Name: Niet-invasieve intratracheale lipopolysaccharide-instillatie bij muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-03-31T13:40:00.000+00:00
Duration: 4 min 10 s
Description: Leer een niet-invasieve intratracheale LPS-instillatiemethode bij muizen voor onderzoek naar longontsteking. Deze techniek minimaliseert chirurgisch trauma en levert nauwkeurig lipopolysaccharide af voor evaluatie van inflammatoire responsen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door de National Natural Science Foundation of China (nr.: 81903902), de China Postdoctoral Science Foundation (nr.: 2019M663457), het Sichuan Science and Technology Program (nr.: 2020YJ0172) en het Xinglin Scholar Research Premotion Project van Chengdu University of TCM (nr.: QJRC2022053).

Het protocol voor dierproeven werd beoordeeld en goedgekeurd door het managementcomité van de Chengdu University of Traditional Chinese Medicine (record nr. 2021-11). Mannelijke C57/BL-muizen (20-25 g, 6-8 weken oud) werden gebruikt voor deze studie. De muizen werden in een dierenkamer gehouden en waren vrij om te drinken en te eten tijdens het experiment.
1. Voorbereiding
<ol><li>Zorg ervoor dat het intubatieplatform bestaat uit een basis, een riser, een paperclip, twee elastiekjes en enkele snaren. Neem een touw, haal het touw door de twee gaten aan de bovenkant van de riser en bind de twee uiteinden van het touw respectievelijk aan de kleine uitsteeksels aan de bovenkant van de riser. OPMERKING: Laat ruimte voor de kop van de muis om tussen het touw en de twee gaten door te gaan.</li>
	<li>Bind twee elastiekjes aan elk uiteinde van de paperclip en plak de paperclip met de elastiekjes aan de achterkant van de riser. Bevestig ten slotte de riser op de basis op 90° (figuur 1).</li>
	<li>Selecteer een canule van de juiste grootte en lengte. Voor een muis van 20−30 g kan een katheter van 22 G (2,5−3,8 cm lang) worden gebruikt11. Monteer de canule op een canulepen en schakel het lampje van de pen in (figuur 2).</li>
	<li>Bereid kleine chirurgische tangen en een Pasteur-pipet door ze te desinfecteren met 70% alcohol.</li>
</ol>2. Bereiding van de teststof
<ol><li>Weeg 3 mg LPS in 1 ml fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS, pH 7,2) en los deze op tot een LPS-oplossing met een concentratie van 3 mg/ml.</li>
	<li>Weeg en los 10 mg pentobarbitalnatrium op in 1 ml normale zoutoplossing om een 1% pentobarbital-natriumoplossing te vormen. Filtersteriliseer de oplossing met behulp van een spuitfilter van 0,45 μm.</li>
</ol>3. Niet-invasieve orofaryngeale instillatie
<ol><li>Verdoof de muizen met een intraperitoneale injectie van 1% pentobarbitalnatrium in een dosis van 50 mg/kg12,13. Bepaal de diepte van de anesthesie door een gebrek aan reactie op de rechtrichtreflex.</li>
	<li>Plaats de verdoofde muis op het intubatieplatform. Bevestig de bovenste voortanden met de draad en de twee voorvoeten met de elastiekjes (figuur 3).</li>
	<li>Trek de tong eruit met een pincet en houd hem vast met de linkerhand. Duw de canule langzaam, langs de mond, met de rechterhand omhoog, naar de mandibulaire epiglottis. Gebruik het licht van de canulepen om de luchtpijp te vinden en steek deze langzaam in de luchtpijp (figuur 4).</li>
	<li>Nadat de canule in de luchtpijp is ingebracht, trekt u de intubatiepen langzaam terug en laat u de canule binnen. Steek de Pasteurpipet in het canulegewricht en druk op de kop (figuur 5). OPMERKING: Als de borstkas van de muis uitpuilt, is de intubatie succesvol (figuur 6).</li>
	<li>Na succesvolle endotracheale intubatie, inbreng de muizen met 3 mg / ml LPS bij 3 mg / kg via de canule met behulp van een platte microsyringe14,15 (figuur 7).</li>
	<li>Als u klaar bent, verwijdert u de canule en de microsyringe. Verwijder de muis van de steiger en plaats hem apart in een kooi om te herstellen. Observeer de ademhalingstoestand van de muis totdat deze is hersteld en weer bij bewustzijn is gekomen. OPMERKING: Om 12 uur na LPS-tracheale instillatie, euthanaseer de muizen volgens de procedure die is goedgekeurd door de ethische commissie voor dieren. Serum TNF-α-assays en droog-natte longgewichtsmetingen werden uitgevoerd met behulp van standaardprocedures.</li>
</ol>

<ol><li>Xia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effect+of+human+amnion+epithelial+cells+through+endotracheal+instillation+against+lipopolysaccharide-induced+acute+lung+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Xi+Bao+Yu+Fen+Zi+Mian+Yi+Xue+Za+Zhi%22%5BJournal%5D)">Protective effect of human amnion epithelial cells through endotracheal instillation against lipopolysaccharide-induced acute lung injury in mice.</a> Xi Bao Yu Fen Zi Mian Yi Xue Za Zhi. 33 (1), 7-11 (2017).</li>
<li>Butt, Y., Kurdowska, A., Allen, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+lung+injury%3A+A+clinical+and+molecular+review%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Pathology+and+Lab+Medicine%22%5BJournal%5D)">Acute lung injury: A clinical and molecular review.</a> Archives of Pathology and Lab Medicine. 140 (4), 345-350 (2016).</li>
<li>Ware, L. B., Matthay, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+acute+respiratory+distress+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">The acute respiratory distress syndrome.</a> The New England Journal of Medicine. 342 (18), 1334-1349 (2000).</li>
<li>Fan, E., Brodie, D., Slutsky, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+respiratory+distress+syndrome%3A+Advances+in+diagnosis+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Acute respiratory distress syndrome: Advances in diagnosis and treatment.</a> JAMA. 319 (7), 698-710 (2018).</li>
<li>Meyer, N. J., Gattinoni, L., Calfee, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+respiratory+distress+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Acute respiratory distress syndrome.</a> Lancet. 398 (10300), 622-637 (2021).</li>
<li>An, N., Yang, T., Zhang, X. X., Xu, M. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bergamottin+alleviates+LPS-induced+acute+lung+injury+by+inducing+SIRT1+and+suppressing+NF-%CE%BAB%5BTitle%5D)+AND+%22Innate+Immunity%22%5BJournal%5D)">Bergamottin alleviates LPS-induced acute lung injury by inducing SIRT1 and suppressing NF-κB.</a> Innate Immunity. 27 (7-8), 543-552 (2021).</li>
<li>Liu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+of+trans-oral+and+trans-tracheal+intratracheal+instillations+in+a+murine+model+of+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22The+Anatomical+Record%22%5BJournal%5D)">Comparative study of trans-oral and trans-tracheal intratracheal instillations in a murine model of acute lung injury.</a> The Anatomical Record. 295 (9), 1513-1519 (2012).</li>
<li>Virag, J. A., Lust, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+artery+ligation+and+intramyocardial+injection+in+a+murine+model+of+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Coronary artery ligation and intramyocardial injection in a murine model of infarction.</a> Journal of Visualized Experiments. (52), e2581(2011).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Panaxydol+attenuates+ferroptosis+against+LPS-induced+acute+lung+injury+in+mice+by+Keap1-Nrf2%2FHO-1+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Panaxydol attenuates ferroptosis against LPS-induced acute lung injury in mice by Keap1-Nrf2/HO-1 pathway.</a> Journal of Translational Medicine. 19 (1), 96(2021).</li>
<li>Zhou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soluble+epoxide+hydrolase+inhibitor+attenuates+lipopolysaccharide-induced+acute+lung+injury+and+improves+survival+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Soluble epoxide hydrolase inhibitor attenuates lipopolysaccharide-induced acute lung injury and improves survival in mice.</a> Shock. 47 (5), 638-645 (2017).</li>
<li>Nosaka, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+tube+length+of+orotracheal+intubation+for+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Optimal tube length of orotracheal intubation for mice.</a> Laboratory Animals. 53 (1), 79-83 (2019).</li>
<li>Cicero, L., Fazzotta, S., Palumbo, V. D., Cassata, G., Lo Monte, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anaesthesia+protocols+in+laboratory+animals+used+for+scientific+purposes%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Bio-Medica%3A+Atenei+Parmensis%22%5BJournal%5D)">Anaesthesia protocols in laboratory animals used for scientific purposes.</a> Acta Bio-Medica: Atenei Parmensis. 89 (3), 337-342 (2018).</li>
<li>Ehrentraut, H., Weisheit, C. K., Frede, S., Hilbert, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducing+acute+lung+injury+in+mice+by+direct+intratracheal+lipopolysaccharide+instillation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Inducing acute lung injury in mice by direct intratracheal lipopolysaccharide instillation.</a> Journal of Visualized Experiments. (149), e59999(2019).</li>
<li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((STAT6+inhibits+ferroptosis+and+alleviates+acute+lung+injury+by+regulating+P53%2FSLC7A11+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+%26+Disease%22%5BJournal%5D)">STAT6 inhibits ferroptosis and alleviates acute lung injury by regulating P53/SLC7A11 pathway.</a> Cell Death & Disease. 13 (6), 530(2022).</li>
<li>Aramaki, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+operational+tolerance+and+generation+of+regulatory+cells+after+intratracheal+delivery+of+alloantigen+combined+with+nondepleting+anti-CD4+monoclonal+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Induction of operational tolerance and generation of regulatory cells after intratracheal delivery of alloantigen combined with nondepleting anti-CD4 monoclonal antibody.</a> Transplantation. 76 (9), 1305-1314 (2003).</li>
<li>Lan, W. Activation of mammalian target of rapamycin (mTOR) in a murine model of lipopolysaccharide (LPS) -induced acute lung injury (ALI). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Peking+Union+Medical+College%22">Peking Union Medical College</a>. , PhD Thesis (2010).</li>
<li>Lv, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tenuigenin+ameliorates+acute+lung+injury+by+inhibiting+NF-%CE%BAB+and+MAPK+signalling+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Respiratory+Physiology+%26+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Tenuigenin ameliorates acute lung injury by inhibiting NF-κB and MAPK signalling pathways.</a> Respiratory Physiology & Neurobiology. 216, 43-51 (2015).</li>
<li>Yang, H., Lv, H., Li, H., Ci, X., Peng, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oridonin+protects+LPS-induced+acute+lung+injury+by+modulating+Nrf2-mediated+oxidative+stress+and+Nrf2-independent+NLRP3+and+NF-%CE%BAB+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Communication+and+Signaling%22%5BJournal%5D)">Oridonin protects LPS-induced acute lung injury by modulating Nrf2-mediated oxidative stress and Nrf2-independent NLRP3 and NF-κB pathways.</a> Cell Communication and Signaling. 17 (1), 62(2019).</li>
<li>Im, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improvement+of+orthotopic+lung+cancer+mouse+model+via+thoracotomy+and+orotracheal+intubation+enabling+in+vivo+imaging+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Improvement of orthotopic lung cancer mouse model via thoracotomy and orotracheal intubation enabling in vivo imaging studies.</a> Laboratory Animals. 48 (2), 124-131 (2014).</li>
<li>Hamacher, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microscopic+wire+guide-based+orotracheal+mouse+intubation%3A+description%2C+evaluation+and+comparison+with+transillumination%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Microscopic wire guide-based orotracheal mouse intubation: description, evaluation and comparison with transillumination.</a> Laboratory Animals. 42 (2), 222-230 (2008).</li>
<li>Nelson, A. M., Nolan, K. E., Davis, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeated+orotracheal+intubation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Repeated orotracheal intubation in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (157), e60844(2020).</li>
<li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvesicles+packaging+IL-1%CE%B2+and+TNF-%CE%B1+enhance+lung+inflammatory+response+to+mechanical+ventilation+in+part+by+induction+of+cofilin+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22International+Immunopharmacology%22%5BJournal%5D)">Microvesicles packaging IL-1β and TNF-α enhance lung inflammatory response to mechanical ventilation in part by induction of cofilin signaling.</a> International Immunopharmacology. 63, 74-83 (2018).</li>
<li>Feng, Z. Comparative study of different intratracheal instillation in acute lung injury model of mice. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Jilin+University%22">Jilin University</a>. , Master's Thesis (2010).</li>
<li>Chen, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+acute+lung+injury+mice+model+established+by+intranasal+and+intratracheal+instillation+of+lipopolysaccharide%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+and+Clinics+of+Chinese+Materia+Medica%22%5BJournal%5D)">Comparison of acute lung injury mice model established by intranasal and intratracheal instillation of lipopolysaccharide.</a> Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica. 38 (02), 222-227 (2022).</li>
<li>Luckow, B., Lehmann, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+method+for+bronchoalveolar+lavage+in+mice+by+orotracheal+intubation+avoiding+tracheotomy%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">A simplified method for bronchoalveolar lavage in mice by orotracheal intubation avoiding tracheotomy.</a> BioTechniques. 71 (4), 534-537 (2021).</li>
<li>Cai, Y., Kimura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+intratracheal+intubation+to+study+the+pathology+and+physiology+of+mouse+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Noninvasive intratracheal intubation to study the pathology and physiology of mouse lung.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50601(2013).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

In eerste instantie keken we in de mondholte om de locatie van de luchtpijp19 te vinden. Tijdens dit proces ontdekten we echter dat de luchtpijp van C57 / BL-muizen smal is, waardoor het moeilijk is om de juiste locatie te vinden met deze methode zonder de hulp van apparatuur zoals een endoscoop20. Bij verder onderzoek ontdekten we dat het licht van de intubatorlamp het oppervlak van het lichaam kon binnendringen, waardoor de operator de positie van de canule<sup class="xre...

Acuut longletsel (ALI) is een veel voorkomend klinisch syndroom. Onder een verscheidenheid aan pathogene factoren leidt de verstoring van de fysiologische barrière van de longepitheelcellen en vasculaire endotheelcellen tot verhoogde alveolaire permeabiliteit, waardoor verminderde longvolgzaamheid, longoedeem en ernstige hypoxemie1 worden veroorzaakt. Acute respiratory distress syndrome (ARDS) is de meest ernstige vorm van ALI. Ongecontroleerde ontsteking en oxidatieve stressschade worden beschouwd als de belangrijkste oorzaken van ALI en de meer ernstige ARDS2. Wanneer alveolaire epitheelcellen direct gewond raken als gevolg van trauma, wordt de ontstekingsreactieketen van alveolaire macrofagen geactiveerd, wat leidt tot ontsteking in de long3. Wereldwijd zijn er meer dan 3 miljoen patiënten met acute ARDS per jaar, en zij zijn goed voor ongeveer 10% van de opnames op de intensive care; Bovendien is het sterftecijfer in ernstige gevallen zo hoog als 46%4,5,6. Daarom is het nodig om een geschikt diermodel van ALI vast te stellen om de pathogenese ervan te bestuderen. De muis is het meest gebruikte proefdier in de studie van ALI, omdat de luchtwegen de menselijke luchtwegen goed kunnen simuleren voor ALI-studies. Bovendien manifesteert ALI zich als massale inflammatoire celinfiltratie, verhoogde pulmonale vasculaire permeabiliteit en longoedeem. De veranderingen in inflammatoire cytokines in serum en de long dry-wet weight ratio weerspiegelen de mate van ALI7.
Op dit moment omvatten de belangrijkste methoden voor het modelleren van LPS-geïnduceerde ALI bij muizen intranasale en chirurgische tracheale intubatie 8,9. Hier stellen we een nieuwe methode voor om LPS in de luchtpijp af te leveren via niet-invasieve orofaryngeale intubatie. Deze methode maakt gebruik van een verlichte intubator om de luchtpijp van de muis te vinden en levert vervolgens LPS af in de luchtpijp en long. Deze methode levert LPS nauwkeuriger aan de longen dan de intranasale toedieningsmethode. In vergelijking met chirurgische tracheale intubatie vereist deze methode geen operatie, vermijdt het veroorzaken van wonden en vermindert het de pijn bij muizen10. Daarom kan deze methode worden gebruikt om een overtuigender muismodel van ALI vast te stellen.

<table><tbody><tr><td>Lipopolysaccharide</td><td>MERK</td><td>L4130</td><td>LPS</td></tr><tr><td>Microliter Spuiten</td><td>SHANGHAI GAOGE INDUSTRY AND TRADE CO., LTD</td><td>10028505008124</td><td>Om LPS te leveren</td></tr><tr><td>Muis canule</td><td>RWD Life Science</td><td>803-03008-00</td><td>Muis canule</td></tr><tr><td>Muis intubatie set</td><td>RWD Life Science</td><td>903-03027-00</td><td>Inclusief een basis, een verhoger, een intubator, een chirurgische pincet en enkele snaren</td></tr><tr><td>Pasteur pipet</td><td>Biosharp life science</td><td>BS-XG-03</td><td>Om het succes van intubatie te verifiëren</td></tr><tr><td>Pentobarbital natrium</td><td>Beijing Chemical Co., China</td><td>20220918</td><td>Om muizen te anesthetiseren</td></tr></tbody></table>

niet-invasieve intratracheale lipopolysaccharide-instillatie bij muizen

Noninvasive Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation in Mice

Het muismodel voor acute longschade (ALI) geïnduceerd door lipopolysaccharide (LPS) of endotoxine is nog steeds een van de meest gebruikte modellen in dierstudies van acuut longletsel of acute ontsteking. De huidige meest gebruikte methoden in muismodellen met acuut longletsel zijn een intraperitoneale injectie van LPS en tracheostomie voor de tracheale infusie van LPS. De eerste methode mist echter longtargeting en beschadigt andere organen, en de laatste methode induceert operatief trauma, infectierisico en een lage overlevingskans. Hier raden we een niet-invasieve orofaryngeale endotracheale intubatiemethode aan voor LPS-instillatie bij muizen. Bij deze methode wordt LPS niet-invasief in de luchtpijp ingebracht via de orofaryngeale holte om in de long te worden ingebracht met behulp van een apparaat voor endotracheale intubatie. Deze methode zorgt niet alleen voor longtargeting, maar voorkomt ook schade en het risico op overlijden bij de dieren. We verwachten dat deze aanpak op grote schaal zal worden gebruikt op het gebied van acuut longletsel.

De voorgestelde methode voor LPS-instillatie bij muizen werd geverifieerd door de expressie van het inflammatoire cytokine TNF-α en de longdroog-natgewichtsverhouding 12 uur na LPS-instillatie te evalueren. Er waren vier groepen in het experiment: blanco controle (zonder enige behandeling), chirurgische intubatie16, intranasale17,18 en niet-invasieve orofaryngeale intubatie (n = 6). Vergeleken met de blanco...

Hier stellen we een protocol voor intratracheale lipopolysaccharide (LPS) levering via niet-invasieve orofaryngeale endotracheale intubatie. Deze methode minimaliseert het trauma van de chirurgische procedure voor het dier en levert LPS nauwkeurig af aan de luchtpijp en vervolgens aan de longen.

Niet-invasieve intratracheale lipopolysaccharide-instillatie bij muizen

The acute lung injury (ALI) mouse model induced by lipopolysaccharide (LPS) or endotoxin is still among the most commonly used models in animal studies of ...

Ons protocol stelt een nieuwe niet-invasieve toedieningsmethode van LPS voor van de luchtpijp naar de longen, nauwkeuriger. Mensen die deze methode voor de eerste keer proberen, moeten veel moeite doen om de positie van de luchtpijp te vinden. Om het intubatieplatform voor te bereiden, passeert u het touw door de twee gaten en bindt u de uiteinden vast aan de kleine uitsteeksels aan de bovenkant van de riser.Bevestig vervolgens twee elastiekjes aan elk uiteinde van de paperclip en plak ze op de achterkant van de riser. Bevestig ten slotte de riser aan de basis in een hoek van 90 graden. Monteer de canule op een canulepen en doe het lampje van de pen aan.Desinfecteer vervolgens een kleine chirurgische tang en Pasteur-pipet met 70% alcohol. Om de oplossing van de teststof te bereiden, voegt u drie milligram lipopolysaccharide of LPS toe in één milliliter pH 7,2 PBS. Los vervolgens 10 milligram pentobarbital-natrium op in één milliliter normale zoutoplossing en filter de oplossing met een spuitfilter van 0,45 micrometer.Plaats de verdoofde muis op het intubatieplatform. Bevestig vervolgens de bovenste voortanden met het touwtje en de twee voorvoeten met de elastiekjes. Trek met een pi

noninvasive-intratracheal-lipopolysaccharide-instillation-in-mice

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Intratracheale instillaties leveren opgeloste stoffen direct in de longen. Deze procedure richt zich op de levering van de instillate in het distale gebieden van de long, en is daarom vaak opgenomen in studies gericht op het bestuderen van longblaasjes. Wij bieden een uitgebreide survival protocol voor het uitvoeren van intratracheale instillaties bij muizen.

Directe Tracheale Instillatie van opgeloste stoffen in de muis Lung

We illustreren niet-chirurgische levering van testmateriaal in de longen van verdoofde muizen via de luchtpijp. Deze methode laat long blootstelling aan bacteriële en virale pathogenen, cytokines, antistoffen, kralen, chemicaliën of kleurstoffen. We verder beschrijven oogst en verwerking van de longen en longen drainerende lymfeklieren (LDLNs) voor flowcytometrie.

Niet-chirurgische intratracheale Instillatie van Muizen met Analyse van de longen en Lung drainerende lymfeklieren door middel van flowcytometrie

Source: Radulovic, K., et al. Injections of Lipopolysaccharide into Mice to Mimic Entrance of Microbial-derived Products After Intestinal Barrier Breach. J. Vis. Exp. (2018)This video demonstrates a step-by-step procedure for injecting lipopolysaccharide (LPS) into mice intraperitoneally to induce systemic inflammation.

Intraperitoneal Injection of Bacterial Lipopolysaccharide in Mice to Study Systemic Immune Responses

Het gebruik van een model dat de toestand van longziekten bij mensen nabootst is kritiek voor het bestuderen van de pathofysiologie en / of etiologie van een bepaalde ziekte en ontwikkelen van therapeutische interventie. Hier een niet-invasieve intratracheaal intubatie methode die direct exogene materialen kunnen leveren aan muizenlongen wordt gepresenteerd.

Niet-invasieve Intratracheaal intubatie om te studeren de Pathologie en Fysiologie van Mouse Lung

De gastheer immuunrespons op pathogene infectie een strak gereguleerd proces. Met behulp van een lipopolysaccharide long exposure model in muizen, is het mogelijk om hoge resolutie evaluaties van de complexe mechanismen van pathogenese voeren.

Het gebruik van Oropharyngeal Intratracheaal PAMP Administratie en bronchoalveolaire lavage om de immuunrespons van de gastheer in Muizen Evalueer

Intratracheale intubatie-gemedieerde (IMIT) instillatie van reagentia is een uitstekend invasieve methode voor het bestuderen ademhalingsziekte, alsmede een werkwijze voor het indruppelen therapeutische reagentia direct in de longen. Het is een snelle en zeer reproduceerbare werkwijze die geschikt is voor preklinische proeven.

Intubatie-gemedieerde Intratracheaal (IMIT) Blaasinstillatie: een niet-invasieve, Lung-specifieke Delivery System

Dit artikel presenteert een snelle en eenvoudige methode voor het toedienen van bleomycine rechtstreeks in de muis luchtpijp via intubatie. Belangrijkste voordelen van deze werkwijze zijn dat het zeer reproduceerbaar, gemakkelijk onder de knie, en vereist geen gespecialiseerde apparatuur of lange hersteltijden.

Een verbeterde werkwijze voor snelle intubatie van de trachea in muizen

We demonstreren de procedure voor intra-tracheale inoculatie van Haemophilus influenzae in de onderste luchtwegen van muizen. Dit is een zeer nuttige tool om signaleringsroutes te bestuderen die luchtwegontsteking reguleren in muismodellen.

Intratracheale toediening van<em&gt; Haemophilus influenzae</em&gt; In muismodellen om te studeren luchtwegontsteking

Hier gepresenteerd is een stap-voor-stap procedure om acute longschade in muizen induceren door directe intratracheal lipopolysaccharide instillatie en uit te voeren FACS analyse van bloedmonsters, bronchoalveolaire lavage vloeistof, en longweefsel. Minimale invasieve, eenvoudige handling, goede reproduceerbaarheid, en titratie van de ziekte ernst zijn voordelen van deze aanpak.

Inducerende acute Long blessure bij muizen door directe Intratracheal lipopolysaccharide instillatie

Droge poederformuleringen voor inhalatie hebben een groot potentieel bij de behandeling van luchtwegaandoeningen. Voordat men aan menselijke studies begint, is het noodzakelijk om de werkzaamheid van de droge poederformulering in preklinische studies te evalueren. Een eenvoudige en niet-invasieve methode voor de toediening van droog poeder bij muizen via de intratracheale route wordt gepresenteerd.

Intratracheale toediening van droge poederformulering bij muizen

In deze studie is aangetoond dat een niet-invasieve endotracheale installatietechniek ALI bij ratten ontwikkelt met behulp van een basislaryngoscoop om een precieze LPS-afgifte aan de longen te garanderen. De LPS wordt toegediend via een endotracheale buis met behulp van een laryngoscoop. De omvang van het longletsel wordt op meerdere tijdstippen beoordeeld.

Niet-invasieve endotracheale toediening van lipopolysaccharide om acute longschade bij knaagdieren te induceren

Leer een niet-invasieve intratracheale LPS-instillatiemethode bij muizen voor onderzoek naar longontsteking. Deze techniek minimaliseert chirurgisch trauma en levert nauwkeurig lipopolysaccharide af voor evaluatie van inflammatoire responsen.

Niet-invasieve intratracheale lipopolysaccharide-instillatie bij muizen

Meer video's verkennen