Name: Eyestalk ablatie om de ovariële rijping bij modderkrabben te verhogen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-03-31T13:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 28 s
Description: Leer oogstengelablatiemethoden om de ovariële rijping bij modderkrabben te verhogen. Deze techniek stimuleert hormonale veranderingen die de voortplanting in kweekprogramma's bevorderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Deze studie werd ondersteund door het ministerie van Onderwijs, Maleisië, onder het Higher Institution Centre of Excellence (HICoE) -programma, Maleisië, geaccrediteerd bij het Institute of Tropical Aquaculture and Fisheries, Universiti Malaysia Terengganu (Vot No. 63933 & Vot No. 56048). We erkennen de steun van Universiti Malaysia Terengganu en Sayap Jaya Sdn. Bhd. via de Private Partnership Research Grant (Vot. No. 55377). Een adjunct Academic Fellow-positie van Universiti Sains Malaysia naar Khor Waiho en Hanafiah Fazhan wordt ook erkend.

Dit protocol volgt de Maleisische praktijkcode voor de verzorging en het gebruik van dieren voor wetenschappelijke doeleinden, zoals uiteengezet door de Laboratory Animal Science Association of Malaysia. Het offeren van de experimentele monsters werd gedaan volgens de National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (NIH Publications No. 8023, herzien 1978). Seksueel pre-volwassen vrouwelijke modderkrabben (oranje modderkrab S. olivacea) werden verzameld op de lokale markt (5°66′62′′N, 102°72′33′′E) in de Setiu Wetlands in Maleisië. De modderkrabsoort werd geïdentificeerd op basis van morfologische kenmerken1.
1. Monsterverzameling en desinfectie
<ol><li>Verzamel gezonde, actieve en voorrijpe vrouwelijke modderkrabben (figuur 1). OPMERKING: Pre-volwassen vrouwelijke krabben hebben driehoekige en lichtgekleurde buikflappen samen met een CW-bereik van 80−85 mm.</li>
	<li>Was de krabben met gechloreerd kraanwater (zoet water) om vuil en osmofiele parasieten te verwijderen.</li>
	<li>Week de krabben in 150 ppm formaldehyde met 20 ppt zoutgehalte gedurende 30 minuten.</li>
	<li>Zorg voor continue en zachte beluchting met luchtstenen tijdens de formaldehydebehandeling. De beluchtingsbron kan afkomstig zijn van een centrale beluchtingslijn of een aquariumbeluchterpomp.</li>
	<li>Was de krabben met stromend zeewater om eventuele resterende formaldehyde te verwijderen.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65039/65039fig01.jpg"> Figuur 1: Abdominale morfologie van vrouwelijke modderkrabben gebruikt om de seksuele rijpingsstadia te identificeren. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65039/65039fig01large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
2. Acclimatisatie
<ol><li>Breng elk gedesinfecteerd vrouwtje over in een aparte ronde tank van 32 L.</li>
	<li>Voed de vrouwtjes gedurende 3 dagen op in 20 ppt zoutgehalte en blijf twee keer per dag voeden (ochtend 09:00 uur en 's avonds 20:00 uur) met gehakte zeevissen op ongeveer 4% - 5% van het lichaamsgewicht van de krab.</li>
	<li>Verwijder overtollig en niet opgegeten voer door het overhevelen voor de ochtendvoeding.</li>
	<li>Ververs dagelijks 10% van het krabbenkweekwater (20 ppt).</li>
</ol>3. Geïnduceerde rui voor geslachtsrijpheid
<ol><li>Knip alle benen behalve de zwembenen met een gesteriliseerde schaar.<ol><li>Vang de krab met een schepnet en houd de krab voorzichtig vast. Knip eerst beide chelipeds en daarna de looppoten bij het tweede gewricht met een schaar. De krab zal de beschadigde aanhangsels automatisch automatiseren. Anesthesie is niet vereist voor autotomie van de ledematen.</li>
	</ol></li>
	<li>Was de krab in zoet water onmiddellijk na de autotomie van de ledematen.</li>
	<li>Breng de limb-autotomized krabben individueel over in geperforeerde plastic manden (28 cm L x 22 cm B x 7 cm H) en plaats ze in een glasvezeltank (305 cm L x 120 cm B x 60 cm H). OPMERKING: Twee manden kunnen worden vastgebonden en aan elkaar worden geknipt. De bovenste mand wordt gebruikt als afdekking zodat de krab niet uit de mand kan ontsnappen.</li>
	<li>Gebruik een recirculerend aquacultuursysteem (RAS) met een zoutgehalte van 20 ppt en een waterdiepte van ten minste 10 cm om ervoor te zorgen dat de hele plastic mand wordt ondergedompeld.</li>
	<li>Blijf de limb-autotomized vrouwelijke krab twee keer per dag voeren met gehakte zeevis op 5% - 7% van het lichaamsgewicht van de krab.</li>
	<li>Voed de krabben op tot ze geslachtsrijp zijn door rui (35 dagen). OPMERKING: Geïnduceerde rui kan worden overgeslagen voor commerciële ovariële rijping en zaadproductie met wilde volwassen vrouwelijke modderkrabben. Geoogste volwassen vrouwtjes uit het wild moeten worden geacclimatiseerd en direct worden onderworpen aan koude-shock-anesthesie en daaropvolgende oogsteelablatie.</li>
</ol>4. Anesthesie
<ol><li>Selecteer geslachtsrijpe vrouwtjes met een donkergekleurde ovaalvormige buikflap met een CW >86 mm (figuur 1).</li>
	<li>Vang de krabben met een schepnet en houd ze individueel in kleine aquaria voor anesthesie.</li>
	<li>Voeg na 5 minuten acclimatisatieperiode 2-fenoxyethanol (2-PE) met 2 ml / L toe aan elk aquarium en laat 15 minuten anesthesiebehandeling toe.</li>
	<li>Zorg ervoor dat de krabben volledig worden verdoofd door het gebrek aan spontane beweging.</li>
</ol>5. Eyestalk ablatie
<ol><li>Cauterisatie techniek<ol><li>Voer alle procedures uit bovenop een tafel en in een open ruimte.</li>
		<li>Neem een nikkel-stalen metalen staaf met platte kop (bijvoorbeeld een schroevendraaier) met een houten of plastic handvat en bedek het handvat met een natte katoenen handdoek.</li>
		<li>Steriliseer twee roestvrijstalen chirurgische tangen in een autoclaaf.</li>
		<li>Bereid 70% ethanol in een spuitfles en houd het uit de buurt van vuurgerelateerde bronnen, zoals blaasbrander en roodgloeiende schroevendraaier. Zorg dat je papieren zakdoekjes klaar hebt voor gebruik. OPMERKING: Ethanol is licht ontvlambaar. Houd een veilige afstand tot brandbronnen.</li>
		<li>Sluit een blowtorch stevig aan op een gasfles (butaan). LET OP: Volg de instructies op de blaastorch en gasfles. Zorg ervoor dat de blowtorch is uitgeschakeld bij het aansluiten op de gasfles. Lees en volg alle brandveiligheidsmaatregelen vermeld op de gasfles.</li>
		<li>Draag dikke katoenen handschoenen om letsel door hete voorwerpen te voorkomen.</li>
		<li>Onderwerp de punt van de metalen staaf aan het vuur van de blaaspijp totdat de metalen staaf felrood is.</li>
		<li>Bedek de verdoofde krab met een natte katoenen handdoek. OPMERKING: Bedek de antennes van de krab om onnodige schade te voorkomen.</li>
		<li>Houd een oog van de krab vast met een gesteriliseerde tang. OPMERKING: Steriliseer de tang in een autoclaaf voor het eerste gebruik en desinfecteer met 70% ethanol voor later gebruik op andere krabben.</li>
		<li>Houd de roodgloeiende metalen platte punt op het oog van de krab en druk lichtjes gedurende ongeveer 10−15 s totdat de ogensteel een oranje of roodachtig oranje kleur krijgt. Wees voorzichtig bij het uitvoeren van deze stap om schade aan aangrenzende structuren te voorkomen. OPMERKING: Er zijn twee mensen nodig om oogsteelablatie uit te voeren volgens de cauterisatiemethode: één om de krab vast te houden en een andere om de ablatieprocedure uit te voeren.</li>
		<li>Desinfecteer de tang met 70% ethanolspray om kruisbesmetting tussen krabben te voorkomen. OPMERKING: Voer deze stap alleen uit en wacht ten minste 5 minuten na de ablatieprocedure met de oogsteel om ervoor te zorgen dat de tang wordt afgekoeld voordat deze wordt gedesinfecteerd met 70% ethanol om mogelijk brandgevaar te voorkomen.</li>
		<li>Na het uitvoeren van de eyestalk ablatie op alle krabben, dompel je de hete nikkelstalen metalen staaf (schroevendraaier) in kraanwater.</li>
		<li>Desinfecteer de handdoek voor hergebruik. Meerdere handdoeken kunnen worden gebruikt om tijd te besparen. OPMERKING: Was de handdoek met kraanwater en dompel deze gedurende 5 minuten in 30 ppm gechloreerd water. Was vervolgens de handdoek opnieuw met kraanwater en dompel deze in een natriumthiosulfaatoplossing van 1 g / l.</li>
		<li>Bewaar de blowtorch op een veilige plaats nadat u deze hebt uitgeschakeld en wacht tot deze terugkeert naar de omgevingstemperatuur (ongeveer 30 minuten) voordat u de verbinding verbreekt.</li>
	</ol></li>
	<li>Operatietechniek<ol><li>Voer de procedure uit in een goed geventileerde ruimte.</li>
		<li>Steriliseer twee chirurgische scharen en tangen in een autoclaaf.</li>
		<li>Giet 50 ml 70% ethanol in een glazen bekerglas van 100 ml.</li>
		<li>Draag dikke katoenen handschoenen.</li>
		<li>Houd de verdoofde krab vast en bedek deze met een natte katoenen handdoek.</li>
		<li>Houd een oog van de krab vast met een gesteriliseerde tang.</li>
		<li>Knip snel de oogsteel af met een gesteriliseerde chirurgische schaar. OPMERKING: Hemolymfe kan verloren gaan van het gewonde deel van de krab.</li>
		<li>Dompel de schaar en tang na elk gebruik in 70% ethanol en droog ze met vloeipapier voor hergebruik.</li>
	</ol></li>
</ol>6. Post-anesthesie zorg
<ol><li>Bereid 20 ppt gefilterd zeewater voor en bewaar het in een bovengrondse tank met continue beluchting.</li>
	<li>Sluit een flexibele buis aan op de bovengrondse tank voor gravitationele waterstroom.</li>
	<li>Plaats de krab onmiddellijk na de ablatie van de oogsteel in de mand en onderwerp de krab aan stromend zeewater (omgevingswatertemperatuur: 28 °C) uit de bovengrondse tank.</li>
	<li>Houd het zeewater stromend en controleer de krab totdat deze spontaan kan bewegen, wat wijst op herstel van de anesthesie. OPMERKING: Zeewater kan worden bereid in een grondtank en een dompelwaterpomp kan worden gebruikt voor de waterstroom.</li>
	<li>Houd de krabben individueel in 20 ppt zeewater met beluchting in een aquarium gedurende 30 minuten voor verdere observatie. OPMERKING: De teruggevonden krabben zullen individueel worden gekweekt in het daaropvolgende broedkweekproces.</li>
</ol>7. Observatie van de rijping van de eierstokken
<ol><li>Fokkerij van fokdieren<ol><li>Breng de volwassen krabben over naar individuele ronde tanks van 32 L.</li>
		<li>Blijf twee keer per dag voeren met gehakte zeevis (bevroren bij −20 °C) ('s ochtends 09:00 uur en 's avonds 20:00 uur) en verwijder niet-opgegeten voer voor de ochtendvoeding.</li>
		<li>Kweek het broedbestand individueel gedurende 30 dagen in 20 ppt zoutgehalte.</li>
		<li>Verwijder uitwerpselen en ververs dagelijks 10% van het zeewater (20 ppt).</li>
	</ol></li>
	<li>Sectie<ol><li>Reinig een ontleedbak, schaar en tang met 70% ethanol.</li>
		<li>Verdoof de vrouwtjes individueel met de 2-PE onderdompelingsanesthesiemethode.</li>
		<li>Selecteer willekeurig nieuw volwassen vrouwtjes (na de rui van pre-volwassen vrouwtjes) die geen eyestalk-ablatie hebben ondergaan om hun gonadale stadia te bevestigen.</li>
		<li>Offer alle oog-ablated experimentele vrouwtjes individueel op en identificeer de gonad-rijpingsstadia. Vernietig de thoracale ganglia van de krab met behulp van een scherpe steriele priem. Verwijder eerst het bovenste schild en daarna de hepatopancreas om de eierstok zichtbaar te maken. Observeer de kleur van de eierstokken en identificeer de rijpingsfase van de eierstokken (figuur 2).</li>
	</ol></li>
	<li>Identificatie van ovariële rijpingsstadia<ol><li>Observeer de kleur van de eierstokken met het blote oog of onder een stereomicroscoop.</li>
		<li>Identificeer de rijpingsstadia van de eierstokken op basis van kleuring30: de onvolgroeide (stadium-1) vertoont een doorschijnende of roomwitte kleur; de vroege rijping (stadium-2) vertoont een bleke tot lichtgelige kleur; iii) de voorrijping (stadium-3) een gele tot lichtoranje kleur vertoont; en (iv) de volledig gerijpte (stadium-4) een donkeroranje tot roodachtige kleur vertoont.</li>
	</ol></li>
</ol>

Geen van de auteurs heeft belangenconflicten.

Dit protocol is ontwikkeld voor de oogstekelablatie van de modderkrab, Scylla spp., en kan worden toegepast als een efficiënte methode om gonaderijping te induceren. Dit protocol kan gemakkelijk worden gerepliceerd voor de commerciële eierstokrijping van modderkrabben en kan worden geïmplementeerd om de latente periode (tijd van de ene spawning naar de andere) in de productie van modderkrabzaad te verminderen.
De eyestalk ablatie van schaaldieren (d.w.z. zoetwatergarnalen, zeegarnalen...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65039">Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs</a>. The Introduction, Protocol, Discussion and References were&#160;updated.

Erratum: Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

Alle vier de modderkrabsoorten die tot het geslacht Scylla behoren, zijn commercieel belangrijke schaaldiersoorten in de aquacultuur 1,2. De groei van schaaldieren, waaronder modderkrabben, en hun transformatie van de pre-volwassen (sub-volwassen of puberale) fase naar de geslachtsrijpe (volwassen) fase vindt plaats door een ruiproces waarbij oudere en kleinere exoskeletten periodiek worden afgestoten. Carapaxbreedte (CW), chelipeds en abdominale flapmorfologieën worden veel gebruikt om de geslachtsrijpheid van Scylla spp te bepalen. 3,4,5. Het proces van rui wordt gereguleerd door de werking van verschillende hormonen en vereist een enorme hoeveelheid energie6. Naast het normale ruiproces versnelt het verlies van ledematen, vrijwillig of geïnduceerd door externe factoren, de rui van krabben zonder hun overlevingskans te beïnvloeden 7,8,9. Daarom wordt limb autotomie vaak gebruikt voor ruiinductie in de soft-shell modderkrabkweekindustrie 7,9.
Unilaterale of bilaterale eyestalk ablatie is vooral populair in zoetwatergarnalen en zeegarnalen voor gonadrijping en zaadproductie10,11,12,13. Veel voorkomende eyestalk ablatietechnieken bij schaaldieren omvatten het volgende: (i) ligatie aan de basis van de ogensteel met behulp van een string14,15; ii) cauterisatie van de ogensteel met behulp van een hete tang of elektrocauterie16; iii) verwijdering of direct knijpen van de ogensteel om een open wond achter te laten12; en (iv) verwijdering van de inhoud van de ogensteel door incisie na het snijden van het distale deel van het oog met een scheermes17. De eyestalk X-organen zijn belangrijke endocriene organen in schaaldieren omdat ze schaaldieren hyperglycemische hormonen (CHH), vervellingsremmende hormonen (MIH) en vitellogenese-remmende hormonen (VIH) reguleren, 6,18,19,20,21,22. Eyestalk X-organen (of het sinuskliercomplex) synthetiseren en geven gonade-remmende hormonen (GIH) af, ook bekend als vitellogenese-remmende hormonen (VIH), behorend tot de neuropeptidehormoonfamilie6. Unilaterale of bilaterale eyestalk-ablatie vermindert de GIH-synthese, wat resulteert in de dominantie van stimulerende hormonen (d.w.z. gonadestimulerende hormonen, GSH) en de versnelling van het ovariële rijpingsproces bij schaaldieren23,24,25,26. Zonder de invloed van GIH na ablatie van de ogen, besteden vrouwelijke schaaldieren hun energie aan de ontwikkeling van de eierstokken27. Het is gebleken dat eenzijdige eyestalk-ablatie voldoende is voor de inductie van ovariële rijping bij schaaldieren11 en dat de geableerde ogensteel van garnalen en krabben kan regenereren na verschillende ruien28. Er zijn vier ovariële ontwikkelingsstadia geregistreerd in Scylla spp.: i) onrijp (stadium-1), ii) vroege rijping (stadium-2), iii) pre-rijping (stadium-3) en iv) volledig volwassen (stadium-4) 29,30. Het onrijpe ovariële stadium wordt gevonden bij onvolwassen vrouwtjes. Na puberale rui en paring begint de onrijpe eierstok zich te ontwikkelen en rijpt uiteindelijk (stadium-4) voordat hij31 paait.
Een eyetalk ablatieprotocol is essentieel voor de ontwikkeling van modderkrabbroed en zaadproductie. Op de wereldwijde voedselmarkt hebben volwassen modderkrabben met volledig volwassen eierstokken (stadium-4) in plaats van krabben met een hoger spiergehalte de voorkeur van consumenten en hebben ze dus een hogere commerciële waarde, zelfs hoger dan grote mannetjes. Er is geen volledig protocol voor de oogstekalving van modderkrabben. Het eyestalk ablatieprotocol in dit werk minimaliseert stress door volledig verdoofde krabben te gebruiken en minimaliseert lichamelijk letsel aan personeel door krabbeten. Dit protocol is eenvoudig en kosteneffectief. Hier presenteren we een protocol voor de eyestalk ablatie van Scylla spp. die de rijping van de gonade kan induceren. Twee technieken van eyestalk ablatie (cauterisatie en chirurgie) werden getest en hun efficiëntie vergeleken op basis van de gonadale ontwikkelingssnelheid van vrouwelijke modderkrabben.

<table><tbody><tr><td>Aeration tube&nbsp;</td><td>Ming Yu Three</td><td>N/A</td><td>aquarium en dierenwinkel</td></tr><tr><td>Airstone</td><td>Ming Yu Three</td><td>N/A</td><td>aquarium en dierenwinkel</td></tr><tr><td>Autoclave machine</td><td>HIRAYAMA MANUFACTURING CORPORATION</td><td>N/A</td><td>GEMAAKT IN JAPAN</td></tr><tr><td>Bleaching powder (Hi-Chlon 70%)</td><td>Nippon Soda Co.Ltd,Japan</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Blow torch&nbsp;</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Circular tank (32L)</td><td>BEST PLASTIC INDUSTRY SDN. BHD.&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Cotton hand gloves (thick)&nbsp;</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Cotton towel</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Digital thermometer</td><td>Hanna Instrument</td><td>HI9814</td><td>Hanna&nbsp;Instruments&nbsp;GroLine Hydroponics Waterproof pH / EC / TDS / Temp. Draagbare Meter HI9814</td></tr><tr><td>Digital Vernier Caliper</td><td>INSIZE Co., Ltd.</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting tray</td><td>Hatcheri AKUATROP&nbsp;</td><td>N/A</td><td>Onderzoekscentrum van de Universiti Malaysia Terengganu</td></tr><tr><td>Dropper bottle/Plastic Pipettes Dropper</td><td>Shopee Malaysia</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Ethanol 70%</td><td>Thermo Scientific Chemicals</td><td>033361.M1</td><td>Verdund tot 70% met behulp van dubbel gedestilleerd water</td></tr><tr><td>Fiberglass tank (1 ton)</td><td>Hatcheri AKUATROP&nbsp;</td><td>N/A</td><td>Onderzoekscentrum van de Universiti Malaysia Terengganu</td></tr><tr><td>Fine sand</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Verzameld van het zeestrand van de Universiti Malaysia Terengganu</td></tr><tr><td>First Aid Kits</td><td>Watsons Malaysia</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Flat head nickel steel metal rod (Screw driver)</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Formaldehyde</td><td>Thermo Scientific Chemicals</td><td>119690010</td><td></td></tr><tr><td>Gas cylinder (butane gas) for blow&nbsp; torch</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Gas lighter gun (long head)</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Glass beaker (100 mL))</td><td>Corning Life Sciences</td><td>1000-100</td><td></td></tr><tr><td>Ice bag&nbsp;</td><td>Watsons Malaysia</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Perforated plastic baskets&nbsp;</td><td>Eco-Shop Marketing Sdn. Bhd.</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>PVC pipe 15mm</td><td>Bina Plastic Industries Sdn Bhd (HQ)</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Refractometer</td><td>ATAGO CO.,LTD.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Refrigerator</td><td>Sharp Corporation Japan</td><td>N/A</td><td>Chest Freezer SHARP 110L - SJC 118</td></tr><tr><td>Scoop net</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td></td><td>N/A</td></tr><tr><td>Seawater</td><td>Hatcheri AKUATROP&nbsp;</td><td>N/A</td><td>Onderzoekscentrum van de Universiti Malaysia Terengganu</td></tr><tr><td>Siphoning pipe</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Spray bottle</td><td>Mr. DIY Sdn Bhd</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Stainless surgical forceps&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Stainless surgical scissors&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Submersible water pump&nbsp;</td><td>AS</td><td>N/A</td><td>model: Astro 4000</td></tr><tr><td>Tincture of iodine solution&nbsp; (Povidone Iodine)</td><td>Farmasi Fajr Sdn Bhd</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Tissue paper&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Transparent plastic aquarium</td><td>Ming Yu Three</td><td>N/A</td><td>aquarium en dierenwinkel</td></tr><tr><td>Waterproof table</td><td>Hatcheri AKUATROP&nbsp;</td><td>N/A</td><td>Onderzoekscentrum van de Universiti Malaysia Terengganu</td></tr></tbody></table>

eyestalk ablatie om de ovariële rijping bij modderkrabben te verhogen

Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

Modderkrabben (Scylla spp.) zijn commercieel belangrijke schaaldiersoorten die in de hele Indo-West Pacific-regio te vinden zijn. Tijdens de kweek is de inductie van ovariële rijping belangrijk om aan de vraag van de consument naar volwassen modderkrabben te voldoen en de zaadproductie te versnellen. Eyestalk ablatie is een effectief hulpmiddel om de rijping van de eierstokken bij modderkrabben te verbeteren. Er is echter geen standaardprotocol voor de oogsteel-ablatie van modderkrabben. In deze studie worden twee eyestalk ablatietechnieken beschreven: cauterisatie (het gebruik van heet metaal om de ogensteel van een verdoofde krab te aborteren) en chirurgie (het verwijderen van de oogsteel met behulp van een chirurgische schaar). Vóór de ablatie van de ogen werden geslachtsrijpe vrouwtjes (CW > 86 mm) verdoofd met behulp van een ijszak (−20 °C) met zeewater. Toen de watertemperatuur 4 °C bereikte, werd de ijszak uit het water gehaald. Stromend zeewater (omgevingstemperatuur: 28 °C) werd gebruikt voor herstel van de anesthesie onmiddellijk na oogsteelablatie. Mortaliteit trad niet op tijdens of na het proces van oogsteelablatie. Het hier gepresenteerde eyetalk-ablatieprotocol versnelde de rijping van de eierstokken van de modderkrabben.

Gonade rijping Roomwitte eierstokweefsels (onrijpe eierstokken, stadium-1) werden gevonden bij 100% van de ontleedde vrouwtjes (n = 6) voordat de ogensteelablatie werd uitgevoerd (figuur 2). De gonadrijpingssnelheid van de oogsteel-ablated vrouwelijke krabben (n = 63; 31 vrouwtjes met de cauterisatietechniek en 32 vrouwtjes met de operatietechniek) was hoger in vergelijking met vrouwelijke krabben die na 30 dagen individuele opfok niet werden onderworpen aan oogsteelablat...

Twee eyestalk ablatieprotocollen (d.w.z. cauterisatie en chirurgische benaderingen) werden uitgevoerd op verdoofde vrouwelijke krabben. De oogsteblablatie van modderkrabben versnelde de rijping van eierstokken zonder de overlevingskans te verminderen.

Eyestalk ablatie om de ovariële rijping bij modderkrabben te verhogen

Mud crabs (Scylla spp.) are commercially important crustacean species that can be found throughout the Indo-West Pacific region. During culture, the ...

Het beschreven protocol minimaliseert stress tijdens oogsteelablatie van modderkrabben, waardoor de sterfte als gevolg van oogsteelablatie wordt verminderd. Tijdsefficiëntie is de sleutel tot het minimaliseren van stress voor de dieren. Zorg ervoor dat alles is voorbereid voordat u de procedure uitvoert.Begin met het wassen van de gezonde, actieve en premature vrouwelijke modderkrabben met gechloreerd kraanwater om vuil en parasieten te verwijderen. Week de krabben 30 minuten in formaldehyde. Zorg voor een continue en zachte beluchting met luchtstenen tijdens de formaldehydebehandeling.Gebruik vervolgens stromend zeewater om de krabben te wassen om eventuele resterende formaldehyde te verwijderen. Om de krabogensteel te dichtschroeien, begint u met het verwarmen van de punt van een metalen staaf met een blowtorch totdat de staaf felrood is. Bedek een verdoofde krab met een natte katoenen handdoek en houd een oog van de krab vast met een gesteriliseerde tang.Druk de roodgloeiende metalen punt ongeveer 10 tot 15 seconden op het oog van de krab totdat de ogensteel een oranje of roodachtig oranje kleur krijgt. Desinfecteer de tang met 70% ethanol en reinig ze met steriel tissuepapier om kruisbesmetting tussen krabben te voorkomen. Na het uitvoeren van ablatie op alle krabben, dompelt u de metalen staaf in leidingwater.Om chirurgische ablatie uit te voeren, houdt u de verdoofde krab vast met dikke katoenen handschoenen en bedekt u deze met een natte katoenen handdoek. Gebruik een steriele tang om één oog van de krab vast te houden en knip de ogensteel snel af met een chirurgische schaar. Bereid na de operatie een bovengrondse tank voor met 20 delen per duizend gefilterd zeewater met continue beluchting.Verbind een flexibele buis met de tank voor gravitationele waterstroom. Plaats de krab in een mand en onderwerp hem aan stromend zeewater uit de bovengrondse tank. Houd de krab in de gaten onder stromend zeewater totdat hij spontaan kan bewegen.Plaats de krabben individueel in een ander aquarium met zeewater gedurende 30 minuten voor verdere observatie. Selecteer willekeurig nieuw volwassen vrouwtjes die geen eyestalk-ablatie hebben ondergaan. Na het verwijderen van het bovenste schild en de hepatopancreas, observeer en identificeer het rijpingsstadium van de krab-eierstok.De rijpingsstadia van de eierstokken kunnen worden geïdentificeerd op basis van hun kleuring, waarbij de onrijpe fase één doorschijnend of roomwit is, de vroege rijpingsfase twee bleek tot lichtgeel, de voorrijpe fase drie geel tot lichtoranje en de volledig volwassen fase vier een donkeroranje tot roodachtige kleur heeft. De rijpingssnelheid van de gonaden was hoger bij de vrouwtjes met een oogsteel-ablated in vergelijking met degenen die niet waren geableerd. Het hoogste percentage van stadium-drie eierstokken werd gevonden in oog-ablated vrouwelijke krabben.Eenrichtingsanalyse van variantie toonde significante verschillen tussen de experimentele vrouwelijke krabbenrijpingsstadia van de eierstokken. De controlegroep had een hogere prevalentie van onvolwassen vrouwelijke krabben in vergelijking met de geableerde groepen. Alleen de geableerde groepen waren in staat om stadium-vier vrouwelijke krabben te produceren vanaf een onvolgroeid stadium 30 dagen na de behandeling.Het is belangrijk om ervoor te zorgen dat de oogsteel van modderkrab volledig is geableerd na cauterisatie of operatietechniek. Eyestalk ablatie stelt schaaldierboeren in staat om de rijping en rui van de eierstokken gemakkelijk te induceren. Het stelt onderzoekers ook in staat om de rol van eyestalk bij het reguleren van de voortplanting van modderkrabben verder te onderzoeken.

eyestalk-ablation-to-increase-ovarian-maturation-in-mud-crabs

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Bemesting van Xenopus oöcyten Het gebruik van de Host Transfer Methode

De amphipod Parhyale hawaiensis is een veelbelovend model organisme voor studies van schaaldieren embryologie en vergelijkende geleedpotigen ontwikkeling en evolutie. Dit protocol beschrijft een methode voor het handmatig verwijderen van enkele blastomeren van vroeg decollete stadium embryo's van Parhyale.

Ablatie van een enkele cel van acht-cel embryo&#39;s van Amphipod Crustacean<em&gt; Parhyale hawaiensis</em

We beschrijven methoden om onrijpe eicellen van Xenopus laevis te manipuleren, in vitro rijping van eicellen tot eieren, en intracytoplasmatische sperma-injectie. Dit protocol maakt degradatie van sommige maternale eiwitten en overexpressie van interessante genen bij bevruchting mogelijk, en is daarom waardevol om de rollen van specifieke factoren in de vroege embryonale ontwikkeling te bestuderen.

Manipulatie en<em&gt; In Vitro</em&gt; Rijping van<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Eicellen, Gevolgd door intracytoplasmatische sperma-injectie, om embryonale ontwikkeling

We beschrijven een Xenopus eicel en dierlijk kapsysteem voor de expressie-klonering van genen die in staat zijn om een respons te induceren in competent ectoderm, en bespreken technieken voor de daaropvolgende analyse van dergelijke genen. Dit systeem is nuttig bij de functionele identificatie van een breed scala aan genproducten.

Functionele klonen behulp van een<em&gt; Xenopus</em&gt; Eicel Expression System

De studie van de biologie geeft waardevolle informatie over de reproductieve, fysiologische, embryologische en ontwikkelingsprocessen die organismen van vele taxonomische groepen aandrijgen. Hier presenteren we een uitgebreide gids over verschillende methodologieën die kunnen worden gebruikt om ovariële controle en monitoring in amfibieën te bestuderen.

Voortplantingstechnieken voor het monitoren en beheersen van de eierstokken in amfibieën

Dit protocol beschrijft benaderingen voor detectie en kwantificering van grote geaggregeerde en/of organelle extrusies (~4 μm) geproduceerd door C. elegans cellen in de vorm van membraangebonden exofofen. We beschrijven stammen, groeiomstandigheden, scorecriteria, timing en microscopie overwegingen die nodig zijn om dissectie van dit puin uitzetting mechanisme te vergemakkelijken.

Kwantitatieve benaderingen voor scoren in vivo Neuronal Aggregaat en Organelle Extrusie in Large Exopher Vesicles in C. elegans

Dit protocol beschrijft de constructie van een goedkoop micro-injecttiesysteem, de stereotaxische implantatie in diepe hersenstructuren en de procedure voor getimede micro-injecties van tetrodotoxine bij wakkere en ongeremde ratten. Het doel is om de deelname van hypothalamische structuren aan de regulatie van de ovulatie te onthullen door hun neurale activiteit te remmen.

Ontrafeling van de rol van discrete gebieden van het rattenbrein in de regulatie van ovulatie door omkeerbare inactivatie door tetrodotoxine micro-injecteringen

Er wordt een geoptimaliseerd protocol gepresenteerd dat de uitputting van cytoplasmatische microtubuli organiserende centra in muizenoöcyten tijdens metafase I mogelijk maakt met behulp van een nabij-infrarode femtosecondelaser.

Multi-foton laserablatie van cytoplasmatische microtubule organiserende centra in muizenoöcyten

Het protocol demonstreert een eenvoudige en gemakkelijke dissectiemethode, geschikt voor wildtype migrerende vrouwelijke insecten die zijn gevangen met zoeklichtvallen. Deze techniek kan dezelfde soort aanzienlijk ophelderen door beide voortplantingsweefsels te vergelijken, namelijk de paringszak en de ovariële ontwikkeling van vrouwelijke insecten van het wildtype.

Dissectie en classificatie van de ontwikkeling van de eierstokken bij vrouwelijke insecten van het wildtype

Dit protocol stelt methoden vast voor het extraheren en kwantificeren van reacties op het vluchtige seksferomoon in C. elegans, en biedt hulpmiddelen om chemische communicatie en navigatietraject te bestuderen.

Vluchtige seksferomoonextractie en chemo-aantrekkingstest bij Caenorhabditis elegans

Hier presenteren we protocollen en hulpmiddelen voor het visualiseren van calcium tijdens bevruchting en vroege embryogenese met behulp van een genetisch gecodeerde calciumreporter die tot expressie komt in de kiembaan van de modelnematode C. elegans.

In vivo visualisatie van calciumtransiënten tijdens bevruchting en vroege ontwikkeling in C. elegans

Leer oogstengelablatiemethoden om de ovariële rijping bij modderkrabben te verhogen. Deze techniek stimuleert hormonale veranderingen die de voortplanting in kweekprogramma's bevorderen.

Eyestalk ablatie om de ovariële rijping bij modderkrabben te verhogen

Meer video's verkennen