Name: Evaluatie van de immuunrespons van een nano-emulsie-adjuvansvaccin tegen methicilline-resistente Staphylococcus aureus (MRSA) -infectie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-09-01T12:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: Leer de voorbereiding en evaluatie van een nano-emulsie-adjuvansvaccin tegen MRSA-infectie. Deze methode toont de immuunrespons en beschermende effecten in muizenmodellen voor vaccinontwikkeling.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit onderzoek werd ondersteund door nr. 2021YFC2302603 van het National Key Research and Development Program van China, nr. 32070924 en 32000651 van de NSFC, en nr. 2019jcyjA-msxmx0159 van het Natural Science Foundation Project Program van Chongqing.

<ol><li>Cheung, G. Y. C., Bae, J. S., Otto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenicity+and+virulence+of+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">Pathogenicity and virulence of Staphylococcus aureus.</a> Virulence. 12 (1), 547-569 (2021).</li>
<li>Lakhundi, S., Zhang, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus%3A+molecular+characterization%2C+evolution%2C+and+epidemiology%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Microbiology+Reviews%22%5BJournal%5D)">Methicillin-resistant Staphylococcus aureus: molecular characterization, evolution, and epidemiology.</a> Clinical Microbiology Reviews. 31 (4), e00020(2018).</li>
<li>Mancuso, G., Midiri, A., Gerace, E., Biondo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+antibiotic+resistance%3A+the+most+critical+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Pathogens%22%5BJournal%5D)">Bacterial antibiotic resistance: the most critical pathogens.</a> Pathogens. 10 (10), 1310(2021).</li>
<li>Goullé, J. P., Grangeot-Keros, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aluminum+and+vaccines%3A+Current+state+of+knowledge%5BTitle%5D)+AND+%22Medecine+et+Maladies+Infectieuses%22%5BJournal%5D)">Aluminum and vaccines: Current state of knowledge.</a> Medecine et Maladies Infectieuses. 50 (1), 16-21 (2020).</li>
<li>Shi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaccine+adjuvants%3A+Understanding+the+structure+and+mechanism+of+adjuvanticity%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Vaccine adjuvants: Understanding the structure and mechanism of adjuvanticity.</a> Vaccine. 37 (24), 3167-3178 (2019).</li>
<li>Geoghegan, S., O'Callaghan, K. P., Offit, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaccine+safety%3A+myths+and+misinformation%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Vaccine safety: myths and misinformation.</a> Frontiers in Microbiology. 11, 372(2020).</li>
<li>Pandey, P., Gulati, N., Makhija, M., Purohit, D., Dureja, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoemulsion%3A+a+novel+drug+delivery+approach+for+enhancement+of+bioavailability%5BTitle%5D)+AND+%22Recent+Patents+on+Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Nanoemulsion: a novel drug delivery approach for enhancement of bioavailability.</a> Recent Patents on Nanotechnology. 14 (4), 276-293 (2020).</li>
<li>Ko, E. J., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunology+and+efficacy+of+MF59-adjuvanted+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Vaccines+%26+Immunotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Immunology and efficacy of MF59-adjuvanted vaccines.</a> Human Vaccines & Immunotherapeutics. 14 (12), 3041-3045 (2018).</li>
<li>Chen, B. H., Inbaraj, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoemulsion+and+nanoliposome+based+strategies+for+improving+anthocyanin+stability+and+bioavailability%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Nanoemulsion and nanoliposome based strategies for improving anthocyanin stability and bioavailability.</a> Nutrients. 11 (5), 1052(2019).</li>
<li>Zuo, Q. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+protective+immunity+of+a+novel+subunit+fusion+vaccine+in+a+murine+model+of+systemic+MRSA+infection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the protective immunity of a novel subunit fusion vaccine in a murine model of systemic MRSA infection.</a> PLoS One. 8 (12), e81212(2013).</li>
<li>Sun, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+systemic+and+mucosal+immunity+against+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus+infection+by+a+novel+nanoemulsion+adjuvant+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Induction of systemic and mucosal immunity against methicillin-resistant Staphylococcus aureus infection by a novel nanoemulsion adjuvant vaccine.</a> International Journal of Nanomedicine. 10, 7275-7290 (2015).</li>
<li>National Pharmacopoeia Committee. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Chinese+Pharmacopoeia%22">Chinese Pharmacopoeia</a>. , China Medical Science and Technology Press. Beijing. 1088(2020).</li>
<li>Kontomaris, S. V., Stylianou, A., Malamou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atomic+force+microscopy+nanoindentation+method+on+collagen+fibrils%5BTitle%5D)+AND+%22Materials%22%5BJournal%5D)">Atomic force microscopy nanoindentation method on collagen fibrils.</a> Materials. 15 (7), 2477(2022).</li>
<li>Zeng, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+immunodominant+epitope-specific+monoclonal+antibody+cocktail+improves+survival+in+a+mouse+model+of+Staphylococcus+aureus+bacteremia%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">An immunodominant epitope-specific monoclonal antibody cocktail improves survival in a mouse model of Staphylococcus aureus bacteremia.</a> The Journal of Infectious Diseases. 223 (10), 1743-1752 (2021).</li>
<li>Roy, U., Kornitzer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme-iron+acquisition+in+fungi%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Heme-iron acquisition in fungi.</a> Current Opinion in Microbiology. 52, 77-83 (2019).</li>
<li>Saeed, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+toxins+in+musculoskeletal+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Orthopaedic+Research%22%5BJournal%5D)">Bacterial toxins in musculoskeletal infections.</a> Journal of Orthopaedic Research. 39 (2), 240-250 (2021).</li>
<li>Xu, Q., Zhou, A., Wu, H., Bi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+in+vivo+evaluation+of+baicalin-loaded+W%2FO+nanoemulsion+for+lymphatic+absorption%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Development+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Development and in vivo evaluation of baicalin-loaded W/O nanoemulsion for lymphatic absorption.</a> Pharmaceutical Development and Technology. 24 (9), 1155-1163 (2019).</li>
<li>Singh, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoemulsion%3A+Concepts%2C+development+and+applications+in+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Nanoemulsion: Concepts, development and applications in drug delivery.</a> Journal of Controlled Release. 252, 28-49 (2017).</li>
<li>Kadakia, E., Shah, L., Amiji, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mathematical+modeling+and+experimental+validation+of+nanoemulsion-based+drug+transport+across+cellular+barriers%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Research%22%5BJournal%5D)">Mathematical modeling and experimental validation of nanoemulsion-based drug transport across cellular barriers.</a> Pharmaceutical Research. 34 (7), 1416-1427 (2017).</li>
<li>Bhattacharjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DLS+and+zeta+potential-What+they+are+and+what+they+are+not%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">DLS and zeta potential-What they are and what they are not.</a> Journal of Controlled Release. 235, 337-351 (2016).</li>
<li>Francis, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+vaccine+technologies%5BTitle%5D)+AND+%22The+Veterinary+Clinics+of+North+America.+Small+Animal+Practice%22%5BJournal%5D)">Recent advances in vaccine technologies.</a> The Veterinary Clinics of North America. Small Animal Practice. 48 (2), 231-241 (2018).</li>
<li>Tripathi, N. K., Shrivastava, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+developments+in+recombinant+protein-based+dengue+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Recent developments in recombinant protein-based dengue vaccines.</a> Frontiers in Immunology. 9, 1919(2018).</li>
<li>Wilder-Smith, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue+vaccine+development%3A+status+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Bundesgesundheitsblatt+Gesundheitsforschung+Gesundheitsschutz%22%5BJournal%5D)">Dengue vaccine development: status and future.</a> Bundesgesundheitsblatt Gesundheitsforschung Gesundheitsschutz. 63 (1), 40-44 (2020).</li>
<li>Korneev, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+sepsis+and+septic+shock%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Mouse models of sepsis and septic shock.</a> Molecular Biology. 53 (5), 799-814 (2019).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat ze geen belangenconflicten hebben in dit werk.

IsdB, een bacterieel celwandverankerd en ijzergereguleerd oppervlakte-eiwit, speelt een belangrijke rol in het proces van het verkrijgen van heemijzer15. Hla, alfatoxine, is een van de meest effectieve bacteriële toxines die bekend zijn bij MRSA en kan poriën vormen in eukaryote cellen en interfereren met adhesie- en epitheelcellen16. In onze studie werd een nieuw recombinatie MRSA-antigeeneiwit (HI) geconstrueerd en tot expressie gebracht met gentechnolog...

Methicilline-resistente Staphylococcus aureus (MRSA) is een opportunistische ziekteverwekker met een van de hoogste infectiepercentages op een intensive care unit (ICU) afdeling1, cardiologieafdelingen en brandwondenafdelingen wereldwijd. MRSA vertoont hoge infectiepercentages, mortaliteit en brede resistentie tegen geneesmiddelen, wat grote problemen oplevert bij klinische behandeling2. In de wereldwijde prioriteitenlijst van antibioticaresistente bacteriën die in 2017 door de Wereldgezondheidsorganisatie (WHO) werd vrijgegeven, werd MRSA opgenomen in de meest kritieke categorie3. Een vaccin tegen MRSA-infectie is daarom dringend nodig.
Aluminiumadjuvans wordt al lange tijd gebruikt en het hulpmechanisme van het adjuvans is relatief duidelijk, veilig, effectief en goed verdragen4. Aluminium adjuvantia zijn momenteel een veel gebruikt type adjuvans. Over het algemeen wordt aangenomen dat antigenen geadsorbeerd aan aluminiumzoutdeeltjes de stabiliteit kunnen verbeteren en het vermogen van de injectieplaats om antigenen op te nemen kunnen verbeteren, wat zorgt voor een goede absorptie en langzame afgifte5. Momenteel is het grootste nadeel van aluminiumadjuvantia dat ze geen adjuvans effect hebben of slechts een zwak adjuvans effect vertonen op sommige kandidaat-vaccinantigenen6. Bovendien induceren aluminiumadjuvantia IgE-gemedieerde overgevoeligheidsreacties5. Daarom is het noodzakelijk om nieuwe adjuvantia te ontwikkelen om een sterkere immuunrespons te stimuleren.
Nano-emulsie-adjuvantia zijn colloïdale dispersiesystemen die bestaan uit olie, water, oppervlakteactieve stoffen en cosurfactanten7. Bovendien zijn de adjuvantia thermodynamisch stabiel en isotroop, kunnen ze worden geautoclaveerd of gestabiliseerd door centrifugatie met hoge snelheid en kunnen ze spontaan worden gevormd onder milde bereidingsomstandigheden. Verschillende emulsie-adjuvantia (zoals MF59, NB001-002-serie, AS01-04-serie, enz.) zijn momenteel op de markt of in de klinische onderzoeksfase, maar hun deeltjesgroottes zijn groter dan 160 nm8. Daarom kunnen de voordelen van medicinale preparaten op nanoschaal (1-100 nm) (d.w.z. groot specifiek oppervlak, kleine deeltjesgrootte, oppervlakte-effect, hoge oppervlakte-energie, klein effect en macro-kwantumtunneleffect) niet volledig worden benut. In het huidige protocol is gemeld dat een nieuw adjuvans op basis van nano-emulsietechnologie met een diametergrootte van 1-100 nm een goede adjuvante activiteit vertoont9. We testten het recombinatiesubunitvaccinantigeeneiwit HI (α-hemolysinemutant [Hla] en Fe-ionenoppervlakbepalende factor B [IsdB] subunit N2 actief fragmentfusie-eiwit); Een reeks procedures werd vastgesteld om de fysieke eigenschappen en stabiliteit te onderzoeken, de specifieke antilichaamrespons na intramusculaire toediening te evalueren en het beschermende effect van het vaccin te testen met behulp van een systemisch infectiemodel voor muizen.

<table><tbody><tr><td>5424-Small high speed centrifugeFA-45-24-11</td><td>Eppendorf, Duitsland&nbsp;</td><td>5424000495</td><td></td></tr><tr><td>96-well plates</td><td>Corning Incorporated, USA</td><td>CLS3922</td><td></td></tr><tr><td>AFM Dimension FastScan</td><td>BRUKER, Duitsland&nbsp;</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>Alcohol lamp</td><td>Shenzhen Yibaxun Technology Co.,China</td><td>YBS-AA-11408</td><td></td></tr><tr><td>Balb/c mice&nbsp;</td><td>Beijing HFK Bioscience Co. Ltd.&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BCIP/NBT</td><td>Fuzhou Maixin Biotechnology Development Company,China</td><td>BCIP/NBT</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Rad 6.0 microplate reader</td><td>Bio-Rad Laboratories Incorporated Limited Co., CA, USA</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>BL21 Competent Cell</td><td>Merck millipore,Duitsland</td><td>70232-3CN</td><td></td></tr><tr><td>BSA-100G</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>B2064-100G</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge 5810 R</td><td>Eppendorf, Duitsland&nbsp;</td><td>5811000398</td><td></td></tr><tr><td>Coomassie bright blue G-250 staining solution</td><td>MIKX,China</td><td>DB236</td><td></td></tr><tr><td>Decolorization solution</td><td>BOSTER,China</td><td>AR0163-2</td><td></td></tr><tr><td>Electro-heating standing-temperature cultivator HH-B11-420</td><td>Shanghai Yuejin Medical Device Factory, China</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>Electrophoresis apparatus</td><td>Beijing Liuyi Instrument Factory, China</td><td>DYCZ-25D</td><td></td></tr><tr><td>Gel image</td><td>Tanon, USA</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>Glutathione-Sepharose Resin GST</td><td>Mei5bio,China</td><td>affinity chromatography resin</td><td></td></tr><tr><td>H2SO4</td><td>Chengdu KESHI Chemical Co., LTD,China</td><td>7664-93-9</td><td></td></tr><tr><td>HI recombinant protein</td><td>Third Military Medical University,China</td><td>110-27-0</td><td></td></tr><tr><td>HRP -Goat Anti-Mouse IgG</td><td>Biodragon, China</td><td>BF03001</td><td></td></tr><tr><td>HRP- Goat anti-mouse IgG1</td><td>Biodragon, China</td><td>BF03002R</td><td></td></tr><tr><td>HRP- Goat anti-mouse IgG2a</td><td>Biodragon, China</td><td>BF03003R</td><td></td></tr><tr><td>HRP- Goat anti-mouse IgG2b</td><td>Biodragon, China</td><td>BF03004R</td><td></td></tr><tr><td>Inoculation loop</td><td>Haimen Feiyue Co.,LTD,China</td><td>YR-JZH-1UL</td><td></td></tr><tr><td>IsdB and Hla clones</td><td>Shanghai Jereh Biotechnology Co,China</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>Isopropyl nutmeg (pharmaceutic adjuvant)</td><td>SEPPIC, France</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>isopropyl- &beta;-D-1-mercaptogalactopyranoside</td><td>fdbio,China</td><td>FD3278-1</td><td></td></tr><tr><td>LB bouillon culture-medium</td><td>Beijing AOBOX Biotechnology Co., LTD,China</td><td>02-136</td><td></td></tr><tr><td>Lnfrared physiotherapy lamp</td><td>Guangzhou Runman Medical Equipment Co.,China</td><td>7600</td><td></td></tr><tr><td>Low temperature refrigerated centrifuge</td><td>Eppendorf, Duitsland&nbsp;</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>Malvern NANO ZS</td><td>Malvern Instruments Ltd., UK</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>MH(A) medium</td><td>Beijing AOBOX Biotechnology Co., LTD,China</td><td>02-051</td><td></td></tr><tr><td>MH(B) medium</td><td>Beijing AOBOX Biotechnology Co., LTD,China</td><td>02-052</td><td></td></tr><tr><td>Micro plate washing machine 405 LSRS</td><td>Bio Tek Instruments,Inc Highland&nbsp; Park,USA</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>Mini-TBC Compact Film Transfer Instrument</td><td>BeiJingDongFangRuiLi Co.,LTD,China</td><td>1658030</td><td></td></tr><tr><td>MMC packing</td><td>TOSOH(SHANGHAI)CO.,LTD</td><td>0022818</td><td></td></tr><tr><td>MRSA252</td><td>USA, ATCC</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>Nanodrop ultraviolet spectrophotometer</td><td>Thermo Scientific, USA</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>New FlashTM Protein any KD PAGE Protein electrophoresis gel kit</td><td>DAKEWE, China</td><td>8012011</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>biosharp, China</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>PCR, Amplifier</td><td>Thermal Cycler, USA</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>pGEX-target gene recombinant plasmid</td><td>Shanghai Jereh Biotechnology Co,China</td><td>B3528G</td><td></td></tr><tr><td>Phosphotungstic acid</td><td>G-CLONE, China</td><td>CS1231-25g</td><td></td></tr><tr><td>pipette</td><td>Eppendorf, Duitsland&nbsp;</td><td>3120000844</td><td></td></tr><tr><td>polyoxyethylated castor oil (pharmaceutic adjuvant)</td><td>Aladdin, China</td><td>K400327-1kg</td><td></td></tr><tr><td>Primary antibody</td><td>Laboratory homemade:from immunized mice with positive sera</td><td>null</td><td>Zie referentie 11 voor details</td></tr><tr><td>propylene glycol (pharmaceutic adjuvant)</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>P4347-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Protein Marker</td><td>Thermo Scientufuc, USA</td><td>26616</td><td></td></tr><tr><td>PVDF TRANSFER MEMBRANE</td><td>Invitrogen,USA</td><td>88518</td><td></td></tr><tr><td>Scanning Electron Microscope</td><td>JEOL,Japan</td><td>JSM-IT800</td><td></td></tr><tr><td>Sodium pentobarbital</td><td>Merck,Germany</td><td>Tc-P8411</td><td></td></tr><tr><td>Talos L120C TEM</td><td>Thermo Fisher, USA</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>TMB color solution</td><td>TIAN GEN, China</td><td>PA107-01</td><td></td></tr><tr><td>Turtle kits</td><td>Xiamen Bioendo Technology Co.,LTD</td><td>ES80545</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Macklin, China</td><td>9005-64-5</td><td></td></tr></tbody></table>

evaluatie van de immuunrespons van een nano-emulsie-adjuvansvaccin tegen methicilline-resistente staphylococcus aureus (mrsa) -infectie

Evaluating the Immune Response of a Nanoemulsion Adjuvant Vaccine Against Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) Infection

Nano-emulsie-adjuvante vaccins hebben uitgebreide aandacht getrokken vanwege hun kleine deeltjesgrootte, hoge thermische stabiliteit en het vermogen om geldig immuunresponsen te induceren. Het vaststellen van een reeks uitgebreide protocollen om de immuunrespons van een nieuw nano-emulsie-adjuvansvaccin te evalueren, is echter van vitaal belang. Daarom bevat dit artikel een rigoureuze procedure om de fysisch-chemische kenmerken van een vaccin te bepalen (door transmissie-elektronenmicroscopie [TEM], atoomkrachtmicroscopie [AFM] en dynamische lichtverstrooiing [DLS]), de stabiliteit van het vaccinantigeen en -systeem (door een hogesnelheidscentrifugetest, een thermodynamische stabiliteitstest, SDS-PAGE en western blot) en de specifieke immuunrespons (IgG1, IgG2a en IgG2b). Met behulp van deze aanpak kunnen onderzoekers het beschermende effect van een nieuw nano-emulsieadjuvansvaccin in een dodelijk MRSA252 muismodel nauwkeurig evalueren. Met deze protocollen kan het meest veelbelovende nano-emulsievaccinadjuvans in termen van effectief adjuvanspotentieel worden geïdentificeerd. Bovendien kunnen de methoden helpen bij het optimaliseren van nieuwe vaccins voor toekomstige ontwikkeling.

Het protocol voor de bereiding van het nano-emulsieadjuvansvaccin en in vitro en in vivo tests van dit vaccin werd geëvalueerd. TEM, AFM en DLS werden gebruikt om de belangrijke kenmerken van de zetapotentiaal en deeltjesgrootte op het oppervlak van dit monster te bepalen (figuur 1). SDS-PAGE en western blotting toonden aan dat de hoeveelheid antigeen in het neerslag en supernatant niet significant afnam na centrifugatie, wat aangaf dat het vaccin structureel intact, specif...

Het huidige protocol bereidt en evalueert de fysieke eigenschappen, immuunrespons en in vivo beschermend effect van een nieuw nano-emulsie-adjuvans vaccin.

Evaluatie van de immuunrespons van een nano-emulsie-adjuvansvaccin tegen methicilline-resistente Staphylococcus aureus (MRSA) -infectie

Nanoemulsion adjuvant vaccines have attracted extensive attention because of their small particle size, high thermal stability, and ability to induce ...

Het gedemonstreerde protocol onderstreepte de directe en effectieve experimentele aanpak en de gedetailleerde stappen naar immuunresponseffecten van nieuwe virale adjuvantia. Dit protocol biedt het onderzoek niet alleen een in principe immuunevaluatiemethode voor adjuvante vaccins, maar kan ook hun massastabiliteit bepalen. Neem om te beginnen de 10 milligram per milliliter werkoplossing van het MRSA HI-antigeeneiwit en voeg er achtereenvolgens de drie hulpstoffen aan toe, isopropylmyristaat, polyoxyethyleenricinusolie en propyleenglycol, met behoud van een massaverhouding van één is tot zes is tot drie.Roer het mengsel goed en voeg vervolgens geleidelijk gesteriliseerd zuiver water toe om een systeemvolume van 10 milliliter te bereiken. Om het nano-emulsievaccin te bereiden met behulp van een emulgeringsmethode met lage energie, roert u het gedurende ongeveer 20 minuten met 500 rotaties per minuut en 25 graden Celsius. Vervolgens wordt het nano-emulsievaccin met één milligram per milliliter eiwit verkregen als een heldere transparante vloeistof.Voor antigeencoating van de enzymgebonden immunosorbenttest of ELISA-plaat, verdun HI-eiwitantigeen tot 10 microgram per milliliter met coatingoplossing en voeg 100 microliter van het verdunde antigeen per put toe aan de ELISA-plaat. Incubeer de plaat 's nachts bij vier graden Celsius. Was na incubatie de plaat met 300 microliter PBST per put.Sluit de putten af met 300 microliter van de afdichtingsoplossing per put gedurende twee uur bij 37 graden Celsius, verdun vervolgens drie microliter van het muizenserum van elke experimentele groep 100 keer door 297 microliter PBST toe te voegen en vortex het verdunde serum. Voeg 100 microliter verdund serum per put toe aan de gecoate ELISA-plaat voor elk serummonster. Verdun op dezelfde manier de positieve en negatieve controleserums 100 keer met PBST door vier microliter positief of negatief controleserum toe te voegen aan 396 microliter PBST, gevolgd door vortexmenging.Om verdunning met dubbele verhouding uit te voeren, voegt u 200 microliter van het eerder verdunde experimentele serum toe aan de eerste rij van de gecoate ELISA-plaat en voegt u vervolgens 100 microliter PBST toe aan alle putten, behalve die in rij één en 12. Stel vervolgens het pipetpistool in op 100 microliter en breng 100 microliter serum over van de eerste rij naar de tweede rij met PBST. Meng de inhoud in de tweede rij 10 keer met behulp van het pipetpistool.Op dezelfde manier voert u één is uit tot twee opeenvolgende verdunningen van het serum tot rij 11. Als u klaar bent, gooit u 100 microliter vloeistof uit rij 11 weg. Voeg 100 microliter verdund negatief en positief serum toe aan elke overeenkomstige put in rij 12 volgens de monstersjabloon.Sluit de ELISA-plaat af met plasticfolie en incubeer gedurende een uur bij 37 graden Celsius. Verdun ondertussen secundaire antilichaam anti-muis IgG HRP 10.000 keer door PBST toe te voegen. Na de incubatie van een uur wast u de ELISA-plaat met 300 microliter PBST per put om de ongebonden antilichamen te reinigen, voegt u vervolgens 100 microliter van het verdunde secundaire antilichaam toe aan elke put en incubeert u de plaat gedurende 40 minuten bij 37 graden Celsius.Was de plaat met 300 microliter PBST per put en voeg vervolgens 100 microliter TMB-kleurontwikkelingsoplossing toe aan elke put. Plaats de platen op 37 graden Celsius en uit de buurt van licht gedurende 10 minuten. Beëindig daarna de reactie onmiddellijk met 50 microliter van twee molaire zwavelzuur.Detecteer de optische dichtheid of OD-waarden op 415 nanometer met behulp van een enzymmarker binnen 15 minuten na beëindiging. De fysische kenmerken van het nieuwe nano-emulsievaccin werden geanalyseerd met behulp van transmissie-elektronenmicroscopie en atoomkrachtmicroscopie. Dynamische lichtverstrooiing werd gebruikt om de deeltjesgrootteverdeling en de zetapotentiaal van het monster te bepalen.SDS-PAGE en western blotting toonden aan dat de hoeveelheid antigeen in het neerslag en supernatant niet significant uitstelde na centrifugatie, wat aangeeft dat het vaccin structureel intact, specifiek en immunogeen was. Het nano-emulsieadjuvansvaccin verhoogde de totale IgG-, IgG1- en IgG2a-antilichaamtiters van de muizen aanzienlijk. De immunogeniciteit van het eiwitvaccin was significant verbeterd.De serum IgG2b OD-waarden bij 450 nanometer waren het hoogst wanneer PBS werd gebruikt bij een verdunning van één tot 5.000. Het dodelijke model van MRSA 252-muizen weerspiegelde dat het nano-emulsievaccin een goed beschermend effect vertoonde en bacteriële infectie met MRS A 252 effectief remde, waardoor de overlevingskans van geïnfecteerde muizen verbeterde. De bereiding van nano-emulsie en de toevoeging van serum aan de plant zijn de belangrijkste.Ook bij detectie van de antilichaamtiter moet men letten op het corrigeren van een bredere en op vloeistof gebaseerde uit. Naast adjuvantia kan deze methode ook worden gebruikt voor de immuunevolutie van andere wiskundige arrays, zoals kunststoffen of toedieningssystemen.

evaluating-immune-response-nanoemulsion-adjuvant-vaccine-against

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

This video demonstrates an efficient homogenization technique to generate an antigen-adjuvant emulsion to induce experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) in a murine model. The emulsion contains an autoantigen — myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) — in the water phase, surrounded by a continuous oil phase comprising an inactivated pathogenic bacteria. The emulsion ensures a sustained release of antigens for a prolonged immune response.

Preparing an Antigen-Adjuvant Emulsion to Induce Autoimmune Encephalomyelitis

This video demonstrates a method for assessing the antibody immune response to a novel nanoemulsion adjuvant vaccine in pre-immunized mice. Immunization enhances antibody response as confirmed by determining the IgG antibody titers.

Measuring Immunoglobulin G Levels Against a Test Vaccine in a Mouse Serum

This video demonstrates the production of nanoemulsion tumor vaccines. The stable oil reservoir depots carrying synthetic peptides and adjuvants are produced by low-energy nanoemulsion, offering significant promise for tumor immunotherapy.

Preparation of a Nanoemulsion Adjuvant Vaccine

We beschrijven beeldvorming van het hele dier en op flowcytometrie gebaseerde technieken voor het bewaken van de uitbreiding van antigeenspecifieke CD8+ T-cellen als reactie op immunisatie met nanodeeltjes in een muizenmodel voor vaccinatie.

Whole-dierlijke Imaging en Flowcytometrische technieken voor analyse van antigeen-specifieke CD8 + T cel reacties na Nanoparticle Vaccinatie

Het protocol presenteert gedetailleerde methoden om te evalueren of de nano-emulsie ophiopogonine D adjuvans effectieve cellulaire immuunresponsen bevordert.

In vitro Cellulaire activiteit Evaluatie van het nano-emulsievaccin Adjuvans Ophiopogonine D

Hier presenteren we gedetailleerde methoden voor de bereiding en evaluatie van het nasale zelfgeassembleerde nano-emulsietumorvaccin in vitro en in vivo.

Voorbereiding, kenmerken, toxiciteit en werkzaamheid Evaluatie van het nasale zelfgeassembleerde nano-emulsietumorvaccin in vitro en in vivo

Om experimentele auto-immune encefalomyelitis, een diermodel van multiple sclerose, te induceren, worden muizen geïmmuniseerd met een water-in-olie-emulsie die een autoantigeen bevat en het adjuvans van Freund compleet maakt. Hoewel er verschillende protocollen bestaan voor de bereiding van deze emulsies, wordt hier een snel, eenvoudig en gestandaardiseerd homogenisatieprotocol voor emulsievoorbereiding gepresenteerd.

Een snelle, eenvoudige en gestandaardiseerde homogenisatiemethode om antigeen / adjuvante emulsies voor te bereiden voor het induceren van experimentele auto-immune encefalomyelitis

We introduceren vier methoden om de antimicrobiële activiteiten van nanodeeltjes en nanogestructureerde oppervlakken te evalueren met behulp van in vitro technieken. Deze methoden kunnen worden aangepast om de interacties van verschillende nanodeeltjes en nanogestructureerde oppervlakken met een breed scala aan microbiële soorten te bestuderen.

Evaluatie van antimicrobiële activiteiten van nanodeeltjes en nanogestructureerde oppervlakken in vitro

In dit protocol hebben we een kationisch nano-emulsie-ingekapseld retinoïnezuur (RA) ontwikkeld dat kan worden gebruikt als adjuvans om antigeenspecifieke systemische en mucosale reacties te bevorderen. Door de door de FDA goedgekeurde RA aan de nano-emulsie toe te voegen, werd antigeenspecifiek sIgA gepromoot in de vagina en dunne darm na intramusculaire injectie van de nano-emulsie.

Kationisch nano-emulsie-ingekapseld retinoïnezuur als adjuvans ter bevordering van OVA-specifieke systemische en mucosale reacties

Protocollen voor het gebruik van open systeem stroom biofilms met drip stroom reactoren en roterende schijf reactoren worden in detail.

Het gebruik van Drip Flow en roterende schijf reactoren voor Staphylococcus aureus Biofilm Analyse

Leer de voorbereiding en evaluatie van een nano-emulsie-adjuvansvaccin tegen MRSA-infectie. Deze methode toont de immuunrespons en beschermende effecten in muizenmodellen voor vaccinontwikkeling.

Evaluatie van de immuunrespons van een nano-emulsie-adjuvansvaccin tegen methicilline-resistente Staphylococcus aureus (MRSA) -infectie (Video) | JoVE Journal

Evaluatie van de immuunrespons van een nano-emulsie-adjuvansvaccin tegen methicilline-resistente Staphylococcus aureus (MRSA) -infectie

Meer video's verkennen