10 maart 2023
Hier presenteren we een protocol over hoe microscheuren in incrementele kernen kunnen worden voorkomen door een draadloze boor met een koppelvermenigvuldiging toe te passen om problemen bij het coren van bomen te minimaliseren, evenals het effect ervan op het voorbereiden van lange microsecties. Dit protocol bevat ook een procedure om corers in het veld te slijpen.
De meeste streamingstudies zijn gebaseerd op increment core samples, en vooral voor hout anatomische analyse vertrouwen we op zeer hoogwaardige increment cores. Increment cores genomen door een accuboormachine worden onderworpen aan een lagere mechanische belasting en worden daarom minder beschadigd. Begin met het samenstellen van de increment corer en het selecteren van de coringpositie op de stam van een boom, afhankelijk van de onderzoeksvraag.
Nadat u de coringpositie hebt geselecteerd, plaatst u de corer in een rechte hoek ten opzichte van de groeirichting van de stengel en plaatst u een pusher aan de achterkant van de corer om deze tijdens het boren te stabiliseren. Bereik een stabiele positie en leun tegen de duwer om druk uit te oefenen op de snijkant. Draai de korstang met beide handen totdat het draadgedeelte van de boor volledig in de steel verandert.
Als u klaar bent, laat u de druk los en verwijdert u de pusher. Begin vervolgens met beide handen aan de korsgreep te draaien totdat de knol het merg heeft bereikt of door het merg heeft geboord. Controleer dit door de extractor op het handvat naast de steel te houden.
Neem de extractor met de open kant erop en steek deze volledig in de corer. Draai de knol met één volle draai naar achteren om de kern van de steel te breken en trek de afzuigkap uit de knol. Verwijder de kern van de extractor en bewaar deze in een papieren rietje voordat u de knol van de stengel verwijdert en in het handvat opbergt.
Voeg aan de accuboormachine die is uitgerust met een koppelbooster de speciale adapter toe voor de increment corer die bij WSL is ontwikkeld. Zodra de coringpositie is bepaald, plaatst u de knol in een rechte hoek ten opzichte van de groeirichting van de stengel. Bereik een stabiele positie, houd de accuboormachine strak en oefen druk uit op de snijkant.
Start de accuboor en draai langzaam totdat het draadgedeelte van de boor volledig in de steel is geboord. Verhoog vervolgens de snelheid totdat de knol het merg bereikt of boort. Als u klaar bent, verwijdert u de accuboormachine uit de knol, plaatst u het handvat erop en gebruikt u de extractor om de kern te verwijderen zoals uitgelegd.
Bewaar de increment core in een papieren rietje. Verwijder het handvat en plaats de accuboormachine op de knol voordat u de knol van de steel verwijdert. Om de WSL-slijpsteun te gebruiken, neemt u de nieuw ontworpen houder en plaatst u deze op de grond.
Plaats de accuboormachine, inclusief de increment corer, op de aangewezen steunpunten en sluit de montagebeugel om de accuboormachine te bevestigen. Start de accuboormachine door het teflonblok op de startknop te bevestigen en te laten lopen. Neem de conische slijpsteen en slijp de binnenkant van de snijkant ermee.
Neem vervolgens de rechthoekige slijpsteen en slijp de buitenkant van de snijkant om deze te ontbramen. Verwijder het teflonblok van de startknop om de boor te stoppen. Open de montagebeugel om de accuboormachine los te maken en haal het apparaat uit de houder.
Om de scherpte van de snijkant te controleren, verwijdert u de increment corer uit de adapter van de accuboormachine. Leg een vel papier op de houten plank van de slijpsteun en plaats de snijkant van de knol op het papier terwijl je de knol verticaal houdt. Draai de corer terwijl u deze verticaal houdt zonder druk uit te oefenen op de corer.
Til de knol op om te controleren op een rond stuk papier in de snijkant. Als het ronde stuk aanwezig is, is de knol scherp. Zo niet, herhaal dan de verscherpingsprocedure.
Als de buitenkant van een kern niet glad is, herhaalt u de hele procedure. Plaats een lange glazen glijbaan naast de microtoom. Voeg wat water toe in het midden van de glijbaan over de gehele lengte.
Plaats vervolgens de kern in de monsterhouder van een kernmicrotoom. Til de monsterhouder op totdat de kern bijna de rand van het mes raakt en trek het mes over de kern om de bovenkant af te snijden. Plaats het mes opnieuw aan het begin van de kern.
Til het monster ongeveer 10 micrometer op en herhaal de snijprocedure om een vlak oppervlak van ten minste twee millimeter breed te verkrijgen. Borstel vervolgens een maïzena-oplossing op het snijoppervlak en verwijder de overtollige oplossing van de bovenkant van de kern met een stuk doek. Plaats een kant van een in water oplosbare tape aan het begin van de kern met een overlap van één centimeter en het begin van de kern tegenover het microtoomblad.
Bevestig de tape aan het oppervlak van de kern door de tape met een vinger op het oppervlak te strelen. Til vervolgens het monster in de microtoom 15 tot 20 micrometer met behulp van een overlappend stuk van de tape en plaats het microtoomblad aan de rand van de kern. Als u klaar bent, snijdt u het gedeelte terwijl u het uiteinde van de tape vasthoudt.
Neem een dun gedeelte dat op de tape is geplakt en plaats het op de lijn water op de glasplaat die eerder is voorbereid met de snede naar beneden gericht. Na ongeveer 10 seconden begint u met het verwijderen van de tape van de sectie met een pincet terwijl u ervoor zorgt dat het gedeelte op de glasplaat blijft. Tijdens het coren met behulp van de accuboormachine werd geen van de kernen vervormd door de druk die tijdens de eerste fase van het boren op de snijkant werd uitgeoefend.
De kernen zonder glad oppervlak en krassen en scheuren gaven de noodzaak aan om de snijkant te slijpen. Het protocol bespaarde tijd in het lab en verbeterde de kwaliteit van de microsecties. Zelfs als u een accuboormachine gebruikt, wilt u de knol regelmatig slijpen om de bemonstering van hoogwaardige kernen te garanderen.
Het verminderen van de mechanische belasting tijdens het coren vermindert het risico op het veroorzaken van microscheuren in de kernen. Hiervoor wordt het laboratoriumwerk voor het voorbereiden van microsecties tot een minimum beperkt. De mogelijkheid om microsecties van volledige incremente kernen voor te bereiden, maakt een vereenvoudigde tijdreeksanalyse mogelijk voor houtanatomische analyse.
Dit artikel presenteert een protocol voor het minimaliseren van microscheuren in jaarringboren tijdens het boren van boomkernen met behulp van een accuboormachine met een koppelversterker. Daarnaast wordt een procedure beschreven voor het slijpen van boren in het veld om de kwaliteit van microsecties te verbeteren.
De monstername met een hoge integriteit is essentieel voor kwantitatieve houtanatomische studies, waarbij microstructurele continuïteit een directe impact heeft op de betrouwbaarheid van de daaropvolgende analyses. De implementatie van geavanceerde boorworkflows, inclusief technieken met accuboormachines en het slijpen van boren in het veld, vermindert het risico op artefacten en ondersteunt de generatie van reproduceerbare data van hoge kwaliteit. Deze verbeteringen maken een zekerdere interpretatie van tijdreeksen en structurele analyses mogelijk, wat de voorspellende waarde van dendro-ecologisch onderzoek in ontdekkingspijplijnen die relevant zijn voor de biofarmaceutica versterkt.
Deze workflow positioneert het verkrijgen van kwalitatief hoogwaardige groeiringkernen als een fundamentele stap, vanaf de vroege ontdekking tot aan de preklinische anatomische en chemische analyse van hout.