deze met 100% methanol en bereid oplossingen met 100 μg/ml, 80 μg/ml, 60 μg/ml, 50 μg/ml, 40 μg/ml, 30 μg/ml en 20 μg/ml.</li>
		<li>Injecteer de monsters onder de chromatografische omstandigheden beschreven in stap 4.1 om het piekgebied te bepalen, voer een regressieanalyse uit met het piekgebied tot het injectievolume en verkrijg de regressievergelijking en correlatiecoëfficiënt om de lineariteit ervan te evalueren.</li>
		<li>Bereid de monsters voor zoals hierboven beschreven (stap 4.2) en onderwerp ze zes keer op dezelfde dag aan een HPLC-analyse (stap 4.1). Bereken vervolgens de RSD van piekgebieden om de precisie te evalueren.</li>
		<li>Evalueer de stabiliteit van de monsteroplossing door dezelfde monsteroplossingen te analyseren die gedurende 0, 2, 4, 6, 8, 12 en 24 uur bij RT zijn opgeslagen, zoals beschreven in stap 4.1. Bereken vervolgens de RSD van piekgebieden zoals beschreven in stap 1.3.5.</li>
		<li>Onderzoek de herhaalbaarheid door hetzelfde monster (CMT-4) op te lossen in sextuplicaat, bereid zoals beschreven in stap 4.2, en het te onderwerpen aan HPLC-analyse zoals beschreven in stap 4.1. Bereken vervolgens de RSD van β-sitosterolgehalte in zes monsters.</li>
		<li>Beoordeel de nauwkeurigheid van de methode door de standaardtoevoegingsmethode te gebruiken. Voeg hiervoor β-sitosterolreferentieoplossingen toe aan de monsters bij 80%, 100% en 120% van het β-sitosterolgehalte en herhaal elke voorwaarde drie keer zoals beschreven in stap 4.1. Evalueer de nauwkeurigheid van de methode door het gemiddelde herstel en de RSD te berekenen. OPMERKING: De berekeningsformule van de herstelsnelheid (RR) is als volgt: RR % = [(Mt - M0) / Ms] × 100 Waarbij Mt = de kwaliteit van β-sitosterol na toevoeging van de norm, M0 = de kwaliteit van de monsteroplossing en Ms = de kwaliteit van β-sitosterol toegevoegd.</li>
	</ol></li>
	<li>Bepaling van het β-sitosterolgehalte van monsters<ol><li>Neem 10 partijen authentiek Chinees geneesmiddel en vijf partijen verwante vervalsingen om monsteroplossingen te bereiden volgens stap 4.2.</li>
		<li>Injecteer vervolgens elke monsteroplossing en β-sitosterolreferentieoplossing om het piekgebied te bepalen onder de in stap 4.1 beschreven omstandigheden, en bereken het β-sitosterolgehalte van elk monster met behulp van de externe standaard éénpuntsmethode.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Chen, C. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aChen%2C+CR+%22Chinese+Medicine+Specimen+Picture+Book%22">Chinese Medicine Specimen Picture Book</a>. , Shanghai World Book Company. Shanghai. 116(1935).</li>
<li>Xiong, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lignans+from+the+stems+of+Clematis+armandii+%28%26%2334%3BChuan-Mu-Tong%26%2334%3B%29+and+their+anti-neuroinflammatory+activities%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Lignans from the stems of Clematis armandii (&#34;Chuan-Mu-Tong&#34;) and their anti-neuroinflammatory activities.</a> Journal of Ethnopharmacology. 153 (3), 737-743 (2014).</li>
<li>Pan, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((a+lignan+from+the+Chinese+medicinal+plant+Clematis+armandii%2C+inhibits+A431+cell+growth+via+blocking+p70S6%2FS6+kinase+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Integrative+Cancer+Therapies%22%5BJournal%5D)">a lignan from the Chinese medicinal plant Clematis armandii, inhibits A431 cell growth via blocking p70S6/S6 kinase pathway.</a> Integrative Cancer Therapies. 16 (3), 351-359 (2017).</li>
<li>Chinese Pharmacopoeia Commission. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Pharmacopoeia+of+The+People%27s+Republic+of+China%3A+%28Edition+2020%29%22">Pharmacopoeia of The People's Republic of China: (Edition 2020)</a>. , The Medicine Science and Technology Press of China. China., Beijing. 38(2020).</li>
<li>Wang, D. G., Guo, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Textual+research+on+the+materia+medica+and+authenticity+of+Clematidis+armandii%5BTitle%5D)+AND+%22Lishizhen+Medicine+and+Materia+Medicine+Research%22%5BJournal%5D)">Textual research on the materia medica and authenticity of Clematidis armandii.</a> Lishizhen Medicine and Materia Medicine Research. 18 (11), 2696(2007).</li>
<li>Fang, Q. M., Zhang, M., Zhong, Y. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+natural+resources+and+exploitation+of+Caulis+Clematidis+Armandii+in+Sichuan%5BTitle%5D)+AND+%22West+China+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">The natural resources and exploitation of Caulis Clematidis Armandii in Sichuan.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 20 (5), 404-406 (2005).</li>
<li>Bai, M. N., Dai, Y. X., Wang, Y., Ren, Y. Y., Tan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+on+the+identi%EF%AC%81cation+of+Caulis+Clematidis+Armandii%5BTitle%5D)+AND+%22Research+and+Practice+on+Chinese+Medicines%22%5BJournal%5D)">Study on the identiﬁcation of Caulis Clematidis Armandii.</a> Research and Practice on Chinese Medicines. 31 (3), 13-16 (2017).</li>
<li>Zhou, P. J., Li, X. F., Fu, D. H., Pu, X. Y., Zhu, G. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacognosy+identification+of+Ethnomedicine+Clematis+ranunculoides+Franchet%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Guangzhou+University+of+Traditional+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Pharmacognosy identification of Ethnomedicine Clematis ranunculoides Franchet.</a> Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine. 34 (3), 432-436 (2017).</li>
<li>Guo, J. L., Tang, Y., Pei, J., Wang, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+on+random+amplified+polymorphic+DNA+and+sequence+characterized+amplified+regions+of+Caulis+Clematidis+Armandii%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chengdu+Medical+College%22%5BJournal%5D)">Study on random amplified polymorphic DNA and sequence characterized amplified regions of Caulis Clematidis Armandii.</a> Journal of Chengdu Medical College. 6 (4), 283-286 (2011).</li>
<li>Liu, M. Z., Li, M. N., Yao, H., Liu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+identification+of+Clematidis+Armandii+Caulis+and+its+adulterants+and+closely+related+species+by+ITS2+sequence%5BTitle%5D)+AND+%22Global+Traditional+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Molecular identification of Clematidis Armandii Caulis and its adulterants and closely related species by ITS2 sequence.</a> Global Traditional Chinese Medicine. 4 (6), 446-450 (2011).</li>
<li>Liu, J. J., Chen, X., Wei, Z. Q., Li, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+constituents+and+identification+of+the+caules+of+Clematis+armandii+Franch.and+Clematis+montana+Buch.-Ham%5BTitle%5D)+AND+%22Natural+Product+Research+and+Development%22%5BJournal%5D)">Chemical constituents and identification of the caules of Clematis armandii Franch.and Clematis montana Buch.-Ham.</a> Natural Product Research and Development. 22 (6), 998-1000 (2010).</li>
<li>Yang, T. R., Xu, Z., Shi, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+four+compounds+from+Clematis+Montana%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Liaoning+University+of+Traditional+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Studies on four compounds from Clematis Montana.</a> Journal of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine. 10 (4), 142-143 (2008).</li>
<li>Yan, L. H., Xu, L. Z., Zhou, Z. M., Yang, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+constituents+from+stems+of+Clematis+armandii%28I%29%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Traditional+and+Herbal+Drugs%22%5BJournal%5D)">Chemical constituents from stems of Clematis armandii(I).</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 38 (3), 340-342 (2007).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traditional+uses%2C+phytochemistry%2C+pharmacology%2C+and+toxicology+of+Akebiae+Caulis+and+its+synonyms%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Traditional uses, phytochemistry, pharmacology, and toxicology of Akebiae Caulis and its synonyms: A review.</a> Journal of Ethnopharmacology. 277, 114245(2021).</li>
<li>Ye, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diuretic+effect+and+material+basis+of+Clematidis+Armandii+Caulis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22China+Journal+of+Chinese+Materia+Medica%22%5BJournal%5D)">Diuretic effect and material basis of Clematidis Armandii Caulis in rats.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 44 (9), 1889-1894 (2019).</li>
<li>Kuang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consistency+study+of+Caulis+Clematidis+Armandii+and+its+traditionally+used+products+and+counterfeit+species+based+on+efficacy+and+pharmacognosy%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+and+Clinics+of+Chinese+Materia+Medica%22%5BJournal%5D)">Consistency study of Caulis Clematidis Armandii and its traditionally used products and counterfeit species based on efficacy and pharmacognosy.</a> Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica. 36 (3), 115-121 (2020).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quality+assessment+of+Asarum+heterotropoides+var.+mandshuricum+based+on+HPLC+multi-component+determination+and+multiple+pattern+recognition+method+of+fingerprint%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Traditional+and+Herbal+Drugs%22%5BJournal%5D)">Quality assessment of Asarum heterotropoides var. mandshuricum based on HPLC multi-component determination and multiple pattern recognition method of fingerprint.</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 238-243 (2022).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+multi-components+of+Paeoniae+Alba+Radix+based+on+fingerprints+and+chemical+pattern+recognition%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Traditional+and+Herbal+Drugs%22%5BJournal%5D)">Determination of multi-components of Paeoniae Alba Radix based on fingerprints and chemical pattern recognition.</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 231-237 (2022).</li>
<li>Li, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+investigation+for+raw+and+processed+products+of+Euodiae+Fructus+based+on+high-performance+liquid+chromatography+fingerprints+and+chemical+pattern+recognition%5BTitle%5D)+AND+%22Chemistry+%26+Biodiversity%22%5BJournal%5D)">Comparative investigation for raw and processed products of Euodiae Fructus based on high-performance liquid chromatography fingerprints and chemical pattern recognition.</a> Chemistry & Biodiversity. 18 (8), 2100281(2021).</li>
<li>Dong, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+on+suitable+distribution+areas+of+Kawa+Kimichi+produced+in+Sichuan+province-based+on+remote+sensing+and+GIS-A+case+study+of+Clematis+Armandii%5BTitle%5D)+AND+%22Modernization+of+Traditional+Chinese+Medicine+and+Materia+Medica-World+Science+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Study on suitable distribution areas of Kawa Kimichi produced in Sichuan province-based on remote sensing and GIS-A case study of Clematis Armandii.</a> Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica-World Science and Technology. 17 (11), 2398-2404 (2015).</li>
<li>Tang, S. W., Pei, J., Li, F. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+histological+identification+of+Chuanmutong%5BTitle%5D)+AND+%22West+China+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Morphological and histological identification of Chuanmutong.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 15 (1), 19-21 (2000).</li>
<li>Li, B., Chen, X., Fang, Q. M., Zhang, B. J., Wei, Z. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quality+Research+of+Chuanmutong%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Sichuan+of+Traditional+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Quality Research of Chuanmutong.</a> Journal of Sichuan of Traditional Chinese Medicine. 27 (6), 58-60 (2009).</li>
<li>Wu, W. J., Wan, M. M., Cao, Y. H., Tan, R., Song, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+on+the+Quality+Standard+of+Chuanmutong%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Archives+of+Traditional+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Research on the Quality Standard of Chuanmutong.</a> Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine. 33 (2), 313-315 (2015).</li>
<li>Wei, Z. Q., Chen, X., Li, B., Dong, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+stigmasterol+in+Clematis+armandii+Franch+and+Clematis+montana+Buch-Ham.+by+HPLC%5BTitle%5D)+AND+%22Lishizhen+Medicine+and+Materia+Medica+Research%22%5BJournal%5D)">Determination of stigmasterol in Clematis armandii Franch and Clematis montana Buch-Ham. by HPLC.</a> Lishizhen Medicine and Materia Medica Research. 20 (3), 574-575 (2009).</li>
<li>Qing, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+oleanolic+acid+in+Caulis+clematidis+armandii+by+HPLC%5BTitle%5D)+AND+%22West+China+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Determination of oleanolic acid in Caulis clematidis armandii by HPLC.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 21 (3), 273-274 (2006).</li>
<li>Yang, S. D., Wang, R., Fu, D. Y., Guo, J. J., Tan, W. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+on+oleanolic+acid+in+caulis+clematidis+armandii+by+microwave+assisted+extraction-HPLC%2FMS%5BTitle%5D)+AND+%22Anhui+Academy+of+Agricultural+Sciences%22%5BJournal%5D)">Determination on oleanolic acid in caulis clematidis armandii by microwave assisted extraction-HPLC/MS.</a> Anhui Academy of Agricultural Sciences. 38 (13), 6929-6931 (2010).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

De monsterverzameling voor onderzoek is de eerste belangrijke stap naar het construeren van multi-patroonherkenning bij het identificeren van de authenticiteit van Chinese medicinale materialen. Door marktonderzoek ontdekten we dat Sichuan Ya'an, Liangshan en Leshan de belangrijkste productiegebieden van wilde hulpbronnen van Chuanmutong zijn. De verwante rassen van hetzelfde geslacht hebben ook dezelfde geografische spreiding 6,20; CC, DC, DE, XS en SMT worden v...

Chuanmutong, droge Caulis van Clematis armandii Franch. of Clematis montana Buch.-Ham., is een traditionele Chinese geneeskunde die vaak wordt gebruikt in klinieken 1,2,3. Het wordt gebruikt voor de behandeling van urinewegproblemen, oedeem, zweren op de tong en mond, verminderde melkafscheiding, gewrichtsstijfheid en spierpijn veroorzaakt door vochtige warmte4. Chuanmutong is altijd verkregen uit wilde variëteiten, voornamelijk gedistribueerd in het zuidwesten van China, vooral in Sichuan, waar de beste kwaliteit te vinden is 5,6. Het is moeilijk om onderscheid te maken tussen authentieke variëteiten en hun nauw verwante overspelige stoffen vanwege hun vergelijkbare kenmerken 7,8,9,10. De kwaliteitsnorm van Chuanmutong in de 2020-editie van Chinese Farmacopee bepaalt alleen de eigenschappen, microscopische identificatie en dunnelaagidentificatie zonder bepaling van de inhoud, die geen effectieve vervalsingen kunnen identificeren en dus potentiële risico's met zich meebrengen. Bovendien zijn er weinig rapporten die Chuanmutong en aanverwante planten vergelijken en identificeren. Bijgevolg is een kwaliteitscontrolemethode om de authenticiteit van Chuanmutong te garanderen het waard om verder te worden bestudeerd.
De chemische bestanddelen van Chuanmutong zijn voornamelijk samengesteld uit oleanane-type pentacyclische triterpenoïden en hun glycosiden, flavonoïden en organische zuren 11,12,13,14. Onder hen hebben oleanolic acid, β-sitosterol, stigmasterol en ergosterol diuretische effecten van verschillende intensiteiten, wat potentiële farmacodynamische stoffen kunnen zijn voor het bevorderen van diurese en het verlichten van wurggreep15,16. Chemische vingerafdrukken worden verkregen door het scheiden en detecteren van veel chemische componenten in monsters door middel van high-performance vloeistofchromatografie (HPLC), gaschromatografie (GC), enz. Het aannemen van geschikte statistische analysemethoden om de kenmerken van Chuanmutong te analyseren, kan de algehele kwaliteitscontrole en wetenschappelijke identificatie van de traditionele Chinese geneeskunde bepalen 17,18,19.
In deze studie werden 10 partijen authentieke Chuanmutong-variëteiten en vijf partijen overspelige stoffen verzameld. Hun kwaliteit werd vergeleken en geanalyseerd door de HPLC-vingerafdrukmethode in combinatie met multi-patroonherkenning, inclusief clusteranalyse (CA), principal component analysis (PCA), orthogonale partiële least-squares discriminatieanalyse (OPLS-CA) en inhoudsbepaling van de farmacodynamische component. Dit protocol stelt een methode vast voor het identificeren van authentieke rassen met een hoge specificiteit, een nieuwe strategie voor de wetenschappelijke identificatie van authentieke rassen en vervalsingen van Chinese medicinale materialen.

<table><tbody><tr><td>Azijnzuur</td><td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td><td>2017381038</td><td></td></tr><tr><td>Acetonitril</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp; Trading Co., Ltd., Shanghai, China</td><td>WXBD5243V</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-Sitosterol</td><td>Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China</td><td>20210201</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;C18 kolom</td><td>Yuexu Material Technology Co., Ltd., Shanghai, China</td><td>Welch Ultimate LP</td><td></td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Guoqiang Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, China&nbsp;</td><td>19020103</td><td>CMT-1</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Hongya Wawushan Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&nbsp;</td><td>200701</td><td>CMT-2</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&nbsp;</td><td>200701</td><td>CMT-3</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&nbsp;</td><td>200901</td><td>CMT-4</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&nbsp;</td><td>210701</td><td>CMT-5</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Haobo Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&nbsp;</td><td>210401</td><td>CMT-6</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&nbsp;</td><td>200901</td><td>CMT-7</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Wusheng Pharmaceutical Group Co., Ltd., Sichuan, China&nbsp;</td><td>201201</td><td>CMT-8</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Limin Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, China&nbsp;</td><td>201001</td><td>CMT-9</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Yuhetang Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China</td><td>210501</td><td>CMT-10</td></tr><tr><td>Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. Wang</td><td>Madzi Bridge, Sanlang Township, Tianquan County, Sichuan, China&nbsp;</td><td>-</td><td>CC</td></tr><tr><td>Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils.</td><td>Heilin Village, Qiliping Township, Hongya County, Sichuan, China&nbsp;</td><td>-</td><td>DC</td></tr><tr><td>Clematis peterae Hand.-Mazz.</td><td>Huangmu Village, Huangmu Township, Hanyuan County, Sichuan, China&nbsp;</td><td>-</td><td>DE</td></tr><tr><td>Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils</td><td>Mixedang Mountain, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China&nbsp;</td><td>-</td><td>XS</td></tr><tr><td>Clematis finetiana Levl. et Vaniot.</td><td>Wannian Village, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China&nbsp;</td><td>-</td><td>SMT</td></tr><tr><td>Elektronische balans</td><td>Haozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., Shanghai,&nbsp; China&nbsp;</td><td>FA1204</td><td></td></tr><tr><td>Ergosterol</td><td>Meisai Biological Technology Co., Ltd, Chongqing, China</td><td>20210201</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China</td><td>2021112602</td><td></td></tr><tr><td>Ethylacetaat</td><td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td><td>2017042043</td><td></td></tr><tr><td>Mierenzuur</td><td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China</td><td>2016062901</td><td></td></tr><tr><td>Hogeprestatievloeistofchromatografie</td><td>Agilent, VS.</td><td>1260</td><td></td></tr><tr><td>IBM SPSS Statistics versie 26.0</td><td>International Business Machines Corporation, VS</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp; Trading Co., Ltd., Shanghai, China</td><td>WXBD6409V</td><td></td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China</td><td>202010302</td><td></td></tr><tr><td>n-butylalcohol</td><td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td><td>2020071047</td><td></td></tr><tr><td>Petroleumether</td><td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td><td>2020090125</td><td></td></tr><tr><td>Fosforzuur</td><td>Comeo Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td><td>20200110</td><td></td></tr><tr><td>SESCF-TCM versie 2012</td><td>National Pharmacopoeia Commission, China</td><td>-</td><td>http://114.247.108.158:8888/login</td></tr><tr><td>Stigmasterol</td><td>Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China</td><td>20210201</td><td></td></tr><tr><td>Trichloormethaan</td><td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd., Shanghai, China</td><td>20200214</td><td></td></tr><tr><td>Umetrics SIMCA versie 14.1.0.2047</td><td>Umetrics, Zweden</td><td>-</td><td>https://www.sartorius.com/en/products/process-analytical-technology/data-analytics-software/mvda-software/simca/simca-free-trial-download</td></tr><tr><td>Ultrapuur watermachine</td><td>Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd., Sichuan, China</td><td>UPH-II-10T</td><td></td></tr><tr><td>Ultrasoonreiniger</td><td>Kunshan Hechuang Ultrasound Instrument Co., Ltd., Jiangsu, China</td><td>KH3200E</td><td></td></tr></tbody></table>

hplc in combinatie met chemische vingerafdrukken voor multi-patroonherkenning voor het identificeren van de authenticiteit van clematidis armandii caulis

HPLC Coupled with Chemical Fingerprinting for Multi-Pattern Recognition for Identifying the Authenticity of Clematidis Armandii Caulis

Een methode voor het identificeren van Chinese medicinale materialen en hun gerelateerde overspeligen werd geconstrueerd door Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, een universeel gebruikte traditionele Chinese geneeskunde) als voorbeeld te nemen. Tien batches van echte Chuanmutong-variëteiten en vijf partijen verwante overspelige stoffen werden geanalyseerd en vergeleken op basis van de high-performance vloeistofchromatografie (HPLC) vingerafdrukken in combinatie met chemometrie, waaronder clusteranalyse (CA), principal component analysis (PCA) en orthogonale partiële kleinste-kwadraten discriminatieanalyse (OPLS-DA). Bovendien werd het gehalte aan β-sitosterol bepaald. De controle chemische vingerafdruk van Chuanmutong werd vastgesteld en 12 gemeenschappelijke pieken werden geïdentificeerd. De overeenkomst tussen de vingerafdruk van 10 partijen echte Chuanmutong-variëteiten en de controlevingerafdruk was 0,910-0,989, terwijl de gelijkenis van vijf partijen overspelige stoffen slechts 0,133-0,720 was. Op basis van de gemeenschappelijke pieken in het chromatogram werden 15 partijen monsters ingedeeld in drie inhoudsniveaus per PCA en werden ze geaggregeerd in vier categorieën per CA, waardoor een duidelijk onderscheid werd gemaakt tussen authentieke Chuanmutong en overspelige stoffen van Chuanmutong. Verder werden zeven differentiële componenten gevonden die authentieke Chuanmutong en overspelige stoffen van Chuanmutong effectief kunnen identificeren via OPLS-DA. Het β-sitosterolgehalte van 10 partijen echte Chuanmutong-variëteiten was 97,53-161,56 μg / g, terwijl het β-sitosterolgehalte van de vijf partijen overspelige stoffen sterk varieerde, waaronder het β-sitosterolgehalte van Clematis peterae Hand.-Mazz. en Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. en Wils. was significant lager dan die van authentieke variëteiten van Chuanmutong. De HPLC-indexcomponentinhoud en chemische vingerafdruk multi-patroon herkenningsmethode die in deze studie is vastgesteld, bieden een nieuwe strategie voor het effectief identificeren van authentieke Chinese medicinale materialen en gerelateerde overspelige stoffen.

Chromatografische vingerafdruk van Chuanmutong en gelijkenisanalyse (SA) De RSD-waarden van de relatieve retentietijd van precisie, herhaalbaarheid en stabiliteit lagen respectievelijk onder 0,46%, 1,65% en 0,53%; de RSD-waarden van het relatieve piekgebied lagen respectievelijk onder de 4,23%, 3,56% en 3,96%. Zoals te zien is in figuur 1A,B, waren er 12 verschillende gemeenschappelijke pieken (van piek 1 tot piek 12) in de HPLC-vingerafdrukken in de 10 authentieke Chuanm...

Hier presenteren we een protocol om high-performance vloeistofchromatografie (HPLC) vast te stellen, gekoppeld aan chemische vingerafdruk multi-patroonherkenning, die een nieuwe strategie biedt voor het effectief identificeren van de echte variëteiten van Clematidis Armandii Caulis en zijn overspelige stoffen.

HPLC in combinatie met chemische vingerafdrukken voor multi-patroonherkenning voor het identificeren van de authenticiteit van Clematidis Armandii Caulis

A method for identifying Chinese medicinal materials and their related adulterants was constructed by taking Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, a ...

https://cloudfront.jove.com/CDNSource/teasers/64690.jpg

Dit protocol kan een nieuwe strategie bieden voor het effectief identificeren van de echte materialen van Clematidis armandii caulis en zijn overspeligen. Deze methode kan worden gebruikt in onderzoek naar de kwaliteit van medicinale materialen en biedt een referentie voor het bestuderen van de kwaliteitsnormen van andere Chinese medicinale materialen. Om de monstervoorbereiding te beginnen, maalt u de grondstof tot een uniforme deeltjesgrootte door ze door een nylon gaas met een geschikte binnendiameter te laten gaan.Breng nauwkeurig twee gram van de gemalen grondstof in een gestopte erlenmeyer van 50 milliliter voordat 50 milliliter methanol aan de kolf werd toegevoegd. Plaats de stop op de kolf in ultrasoon verwarmd op 600 watt en 40 kilohertz gedurende 30 minuten. Zeef aan het einde van de incubatie de medicinale extractoplossing door het filterpapier.Breng na het persen vier milliliter van de methanoloplossing met de medicinale extracten over in een maatkolf van 10 milliliter. Voeg er vervolgens zes milliliter water aan toe en meng de oplossing. Laat de oplossing 10 minuten bezinken.Voor HPLC-analyse van de monsters. Begin met het voorbereiden van de mobiele fasen en stel het HPLC-verloopprogramma in zoals beschreven in het manuscript. Filtreer het monster door een 0,45 micro poreus filtermembraan en onderwerp het aan HPLC-analyse.Voer voor elk monster zes keer per dag een analyse uit. Om de stabiliteit van de monsteroplossing te evalueren, analyseert u dezelfde monsteroplossing die gedurende 0, 2, 4, 6, 8, 12 en 24 uur na bereiding bij kamertemperatuur is opgeslagen. Neem zes replica's van hetzelfde monster en detecteer de vingerafdruk in HPLC.Importeer de relevante gegevens in de software met de naam Similarity Evaluation System of Chromatographic Fingerprints of Traditional Chinese Medicine of SESCF TCM versie 2012. Importeer de retentietijd en het piekgebied voor alle 10 batches authentieke Chuanmutong-monsters en vijf partijen overspelige stoffen in SESCF TCM voor analyse. Klik in het hoofdmenu op het ingestelde referentiespectrum en ga naar het venster met parameterinstellingen om de referentiechromatografische vingerafdruk van de authentieke soort Chuanmutong als referentie in te stellen.Stel vervolgens de methode voor het genereren van besturingsspectrum in als de mediane methode met de tijdvensterbreedte van 0,5. Klik vervolgens op meerpuntskalibratie in het hoofdmenu, selecteer de pieken en selecteer vervolgens de optie piekovereenkomst als gemarkeerde pieken. Klik ten slotte op Gelijkenis berekenen om een gelijkenisanalyse van de monsters uit te voeren op basis van de referentiechromatogramafdrukken van Chuanmutong.Om systemische clusteranalyse uit te voeren, opent u relevante statistische analysesoftware en klikt u op bestand om de gegevens van 10 batches authentieke monsters en vijf batches overspelige stoffen in de software te importeren. Ga in het menu onder het tabblad Classificatie naar Analyse en systeemclustering. Selecteer de gemeenschappelijke piekgebieden van 10 partijen authentieke monsters en vijf partijen overspelige stoffen als variabelen.Stel het aantal clusters in op vier. Klik vervolgens op Methode om de clustermethode als intergroepverbinding te selecteren. Kies het meetinterval als Pearson-correlatie en gebruik het tabblad OK om de clusteranalysekaart te tekenen.Voor principecomponentenanalyse of PCA opent u de software voor gegevensanalyse. Klik op bestand in het menu en maak een nieuw regulier project. Importeer het piekgebied van 12 veelvoorkomende pieken in een Excel of vergelijkbare spreadsheet uit het HPLC-systeem.Druk op de knop Voltooien om de gegevensimport te voltooien. Om het modeltype met PCA in te stellen, klikt u op Nieuw om een nieuw model te maken en vervolgens de gegevens te passen met behulp van autofit en tabbladen toe te voegen. Ga naar scores om de PCA-scorekaart te krijgen.Om de Orthogonal Partial Least Squares Discrimination Analysis of OPLSDA te gebruiken. Genereer de PCA-scorekaart zoals eerder gedemonstreerd. Stel het modeltype in met de OPLSDA door te klikken op Nieuw en Nieuw als model één Voordat u gaat schalen in het selecteren van par voor iedereen, drukt u vervolgens op AutoFit in scores om de OPLSDA-scorekaart te genereren.Om het variabele belang en de projectie te schatten, gaat u naar het softwaremenu voor gegevensanalyse en gaat u naar Analyseren, gevolgd door het aantal in te stellen op 200 onder per mutaties. Verkrijg de R-kwadraat- en Q-kwadraatwaarden uit de OPLSDA-score en klik op VIP- en VIP-voorspellend om de VIP-kaart te krijgen. HPLC-vingerafdrukken van de 10 authentieke Chuanmutong-monsters toonden 12 verschillende gemeenschappelijke pieken waarvan de relatief grote en goed opgeloste.Piek nummer 10 werd gebruikt als referentiepiek om de relatieve retentietijden van de rustpieken te schatten. De authentieke monsters vertoonden gelijkenisgraden die zeer dicht bij een van de overeenkomsten in goede consistentie impliceren. De gelijkenisgraden tussen de vijf partijen overspeligen en de controle-Chuanmutong waren echter vrij laag.De HPLC-vingerafdrukken van de vijf overspeligen bleken af te wijken van de authentieke monsters, voornamelijk in de regio met bewaartijden variërend van 28 tot 55 minuten. PCA toonde een duidelijke overeenkomst tussen de authentieke rassen en hun verschil met de overspelige stoffen, behalve voor de overspelige CC.Vergelijkbare resultaten werden ook verkregen uit clusteranalyse wanneer de classificatieafstand 20 was. De scorematrix gegenereerd op basis van OPLSDA gaf geen kruising aan tussen de monsterpunten van authentieke monsters en de overspeligen.Nogmaals, overspelige CC leek meer op de authentieke variëteiten dan de andere overspelige stoffen. Volgens de VIP-kaart werden de pieken met waarden groter dan één geïdentificeerd als de belangrijkste markercomponenten die het verschil veroorzaken tussen authentieke monsters en de overspeligen. Het gehalte aan bèta-sitosterol, een actief bestanddeel in Chuanmutong, werd gedetecteerd in alle vijf partijen overspelige stoffen, maar de inhoud varieerde sterk.Dit protocol stelt verschillende analysemethoden vast om alle informatie over medicinale materialen vanuit meerdere hoeken weer te geven en overal de authenticiteit van Chuanmutong medicinale materialen te schatten.

hplc-coupled-with-chemical-fingerprinting-for-multi-pattern

Research

JoVE Journal

Chemistry

Scheikunde

Ongerichte metabolomics biedt een hypothese genererende momentopname van een metabool profiel. Dit protocol zal de extractie en analyse van metabolieten uit cellen, serum of weefsel tonen. Een reeks van metabolieten worden onderzocht met behulp van vloeistof-vloeistof fase-extractie, microflow UltraPerformance vloeistofchromatografie / hoge-resolutie massaspectrometrie (UPLC-HRMS) gekoppeld aan differentiële analyse software.

Ongerichte Metabolomics uit biologische grondstoffen gebruiken UltraPerformance Liquid Chromatography-hoge resolutie massaspectrometrie (UPLC-HRMS)

Hier presenteren we een protocol voor de werking en afstemming van parallelle gesegmenteerde flow chromatografie kolommen om multiplexed detectie mogelijk te maken.

Tuning een parallelle gesegmenteerd Flow Column en Multiplexed Detection inschakelen

Een methode voor het soort identificatie van botanische materiaal door directe analyse in real time-hoge resolutie massaspectrometrie en multivariate statistische analyse wordt gepresenteerd.

Rapid High-throughput Species Identificatie van Botanical Material gebruik van Direct Analysis in Real Time met hoge resolutie massaspectrometrie

Hier presenteren we een protocol voor de sequentiële gerichte kwantificering en niet-gerichte analyse van gefluoreerde verbindingen in water door de Spectrometrie van de massa. Deze methode biedt kwantitatieve niveaus van bekende fluorochemical verbindingen en identificeert onbekende chemicaliën in verwante monsters met semi-kwantitatieve ramingen van hun overvloed.

Identificeren van- en Polyfluorinated chemische soorten met een gecombineerde gerichte en niet-gerichte-Screening hoge-resolutie massa spectrometrie Workflow

Hier gepresenteerd is een protocol voor veldidentificatie van Matricaria chamomilla met behulp van een draagbaar qPCR-systeem. Dit eenvoudig uit te voeren protocol is ideaal als methode om de identiteit van een botanische soort te bevestigen op locaties waar de toegang tot laboratoriumapparatuur en expertise beperkt is, zoals boerderijen en magazijnen.

Veldidentificatie van Matricaria chamomilla met behulp van een draagbaar qPCR-systeem

Dit protocol presenteert een benadering van vingerafdruk en verkent multidimensionale gegevens verzameld door uitgebreide tweedimensionale gaschromatografie gekoppeld aan massaspectrometrie. Speciale algoritmen voor patroonherkenning (template matching) worden toegepast om de chemische informatie te verkennen die is gecodeerd in de extra vierge olijfolie vluchtige fractie (d.w.z. volatilome).

Chromatografische vingerafdrukken op sjabloonmatching voor gegevens verzameld door uitgebreide tweedimensionale gaschromatografie

Natuurlijke producten vormen veelbelovende uitgangspunten voor de ontwikkeling van nieuwe geneesmiddelen en therapeutische middelen. Vanwege de grote chemische diversiteit is het vinden van nieuwe therapeutische verbindingen van planten echter een uitdagende en tijdrovende taak. We beschrijven een vereenvoudigde aanpak om antimicrobiële en antibiofilmmoleculen te identificeren uit plantenextracten en fracties.

Systematische aanpak om nieuwe antimicrobiële en antibiofilmmoleculen uit plantenextracten en -fracties te identificeren om tandheelkundige cariës te voorkomen

Een snel-multidisciplinaire strategie voor vroege detectie van cyanobacteriële bloei en bijbehorende cyanotoxinen wordt hier beschreven. Het maakt het mogelijk om cyanobacteriën en verwante cyanotoxinen in watermonsters en in organische matrices, zoals tweekleppigenmonsters, in 24 uur te detecteren.

Vroege detectie van cyanobacteriële bloei en bijbehorende cyanotoxinen met behulp van snelle detectiestrategie

Een procedure voor de bereiding van poreuze hybride scheidingsmedia, bestaande uit een macroporeuze polymeermonoliet intern gecoat met een microporeuze coördinatiepolymeer met een groot oppervlak, wordt gepresenteerd.

Voorbereiding van de zeer poreuze Coordination Polymer Coatings op Macroporeuze Polymer Monoliths voor Enhanced Verrijking van fosfopeptiden

Een operationeel eenvoudige procedure voor de synthese van ortho-trifluormethoxyleerde anilinederivaten via een twee-stapssequentie van O-trifluormethylering van N-aryl-N-hydroxyacetamide gevolgd door thermisch geïnduceerde intramoleculaire OCF3-migratie wordt gerapporteerd.

Protocol voor de synthese van<em&gt; Ortho</em&gt; -trifluoromethoxylated anilinederivaten

Leer HPLC met chemische vingerafdrukken voor het identificeren van authentieke Clematidis Armandii Caulis en het onderscheiden van vervalsingen. Deze methode ondersteunt kwaliteitsonderzoek van medicinale materialen.

HPLC in combinatie met chemische vingerafdrukken voor multi-patroonherkenning voor het identificeren van de authenticiteit van Clematidis Armandii Caulis (Video) | JoVE Journal

HPLC in combinatie met chemische vingerafdrukken voor multi-patroonherkenning voor het identificeren van de authenticiteit van Clematidis Armandii Caulis

Meer video's verkennen