Een muisoormodel voor allergische contactdermatitis evaluatie

Dit model kan niet alleen worden gebruikt om de pathogenese van ACD te onderzoeken, maar is ook toepasbaar voor de preklinische evolutie van nieuwe therapeutische methoden, die een belangrijke betekenis heeft. Dit is een stabiel en efficiënt diermodel met veel voordelen, zoals een korte experimentele periode, eenvoudige bediening, duidelijke symptomen en een hoog slagingspercentage. Ons experimentele protocol is zeer gedetailleerd en eenvoudig te bedienen.

Zorg ervoor dat u elke stap van het protocol correct volgt. Voordat u begint met het modelleren, acclimatiseert u de muizen gedurende een week aan de omgeving met gratis toegang tot voedsel en water. Op de dag van modelleren, met behulp van een ultraviolette lamp en 75% alcohol, reinig en desinfecteer de omgeving en werkbladen.

Breng zeepsop aan op de buik van de muizen met behulp van een wattenstaafje en scheer het gebied in de richting van de haargroei met een mes of scheerapparaat. Weeg de muis en vergelijk de gewichtsveranderingen tussen elke groep. Voordat u abdominale sensibilisatiestimulatie uitvoert, moet u zorgen voor het volledige herstel van eventuele kleine verwondingen aan de buikhuid van de muis veroorzaakt door scheren.

Bereid 0,5% DNFB-oplossing en verdun deze met aceton-olijfoliemengsel in een verhouding van 4 op 1. Gebruik een pipetpistool en blaas en meng 20 keer om de DNFB-oplossing grondig te mengen. Breng 25 microliter van de 0,5% DNFB-oplossing aan op het midden van het scheergebied van de buik met een pipetter en verspreid lichtjes met de gladde kant van de pipetterpunt om deze gelijkmatig te verspreiden.

Plaats de muis na 30 seconden DNFB-stimulatie in een lege kooi zonder beddengoed om te voorkomen dat de muis de DNFB-oplossing afwrijft. Wanneer de oplossing volledig droog is, brengt u de muis terug naar zijn oorspronkelijke kooi met vrije toegang tot voedsel en water. Voor oorsensibilisatiestimulatie richt u het muizenlichaam en maakt u de buitenrand van de oorschelp naar beneden gericht om te voorkomen dat de oplossing tijdens DNFB-stimulatie de gehoorgang binnendringt.

Breng op dag 4 en 10 met behulp van een pipetter 20 microliter van het voertuig of 0,2% DNFB-oplossing langzaam en gelijkmatig aan op het binnenoppervlak van de linker oorschelp en verdeel de oplossing voorzichtig met behulp van de gladde kant van de pipetter. Laat het rechteroor onbehandeld. Wacht tot de DNFB-oplossing droog is en plaats de muis terug in de kooi.

Na abdominale en oorsensibilisatiestimulatie, weeg de muizen om de twee dagen vanaf dag één. Vergelijk het gewicht van elke muis met dag nul en evalueer het effect van ACD op het lichaamsgewicht van de muizen als het gewicht verandert. Maak foto's met hoge resolutie van de oren van de muis om elke twee dagen klinische symptomen van ACD vast te leggen, te beginnen op de eerste dag.

Meet met behulp van vernier-remklauwen elke dag op hetzelfde tijdstip de dikte van de oorschelp voor nauwkeurige resultaten. Voorkom dat de remklauwen van de vernier naar binnen blijven klemmen wanneer er een lichte verstopping is om weefselschade aan het muizenoor te voorkomen. Houd de positie vast en noteer de gegevens voor beide oren.

Noteer het gemiddelde van de drie gegevens en evalueer de zwelling van het oor in micrometers. Om de mate van inflammatoire zwelling op dag 11 te evalueren, bereidt u 0,5% Evans Blue-kleurstofoplossing en verdunt u deze met PBS. Om de muis met een fixator te immobiliseren, opent u het deksel, houdt u de muisstaart vast, maakt u de kop van de muis naar de fixator gericht en laat u de muis instinctief in de fixator klimmen.

Dek het deksel af. Laat de muizenstaart uit het gat op het deksel komen en pas de lengte van de fixator aan om de hele muizenstaart bloot te leggen. Veeg de staart herhaaldelijk af met een alcoholwatje of week het gedurende 30 seconden in warm water en knijp voorzichtig in de wortel van de staart om te vullen en zet de aderen aan beide zijden uit.

Injecteer Evans Blue Dye-oplossing langzaam in de muizenstaartader met behulp van een insulinenaald van 1 mm onder de bestraling van een koude lichtbron. Wacht 15 minuten om foto's te maken van de oren van de muis. Muisoren van de DNFB-groep vertoonden duidelijke klinische symptomen vergelijkbaar met ACD, met gevoelige gebieden die de typische symptomen van roodheid, droogheid, erosie en exsudatie vertoonden.

Oortoediening van zuiver water of oplosmiddelcontrole veroorzaakte echter geen symptomen die vergelijkbaar waren met de DNFB-groep. In de DNFB-groep, vergeleken met het onbehandelde rechteroor, nam de dikte van het linkeroor aanzienlijk toe na DNFB-stimulatie. Er was geen significant verschil in de controle- en voertuiggroepen.

Het linkeroor van de DNFB-groepmuizen werd donkerblauw na de injectie van Evans Blue-kleurstof, die visueel verschilde van het rechteroor. De linker- en rechteroren van muizen in controle- en voertuiggroepen hadden ongeveer dezelfde kleur. De gewichtstoename van de muis werd enigszins vertraagd door DNFB of eenvoudige voertuigstimulatie, maar resulteerde niet in significant gewichtsverlies.

Herhaalde DNFB-stimulatie in het muizenoor resulteerde in miltvergroting en een toename van de miltindex. Daarentegen veranderde de miltindex van muizen in de voertuiggroep niet significant. Zorg ervoor dat de DINFB-oplossing volledig is gemengd en gelijkmatig op het muizenoor is aangebracht zonder in de gehoorgang te stromen.

Dit is de sleutel tot het succes van modellering.