Name: Isolatie en identificatie van mesenchymale stamcellen afgeleid van vetweefsel van Sprague Dawley-ratten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-04-07T14:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 50 s
Description: Leer de isolatie en identificatie van mesenchymale stamcellen uit vetweefsel van Sprague Dawley-ratten. Deze methode ondersteunt onderzoek naar celtherapie voor pancreasregeneratie en diabetesbehandeling.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs zijn het Mexicaanse Instituut voor Sociale Zekerheid (IMSS) en het Kinderziekenhuis van Mexico, Federico Gomez (HIMFG) en de Bioterio-medewerkers van de IMSS Research Coordination dankbaar voor de steun die is gegeven om dit project uit te voeren. We danken de National Council of Science and Technology voor de AOC (815290) beurs en Antonio Duarte Reyes voor de technische ondersteuning in het audiovisuele materiaal.

Alle experimentele procedures werden uitgevoerd volgens de Mexicaanse richtlijnen voor dierenverzorging, gebaseerd op aanbevelingen van de Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care International (Norma Oficial Mexicana NOM-062-200-1999, Mexico). Het protocol werd beoordeeld, goedgekeurd en geregistreerd door de Ethische Commissie voor Gezondheidsonderzoek van het Instituto Mexicano del Seguro Social (R-2021-785-092).
1. Verwijdering van vetweefsel van ratten door chirurgische resectie
<ol><li>Bereid twee conische buisjes met 20 ml steriele 1x fosfaat gebufferde zoutoplossing-antibioticum antimycotische (PBS-AA) oplossing (1x PBS, gentamicine [20 μg / ml] en amfotericine [0,5 μg / ml]) en onderhoud op ijs.</li>
	<li>Selecteer twee volwassen mannelijke Sprague Dawley-ratten (R. norvegicus) in goede gezondheidstoestand. Zorg ervoor dat de ratten tussen de 3-4 maanden oud zijn en een coporal gewicht van 350-450 g hebben.</li>
	<li>Ga over tot sedatie met 20 mg / kg xylazinehydrochloride en dien 5 minuten later een verdovingsmiddel toe met een dosis van 120 mg / kg ketaminehydrochloride intraperitoneaal. Smeer beide ogen in met een oogzalf om uitdroging te voorkomen. Bevestig vervolgens de anesthesiediepte via een gebrek aan pedaalreflex.</li>
	<li>Scheer en desinfecteer de buik- en liesstreek met een jodiumoplossing. Breng chirurgische gordijnen aan om de steriliteit te behouden. Maak vervolgens een mediane longitudinale incisie van het borstbeen naar het testiculaire gebied.</li>
	<li>Verwijder het vetweefsel rond zowel de bijbal als de nieren met een steriele tang en plaats het in de 1x PBS-AA-oplossing. Bewaar de monsters op ijs.</li>
	<li>Hecht de incisie gesloten indien nodig volgens de institutionele richtlijnen en euthanaseer de dieren met een intracardiale dosis van 40 mg / kg natriumpentobarbital. Zodra de dood is bevestigd, gooit u het karkas weg volgens de institutionele procedure(s). OPMERKING: De dood lokt signaleringsmechanismen uit die het immunofenotype, de differentiatiecapaciteit en het paracriene effect van mesenchymale cellen beïnvloeden. Daarom wordt weefselverzameling uitgevoerd vóór euthanasie. </li>
</ol>2. Isolatie van mesenchymale cellen uit vetweefsel
<ol><li>Verwijder het vetweefsel met een steriele tang in een bioveiligheidskast en plaats het op steriel filterpapier in een petrischaal met een diameter van 100 mm om overtollig PBS te absorberen.</li>
	<li>Breng het vetweefsel over naar een andere petrischaal en voer drie wasbeurten uit gedurende 5 minuten elk met 10 ml 1x PBS-AA-oplossing met behulp van een pipet van 10 ml.</li>
	<li>Splits het weefsel mechanisch in fragmenten van ongeveer 1 cm2 met behulp van een schaar en een scalpel.</li>
	<li>Bereid collagenase type IV (0,075%) in 20 ml niet-aangevulde Dulbecco's gemodificeerde Eagle's medium (DMEM). Filtreer door een spuitfilter van 0,22 μm en houd het op 37 °C.</li>
	<li>Voeg de collagenase-oplossing (20 ml) bereid in stap 2.4 toe aan een kristalbeker met het gefragmenteerde weefsel en een magnetische staaf. Sluit de container af en incubeer onder langzaam en continu roeren bij 37 °C. OPMERKING: De enzymatische vertering duurt ongeveer 90 minuten (blijf langzaam roeren om de integriteit van de celmembranen te behouden).</li>
	<li>Filtreer het homogenaat door een roestvrijstalen, 40 mazen, 0,38 mm diafragmafilter op een petrischaal van 100 mm en vang de celsuspensie op in een steriele conische buis van 50 ml.</li>
	<li>Voeg 20 ml verwarmde, aangevulde DMEM toe (10% foetaal runderserum [FBS], 2 mM glutamine, 2 mM natriumpyruvaat, 100x niet-essentiële aminozuuroplossing en 100x antibiotische antimycotische oplossing [AA]). Suspensie voorzichtig de stromale vasculaire fractie (SVE).</li>
	<li>Centrifugeer de celsuspensie gedurende 10 minuten op 290 x g , gooi het supernatant weg met een pipet van 25 ml en was de cellen voorzichtig met 40 ml van een niet-aangevuld DMEM-medium.</li>
	<li>Herhaal deze stap. Gebruik een nieuwe steriele conische buis tussen de stappen om de minste hoeveelheid cellulair afval en vet te slepen.</li>
	<li>Suspensie de pellet in 5 ml aangevuld DMEM met een pipet van 5 ml en breng over in een T-25 cm2 fles. Incubeer gedurende 24 uur bij 37 °C en 5% CO2.</li>
	<li>Voer de volgende dag drie wasbeurten uit met 5 ml verwarmde 1x PBS-AA en twee wasbeurten met niet-aangevulde DMEM om celresten en niet-hechtende cellen te verwijderen. Voeg 5 ml verse, verwarmde, aangevulde DMEM toe met een pipet van 5 ml en vervang het medium om de 3-4 dagen.</li>
</ol>3. Behoud en uitbreiding van de ASC primaire culturen
<ol><li>Zodra de cellen 90% -100% samenvloeiing bereiken (8 ± 2 dagen), was twee keer met 5 ml niet-aangevulde DMEM. Voeg 1 ml verwarmd 0,025% trypsine-2 mM ethyleendiaminetetra-azijnzuur (EDTA) toe en incubeer gedurende 5-7 minuten bij 37 °C.</li>
	<li>Wanneer de celmonolaag is losgemaakt, voegt u 4 ml aangevulde DMEM toe en splitst u de celsuspensie voorzichtig uit.</li>
	<li>Breng de celsuspensie over in een conische buis van 15 ml, voeg 5 ml verwarmde, aangevulde DMEM toe en suspensie voorzichtig om te homogeniseren.</li>
	<li>Centrifugeer op 290 x g gedurende 5 min. Gooi het supernatant weg en meng de pellet voorzichtig in 1 ml aangevulde DMEM. Tel de cellen in een Neubauer-kamer na kleuring met Trypan-blauw.</li>
	<li>Tot slot, zaad 2,5 x 103 cellen/cm2 in een gesplitste verhouding van 1:4 in T-75 kolven. Deze stap zorgt voor kolonievorming en een hoge proliferatiesnelheid.</li>
</ol>4. Morfologische karakterisering van ASC primaire culturen
<ol><li>Observeer de morfologie van ASC's onder omgekeerde microscopie. OPMERKING: Voordat u monteert voor histologie en ASC-identificatie, behandelt u de coverslips met een 1% gelatine-oplossing. Bestralen met UV gedurende 15 min.<ol><li>Verwijder de coverslips uit de 70% ethanoloplossing en laat ze 5 minuten drogen.</li>
		<li>Dompel de coverslips onder in een steriele 1% gelatineoplossing, giet af en droog op kamertemperatuur (RT).</li>
		<li>Plaats elke coverslip in elke put van een 6-putplaat en bestraal de platen gedurende 15 minuten met UV-licht.</li>
		<li>Zaai een druppel met 25 x 103 cellen in het midden van de put, wacht 1 minuut en voeg 1 ml aangevuld DMEM-medium toe. Incubeer gedurende 96 uur bij 37 °C en 5% CO2.</li>
		<li>Verwijder het medium en voer drie wasbeurten uit met 1x PBS-AA met behulp van een transferpipet.</li>
		<li>Voeg 1 ml 3,5% neutrale formaline toe aan elke put en incubeer gedurende 1 uur bij RT. Verwijder voorzichtig de formaline en voeg 1 ml koude 70% ethanol toe aan elk putje.</li>
		<li>Sluit de plaat af met parafilm tot gebruik, om uitdroging te voorkomen. OPMERKING: De cellulaire morfologie van ASC's worden ook geëvalueerd door hematoxyline-eosinekleuring tijdens verschillende passages.</li>
		<li>Verwijder de 70% ethanol uit elke put en hydrateer de cellen gedurende 5 minuten met gedestilleerd water. Filter ondertussen de kleuringsoplossingen.</li>
		<li>Verwijder het water en kleurt de cellen onder langzaam roeren gedurende 15 minuten met Harris 'hematoxyline-oplossing.</li>
		<li>Verwijder de vlekoplossing en voer twee wasbeurten uit met 1x PBS.</li>
		<li>Kleur de cellen met eosine-oplossing onder langzaam roeren gedurende 1 min. Verwijder vervolgens de oplossing en voer twee wasbeurten uit met 1x PBS.</li>
		<li>Verwijder voorzichtig de afdekstroken uit elke put en monteer de dia's op een druppel PBS-glycerolmontage-oplossing (1:1 v/v).</li>
		<li>Plaats een lijn nagellak rond de deklaag en observeer de histologische glaasjes onder de lichtmicroscoop.</li>
	</ol></li>
</ol>5. Expressiemarkers van ASC's door immunofluorescentie
<ol><li>Bereid de wasbuffer met 1x PBS-0,05% Tween 20 voor. Voer de wasbeurten uit bij RT en met langzaam schudden. Was de borden drie keer met 2 ml buffer/put (incubeer gedurende 3 minuten voor elke wasbeurt).</li>
	<li>Plaats 1 ml blokkerend reagens (1:10) en incubeer met langzaam roeren gedurende 20 minuten.</li>
	<li>Voeg 200 μL (1:50 verdunning) van de volgende primaire antilichamen toe aan elk putje: CD9 (monoklonale muis), CD34 (polyklonaal konijn) en anti-CD63 (polyklonale geit). Incubeer een nacht bij 4 °C.</li>
	<li>Was de platen drie keer opnieuw en incubeer met 200 μL (1:50 verdunning) van de volgende secundaire antilichamen: antimuis IgG FITC geconjugeerde geit, ezel anti-geit IgG DyeLight 550 en geit antikonijn IgG Cy3.</li>
	<li>Was drie keer met 1x PBS-0,05% Tween 20 en contrakleur de celkernen met 100 μL DRAQ-7 (verdunning: 17 μL in 1 ml dubbel gedestilleerd water) gedurende 20 min.</li>
	<li>Was nog drie keer en monteer de dia's volgens de stappen 4.1.12-4.1.13. Bewaar de monsters beschermd tegen licht en bevroren tot gebruik.</li>
	<li>Visualiseer de monsters onder epifluorescentie confocale microscopie met behulp van de juiste instellingen en software die voor deze apparatuur worden aanbevolen.</li>
</ol>6. Expressiemarkers van ASC's door flowcytometrie
<ol><li>Pas een eencellige suspensie van trypsinized of ontdooide cellen (subpassages 3 of 4) aan bij een concentratie van 1 x 106 cellen / ml van 1x PBS-5% FBS. Aliquot 100 μL met 100.000 cellen in 1,5 ml centrifugebuizen. Gebruik één aliquot zonder labeling voor de autofluorescentieregeling.</li>
	<li>Voeg alle juiste hoeveelheden Anti-CD105 AF-594 en Anti-CD31 AF-680 toe volgens de instructies van de fabrikant. Incubeer in het donker gedurende 20 minuten bij 4 °C.</li>
	<li>Was de overtollige vlek met 1 ml 1x PBS-5% FBS door centrifugeren op 250 x g gedurende 5 minuten en suspensie in 300 μL van 1% formaline.</li>
	<li>Voer monsterverwerving uit op een flowcytometer. De gatingstrategie van de cellen is gebaseerd op FSC-A vs. SSC-A gating, single cells gated using SSC-H vs. SSC-A gevolgd door FSC-A vs. FSC-H.</li>
	<li>Gebruik Y610-mCherry-A detector voor CD105 AF-594 en R660-APC-A detector voor CD31 AF-680.</li>
</ol>7. Differentiatie van ASC's naar de adipogene afstamming
<ol><li>Zaai in een 6-well plaat 1 x 104 cellen (P-4) per cm 2 en incubeer bij 37 °C, 5% CO2, tot 60-80% samenvloeiing (~72-96 h). Induceer differentiatie, rechtstreeks van toepassing op het kweekmedium: 4 μM insuline, 1 μM dexamethason 21-acetaat (Dxa) en 0,5 mM 3-isobutyl-1-methylxanthine (MIX). Verander het differentiatiemedium elke 2-3 dagen.</li>
	<li>Bereid een stockoplossing van 800 μM insuline in 2 ml steriel ultrapuur water (voeg 20 μL 1 N HCl toe om volledige oplossing te garanderen) en bewaar bij -20 °C. Voeg 10 μL insulinebouillon toe, eerder verdund 1:100, en breng 10 μL aan met een eindvolume van 2 ml per put.</li>
	<li>Bereid een stamoplossing van 1 mM Dxa in 5 ml steriel ultrapuur water (merk op dat volledige oplossing niet optreedt). Bewaren bij 4 °C. Voeg 40 μL/well van een 1:4 verdunning van Dxa bouillon toe.</li>
	<li>Bereid een voorraad van 100 mM MIX in 2,5 ml 0,1 N NaOH, vortex, en voeg 40 μL 1 N NaOH toe voor volledige oplossing. Bewaren bij -70 °C. Voeg 10 μL/put MIX-bouillon toe.</li>
	<li>Filtreer de stamoplossingen door een steriele spuitfilter van 0,22 μm voordat u ze opbergt.</li>
	<li>Was op dag 12 de cellen drie keer met 1x PBS en incubeer met 500 μL 4% formaline gedurende 1 uur bij RT. Was elke put twee keer met gedestilleerd water gevolgd door 60% isopropanol gedurende 5 minuten en laat drogen.</li>
	<li>Voeg 0,5% olierood O verdund in 60% isopropanol (500 μL/put) toe en incubeer gedurende 20 minuten bij RT. Was drie keer met 1 ml gedestilleerd water en observeer onder een omgekeerde microscoop. OPMERKING: Voor de benodigde reagentia, apparatuur en materialen raadpleegt u de materiaaltabel.</li>
</ol>

Isolatie en karakterisering van van vetweefsel afgeleide stamcellen

<ol><li>Djian, P., Roncari, A. K., Hollenberg, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+%5Canatomic+site+and+age+on+the+replication+and+differentiation+of+rat+adipocyte+precursors+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Influence of \anatomic site and age on the replication and differentiation of rat adipocyte precursors in culture.</a> The Journal of Clinical Investigation. 72 (4), 1200-1208 (1983).</li>
<li>Greenwood, M. R., Hirsch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+development+of+adipocyte+cellularity+in+the+normal+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Postnatal development of adipocyte cellularity in the normal rat.</a> Journal of Lipid Research. 15 (5), 474-483 (1974).</li>
<li>González, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Engineering+of+the+cartilage+tissue%3A+application+of+mesenchymal+stem+cells+derived+from+adipose+tissue+and+bone+marrow+for+use+in+cartilage+tissue+regeneration%22">Engineering of the cartilage tissue: application of mesenchymal stem cells derived from adipose tissue and bone marrow for use in cartilage tissue regeneration</a>. , Universidad de León. PhD thesis, http://hdl.handle.net/10612/3600 (2014).</li>
<li>Oedayrajsingh-Varma, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue-derived+mesenchymal+stem+cell+yield+and+growth+characteristics+are+affected+by+the+tissue-harvesting+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue-derived mesenchymal stem cell yield and growth characteristics are affected by the tissue-harvesting procedure.</a> Cytotherapy. 8 (2), 166-177 (2006).</li>
<li>Sherman, L. S., Conde-Green, A., Naaldijk, Y., Lee, E. S., Rameshwar, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+enzyme-free+method+for+isolation+and+expansion+of+human+adipose-derived+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">An enzyme-free method for isolation and expansion of human adipose-derived mesenchymal stem cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (154), e59419(2019).</li>
<li>Cowan, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+adult+stromal+cells+heal+critical-size+mouse+calvarial+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived adult stromal cells heal critical-size mouse calvarial defects.</a> Nature Biotechnology. 22 (5), 560-567 (2004).</li>
<li>Alstrup, T., Eijken, M., Bohn, A. B., Moller, B., Damsgaard, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+adipose+tissue-derived+stem+cells%3A+enzymatic+digestion+in+combination+with+mechanical+distortion+to+increase+adipose+tissue-derived+stem+cell+yield+from+human+aspirated+fat%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Stem+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Isolation of adipose tissue-derived stem cells: enzymatic digestion in combination with mechanical distortion to increase adipose tissue-derived stem cell yield from human aspirated fat.</a> Current Protocols in Stem Cell Biology. 48 (1), 68(2019).</li>
<li>Gittel, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+equine+multipotent+mesenchymal+stromal+cells+by+enzymatic+tissue+digestion+or+explant+technique%3A+comparison+of+cellular+properties%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Isolation of equine multipotent mesenchymal stromal cells by enzymatic tissue digestion or explant technique: comparison of cellular properties.</a> BMC Veterinary Research. 9, 221(2013).</li>
<li>Aliborzi, G., Vahdati, A., Mehrabani, D., Hosseini, S. E., Tamadon, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+characterization+and+growth+kinetic+comparison+of+bone+marrow+and+adipose+tissue+mesenchymal+stem+cells+of+guinea+pig%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Isolation, characterization and growth kinetic comparison of bone marrow and adipose tissue mesenchymal stem cells of guinea pig.</a> International Journal of Stem Cells. 9 (1), 115-123 (2016).</li>
<li>Jurgens, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+tissue-harvesting+site+on+yield+of+stem+cells+derived+from+adipose+tissue%3A+implications+for+cell-based+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Effect of tissue-harvesting site on yield of stem cells derived from adipose tissue: implications for cell-based therapies.</a> Cell and Tissue Research. 332 (3), 415-426 (2008).</li>
<li>Secunda, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+expansion+and+characterisation+of+mesenchymal+stem+cells+from+human+bone+marrow%2C+adipose+tissue%2C+umbilical+cord+blood+and+matrix%3A+a+comparative+study%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotechnology%22%5BJournal%5D)">Isolation, expansion and characterisation of mesenchymal stem cells from human bone marrow, adipose tissue, umbilical cord blood and matrix: a comparative study.</a> Cytotechnology. 67 (5), 793-807 (2015).</li>
<li>Tholpady, S. S., Katz, A. J., Ogle, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+from+rat+visceral+fat+exhibit+multipotential+differentiation+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22The+Anatomical+Record.+Part+A%2C+Discoveries+in+Molecular%2C+Cellular%2C+and+Evolutionary+Biology%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells from rat visceral fat exhibit multipotential differentiation in vitro.</a> The Anatomical Record. Part A, Discoveries in Molecular, Cellular, and Evolutionary Biology. 272 (1), 398-402 (2003).</li>
<li>Yoshimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-assisted+lipotransfer+for+cosmetic+breast+augmentation%3A+supportive+use+of+adipose-derived+stem%2Fstromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Aesthetic+Plastic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Cell-assisted lipotransfer for cosmetic breast augmentation: supportive use of adipose-derived stem/stromal cells.</a> Aesthetic Plastic Surgery. 32 (1), 48-57 (2008).</li>
<li>Si, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+stem+cells%3A+Sources%2C+potency%2C+and+implications+for+regenerative+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicine+%26+Pharmacotherapy%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived stem cells: Sources, potency, and implications for regenerative therapies.</a> Biomedicine & Pharmacotherapy. 114, 108765(2019).</li>
<li>Hammoud, S. H., AlZaim, I., Al-Dhaheri, Y., Eid, A. H., El-Yazbi, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perirenal+adipose+tissue+inflammation%3A+Novel+insights+linking+metabolic+dysfunction+to+renal+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Perirenal adipose tissue inflammation: Novel insights linking metabolic dysfunction to renal diseases.</a> Frontiers in Endocrinology. 12, 707126(2021).</li>
<li>Liu, B. X., Sun, W., Kong, X. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perirenal+fat%3A+A+unique+fat+pad+and+potential+target+for+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Angiology%22%5BJournal%5D)">Perirenal fat: A unique fat pad and potential target for cardiovascular disease.</a> Angiology. 70 (7), 584-593 (2019).</li>
<li>Lee, J., Han, D. J., Kim, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+differentiation+of+human+adipose+tissue-derived+stem+cells+into+cells+with+pancreatic+phenotype+by+regenerating+pancreas+extract%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">In vitro differentiation of human adipose tissue-derived stem cells into cells with pancreatic phenotype by regenerating pancreas extract.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 375 (4), 547-551 (2008).</li>
<li>Chandra, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Islet-like+cell+aggregates+generated+from+human+adipose+tissue+derived+stem+cells+ameliorate+experimental+diabetes+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Islet-like cell aggregates generated from human adipose tissue derived stem cells ameliorate experimental diabetes in mice.</a> PLoS One. 6 (6), e20615(2011).</li>
<li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multilineage+cells+from+human+adipose+tissue%3A+implications+for+cell-based+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering%22%5BJournal%5D)">Multilineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies.</a> Tissue Engineering. 7 (2), 211-228 (2001).</li>
<li>Huang, S. J., Yang, W. S., Lin, Y. W., Wang, H. C., Chen, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increase+of+insulin+sensitivity+and+reversal+of+age-dependent+glucose+intolerance+with+inhibition+of+ASIC3%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Increase of insulin sensitivity and reversal of age-dependent glucose intolerance with inhibition of ASIC3.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 371 (4), 729-734 (2008).</li>
<li>Jang, H. J., Cho, K. S., Park, H. Y., Roh, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue-derived+stem+cells+for+cell+therapy+of+airway+allergic+diseases+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Histochemica%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue-derived stem cells for cell therapy of airway allergic diseases in mouse.</a> Acta Histochemica. 113 (5), 501-507 (2011).</li>
<li>Haasters, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+immunocytochemical+characteristics+indicate+the+yield+of+early+progenitors+and+represent+a+quality+control+for+human+mesenchymal+stem+cell+culturing%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Anatomy%22%5BJournal%5D)">Morphological and immunocytochemical characteristics indicate the yield of early progenitors and represent a quality control for human mesenchymal stem cell culturing.</a> Journal of Anatomy. 214 (5), 759-767 (2009).</li>
<li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+pig+adipose-derived+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Journal+of+Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of pig adipose-derived progenitor cells.</a> Canadian Journal of Veterinary Research. 80 (4), 309-317 (2016).</li>
<li>Varma, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypical+and+functional+characterization+of+freshly+isolated+adipose+tissue-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+and+Development%22%5BJournal%5D)">Phenotypical and functional characterization of freshly isolated adipose tissue-derived stem cells.</a> Stem Cells and Development. 16 (1), 91-104 (2007).</li>
<li>Palumbo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+of+isolation%2C+characterization+and+expansion+of+human+adipose-derived+stem+cells+%28ASCs%29%3A+An+overview%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Methods of isolation, characterization and expansion of human adipose-derived stem cells (ASCs): An overview.</a> International Journal of Molecular Sciences. 19 (7), 1897(2018).</li>
<li>Yu, B., Zhang, X., Li, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosomes+derived+from+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Exosomes derived from mesenchymal stem cells.</a> International Journal of Molecular Sciences. 15 (3), 4142-4157 (2014).</li>
<li>Maumus, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Native+human+adipose+stromal+cells%3A+localization%2C+morphology%2C+and+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Obesity%22%5BJournal%5D)">Native human adipose stromal cells: localization, morphology, and phenotype.</a> International Journal of Obesity. 35 (9), 1141-1153 (2011).</li>
<li>Helmy, M. A., Mohamed, A. F., Rasheed, H. M., Fayad, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+primary+isolation+and+culture+of+adipose-derived+stem+cells+and+their+phenotypic+profile%5BTitle%5D)+AND+%22Alexandria+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">A protocol for primary isolation and culture of adipose-derived stem cells and their phenotypic profile.</a> Alexandria Journal of Medicine. 56 (1), 42-50 (2020).</li>
<li>He, Q., Ye, Z., Zhou, Y., Tan, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+of+mesenchymal+stem+cells+from+rat+bone+marrow+and+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Turkish+Journal+of+Biology%22%5BJournal%5D)">Comparative study of mesenchymal stem cells from rat bone marrow and adipose tissue.</a> Turkish Journal of Biology. 42 (6), 477-489 (2018).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat ze geen belangenconflict hebben.

In de afgelopen vier decennia sinds de ontdekking van MSC's hebben verschillende groepen onderzoekers procedures beschreven voor het verkrijgen van MSC's uit verschillende weefsels en soorten. Een van de voordelen van het gebruik van ratten als diermodel is hun eenvoudige onderhoud en snelle ontwikkeling, evenals het gemak van het verkrijgen van MSC's uit vetweefsel. Verschillende weefselbronnen zijn beschreven voor het verkrijgen van ASC's, zoals visceraal, perirenaal, epididymaal en onderhuids vet 12,13,14,15,16.<sup c...

Mesenchymale stamcellen (MSC's) hebben een sterke invloed gehad op de regeneratieve geneeskunde vanwege hun hoge capaciteit voor zelfvernieuwing, proliferatie, migratie en differentiatie in verschillende cellijnen 1,2. Momenteel richt veel onderzoek zich op hun potentieel voor de behandeling en diagnose van verschillende ziekten.
Er zijn verschillende bronnen van mesenchymale cellen: beenmerg, skeletspieren, vruchtwater, haarzakjes, placenta en vetweefsel, onder anderen. Ze worden verkregen van verschillende soorten, waaronder mensen, muizen, ratten, honden en paarden3. Van beenmerg afgeleide MSC's (BMSC's) worden al vele jaren gebruikt als een belangrijke bron van stamcellen in de regeneratieve geneeskunde en als alternatief voor het gebruik van embryonale stamcellen4. Van vetweefsel afgeleide MSC's, of van vetweefsel afgeleide stamcellen (ASC's), zijn echter een belangrijk alternatief met grote voordelen vanwege hun gemak van verzameling en isolatie, evenals de opbrengst van cellen verkregen per gram vetweefsel 5,6. Er is gemeld dat de oogstsnelheid van ASC's over het algemeen hoger is dan die van BMSCs7. Aanvankelijk werd voorgesteld dat het herstellende/regeneratieve vermogen van ASC's te wijten was aan hun vermogen om te differentiëren in andere cellijnen8. Onderzoek in de afgelopen jaren heeft echter de primaire rol van paracriene factoren die door ASC's worden vrijgegeven in hun herstelpotentieelversterkt 9,10.
Vetweefsel (AT), naast het feit dat het een energiereserve is, interageert met het endocriene, nerveuze en cardiovasculaire systeem. Het is ook betrokken bij postnatale groei en ontwikkeling, het onderhoud van weefselhomeostase, weefselherstel en regeneratie. De AT bestaat uit adipocyten, vasculaire gladde spiercellen, endotheelcellen, fibroblasten, monocyten, macrofagen, lymfocyten, preadipocyten en ASC's. Deze laatste spelen een belangrijke rol in de regeneratieve geneeskunde vanwege hun lage immunogeniciteit11,12. ASC's kunnen worden verkregen door enzymatische vertering en mechanische verwerking of door vetweefselexplantaten. Primaire culturen van ASC's zijn gemakkelijk te onderhouden, te kweken en uit te breiden. Fenotypische karakterisering van ASC's is essentieel om de identiteit van de cellen te verifiëren door de expressie van specifieke membraanmarkers te beoordelen met behulp van methoden zoals immunofluorescentie en flowcytometrie13. De International Federation for Adipose Therapeutics and Science (IFATS) en de International Society for Cellular Therapy (ISCT) hebben gedefinieerd dat ASC's CD73, CD90 en CD105 uitdrukken, terwijl ze de expressie van CD11b, CD14, CD19, CD45 en HLA-DR14 missen. Deze markers, zowel positief als negatief, worden daarom als betrouwbaar beschouwd voor de karakterisering van ASC's.
Dit project was gericht op het beschrijven van een procedure voor de isolatie en identificatie van volwassen mesenchymale cellen geëxtraheerd uit het AT van ratten, omdat deze bron van cellen geen ethische uitdagingen met zich meebrengt, in tegenstelling tot embryonale stamcellen. Dit stolt de procedure als een haalbare optie vanwege de gemakkelijke toegang en de minimaal invasieve methode in vergelijking met van beenmerg afgeleide stamcellen. 
Mesenchymale cellen uit deze weefselbron spelen een belangrijke rol in de regeneratieve geneeskunde vanwege hun immunomodulerende mogelijkheden en lage immuunafstoting. Daarom is de huidige studie een fundamenteel onderdeel van toekomstig onderzoek naar hun secretoom en hun toepassing als regeneratieve therapie bij verschillende ziekten, waaronder metabole ziekten zoals diabetes.

```html
<table><tbody><tr><td>Amphotericin B</td><td>HyClone</td><td>SV30078.01</td><td></td></tr><tr><td>Analytical balance</td><td>Sartorius</td><td>AX224</td><td></td></tr><tr><td>Antibody anti- CD9 (C-4)</td><td>Santa Cruz</td><td>Sc-13118</td><td></td></tr><tr><td>Antibody anti-CD34 (C-18)</td><td>Santa Cruz</td><td>Sc-7045</td><td></td></tr><tr><td>Antibody anti-C63</td><td>Santa Cruz</td><td>Sc-5275</td><td></td></tr><tr><td>Antibody anti-Endoglin/CD105 (P3D1) Alexa Fluor 594 </td><td>Santa Cruz</td><td>Sc-18838A594</td><td></td></tr><tr><td>Antibody anti-CD31/PECM-1 Alexa Fluor 680</td><td>Santa Cruz</td><td>Sc-18916AF680</td><td></td></tr><tr><td>Antibody Goat anti-rabitt IgG (H+L) Cy3 </td><td>Novus</td><td>NB 120-6939</td><td></td></tr><tr><td>Antibody Donkey anti-goat IgG (H+L) DyLight 550 </td><td>Invitrogen</td><td>SA5-10087</td><td></td></tr><tr><td>Antibody anti-mouse IgG FITC conjugated goat F (ab&acute;)</td><td>RD Systems.</td><td>No. F103B</td><td></td></tr><tr><td>Bottle Top Filter Sterile</td><td>CORNING</td><td>10718003</td><td></td></tr><tr><td>Cell and Tissue Culture Flasks</td><td>BIOFIL</td><td>170718-312B</td><td></td></tr><tr><td>Cell Counter Bright-Line Hemacytometer with cell counting chamber slides</td><td>SIGMA Aldrich </td><td>Z359629</td><td></td></tr><tr><td>Cell wells: 6 well with Lid</td><td>CORNING</td><td>25810</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge conical tubes</td><td>HeTTICH</td><td>ROTANA460R</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge eppendorf tubes</td><td>Fischer Scientific</td><td>M0018242_44797</td><td></td></tr><tr><td>Collagen IV </td><td>Worthington</td><td>LS004186</td><td></td></tr><tr><td>Cryovial</td><td>SPL Life Science</td><td>43112</td><td></td></tr><tr><td>Culture tubes</td><td>Greiner Bio-One </td><td>191180</td><td></td></tr><tr><td>CytExpert 2.0</td><td>Beckman Coulter</td><td>Free version</td><td></td></tr><tr><td>CytoFlex LX cytometer</td><td>Beckman Coulter</td><td>FLOW-2463VID03.17</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>GIBCO</td><td>31600-034</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>SIGMA Aldrich</td><td> 67-68-5</td><td></td></tr><tr><td>DraQ7 Dye</td><td>Thermo Sc. </td><td>D15106</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>SIGMA Aldrich</td><td>60-00-4</td><td></td></tr><tr><td>Eosin yellowish</td><td>Hycel</td><td>300</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol 96%</td><td>Baker</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>Falcon tubes 15 mL</td><td>Greiner Bio-One </td><td>188271</td><td></td></tr><tr><td>Falcon tubes 50 mL</td><td>Greiner Bio-One </td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum </td><td>CORNING</td><td>35-010-CV</td><td></td></tr><tr><td>Gelatin</td><td>SIGMA Aldrich</td><td>128111163</td><td></td></tr><tr><td>Gentamicin</td><td>GIBCO</td><td>15750045</td><td></td></tr><tr><td>Glycerin-High Purity</td><td>Herschi Trading </td><td>56-81-5</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>AMRESCO </td><td>0701-25G</td><td></td></tr><tr><td>Heracell 240i CO2 Incubator </td><td>Thermo Sc.</td><td>50116047</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin Pet (Ketamine clorhidrate)</td><td>Aranda</td><td>SV057430</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamine </td><td>GIBCO/ Thermo Sc. </td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>LSM software Zen 2009 V5.5</td><td></td><td>Free version</td><td></td></tr><tr><td>Biological Safety Cabinet Class II</td><td>NuAire</td><td>12082100801</td><td></td></tr><tr><td>Epifluorescent microscope </td><td>Zeiss Axiovert 100M</td><td>21.0028.001</td><td></td></tr><tr><td>Inverted microscope </td><td>Olympus CK40</td><td>CK40-G100 </td><td></td></tr><tr><td>Non-essential amino acids 100X</td><td>GIBCO</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>Micro tubes 2 mL </td><td>Sarstedt </td><td>72695400</td><td></td></tr><tr><td>Micro tubes 1,5 mL</td><td>Sarstedt </td><td>72706400</td><td></td></tr><tr><td>Micropipettes 0.2-2 &mu;L</td><td>Finnpipette</td><td>E97743</td><td></td></tr><tr><td>Micropipettes 2-20 &mu;L</td><td>Finnpipette</td><td>F54167</td><td></td></tr><tr><td>Micropipettes 20-200 &mu;L</td><td>Finnpipette</td><td>G32419</td><td></td></tr><tr><td>Micropipettes 100-1000 &mu;L</td><td>Finnpipette</td><td>FJ39895</td><td></td></tr><tr><td>Nitrogen tank liquid</td><td>Taylor-Wharton</td><td>681-021-06</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>SIGMA Aldrich</td><td>SLBC3029V</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin / Streptomycin </td><td>GIBCO/ Thermo Sc. </td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Petri dish Cell culture</td><td>CORNING Inc</td><td>480167</td><td></td></tr><tr><td>Pipet Tips</td><td>Axygen Scientific</td><td>301-03-201</td><td></td></tr><tr><td>Pisabental (pentobarbital sodium)</td><td>PISA Agropecuaria</td><td>Q-7833-215</td><td></td></tr><tr><td>Potassium chloride </td><td>J.T.Baker</td><td>7447-40-7</td><td></td></tr><tr><td>Potassium Phosphate Dibasic</td><td>J.T Baker</td><td>2139900</td><td></td></tr><tr><td>S1 Pipette Fillers</td><td>Thermo Sc</td><td>9531</td><td></td></tr><tr><td>Serological pipette 5 mL</td><td>PYREX</td><td>L010005</td><td></td></tr><tr><td>Serological pipette 10 mL</td><td>PYREX</td><td>L010010</td><td></td></tr><tr><td>Sodium bicarbonate</td><td>J.T Baker</td><td>144-55-8</td><td></td></tr><tr><td>Sodium chloride </td><td>J.T.Baker</td><td>15368426</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Phosphate Dibasic Anhydrous</td><td>J.T Baker</td><td>7558-79-4</td><td></td></tr><tr><td>Sodium pyruvate</td><td>GIBCO BRL</td><td>11840-048</td><td></td></tr><tr><td>Syringe Filter Sterile</td><td>CORNING</td><td>431222</td><td></td></tr><tr><td>Spectrophotometer</td><td>PerkinElmer Lambda 25</td><td>L6020060</td><td></td></tr><tr><td>Titer plate shaker</td><td>LAB-LINE</td><td>1250</td><td></td></tr><tr><td>Transfer pipets</td><td>Samco/Thermo Sc</td><td>728NL</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue stain</td><td>GIBCO</td><td>1198566</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin From Porcine Pancreas</td><td>SIGMA Aldrich</td><td>102H0234</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>SIGMA Aldrich</td><td>9005-6

isolatie en identificatie van mesenchymale stamcellen afgeleid van vetweefsel van sprague dawley-ratten

Isolation and Identification of Mesenchymal Stem Cells Derived from Adipose Tissue of Sprague Dawley Rats

Volwassen mesenchymale cellen hebben de afgelopen decennia een revolutie teweeggebracht in de moleculaire en celbiologie. Ze kunnen differentiëren in verschillende gespecialiseerde celtypen, naast hun grote vermogen tot zelfvernieuwing, migratie en proliferatie. Vetweefsel is een van de minst invasieve en meest toegankelijke bronnen van mesenchymale cellen. Er is ook gemeld dat het hogere opbrengsten heeft in vergelijking met andere bronnen, evenals superieure immunomodulerende eigenschappen. Onlangs zijn verschillende procedures voor het verkrijgen van volwassen mesenchymale cellen uit verschillende weefselbronnen en diersoorten gepubliceerd. Na het evalueren van de criteria van sommige auteurs, hebben we een methodologie gestandaardiseerd die toepasbaar is voor verschillende doeleinden en gemakkelijk reproduceerbaar. Een pool van stromale vasculaire fractie (SVF) uit perirenaal en epididymaal vetweefsel stelde ons in staat om primaire culturen te ontwikkelen met optimale morfologie en functionaliteit. De cellen werden waargenomen die gedurende 24 uur aan het plastic oppervlak kleefden en vertoonden een fibroblastachtige morfologie, met verlengingen en een neiging om kolonies te vormen. Flowcytometrie (FC) en immunofluorescentie (IF) technieken werden gebruikt om de expressie van de membraanmarkers CD105, CD9, CD63, CD31 en CD34 te beoordelen. Het vermogen van van vetweefsel afgeleide stamcellen (ASC's) om te differentiëren in de adipogene afstamming werd ook beoordeeld met behulp van een cocktail van factoren (4 μM insuline, 0,5 mM 3-methyl-iso-butyl-xanthine en 1 μM dexamethason). Na 48 uur werd een geleidelijk verlies van fibroblastoïde morfologie waargenomen en na 12 dagen werd de aanwezigheid van lipidedruppeltjes positief voor olierode kleuring bevestigd. Samenvattend wordt een procedure voorgesteld om optimale en functionele ASC-culturen te verkrijgen voor toepassing in de regeneratieve geneeskunde.

Vetweefsel werd verkregen van volwassen Sprague Dawley-ratten van 3-4 maanden oud en met een lichaamsgewicht van 401 ± 41 g (geometrisch gemiddelde ± SD). Een gemiddelde waarde van 3,8 g epididymaal en perirenaal vetweefsel kwam overeen met de analyse van 15 experimentele extracties. Na 24 uur kweek bleven celpopulaties aan het plastische oppervlak kleven en vertoonden ze een heterogene morfologie. De eerste passage werd gerealiseerd na 8 ± 2 dagen, met een opbrengst van 1,4 ± 0,6 x 106 cellen in een totaal va...

Dit protocol beschrijft een methodologie voor het isoleren en identificeren van van vetweefsel afgeleide mesenchymale stamcellen (MSC's) van Sprague Dawley-ratten.

Isolatie en identificatie van mesenchymale stamcellen afgeleid van vetweefsel van Sprague Dawley-ratten

Adult mesenchymal cells have revolutionized molecular and cell biology in recent decades. They can differentiate into different specialized cell types, in ...

Mesenchymale stamcellen hebben een zeer brede rol in cellulaire communicatie vanwege hun paracriene functie. Dit protocol verkrijgt van vetweefsel afgeleide mesenchymale stamcellen met morfologische, immunofenotypische en adequate functionaliteit voor gebruik bij het bestuderen van therapieën voor pancreasregeneratie en diabetes. Er is een toenemend gebruik van celtherapieën bij de behandeling van diabetes.Deze therapieën omvatten allogene transplantaties van pancreascellen, autologe stamcel-afgeleide producten van insulineproducerende cellen en 3D-geprint pancreasweefsel met behulp van biologische inkten. Het meeste onderzoek bestudeerde voornamelijk de secretoomcomponenten en de rol in de regulatie van verschillende cellulaire processen. Nieuwe technieken zoals microarrays en next-generation sequencing kunnen de functie van miRNA's onderzoeken.Een uitdaging op dit gebied is om een grotere stimulatie van mesenchymale cellen te bereiken, een precieze moleculaire samenstelling in het secretoom te bereiken en het te richten op de behandeling van een specifieke aandoening. We zullen evalueren hoe miRNA's bijdragen aan degeneratie van pancreasweefsel blootgesteld aan oxidatieve stress. De studie omvat het gebruik van stamcellen uit vetweefsel.

isolation-identification-mesenchymal-stem-cells-derived-from-adipose

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

This video demonstrates a technique for isolating and culturing fluorescently labeled neural crest-derived adipose-derived stem cells (ADSCs) from murine periaortic arch adipose tissue. Following isolation, the NCADSCs are detected, sorted using fluorescence-activated cell sorting, and subsequently cultured on a plate, promoting cell proliferation.

Isolating Adipose-Derived Stem Cells from Murine Periaortic Adipose Tissue

Dit protocol beschrijft een isolatietechniek voor het verkrijgen van primaire long resident mesenchymale stromale cellen van ratten, door middel van enzymatische digestie, dichtheidsgradiënt scheiding plastic hechting en CD146 + magnetische bead selectie.

Isolatie van CD146<sup&gt; +</sup&gt; Resident Lung mesenchymale stromale cellen van Rat Longen

Dit protocol beschrijft de isolatie van varkens-vetafkomstige stamcellen (pADSC) uit subcutaan vetweefsel met onderzoek van multipotentie. De multipotente pADSC worden gebruikt om processen van adipocytendifferentiatie te bepalen en transdifferentiatie in meerdere cellijnen van mesodermaal mesenchym of verdere lijnen van ectoderm en endoderm te bestuderen voor regeneratieve onderzoeken.

Isolatie en differentiatie van vetcellen afgeleide stamcellen uit Porcine Onderhuids vetweefsel

Dit protocol biedt een enzym vrije methode voor het isoleren van mesenchymale stamcellen uit correctie-en lipoaspirate-monsters met behulp van een explant methode. De afwezigheid van harde enzymen of centrifugeer stappen voorziet in klinisch relevante stamcellen die kunnen worden gebruikt voor studies in vitro of teruggeplaatst naar de kliniek.

Een enzym vrije methode voor isolatie en uitbreiding van mesenchymale stamcellen van menselijke adipeus

In dit artikel beschrijven we isolatie van van resusapen afgeleide vetweefsel-afgeleide stamcellen (ADSC's) met behulp van een enzymatisch weefselverteringsprotocol. Vervolgens beschrijven we ADSC-proliferatie, waaronder celonthechting, tellen en plating. Ten slotte wordt ADSC-differentiatie beschreven met behulp van specifieke adipogene inducerende middelen. Daarnaast beschrijven we kleuringstechnieken om differentiatie te bevestigen.

Isolatie, proliferatie en differentiatie van rhesus makaken vet-afgeleide stamcellen

Vetweefsel-afgeleide mesenchymale stamcellen (Ad-MSC's) kunnen een potentiële bron zijn van MSC's die differentiëren in insulineproducerende cellen (IPC's). In dit protocol bieden we gedetailleerde stappen voor de isolatie en karakterisering van epididymale Ad-MSC's bij ratten, gevolgd door een eenvoudig, kort protocol voor het genereren van IPC's van dezelfde rat Ad-MSC's.

Isolatie van rat vetweefsel Mesenchymale stamcellen voor differentiatie in insulineproducerende cellen

Het vetweefsel is een uitstekende bron van mesenchymale stamcellen. Hier brengen we de stapsgewijze extractie, cultivatie en karakterisering van van vetweefsel afgeleide stamcellen (ADSC's) uit epididymaal vetweefsel van Zwitserse muizen.

Isolatie, in-vitro-expansie en karakterisering van mesenchymale stamcellen uit epididymaal vetweefsel van muizen

Hier presenteren we een standaardmethode om effectief stamcellen en adipocyten van vetweefsel te isoleren, gekenmerkt door &gt;90% vermindering van verwerkingstijd, hoge cellevensvatbaarheid en brede compatibiliteit.

Efficiënte isolatie van vetweefselstamcellen en adipocyten uit varkensvet vetweefsel

Dit protocol beschrijft de isolatie en de daaropvolgende expansie van mesenchymale stromale cellen en endotheelcellen kolonievormende cellen zonder het gebruik van dierlijke serum op autologe paren te genereren voor experimentele transplantatie doeleinden.

Isolatie en dierlijk serum vrije expansie van de mens navelstreng Afgeleid Mesenchymale stromale cellen (MSC&#39;s) en Endotheliale Colony Forming progenitor cellen (ECFCs)

Rat MSC's werden geïsoleerd uit dijbeen en dij-en vervolgens verrijkt door magnetische celsortering. Gesorteerde cellen werden bevestigd voor de expressie van de oppervlakte markers door flowcytometrie. Deze cellen werden ook gekweekt in klonale dichtheid aan enkele kolonies vormen en vervolgens deze kolonies werden van elkaar gescheiden door het klonen van cilinders.

Isolatie en Verrijking van Rat mesenchymale stamcellen (MSC&#39;s) en de scheiding van Single-kolonie Derived MSC&#39;s

Leer de isolatie en identificatie van mesenchymale stamcellen uit vetweefsel van Sprague Dawley-ratten. Deze methode ondersteunt onderzoek naar celtherapie voor pancreasregeneratie en diabetesbehandeling.

Isolatie en identificatie van mesenchymale stamcellen afgeleid van vetweefsel van Sprague Dawley-ratten

Meer video's verkennen