Name: Ferritinofagie: beoordeling van de selectieve afbraak van ijzer door autofagie in menselijke fibroblasten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-02-23T12:40:00.000+00:00
Duration: 9 min 21 s
Description: Leer ferritinofagie beoordelen in menselijke fibroblasten met hoge-doorvoer immunofluorescentie-microscopie. Deze methode kwantificeert lysosomale ferritine-afbraak en onderscheidt autofagie-afhankelijke en onafhankelijke routes.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Proikas-Cezanne, T., Takacs, Z., Dönnes, P., Kohlbacher, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((WIPI+proteins%3A+Essential+PtdIns3P+effectors+at+the+nascent+autophagosome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">WIPI proteins: Essential PtdIns3P effectors at the nascent autophagosome.</a> Journal of Cell Science. 128 (2), 207-217 (2015).</li>
<li>Proikas-Cezanne, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((WIPI-1%CE%B1+%28WIPI49%29%2C+a+member+of+the+novel+7-bladed+WIPI+protein+family%2C+is+aberrantly+expressed+in+human+cancer+and+is+linked+to+starvation-induced+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">WIPI-1α (WIPI49), a member of the novel 7-bladed WIPI protein family, is aberrantly expressed in human cancer and is linked to starvation-induced autophagy.</a> Oncogene. 23 (58), 9314-9325 (2004).</li>
<li>Bakula, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((WIPI3+and+WIPI4+%CE%B2-propellers+are+scaffolds+for+LKB1-AMPK-TSC+signalling+circuits+in+the+control+of+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">WIPI3 and WIPI4 β-propellers are scaffolds for LKB1-AMPK-TSC signalling circuits in the control of autophagy.</a> Nature Communications. 8 (1), 15637(2017).</li>
<li>Hayflick, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B2-Propeller+protein-associated+neurodegeneration%3A+A+new+X-linked+dominant+disorder+with+brain+iron+accumulation%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">β-Propeller protein-associated neurodegeneration: A new X-linked dominant disorder with brain iron accumulation.</a> Brain. 36, 1708-1717 (2013).</li>
<li>Wilson, J. A. -O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consensus+clinical+management+guideline+for+beta-propeller+protein-associated+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Medicine+and+Child+Neurology%22%5BJournal%5D)">Consensus clinical management guideline for beta-propeller protein-associated neurodegeneration.</a> Developmental Medicine and Child Neurology. 63 (12), 1402-1409 (2021).</li>
<li>Gao, G., Li, J., Zhang, Y., Chang, Y. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+iron+metabolism+and+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Experimental+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Cellular iron metabolism and regulation.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 1173, 21-32 (2019).</li>
<li>Mancias, J. D., Wang, X., Gygi, S. P., Harper, J. W., Kimmelman, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+proteomics+identifies+NCOA4+as+the+cargo+receptor+mediating+ferritinophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Quantitative proteomics identifies NCOA4 as the cargo receptor mediating ferritinophagy.</a> Nature. 509 (7498), 105-109 (2014).</li>
<li>Voss, P., Horakova, L., Jakstadt, M., Kiekebusch, D., Grune, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ferritin+oxidation+and+proteasomal+degradation%3A+Protection+by+antioxidants%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radical+Research%22%5BJournal%5D)">Ferritin oxidation and proteasomal degradation: Protection by antioxidants.</a> Free Radical Research. 40 (7), 673-683 (2006).</li>
<li>Schüssele, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+profiling+in+single+cells+with+open+source+CellProfiler-based+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">Autophagy profiling in single cells with open source CellProfiler-based image analysis.</a> Autophagy. 19 (1), 338-351 (2023).</li>
<li>Goodwin, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy-independent+lysosomal+targeting+regulated+by+ULK1%2F2-FIP200+and+ATG9%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Autophagy-independent lysosomal targeting regulated by ULK1/2-FIP200 and ATG9.</a> Cell Reports. 20 (10), 2341-2356 (2017).</li>
<li>Quiles del Rey, M., Mancias, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NCOA4-mediated+ferritinophagy%3A+A+potential+link+to+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">NCOA4-mediated ferritinophagy: A potential link to neurodegeneration.</a> Frontiers in Neuroscience. 13, 238(2019).</li>
<li>Zachari, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+autophagy+of+mitochondria+on+a+ubiquitin-endoplasmic-reticulum+platform%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Selective autophagy of mitochondria on a ubiquitin-endoplasmic-reticulum platform.</a> Developmental Cell. 50 (5), 627-643 (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Cellijnen</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Primaire huid-afgeleide humane fibroblasten&nbsp;</td><td>Huidbiopsie, gezonde menselijke donor, Biobank University Clinic Tübingen, Ethische goedkeuring 389/2019BO2</td><td>F-CO-60, passage 9</td><td></td></tr><tr><td>Celcultuur behandelingen</td><td></td><td></td><td>Eindconcentratie (verbinding)</td></tr><tr><td>Controlemedium</td><td>DMEM 10%FCS</td><td></td><td>(alleen DMSO)</td></tr><tr><td>Controlemedium + bafilomycineA1</td><td>DMEM 10%FCS</td><td></td><td>100 nM bafilomycine A1</td></tr><tr><td>Controlemedium + deferasiox (DFX)</td><td>DMEM 10%FCS</td><td></td><td>30 &micro;M DFX</td></tr><tr><td>Controlemedium + DFX + bafilomycineA1</td><td>DMEM 10%FCS</td><td></td><td>30 &micro;M DFX, 100 nM bafilomycine A1</td></tr><tr><td>Controlemedium + ferric ammonium citrate (FAC)</td><td>DMEM 10%FCS</td><td></td><td>0,05 mg/mL FAC</td></tr><tr><td>Controlemedium + FAC + bafilomycineA1</td><td>DMEM 10%FCS</td><td></td><td>0,05 mg/mL FAC, 100 nM bafilomycine A1</td></tr><tr><td>Materiaal</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Albumine [BSA] Fractie V</td><td>AppliChem</td><td>A1391</td><td></td></tr><tr><td>Alexa 488 geit a-konijn</td><td>Life Technologies</td><td>A-11008</td><td></td></tr><tr><td>Alexa 546 geit a-muis</td><td>Life Technologies</td><td>A-11003</td><td></td></tr><tr><td>Bafilomycine A1</td><td>Sigma Aldrich</td><td>196000</td><td></td></tr><tr><td>BioLite Celcultuur behandelde 10cm schotels</td><td>Thermo Scientific</td><td>130182</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>AppliChem</td><td>A4099</td><td></td></tr><tr><td>Deferasiox (ICL-670)</td><td>Selleckchem</td><td>S1712</td><td></td></tr><tr><td>DMEM Glutamax</td><td>Gibco</td><td>31966</td><td></td></tr><tr><td>DMSO&nbsp;</td><td>AppliChem</td><td>A3672</td><td></td></tr><tr><td>DPBS geen calcium noch magnesium</td><td>Gibco</td><td>14190094</td><td></td></tr><tr><td>Foetaal bovien serum (FCS)</td><td>Gibco</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>Ferric ammonium citrate (FAC)</td><td>Merck</td><td>F5879</td><td></td></tr><tr><td>Anti-FERRITINE (Menselijke Milt)</td><td>Rockland</td><td>200-401-090-0100</td><td></td></tr><tr><td>LAMP2 (H4B4)</td><td>Santa Cruz</td><td>Sc-18822</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde (PFA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>441244</td><td></td></tr><tr><td>PBS 10x Dulbecco&rsquo;s</td><td>AppliChem</td><td>A0965</td><td></td></tr><tr><td>PenStrep (1,00U/mL penicilline, 100 mg/mL streptomycine)</td><td>Life Technologies</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0,05%) met fenol rood</td><td>Gibco</td><td>25300</td><td></td></tr><tr><td>Tween20</td><td>AppliChem</td><td>A4974</td><td></td></tr><tr><td>96 wel glasbodem #0 platen</td><td>Cellvis</td><td>P96-0-N</td><td></td></tr><tr><td>Oplossing</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>3,7% paraformaldehyde (PFA)</td><td></td><td></td><td>PFA opgelost in PBS, pH 7,5&nbsp;</td></tr><tr><td>Bafilomycine A1 100 mM stock</td><td></td><td></td><td>Bafilomycine A1 verdund in DMSO</td></tr><tr><td>Ferric ammonium citrate (FAC) 100 mg/mL stock</td><td></td><td></td><td>FAC verdund in geautoclaveerde gedistilleerd water</td></tr><tr><td>PBS/T</td><td></td><td></td><td>PBS, aangevuld met 10% Tween20&nbsp;</td></tr><tr><td>PBS/T + BSA</td><td></td><td></td><td>PBS, aangevuld met 10% Tween20, 1% BSA&nbsp;</td></tr><tr><td>Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CellProfiler 4.2.4</td><td>https://cellprofiler.org/</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td>Dotmatics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microsoft Excel Versie 16.50</td><td>Microsoft Office Plus 365</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

ferritinofagie: beoordeling van de selectieve afbraak van ijzer door autofagie in menselijke fibroblasten

Ferritinophagy: Assessing the Selective Degradation of Iron by Autophagy in Human Fibroblasts

Ferritinofagie: beoordeling van de selectieve afbraak van ijzer door autofagie in menselijke fibroblasten

Mutations in the autophagy gene WDR45/WIPI4 are the cause of beta-propeller-associated neurodegeneration (BPAN), a subtype of human diseases known as ...

ferritinophagy-assessing-selective-degradation-iron-autophagy-human

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Er wordt een protocol voor de synthese en kationisatie van kobalt-gedopeerd magnetoferritine gepresenteerd, evenals een methode om stamcellen snel te magnetiseren met gekationiseerd magnetoferritine.

Synthese van gekationiseerde Magnetoferritin voor ultrasnelle magnetisatie van Cells

Hier, multispectrale beeldvormende flowcytometrie met een analytische functie die heldere detailafbeeldingen van 3 autofagie markers vergelijkt en kwantificeert hun co-lokalisatie, samen met LC3 spot counting, werd gebruikt om autofagie op objectieve, kwantitatieve en statistisch robuuste wijze te meten.

Autofagische Flux beoordelen door LC3-, P62- en LAMP1-co-lokalisatie met behulp van Multispectrale Imaging Flow Cytometry

Mitophagy, het proces van clearing beschadigd de mitochondriën, is noodzakelijk voor mitochondriale homeostase en gezondheid onderhoud. Dit artikel presenteert een aantal van de meest recente mitophagy detectiemethoden in menselijke cellen, Caenorhabditis elegansen muizen.

In Vitro en In Vivo opsporing van Mitophagy in menselijke cellen, C. Elegansen muizen

Hier is een eenvoudig en goed gevalideerde protocol voor het meten van de bulk autophagic sekwester activiteit in zoogdiercellen wordt beschreven. De methode is gebaseerd op het kwantificeren van het aandeel van lactaat dehydrogenase (LDH) in sedimentable cel breuken in vergelijking met de totale cellulaire LDH niveaus.

De lactaat Dehydrogenase Sequestration test — Een eenvoudige en betrouwbare methode om te bepalen van de Bulk Autophagic Sequestration activiteit in zoogdiercellen

Het gehalte aan lipidehydroperoxide is de meest gebruikte indicator van ferroptotische celdood. Dit artikel demonstreert de stapsgewijze flowcytometrieanalyse van het lipidehydroperoxidegehalte in cellen bij ferroptose-inductie.

Onthullen van het ferroptomatische fenotype van medulloblastoom

Dit protocol presenteert methoden voor het beoordelen van de verdeling en hoeveelheid ijzerafzetting in weefsels, met name de hersenen. Het protocol beschrijft de procedures voor monstervoorbereiding, Perls/DAB-kleuring, beeldopname en gegevensanalyse.

Beoordeling van ijzerafzetting in de hersenen van 5xFAD-muizen door Perls'/DAB-kleuring

Dit artikel presenteert een levende-cel LysoTracker-protocol om lysosomale hervorming tijdens senescentie in IMR-90 menselijke fibroblasten te meten.

Lysosomale profilering met LysoTracker voor kwantitatieve beoordeling van cellulaire senescentie bij menselijke fibroblasten

Tonen we het protocol voor het genereren van geïnduceerde pluripotente stamcellen uit menselijke somatische cellen met behulp van lentivirus-gemedieerde levering van de menselijke factoren Oct4, Sox2, NANOG, en Lin28. Pluripotentie werd bevestigd door morfologie en de aanwezigheid van embryonale stamcellen (ES) cel-specifieke merkers.

Generatie van geïnduceerde pluripotente stamcellen van menselijke fibroblasten herprogrammeren met de Stemgent Human TF lentivirus Set

We presenteren een protocol voor een efficiënte herprogrammering van menselijke somatische cellen in het menselijk geïnduceerde pluripotente stamcellen (hiPSC) met behulp van retrovirale vectoren die coderen voor Oct3 / 4, Sox2, Klf4 en c-myc (OSKM) en de identificatie van de opnieuw aangeleerd hiPSC door live kleuring met Tra- 1-81 antilichaam.

Selecteren en isoleren van Koloniën van de mens geïnduceerde pluripotente stamcellen geherprogrammeerd tegen Adult Fibroblasten

Een techniek voor het isoleren van portal fibroblasten van rat lever wordt beschreven. Levers zijn perfusie en...

Isolatie van Rat Portal Fibroblasten door<em&gt; In situ</em&gt; Leverperfusie

Leer ferritinofagie beoordelen in menselijke fibroblasten met hoge-doorvoer immunofluorescentie-microscopie. Deze methode kwantificeert lysosomale ferritine-afbraak en onderscheidt autofagie-afhankelijke en onafhankelijke routes.

Ferritinofagie: beoordeling van de selectieve afbraak van ijzer door autofagie in menselijke fibroblasten

Meer video's verkennen