Name: Intra-peritoneale transplantatie voor het genereren van acute myeloïde leukemie bij muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-01-06T14:10:00.000+00:00
Duration: 10 min 2 s
Description: Leer intra-peritoneale transplantatie voor het genereren van acute myeloïde leukemie bij muizen. Deze methode biedt een betrouwbaarder en kosteneffectiever alternatief voor intraveneuze injectie in oncologisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs bedanken de Flow Cytometry Core Facility van het Huck Institute en de Histopathology Core Facility van het Animal Diagnostic Laboratory, Department of Veterinary and Biomedical Sciences, The Pennsylvania State University, voor het bieden van tijdige technische ondersteuning. Dit werk werd ondersteund door subsidies van het American Institute for Cancer Research (KSP), Penn State College of Agricultural Sciences, Penn State Cancer Institute, USDA-NIFA project 4771, toetredingsnummer 00000005 K.S.P. en R.F.P.

<ol><li>Dohner, H., Weisdorf, D. J., Bloomfield, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Acute myeloid leukemia.</a> The New England Journal of Medicine. 373 (12), 1136-1152 (2015).</li>
<li>Fortier, J. M., Graubert, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+models+of+human+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Treatment+and+Research%22%5BJournal%5D)">Murine models of human acute myeloid leukemia.</a> Cancer Treatment and Research. 145, 183-196 (2010).</li>
<li>Ernst, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Definitive+hematopoiesis+requires+the+mixed-lineage+leukemia+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Definitive hematopoiesis requires the mixed-lineage leukemia gene.</a> Developmental Cell. 6 (3), 437-443 (2004).</li>
<li>Fisher, J. N., Kalleda, N., Stavropoulou, V., Schwaller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Impact+of+the+cellular+origin+in+acute+myeloid+leukemia%3A+learning+from+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Hemasphere%22%5BJournal%5D)">The Impact of the cellular origin in acute myeloid leukemia: learning from mouse models.</a> Hemasphere. 3 (1), 152(2019).</li>
<li>Zhan, Y., Zhao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematopoietic+stem+cell+transplant+in+mice+by+intra-femoral+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Hematopoietic stem cell transplant in mice by intra-femoral injection.</a> Methods in Molecular Biology. 430, 161-169 (2008).</li>
<li>Price, J. E., Barth, R. F., Johnson, C. W., Staubus, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injection+of+cells+and+monoclonal+antibodies+into+mice%3A+comparison+of+tail+vein+and+retroorbital+routes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Society+for+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Injection of cells and monoclonal antibodies into mice: comparison of tail vein and retroorbital routes.</a> Proceedings of the Society for Experimental Biology. 177 (2), 347-353 (1984).</li>
<li>Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retro-orbital+injections+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">Retro-orbital injections in mice.</a> Lab Animal. 40 (5), 155-160 (2011).</li>
<li>Suckow, M. A., Danneman, P., Brayton, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSuckow%2C+MA+%22The+Laboratory+Mouse%22">The Laboratory Mouse</a>. , CRC Press Inc. (2001).</li>
<li>Barr, J. E., Holmes, D. B., Ryan, L. J., Sharpless, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+the+chronic+cannulation+of+the+jugular+vein+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology%2C+Biochemistry%2C+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Techniques for the chronic cannulation of the jugular vein in mice.</a> Pharmacology, Biochemistry, and Behavior. 11 (1), 115-118 (1979).</li>
<li>Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+cancer+stem+cell+metastasis+in+xenograft+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Analysis of cancer stem cell metastasis in xenograft animal models.</a> Methods in Molecular Biology. 568, 7-19 (2009).</li>
<li>Nungestee, W., Wolf, A., Jourdonais, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+gastric+mucin+on+virulence+of+bacteria+in+intraperitoneal+injections+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Society+for+Experimental+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Effect of gastric mucin on virulence of bacteria in intraperitoneal injections in the mouse.</a> Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine. 30 (2), 120-121 (1932).</li>
<li>Gargiulo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mice+anesthesia%2C+analgesia%2C+and+part+I%3A+anesthetic+considerations+in+preclinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+journal%22%5BJournal%5D)">Mice anesthesia, analgesia, and part I: anesthetic considerations in preclinical research.</a> ILAR journal. 53 (1), 55-69 (2012).</li>
<li>Leong, S. -K., Ling, E. -A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Labelling+neurons+with+fluorescent+dyes+administered+via+intravenous%2C+subcutaneous+or+intraperitoneal+route%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Labelling neurons with fluorescent dyes administered via intravenous, subcutaneous or intraperitoneal route.</a> Journal of Neuroscience Methods. 32 (1), 15-23 (1990).</li>
<li>Ma, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraperitoneal+injection+of+magnetic+Fe3O4-nanoparticle+induces+hepatic+and+renal+tissue+injury+via+oxidative+stress+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Intraperitoneal injection of magnetic Fe3O4-nanoparticle induces hepatic and renal tissue injury via oxidative stress in mice.</a> International Journal of Nanomedicine. 7, 4809-4918 (2012).</li>
<li>Schwarze, S. R., Ho, A., Vocero-Akbani, A., Dowdy, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+protein+transduction%3A+delivery+of+a+biologically+active+protein+into+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">In vivo protein transduction: delivery of a biologically active protein into the mouse.</a> Science. 285 (5433), 1569-1572 (1999).</li>
<li>Muench, M. O., Chen, J. C., Beyer, A. I., Fomin, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+therapies+supplement%3A+the+peritoneum+as+an+ectopic+site+of+hematopoiesis+following+in+utero+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Cellular therapies supplement: the peritoneum as an ectopic site of hematopoiesis following in utero transplantation.</a> Transfusion. 51, Suppl_4 106-117 (2011).</li>
<li>Zhao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+injection+of+mesenchymal+stem+cells+is+effective+in+treating+liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Intravenous injection of mesenchymal stem cells is effective in treating liver fibrosis.</a> World Journal of Gastroenterology. 18 (10), 1048(2012).</li>
<li>Yousefi, F., Ebtekar, M., Soleimani, M., Soudi, S., Hashemi, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+in+vivo+immunomodulatory+effects+of+intravenous+and+intraperitoneal+administration+of+adipose-tissue+mesenchymal+stem+cells+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+%28EAE%29%5BTitle%5D)+AND+%22International+Immunopharmacol%22%5BJournal%5D)">Comparison of in vivo immunomodulatory effects of intravenous and intraperitoneal administration of adipose-tissue mesenchymal stem cells in experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE).</a> International Immunopharmacol. 17 (3), 608-616 (2013).</li>
<li>Cheng, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+bone+marrow-derived+MSCs+improves+cisplatinum-induced+renal+injury+through+paracrine+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Molecular+Pathology%22%5BJournal%5D)">Transplantation of bone marrow-derived MSCs improves cisplatinum-induced renal injury through paracrine mechanisms.</a> Experimental and Molecular Pathology. 94 (3), 466-473 (2013).</li>
<li>Castelo-Branco, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraperitoneal+but+not+intravenous+cryopreserved+mesenchymal+stromal+cells+home+to+the+inflamed+colon+and+ameliorate+experimental+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Intraperitoneal but not intravenous cryopreserved mesenchymal stromal cells home to the inflamed colon and ameliorate experimental colitis.</a> PLoS One. 7 (3), 33360(2012).</li>
<li>Bazhanov, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraperitoneally+infused+human+mesenchymal+stem+cells+form+aggregates+with+mouse+immune+cells+and+attach+to+peritoneal+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Intraperitoneally infused human mesenchymal stem cells form aggregates with mouse immune cells and attach to peritoneal organs.</a> Stem Cell Research & Therapy. 7, 27(2016).</li>
<li>Liu, Q., Chen, L., Atkinson, J. M., Claxton, D. F., Wang, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atg5-dependent+autophagy+contributes+to+the+development+of+acute+myeloid+leukemia+in+an+MLL-AF9-driven+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+%26+Disease%22%5BJournal%5D)">Atg5-dependent autophagy contributes to the development of acute myeloid leukemia in an MLL-AF9-driven mouse model.</a> Cell Death & Disease. 7 (9), 2361(2016).</li>
<li>Wognum, A. W., Eaves, A. C., Thomas, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+isolation+of+hematopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Medical+Research%22%5BJournal%5D)">Identification and isolation of hematopoietic stem cells.</a> Archives of Medical Research. 34 (6), 461-475 (2003).</li>
<li>Randall, T. D., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+population+of+cells+in+the+bone+marrow+that+phenotypically+mimics+hematopoietic+stem+cells%3A+resting+stem+cells+or+mystery+population%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Characterization of a population of cells in the bone marrow that phenotypically mimics hematopoietic stem cells: resting stem cells or mystery population.</a> Stem Cells. 16 (1), 38-48 (1998).</li>
<li>Gott, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+Cs-137+gamma+rays+and+320-kV+X-rays+in+a+mouse+bone+marrow+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Dose+Response%22%5BJournal%5D)">A comparison of Cs-137 gamma rays and 320-kV X-rays in a mouse bone marrow transplantation model.</a> Dose Response. 18 (2), 1559325820916572(2020).</li>
<li>Miner, N. A., Koehler, J., Greenaway, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraperitoneal+injection+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Intraperitoneal injection of mice.</a> Applied Microbiology. 17 (2), 250-251 (1969).</li>
<li>Madisen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+robust+and+high-throughput+Cre+reporting+and+characterization+system+for+the+whole+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A robust and high-throughput Cre reporting and characterization system for the whole mouse brain.</a> Nature Neuroscience. 13 (1), 133-140 (2010).</li>
<li>Cardiff, R. D., Miller, C. H., Munn, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+hematoxylin+and+eosin+staining+of+mouse+tissue+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Manual hematoxylin and eosin staining of mouse tissue sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2014 (6), 655-658 (2014).</li>
<li>Ronan, J. L., Wu, W., Crabtree, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+neural+development+to+cognition%3A+unexpected+roles+for+chromatin%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Review+Genetics%22%5BJournal%5D)">From neural development to cognition: unexpected roles for chromatin.</a> Nature Review Genetics. 14 (5), 347-359 (2013).</li>
<li>Qian, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-4+treatment+reduces+leukemia+burden+in+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Interleukin-4 treatment reduces leukemia burden in acute myeloid leukemia.</a> FASEB Journal. 36 (5), 22328(2022).</li>
<li>Krivtsov, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transformation+from+committed+progenitor+to+leukaemia+stem+cell+initiated+by+MLL-AF9%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Transformation from committed progenitor to leukaemia stem cell initiated by MLL-AF9.</a> Nature. 442 (7104), 818-822 (2006).</li>
<li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malignant+transformation+initiated+by+Mll-AF9%3A+gene+dosage+and+critical+target+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Malignant transformation initiated by Mll-AF9: gene dosage and critical target cells.</a> Cancer Cell. 13 (5), 432-440 (2008).</li>
<li>Somervaille, T. C. P., Cleary, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+leukemia+stem+cells+in+murine+MLL-AF9+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of leukemia stem cells in murine MLL-AF9 acute myeloid leukemia.</a> Cancer Cell. 10 (4), 257-268 (2006).</li>
</ol>

De auteurs verklaren geen belangenverstrengeling.

Deze hierboven beschreven studies leveren ondersteunend bewijs dat de transplantatie van Lin-cellen vergelijkbaar is met LSK-cellen bij de generatie van 1° murine AML. Bovendien laten de huidige gegevens ook zien dat ip-injectie een efficiënte en handige methode is om murine AML vast te stellen in vergelijking met intraveneuze (of r.o.) injectie.
Naast LSK-cellen is gemeld dat andere populaties zoals granulocyt-monocytenvoorloper (GMP), gewone lymfoïde voorloper (CLP) en gewone myel...

Acute myeloïde leukemie (AML) is een vorm van hematologische maligniteit van diverse etiologie met een slechte prognose1. De generatie van AML-diermodellen legt de basis voor het begrijpen van de complexe variaties en pathobiologie in een poging om nieuwe therapieën te ontdekken2. Leukemogenese bij muizen omvat de transplantatie van donorcellen die fusie-oncoproteïnen tot expressie brengen, inclusief fusies waarbij het gen voor gemengde afstammingsleukemie (MLL) betrokken is om AML krachtig te induceren, om de ziekte bij mensen na te bootsen3. Verschillende cellulaire oorsprong van donorcellen zijn gemeld bij de transplantatie van MLL-gen-geassocieerde AML4, waarbij zeer weinig bekend is over de cellen die verantwoordelijk zijn voor de oorsprong van de ziekte.
Er zijn meerdere routes ontwikkeld voor transplantatie bij muizen; in plaats van een intrafemorale injectie, die direct gemuteerde donorcellen in beenmerg5 introduceert, is een intraveneuze injectie die gebruik maakt van de veneuze sinusplexus, staartader en halsader op grote schaal gebruikt om murine AML-modellen 6,7,8,9 te genereren. In het geval van retro-orbitale (r.o.) injectie zijn verschillende inherente nadelen, zoals volumebeperking, hoge technische vraag, weinig kans op herhaalde pogingen of fouten, en potentieel oogletsel, grote struikelblokken geweest met beperkte of geen haalbare alternatieven7. Staartaderinjectie kan vergelijkbare problemen hebben naast lokale verwondingen; Om de procedure te vergemakkelijken, moeten muizen vaak worden opgewarmd om hun staartaders te verwijden10. Het is ook moeilijk om de staartader te lokaliseren zonder een extra lichtbron, vooral in de C57BL / 6-muizenstam. Voor jugulaire aderinjectie heeft onderzoekspersoneel voldoende training nodig om de ader te lokaliseren en mogelijke complicaties te beperken. Bovendien moeten zowel veneuze sinus- als halsaderinjecties onder anesthesie worden uitgevoerd, wat een ander niveau van complexiteit toevoegt. Het is dus verleidelijk om nieuwe routes voor transplantatie te verkennen om de oprichting van AML-muizenmodellen te vergemakkelijken.
Intra-peritoneale (i.p.) injectie wordt vaak gebruikt voor het toedienen van geneesmiddelen, kleurstoffen en anesthetica 11,12,13,14,15; Het is ook gebruikt om hematopoëtische cellen te introduceren voor ectopische hematopoëse16 en om van beenmerg afgeleide mesenchymale stamcellen te transplanteren in verschillende muismodellen 17,18,19,20,21. Het is echter niet vaak gebruikt om hematopoëtische maligniteiten bij muizen vast te stellen, met name om de progressie van de AML-ziekte te bestuderen.
De huidige studie beschrijft de haalbaarheid van i.p. injectie bij het genereren van AML-muismodellen, naast het vergelijken van de transplantatie-efficiëntie van afstammingsnegatieve (Lin-) en Lin-Sca-1+c-Kit+ (LSK) populaties als donorcellen. Deze bevindingen bieden een eenvoudige en efficiënte manier om experimentele modellen van AML en gerelateerde myeloïde leukemieën te genereren. Een dergelijke methode heeft het potentieel om ons begrip van de ziektemechanismen te vergroten en een relatief eenvoudig model te bieden om experimentele therapieën te testen.

<table><tbody><tr><td>a-Select competent cells&nbsp;</td><td>Bioline</td><td>BIO-85027</td><td></td></tr><tr><td>Ammonium chloride (NH4Cl)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat# A-9434</td><td></td></tr><tr><td>Ampicillin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat# A0797</td><td></td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin (BSA), Fraction V&mdash;Low-Endotoxin Grade</td><td>Gemini bio-products</td><td>Cat# 700-102P</td><td></td></tr><tr><td>Ciprofloxacin HCl</td><td>GoldBio.com</td><td>Cat# C-861-100</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, high glucose, no glutamine</td><td>Gibco</td><td>Cat# 11960-044</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&rsquo;s Phosphate-Buffered Saline (PBS)</td><td>Corning</td><td>Cat# 21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>EDTA, Disodium Salt (EDTA-2Na), Dihydrate, Molecular Biology Grade</td><td>Calbiochem</td><td>Cat# 324503</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum - Premium Select</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>Cat# S11550</td><td></td></tr><tr><td>Holo-transferrin, bovine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat# T1283</td><td></td></tr><tr><td>Insulin solution human</td><td>Sigma</td><td>Cat# I-9278</td><td></td></tr><tr><td>Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM)</td><td>Gibco</td><td>Cat# 12440-053</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamine 200 mM (100&times;) solution</td><td>HyClone, Gelifesciences</td><td>Cat# SH30034.01</td><td></td></tr><tr><td>LB broth, Lennox</td><td>NEOGEN</td><td>Cat #: 7290A</td><td></td></tr><tr><td>LB Broth with agar (Miller)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat# L-3147</td><td></td></tr><tr><td>Mouse anti-mouse CD45.1 (FITC)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Cat# 130-124-211</td><td></td></tr><tr><td>Mouse Interleukin-3 (IL-3)</td><td>Gemini bio-products</td><td>Cat# 300-324P</td><td></td></tr><tr><td>Mouse Interleukin-6 (IL-6)</td><td>Gemini bio-products</td><td>Cat# 300-327P</td><td></td></tr><tr><td>Mouse Stem Cell Factor (SCF)</td><td>Gemini bio-products</td><td>Cat# 300-348P</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin Solution, 100x</td><td>Corning</td><td>Cat# 30-002-CI</td><td></td></tr><tr><td>Phenix-Eco (pECO) cells</td><td>ATCC</td><td>CRL-3214</td><td></td></tr><tr><td>Potassium Bicarbonate (KHCO3), Granular</td><td>JT. Baker</td><td>Cat# 2940-01</td><td></td></tr><tr><td>Rat anti-mouse CD117 (c-kit) (APC)</td><td>BioLegend&nbsp;</td><td>Cat # 105812</td><td></td></tr><tr><td>Rat anti-mouse Ly-6A/E (Sca-1) (PE-Cy7)</td><td>BD Pharmingen</td><td>Cat# 558162</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant Murine Flt3-Ligand</td><td>Pepro Tech, INC.</td><td>Cat# 250-31L</td><td></td></tr><tr><td>RetroNectin Recombinant Human Fibronectin Fragment</td><td>TaKaRa</td><td>Cat# T100A</td><td></td></tr><tr><td>TransIT-293 Reagent</td><td>MirusBio</td><td>Cat# MIR 2705</td><td></td></tr><tr><td>TRI Reagent</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat# T9424</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue Solution, 0.4%</td><td>Gibco</td><td>Cat # 15250061</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red</td><td>Gibco</td><td>Cat# 25200-056</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-Mercaptoethanol (BME)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat# M3148</td><td></td></tr><tr><td>Commerciële tests&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>EasySep Mouse Hematopoietic Progenitor Cell Isolation Kit&nbsp;</td><td>StemCell technologies</td><td>Cat# 19856A</td><td></td></tr><tr><td>High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit&nbsp;</td><td>Thermo Fisher&nbsp;</td><td>Cat# 4368813</td><td></td></tr><tr><td>PerfeCTa qPCR SuperMix</td><td>Quanta Bio</td><td>Cat# 95051-500</td><td></td></tr><tr><td>Plasmid Maxi Kit (25)</td><td>Qiagen</td><td>Cat#:12163</td><td></td></tr><tr><td>Dieren</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ai14TdTomato muizen</td><td>Jackson Laboratory</td><td>Stam # 007914</td><td></td></tr><tr><td>CD45.1 C57BL6/J muizen&nbsp;</td><td>Jackson Laboratory</td><td>Stam # 002014</td><td></td></tr><tr><td>CD45.2 C57BL6/J muizen&nbsp;</td><td>Jackson Laboratory</td><td>Stam # 000664</td><td></td></tr><tr><td>Instrumenten en software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Adobe illustrator&nbsp;</td><td>Versie 25.2.3</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD accuri C6 flow cytometer</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FlowJo 10.8.0</td><td>BD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GeneSys software programma&nbsp;</td><td>Versie 1.5.7.0</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism versie 6&nbsp;</td><td>GraphPad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hemavet 950FS&nbsp;</td><td>Drew Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>7300 Real time PCR systeem</td><td>Applied Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Syngene G:BOX Chemi XR5 Chemiluminescerende Fluorescerende Beeldvorming</td><td>G:Box Chemi</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

intra-peritoneale transplantatie voor het genereren van acute myeloïde leukemie bij muizen

Intra-Peritoneal Transplantation for Generating Acute Myeloid Leukemia in Mice

Er is een onvervulde behoefte aan nieuwe therapieën voor de behandeling van acute myeloïde leukemie (AML) en de bijbehorende terugval waarbij persistente leukemiestamcellen (LSC's) betrokken zijn. Een experimenteel AML-knaagdiermodel om therapieën te testen op basis van het succesvol transplanteren van deze cellen via retro-orbitale injecties in ontvangende muizen is beladen met uitdagingen. Het doel van deze studie was om een eenvoudige, betrouwbare en consistente methode te ontwikkelen om een robuust muizenmodel van AML te genereren met behulp van een intra-peritoneale route. In het huidige protocol werden beenmergcellen getransduceerd met een retrovirus dat humaan MLL-AF9-fusie-oncoproteïne tot expressie brengt. De efficiëntie van afstammingsnegatieve (Lin-) en Lin-Sca-1+c-Kit+ (LSK) populaties als donor-LSC's bij de ontwikkeling van primaire AML werd getest en intra-peritoneale injectie werd aangenomen als een nieuwe methode om AML te genereren. Vergelijking tussen intra-peritoneale en retro-orbitale injecties werd gedaan in seriële transplantaties om de twee methoden te vergelijken en te contrasteren. Zowel Lin- als LSK-cellen getransduceerd met humaan MLL-AF9-virus goed geënt in het beenmerg en de milt van ontvangers, wat leidt tot een volledige AML. De intra-peritoneale injectie van donorcellen vestigde AML in ontvangers bij seriële transplantatie en de infiltratie van AML-cellen werd gedetecteerd in het bloed, beenmerg, milt en lever van ontvangers door flowcytometrie, qPCR en histologische analyses. Intra-peritoneale injectie is dus een efficiënte methode van AML-inductie met behulp van seriële transplantatie van donorleukemische cellen.

Vergelijking van de transplantatie-efficiëntie van murine AML-cellen met behulp van r.o. en i.p. transplantatieroutes Eerder werd de vaststelling van 1° AML gemeld bij ontvangende muizen retro-orbitaal getransplanteerd met MLL-AF9-getransduceerde LSK-cellen, en de transplanteerbaarheid van 1° AML-cellen werd aangetoond door seriële transplantatie30. De huidige studie is de eerste die de mogelijkheid evalueert om beenmerglincellen te gebruiken om transplantatie uit te voeren.<su...

Hier wordt intra-peritoneale injectie van leukemiecellen gebruikt om acute myeloïde leukemie (AML) bij muizen vast te stellen en te verspreiden. Deze nieuwe methode is effectief bij de seriële transplantatie van AML-cellen en kan dienen als een alternatief voor diegenen die problemen en inconsistenties kunnen ervaren met intraveneuze injectie bij muizen.

Intra-peritoneale transplantatie voor het genereren van acute myeloïde leukemie bij muizen

There is an unmet need for novel therapies to treat acute myeloid leukemia (AML) and the associated relapse that involves persistent leukemia stem cells ...

Dit protocol is belangrijk omdat lin-negatieve cellen en SK-cellen geïsoleerd uit dezelfde donormuizen geen duidelijk verschil hadden in de generatie van MLL-AF9 geïnduceerde AML. Ook kan IP-injectie van leukemische cellen met succes een muismodel van AML ontwikkelen. In vergelijking met conventionele transplantatiemethoden is deze techniek handiger en goedkoper.Steriliseer om te beginnen de 8 tot 10 weken oude CD45.1 vrouwelijke C57BL/6J muis met 70% ethanol. Plaats de muis op een steriele chirurgische pad op een piepschuimen bord en speld de benen door de voetzolen van de muis. Knip de huid boven de buikholte bij de middellijn en verbreed de onderhuidse ruimte naar de achterpoten met een steriele schaar met een scherpe steriele schaar.Verleng de incisie van de buiklijn tot aan de enkels en verbreed de onderhuidse ruimte onder de achterpoten met de messen van een scherpe schaar. Knip de achillespees af met een scherpe schaar. Houd de pees vast met een tang met tanden en snijd het andere uiteinde af dat aan het dijbeen is bevestigd om de gastrocnemiusspier te verwijderen.Knip de quadricepspees die aan de knie is bevestigd met een scherpe schaar. Houd de pees vast en snijd de spierkop af die aan het dijbeen is bevestigd om de gastrocnemiusspier te verwijderen. Snijd de andere spieren rond het dijbeen aan het einde die aan het scheenbeen zijn bevestigd.Knip vervolgens de enkel af met een scherpe schaar, zodat het scheenbeen intact blijft. Houd het distale uiteinde van het dijbeen vast en knip het heupgewricht af met een scherpe schaar, zodat de heupkop intact blijft. Breng de scheenbenen en dijbenen over naar een stromingsbuffer in een buis van 15 milliliter.Scheid het scheenbeen en het dijbeen door de knie met de hand te breken. Verwijder de patella, het kraakbeen en de femorale condylen om het tibiale plateau en het distale dijbeen bloot te leggen. Verwijder de spieren met steriel gaas en week de botten in een stroombuffer.Snijd de femurhals af en spoel de beenmergcellen met stroombuffer van beide uiteinden van het dijbeen met behulp van een spuit van 10 milliliter met een naald van 23 gauge. Snijd vervolgens de tibiale malleolus en spoel de beenmergcellen met stroombuffer van beide uiteinden van het scheenbeen. Dispergeer de cellen door op en neer te pipetteren met behulp van een 10 milliliter spuit met een naald van 18 gauge.Centrifugeer de eencellige suspensie gedurende drie minuten bij vier graden Celsius en 400 G. Gooi het supernatant weg en resuspendien de cellen in vijf milliliter rode bloedcel, of RBC, lysisbuffer om de RBC's gedurende drie minuten te lyseren. Voeg vijf milliliter stroombuffer toe om de lysis te stoppen.Centrifugeer vervolgens de celsuspensie en resuspensie van de pellet in vijf milliliter stroombuffer. Plaats een 70 micron celzeef op een buis van 50 milliliter en passeer de suspensie door de zeef om de cellen te verzamelen. Pas de celconcentratie met stroombuffer aan tot één maal 10 tot acht per milliliter in polypropyleenbuizen met ronde bodem.Selecteer afstammingsnegatieve cellen met behulp van een hematopoietische celisolatiekit voor muizen volgens de instructies van de fabrikant. Als u klaar bent, centrifugeert u de gesorteerde hematopoëtische stamcellen en ongesorteerde afstammingsnegatieve cellen en resuspenseert u in drie milliliter 2x cytokines, IMDM-media en drie milliliter viraal supernatant in een retro-reductief gecoate schaal. Incubeer de schaal in een bevochtigde 5% kooldioxide-incubator bij 37 graden Celsius gedurende 6 of 24 uur.Na transductie oogst u de cellen door centrifugeren. Gebruik indien nodig trypsine om de cellen te verzamelen die aan de bodem van de schotel zijn bevestigd. Gooi het supernatant weg en resuspensie de pellet in voorverwarmd PBS.Injecteer cellen retro-orbitaal of intraperitoneaal in de primaire ontvangende muis met een halve naald van 27 gauge. Controleer de muis dagelijks. Na een maand wekelijks bloed verzamelen door retro-orbitale bloedingen om leukocytose te controleren door het volledige bloedbeeld op een HEMAVET te evalueren.Propageer het oog met de duim en wijsvinger en peneer vervolgens de veneuze sinusplexus met een steriele hematocriet capillaire buis door de binnenste canthus. Verzamel 20 tot 25 microliter bloed in een EDTA-bloedafnamebuis en sluit de oogleden om het bloeden te stoppen. Breng een druppel gentamycinesulfaat oftalmische oplossing aan op het oog.Wanneer de witte bloedcellen vier keer 10 tot de vier cellen per microliter bereiken, isoleert u de beenmergcellen door de dijbenen en scheenbenen te spoelen met stroombuffer, gevolgd door RBC-lysis zoals eerder beschreven. Vervolgens, om de splenocyten te oogsten, plaatst u de muis op een steriele chirurgische pad op een piepschuimen bord en speldt u de benen door de muispootkussens. Steriliseer de muis met 70% ethanol.Knip de huid en spieren bij de middellijn om de buikholte bloot te leggen met een steriele schaar met een scherp uiteinde. Isoleer de milt en plaats deze in een stroombuffer in een buis van 15 milliliter. Gaas de milt door een zeef van 70 micron in een schaal van zes centimeter met drie milliliter stroombuffer.Breng de cellen over van de schaal naar een buis van 15 milliliter, centrifugeer vervolgens de eencellige suspensie, gooi het supernatant weg en resuspensie de pellet gedurende drie minuten in vijf milliliter RBC-lysisbuffer. Voeg vijf milliliter stroombuffer toe om de lysis te stoppen en de celsuspensie te centrifugeren. Resuspendeer de pellet in vijf milliliter stroombuffer, meng en passeer een 70 micron celzeef om cellen in een buis van 50 milliliter te verzamelen.Identificeer primaire acute myeloïde leukemie, of AML, cellen door de splenocyten en beenmergcellen te kleuren met FITC geconjugeerd anti-muis CD45.1 antilichaam en te detecteren op een flowcytometer. De cellen worden eerst gated op FSC-A FSC-H en FSC-A SSC-A om singlets te verkrijgen. De CD45.1-positieve populatie wordt op de FL1-plot afgesloten door deze te vergelijken met niet-gekleurde cellen.Voor secundaire transplantatie, resuspendien CD45.1 AML miltcellen van primaire retro-orbitale ontvangers in PBS en injecteer ze retro-orbitaal in CD45.2 mannelijke muis. De aanwezigheid van afwijkende leukocytose en verhoogde infiltratie van leukemische cellen in het beenmerg en de milt ondersteunt de haalbaarheid van het gebruik van beenmerglijnnegatieve cellen om primaire AML te genereren. Er werden geen significante verschillen waargenomen bij primaire ontvangers vertaald met LSK of afstammingsnegatieve cellen.De AML-cellen verspreiden zich in de buikholte van primaire ontvangers door gemengde afstammingsleukemie of MLL-AF9 getransduceerde afstammingsnegatieve cellen. Deze resultaten bevestigden ook de vaststelling van primaire AML via intraperitoneale injectie van MLL-AF9 getransduceerde beenmerglijnnegatieve cellen in de vorm van leukocytose en de aanwezigheid van AML-cellen in het beenmerg en de milt van ontvangende muizen. Primaire transplantatie via intraperitoneale injectie duurde echter langer om AML te ontwikkelen dan via retro-orbitale injectie, ondanks het gelijke aantal donorcellen.De secundaire ontvangers vertoonden leukocytose en significante hepatosplenomegalie in minder dan één maand na transplantatie. De AML-cellen werden ook gedetecteerd in het perifere bloed, beenmerg en milt, evenals in de peritoneale holte. De intraperitoneale injectie van acht maal 10 tot de vijf AML-cellen bereikte een vergelijkbare engraftment als retro-orbitale injectie van acht maal 10 tot de vijf AML.De tertiaire ontvangende muizen vertoonden acuut AML-symptomen, waaronder leukocytose en hepatosplenomegalie, de aanwezigheid van leukemische cellen in het bloed, beenmerg en milt, histologische observatie van het dijbeen en de milt toonden verder de infiltratie van leukemische cellen aan. In vergelijking met de secundaire en tertiaire transplantaties verliep de tertiaire transplantatie veel sneller dan de secundaire transplantatie. Voor het huidige model is het sorteren van LSK-cellen niet nodig.Lin-negatieve cellen kunnen gedurende 6 uur of 24 uur worden getransduceerd met het AML-virus. Het heeft geen invloed op de efficiëntie van de modelinrichting.

intra-peritoneal-transplantation-for-generating-acute-myeloid

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

In this video, we perform an intraperitoneal injection of ovarian cancer cell suspension in a mouse model to study the colonization of ovarian cancer cells in peritoneal adipose tissues and their subsequent...

Intraperitoneal Injection of Cells: A Method of Delivering Cancer Cells into the Peritoneal Adipose Tissue of Murine Model

This video demonstrates the induction of intestinal graft-versus-host disease, GvHD, in a lethally-irradiated recipient mouse using allogeneic hematopoietic stem cells and GvHD-inducing splenic alloreactive T lymphocytes. This protocol helps establish a severe acute intestinal GvHD model to understand the mechanism of the disease and develop innovative therapeutic options.

Induction of Graft Versus Host Disease in Mouse Models via Allogeneic Bone Marrow and Splenic Cell Transplantation

We beschrijven een protocol waarbij busulfan-conditionering het mogelijk maakt om het beenmerg van een ontvangende muis te vervangen door beenmergcellen van donormuizen die alomtegenwoordig groen fluorescent eiwit vertonen, zonder bestraling. Deze techniek is nuttig om de ophoping van beenmergcellen in het centrale zenuwstelsel te bestuderen.

Busulfan als myelosuppressieve Agent voor het genereren van een stabiel hoog niveau beenmergchimerisme in Muizen

Intravital fluorescentie microscopie (IVFM) van de calvarium wordt toegepast in combinatie met genetische diermodellen om de homing en engraftment van hematopoietische cellen in het beenmerg (BM) niches te studeren.

Intravital Fluorescent microscopie (IVFM) te combineren met genetische modellen om te studeren van Engraftment dynamiek van hematopoietische cellen aan het beenmerg Niches

Dit manuscript geeft een beschrijving van de methodologie die wordt gebruikt om muizenmodellen voor transductie-transplantatie te vestigen. Er wordt een gedetailleerd overzicht gegeven van technische fouten die moeten worden vermeden bij het uitvoeren van beenmergtransplantaties. Er moet een duidelijk begrip worden verkregen van het belang van hoog viraal titer, transfectie/transductie en bestraling.

Transductie-Transplantatie Mouse Model van myeloproliferatieve aandoening

Hier beschrijven we een protocol waarin een acuut lymfoblastische leukemiepatiënt-afgeleid xenograftmodel wordt gebruikt als een strategie om CD19-gerichte chimere antigeenreceptor T-cel-geassocieerde toxiciteiten te beoordelen en te monitoren.

Beoordeling van chimere antigeenreceptor T-celgeassocieerde toxiciteiten met behulp van een acuut lymfoblastische leukemiepatiënt-afgeleid xenograftmuismodel

Dit protocol beschrijft de intrafemorale injectie van enkele hematopoëtische of leukemische stamcellen, waaronder gen-bewerkte cellen, in muizenxenotransplantaatmodellen, die niet alleen de snelle en veilige transplantatie van cellen mogelijk maken, maar ook seriële analyses van het beenmerg.

Vereenvoudigde intrafemorale injecties met levende muizen maken continue beenmerganalyse mogelijk

Intrafemorale injecties maken de implantatie van een klein aantal hematopoëtische stam- en voorlopercellen (HSPC's) mogelijk door de cellen direct in de beenmergholte te plaatsen. Hier beschrijven we een experimenteel protocol van intrafemorale injectie van menselijke HSPC's in immunodeficiënte muizen.

Intrafemorale injectie van menselijke hematopoëtische stam- en voorlopercellen in immuungecompromitteerde muizen 

Hier wordt een op fosfoflowcytometrie gebaseerde methode beschreven om de signalering stroomafwaarts van de mTORC1-, JAK/STAT5- en MAPK-routes te analyseren in acute menselijke myeloïde leukemiecellen die xenotransplanteerd zijn in muizen en verkregen uit beenmergaspiraten. p-STAT5-, p-4EBP1-, p-RPS6- en p-ERK1/2-niveaus worden tegelijkertijd gemeten met behulp van een spectrale flowcytometer van de volgende generatie met hoge gevoeligheid.

Intracellulaire fosfoflowcytometrie van acute myeloïde leukemie Patiënt-afgeleide xenotransplantaties

Het protocol heeft tot doel een muismodel te beschrijven voor het genereren van recidieven van acute lymfatische leukemie, gebaseerd op de dynamiek van de respons op inductiechemotherapie.

Muismodel van leukemie Terugval naar inductiechemotherapie voor acute lymfoblastische leukemie

Dit protocol demonstreert temporele veneninjectie voor intraveneuze toediening van kinderkankercellen aan neonatale muizen, waardoor precieze, reproduceerbare modellering van immuunresponsen in het vroege leven tegen kanker mogelijk is. De methode maakt het mogelijk om de impact van interventies, zoals immunomodulatie of therapie, te beoordelen wanneer deze tijdens de neonatale periode worden toegepast.

Een neonataal intraveneus transplantatiemodel voor de beoordeling van immuunactiviteiten in het vroege leven tegen kankercellen

Leer intra-peritoneale transplantatie voor het genereren van acute myeloïde leukemie bij muizen. Deze methode biedt een betrouwbaarder en kosteneffectiever alternatief voor intraveneuze injectie in oncologisch onderzoek.

Intra-peritoneale transplantatie voor het genereren van acute myeloïde leukemie bij muizen

Meer video's verkennen