Name: Het kuikenembryobrein gebruiken als model voor in vivo en ex vivo analyses van menselijk glioblastoomcelgedrag (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 53 s
Description: Leer hoe kuikenembryobreinen dienen als model voor in vivo en ex vivo analyses van menselijk glioblastoomcelgedrag. Deze methode maakt real-time observatie van tumorinvasie en L1CAM-expressie mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gedeeltelijk gefinancierd door een subsidie aan D.S.G. van het National Cancer Institute (R03CA227312) en door een genereuze subsidie van de Lisa Dean Moseley Foundation. Levende GBM-monsters werden verkregen met toestemming van de patiënt via het Tissue Procurement Center van het Helen F. Graham Cancer Center and Research Institute. Financiering aan A.R. werd verstrekt door het National Center for Research Resources en het National Center for Advancing Translational Sciences, National Institutes of Health (UL1TR003107). Zomer undergraduate onderzoeksbeurzen aan N.P., A.L., Z.W. en K.S. werden verstrekt door het Undergraduate Research Program van de Universiteit van Delaware.

Het brein van kuikenembryo's gebruiken als model om het gedrag van menselijke glioblastoomcellen te bestuderen

<ol><li>Cretu, A., Fotos, J. S., Little, B. W., Galileo, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+and+rat+glioma+growth%2C+invasion%2C+and+vascularization+in+a+novel+chick+embryo+brain+tumor+model%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Human and rat glioma growth, invasion, and vascularization in a novel chick embryo brain tumor model.</a> Clinical & Experimental Metastasis. 22 (3), 225-236 (2005).</li>
<li>Yang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L1+stimulation+of+human+glioma+cell+motility+correlates+with+FAK+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuro-Oncology%22%5BJournal%5D)">L1 stimulation of human glioma cell motility correlates with FAK activation.</a> Journal of Neuro-Oncology. 105 (1), 27-44 (2011).</li>
<li>Mohanan, V., Temburni, M. K., Kappes, J. C., Galileo, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L1CAM+stimulates+glioma+cell+motility+and+proliferation+through+the+fibroblast+growth+factor+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">L1CAM stimulates glioma cell motility and proliferation through the fibroblast growth factor receptor.</a> Clinical & Experimental Metastasis. 30 (4), 507-520 (2013).</li>
<li>Anderson, H. J., Galileo, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small-molecule+inhibitors+of+FGFR%2C+integrins+and+FAK+selectively+decrease+L1CAM-stimulated+glioblastoma+cell+motility+and+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Oncology%22%5BJournal%5D)">Small-molecule inhibitors of FGFR, integrins and FAK selectively decrease L1CAM-stimulated glioblastoma cell motility and proliferation.</a> Cellular Oncology. 39 (3), 229-242 (2016).</li>
<li>Pace, K. R., Dutt, R., Galileo, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosomal+L1CAM+stimulates+glioblastoma+cell+motility%2C+proliferation%2C+and+invasiveness%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Exosomal L1CAM stimulates glioblastoma cell motility, proliferation, and invasiveness.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (16), 3982(2019).</li>
<li>Stoppini, L., Buchs, P. A., Muller, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+organotypic+cultures+of+nervous+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple method for organotypic cultures of nervous tissue.</a> Journal of Neuroscience Methods. 37 (2), 173-182 (1991).</li>
<li>Ohnishi, T., Matsumura, H., Izumoto, S., Hiraga, S., Hayakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+model+of+glioma+cell+invasion+using+organotypic+brain+slice+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">A novel model of glioma cell invasion using organotypic brain slice culture.</a> Cancer Research. 58 (14), 2935-2940 (1998).</li>
<li>Humpel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+brain+slice+cultures%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Organotypic brain slice cultures: A review.</a> Neuroscience. 305, 86-98 (2015).</li>
<li>Aaberg-Jessen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasion+of+primary+glioma-+and+cell+line-derived+spheroids+implanted+into+corticostriatal+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Clinical+and+Experimental+Pathology%22%5BJournal%5D)">Invasion of primary glioma- and cell line-derived spheroids implanted into corticostriatal slice cultures.</a> International Journal of Clinical and Experimental Pathology. 6 (4), 546-560 (2013).</li>
<li>Matsumura, H., Ohnishi, T., Kanemura, Y., Maruno, M., Yoshimine, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+glioma+cell+invasion+by+confocal+laser+scanning+microscopy+in+a+novel+brain+slice+model%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of glioma cell invasion by confocal laser scanning microscopy in a novel brain slice model.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 269 (2), 513-520 (2000).</li>
<li>Ren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasion+and+anti-invasion+research+of+glioma+cells+in+an+improved+model+of+organotypic+brain+slice+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Tumori%22%5BJournal%5D)">Invasion and anti-invasion research of glioma cells in an improved model of organotypic brain slice culture.</a> Tumori. 101 (4), 390-397 (2015).</li>
<li>Fayzullin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-lapse+phenotyping+of+invasive+glioma+cells+ex+vivo+reveals+subtype-specific+movement+patterns+guided+by+tumor+core+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Time-lapse phenotyping of invasive glioma cells ex vivo reveals subtype-specific movement patterns guided by tumor core signaling.</a> Experimental Cell Research. 349 (2), 199-213 (2016).</li>
<li>Jensen, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+characterization+of+a+tumor+stem+cell-based+glioblastoma+invasion+model%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Establishment and characterization of a tumor stem cell-based glioblastoma invasion model.</a> PloS One. 11 (7), e0158746(2016).</li>
<li>Marques-Torrejon, M. A., Gangoso, E., Pollard, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+glioblastoma+tumour-host+cell+interactions+using+adult+brain+organotypic+slice+co-culture%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Modelling glioblastoma tumour-host cell interactions using adult brain organotypic slice co-culture.</a> Disease Models & Mechanisms. 11 (2), 031435(2018).</li>
<li>Tamura, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+spatiotemporal+dynamics+of+human+glioma+stem+cell+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Brain%22%5BJournal%5D)">Visualization of spatiotemporal dynamics of human glioma stem cell invasion.</a> Molecular Brain. 12 (1), 45(2019).</li>
<li>Yang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+slice+culture+based+on+in+ovo+electroporation+for+chicken+embryonic+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+and+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Organotypic slice culture based on in ovo electroporation for chicken embryonic central nervous system.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23 (3), 1813-1826 (2019).</li>
<li>Murrell, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+of+multipotent+stem+cells+from+the+adult+human+brain%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Expansion of multipotent stem cells from the adult human brain.</a> PloS One. 8 (8), e71334(2013).</li>
<li>Fotos, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+time-lapse+microscopy+and+high-resolution+tracking+of+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotechnology%22%5BJournal%5D)">Automated time-lapse microscopy and high-resolution tracking of cell migration.</a> Cytotechnology. 51 (1), 7-19 (2006).</li>
<li>Tufan, A. C., Akdogan, I., Adiguzel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shell-less+culture+of+the+chick+embryo+as+a+model+system+in+the+study+of+developmental+neurobiology%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroanatomy%22%5BJournal%5D)">Shell-less culture of the chick embryo as a model system in the study of developmental neurobiology.</a> Neuroanatomy. 3 (1), 8-11 (2004).</li>
<li>Shoin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chick+embryo+assay+as+chemosensitivity+test+for+malignant+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Japanese+Journal+of+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Chick embryo assay as chemosensitivity test for malignant glioma.</a> Japanese Journal of Cancer Research. 82 (10), 1165-1170 (1991).</li>
<li>Hagedorn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accessing+key+steps+of+human+tumor+progression+in+vivo+by+using+an+avian+embryo+model%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Accessing key steps of human tumor progression in vivo by using an avian embryo model.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 102 (5), 1643-1648 (2005).</li>
<li>Balciūniene, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histology+of+human+glioblastoma+transplanted+on+chicken+chorioallantoic+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Medicina%22%5BJournal%5D)">Histology of human glioblastoma transplanted on chicken chorioallantoic membrane.</a> Medicina. 45 (2), 123-131 (2009).</li>
<li>De Magalhães, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+a+new+In+vivo+tumor+spheroid+based+shell-less+chorioallantoic+membrane+3-D+model+in+bioengineering+research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Science+and+Engineering%22%5BJournal%5D)">Applications of a new In vivo tumor spheroid based shell-less chorioallantoic membrane 3-D model in bioengineering research.</a> Journal of Biomedical Science and Engineering. 3 (1), 20-26 (2010).</li>
<li>Szmidt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphology+of+human+glioblastoma+model+cultured+in+ovo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Morphology of human glioblastoma model cultured in ovo.</a> Journal of Veterinary Research. 56 (2), 261-266 (2012).</li>
<li>Jaworski, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+tumor+morphology+and+structure+from+U87+and+U118+glioma+cells+cultured+on+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Comparison of tumor morphology and structure from U87 and U118 glioma cells cultured on chicken embryo chorioallantoic membrane.</a> Journal of Veterinary Research. 57 (4), 593-598 (2013).</li>
<li>Yuan, Y. J., Xu, K., Wu, W., Luo, Q., Yu, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+the+chick+embryo+chorioallantoic+membrane+in+neurosurgery+disease%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Medical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Application of the chick embryo chorioallantoic membrane in neurosurgery disease.</a> International Journal of Medical Sciences. 11 (12), 1275-1281 (2014).</li>
<li>Urbańska, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+silver+nanoparticles+%28AgNPs%29+on+proliferation+and+apoptosis+of+in+ovo+cultured+glioblastoma+multiforme+%28GBM%29+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale+Research+Letters%22%5BJournal%5D)">The effect of silver nanoparticles (AgNPs) on proliferation and apoptosis of in ovo cultured glioblastoma multiforme (GBM) cells.</a> Nanoscale Research Letters. 10, 98(2015).</li>
<li>DeBord, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chick+chorioallantoic+membrane+%28CAM%29+as+a+versatile+patient-derived+xenograft+%28PDX%29+platform+for+precision+medicine+and+preclinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">The chick chorioallantoic membrane (CAM) as a versatile patient-derived xenograft (PDX) platform for precision medicine and preclinical research.</a> American Journal of Cancer Research. 8 (8), 1642-1660 (2018).</li>
<li>Han, J. M., Jung, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+anticancer+effect+of+a+combination+of+berbamine+and+arcyriaflavin+A+against+glioblastoma+stem-like+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Synergistic anticancer effect of a combination of berbamine and arcyriaflavin A against glioblastoma stem-like cells.</a> Molecules. 27 (22), 7968(2022).</li>
<li>Ruiz-Ontañon, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+plasticity+confers+migratory+and+invasive+advantages+to+a+population+of+glioblastoma-initiating+cells+that+infiltrate+peritumoral+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Cellular plasticity confers migratory and invasive advantages to a population of glioblastoma-initiating cells that infiltrate peritumoral tissue.</a> Stem Cells. 31 (6), 1075-1085 (2013).</li>
<li>Cage, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+patterns+of+human+medulloblastoma+dissemination+in+the+developing+chick+embryo+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Distinct patterns of human medulloblastoma dissemination in the developing chick embryo nervous system.</a> Clinical & Experimental Metastasis. 29 (4), 371-380 (2012).</li>
<li>Darrigues, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biobanked+glioblastoma+patient-derived+organoids+as+a+precision+medicine+model+to+study+inhibition+of+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Biobanked glioblastoma patient-derived organoids as a precision medicine model to study inhibition of invasion.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (19), 10720(2021).</li>
</ol>

Geen van de auteurs heeft belangenconflicten.

Kritieke stappen in het protocol voor de injectie van cellen in de ventrikel van de middenhersenen (optisch tectum) omvatten het niet beschadigen van de bloedvaten in het chorioallantoïsche membraan in het ei of rond het embryo voor en tijdens de injectie, hoewel het amnionmembraan onmiddellijk rond het embryo voorzichtig kan worden getrokken en vastgehouden om het hoofd te positioneren bij het injecteren van de cellen in de middenhersenen. Het amnion is relatief taai en kan met een fijne tang worden getrokken om het hoofd te positioneren en stabiel te houden met één hand, voor de injectie van cellen met de andere hand in het optische tectum, de grote, ronde structuur in het midden van de hersenen. Over het algemeen varieert de levensvatbaarheid van geïnjecteerde embryo's van 25% tot 75%, afhankelijk van onbekende factoren, en vrijwel elk embryo dat overleeft, bevat ten minste een kleine tumor in het optische tectum. Kritieke stappen bij het genereren van levensvatbare hersenplakken omvatten het vlekken van het weefsel van overtollige vloeistof, zodat de agarose zich tijdens het snijden aan de hersenen hecht en om weefsel en plakjes koud te houden totdat ze op het membraan worden geplaatst. Omdat verschillende celtypen sferoïden verschillend vormen (in snelheid en grootte), moeten de vergulde celdichtheid op poly-HEMA-platen en de tijdsduur voor het oogsten van sferoïden voor elk celtype worden geoptimaliseerd.
Het werk hier is niet onderworpen aan een formele longitudinale studie van de levensvatbaarheid van hersenschijven. Yang et al. gebruikten kuikenembryo hersenschijfculturen vergelijkbaar met de hier gebruikte culturen en toonden een goede levensvatbaarheid van de plakjes gedurende ten minste 7 dagen16. Eerder werk toonde aan dat wanneer OT-weefsel in suboptimale media werd bewaard, veel pyknotische kernen in het weefsel verschenen, die niet voorkwamen in de plakjes in het werk hier. Bovendien, wanneer plakjes degenereren in suboptimale omstandigheden, fragmenteren de bloedvaten en verschijnen ze als rijen laminine-positieve bolletjes (niet weergegeven). Hoewel de levensvatbaarheid hier dus niet is gecontroleerd met methoden zoals elektrofysiologie of actieve caspase-3-expressie, verscheen hier geen van de indicatoren van celdood die werden gezien onder suboptimale kweekomstandigheden.
De OT is gericht op in vivo hersentumorexperimenten omdat het het gemakkelijkst geïnjecteerde gebied is met de grootste ventrikel. Op E5, de laatste dag dat het embryo klein genoeg is om boven op de dooier toegankelijk te blijven, moeten injecties in een ventrikel worden gemaakt, omdat alle hersengebieden niets meer zijn dan een dunne ventriculaire zone. Niettemin resulteren deze injecties met succes in ingebedde tumoren met cellen die het hersenparenchym binnendringen. Soms worden resulterende tumoren gevonden in de voorhersenen of het cerebellum, maar dit komt niet vaak voor. Ex vivo plakjes E15 optisch tectum zijn hier voornamelijk gebruikt voor experimenten, zodat de ex vivo co-cultuur resultaten kunnen worden gecorreleerd met de in vivo injectie-experimenten. Voorhersenenplakken zijn echter ook geschikt en hebben een groter oppervlak en een zeer dunne ventrikel in vergelijking met het optische tectum, waardoor de voorhersenen meer geschikt kunnen zijn voor ex vivo co-culturen die niet worden gecorreleerd met in vivo injecties.
Hier is aangetoond dat in vivo injecties, gevolgd door weefselfixatie, vibrerende weefselsnijderssecties en immunostaining voor laminine en andere markers, resulteerden in hogeresolutiebeelden van GBM-cellen en GSC's in hersenweefsel in de nabijheid van bloedvaten. De mogelijkheid om de onderlinge relaties tussen tumorcellen en bloedvaten te bepalen, werd aanzienlijk vergemakkelijkt door 3D-volumeweergaven te maken van z-stapels confocale optische secties met behulp van de confocale software en de instructies van de fabrikant. Time-lapse beeldvorming met behulp van widefield fluorescentiemicroscopie van GFP-, mCherry- en DiD-gelabelde cellen was mogelijk; migrerende cellen die zich in de nabijheid van de zeer fluorescerende sferoïden bevonden, werden echter soms verduisterd door de "gloed" van de sferoïde. Dit ongewenste effect kan enigszins worden geminimaliseerd door de belichtingstijden voor het verzamelen van widefield-afbeeldingen zorgvuldig aan te passen. Time-lapse beeldvorming met behulp van confocale z-stacks in de loop van de tijd (4D) elimineerde de onscherpe gloed van de sferoïden en resulteerde in scherp gedefinieerde migrerende cellen met een donkere achtergrond. Dit werd niet beschreven in het protocol, maar werd op dezelfde manier uitgevoerd als widefield time-lapse imaging, die werd uitgevoerd terwijl hersenplakken zich op de transparante membraaninzetstukken in een 6-well plastic plaat bevonden. Hoewel confocale time-lapse beeldvorming resulteert in duidelijk duidelijkere beelden van individuele cellen en hun gedrag, is een multi-point time-lapse experiment dat z-stacks van 10 z-vlakken / punt verzamelt, met intervallen van 10 minuten over een periode van 20 uur, een uitgebreid gebruik van de scankopgalvanometers. Omdat dit de levensduur van de galvanometers aanzienlijk zou kunnen verkorten, wordt deze methode oordeelkundig gebruikt.
Hoewel het kuikenembryosysteem zeer geschikt is voor zowel in vivo injectie als ex vivo co-cultuur experimenten die GBM celgedrag onderzoeken, zijn er verschillende beperkingen aan dit modelsysteem. Zoals met elk xenograftsysteem, is de omgeving waarin menselijke cellen worden geïmplanteerd niet het menselijk brein, maar GBM-celgedrag lijkt dat na te bootsen in knaagdiermodellen en bij menselijke patiënten. Na het uitvoeren van in vivo injectie-experimenten op E5, worden tumoren normaal gesproken gedurende 10 dagen gevormd, tot E15. Dit is duidelijk niet genoeg tijd om alle aspecten van tumorigenese en celinvasie te bestuderen. Het is hier echter aangetoond dat solide tumoren zich vormen in het hersenparenchym, cellen interageren en zich herschikken binnen de tumor, en significante herseninvasie vindt zowel langs bloedvaten als diffuus plaats binnen deze relatief korte periode. Een andere beperking van het in vivo kuikenembryosysteem is dat het niet geschikt is voor medicamenteuze of andere behandelingen vanwege de grote dooier en de extra-embryonale bloedsomloop die werkt tijdens de ontwikkeling van kuikenembryo's. Topische vloeibare medicamenteuze behandelingen zouden resulteren in een zeer variabele en onbekende concentratie in de hersenen als gevolg van diffusie weg van het embryo in de veel grotere dooiermassa. Evenzo zou intraveneuze injectie van geneesmiddelen in de zeer delicate extra-embryonale bloedsomloop lekken of diffunderen uit de bloedvaten en ook resulteren in onbekende concentraties in de hersenen. Dit is een van de belangrijkste redenen dat de ex vivo slice culture-methode werd aangenomen - zodat niet alleen celgedrag kon worden waargenomen en gevolgd via time-lapse-microscopie, maar ook zodat behandelingen die succesvol zijn geweest in het veranderen van GBM-celgedrag in een schaal4 konden worden getest in een meer relevante hersenweefselomgeving.
De ontwikkeling van het orthotopische hersentumormodelsysteem van het kuikenembryo wordt gezien als een belangrijke aanvulling op de systemen en hulpmiddelen die beschikbaar zijn voor de studie van GBM-tumorvorming en invasief celgedrag. Bevruchte kippeneieren zijn waarschijnlijk gemakkelijk beschikbaar in de meeste gebieden, ze zijn goedkoop in vergelijking met knaagdieren, er zijn geen kosten voor dierverzorging, de embryo's zijn zeer veerkrachtig en resistent tegen infecties (d.w.z. het meeste werk wordt gedaan op een bench), de embryo's zijn zeer manipuleerbaar en kunnen worden gekweekt in schaalloze cultuur19, en kuikenembryo's worden niet beschouwd als gewervelde dieren en vereisen dus geen IACUC-goedkeuring door NIH-richtlijnen (institutionele vereisten kan variëren). Deze meervoudige voordelen maken het kuikenembryosysteem dus zeer aantrekkelijk als men hun vragen en experimenten beperkt tot die welke binnen zijn beperkingen vallen. Meerdere GBM-celstudies zijn uitgevoerd door anderen met behulp van het kuikenembryo, maar deze hebben bijna uitsluitend het chorioallantoïsche membraan (CAM) van het embryo 20,21,22,23,24,25,26,27,28,29 en ledemaatknop 30 gebruikt, en niet de hersenen. Er is ook een rapport geweest dat medulloblastoom implanteert in de kuikenhersenen op E231. Ongetwijfeld zou het gebruik van het kuikenembryo als een orthotopisch xenograft-modelsysteem, zoals hier beschreven, resultaten moeten opleveren die veel zinvoller zijn voor de menselijke GBM-tumorbiologie dan studies met behulp van de CAM.
Hoewel deze studies pas zijn begonnen om het kuikenembryo hersentumormodelsysteem volledig te gebruiken voor studies van menselijk GBM-cel- en GSC-gedrag, wordt gehoopt dat anderen het gebruik zullen uitbreiden en verdere potentiële toepassingen zullen vinden. Men zou zich kunnen voorstellen dat dit systeem niet alleen mechanismen zal blootleggen die GBM-tumorvorming en celgedrag reguleren, maar ook preklinisch testen van specifieke geneesmiddelen en stoffen op de cellen van specifieke patiënten mogelijk zal maken. Als bijvoorbeeld hersenschijfculturen van tevoren waren opgezet, konden tumorcellen, stukjes van chirurgische tumorresecties of van de patiënt afgeleide GBM-organoïden32 direct in ex vivo co-cultuur worden geplaatst en konden verschillende behandelingen binnen enkele dagen worden beoordeeld. Evenzo kunnen gedissocieerde patiëntcellen rechtstreeks in E5-middenhersenen in ovo worden geïnjecteerd om hun vermogen om tumoren te vormen en hersenparenchym binnen te dringen te beoordelen. Daarom wordt gehoopt dat de beschrijvingen van de methoden en representatieve resultaten hier het toegenomen gebruik van dit zeer onderbenutte systeem voor onderzoek naar hersenkanker zullen vergemakkelijken en aanmoedigen.

In vitro studies van kankercelgedrag worden vaak gebruikt om potentiële mechanismen te ontleden die werken tijdens het meer complexe gedrag dat wordt waargenomen tijdens tumorvorming en celinvasie in in vivo xenograftmodellen. Bijvoorbeeld, met glioblastoom (GBM), hebben in vitro studies mechanismen blootgelegd van hoe L1CAM mogelijk werkt tijdens tumorvorming en herseninvasie in een nieuw kuikenembryo xenograft hersentumormodel 1,2,3,4,5. Hoewel in vitro en in vivo experimenten elkaar op nuttige manieren aanvullen, laten ze een aanzienlijke kloof achter in hoe de resultaten kunnen worden gecorreleerd. Mechanistische analyses van GBM-celmotiliteit op een schaal zijn bijvoorbeeld een zeer kunstmatige situatie, en in vivo xenograftmodellen kunnen alleen statische tijdpunt- of eindpuntanalyses van tumorvorming en celgedrag onthullen. In vivo studies met knaagdieren of kuikenembryo's lenen zich niet gemakkelijk voor het monitoren van celgedrag, terwijl de cellen hersenweefsel binnendringen in deze xenograftmodellen. Niettemin heeft het xenograftmodel van het kuikenembryo aangetoond dat het adhesie-eiwit L1CAM een stimulerende rol speelt in het invasieve vermogen van menselijke T98G GBM-cellen 2,5.
Een geschikte oplossing voor dit probleem kan worden bereikt door zowel in vivo als in vitro methoden te overbruggen met behulp van een organotypisch hersenschijfcultuurmodel, een ex vivo model genoemd. In dit ex vivo model kan levend hersenweefsel tot een paar weken op een dikte van enkele honderden micron worden gehouden, waardoor het mogelijk is om kankercellen te implanteren, hun gedrag in het werkelijke weefsel in de loop van de tijd te observeren en vervolgens een meer gedetailleerde markeranalyse uit te voeren op het eindpunt van het experiment.
Een populaire organotypische plakkweekmethode is geweest om een enkele honderden micron dikke hersenschijf bovenop een doorschijnend of transparant poreus membraan te kweken, waardoor het weefsel wordt blootgesteld aan lucht, maar voedingsmedia het weefsel van onder het membraan kunnen ondersteunen (zie Stoppini et al.6). Verschillende variaties van deze methode zijn gebruikt voor verschillende studies, waaronder het gebruik van verschillende media of verschillende membraaninzetstukken. Verschillende membraaninzetstukken omvatten een 30 mm diameter, poreuze (0,4 μm) membraaninzetstukken in een 35 mm kweekschal6, en celkweekinzetstukken (0,4 μm) voor 6-putplaten7. Verschillende media omvatten 50% MEM / HEPES + 25% warmte-geïnactiveerd paardenserum + 25% Hanks gebalanceerde zoutoplossing (HBSS)8, 50% gereduceerde serummedia + 25% paardenserum + 25% HBSS9, evenals andere. Als een doorschijnend of transparant membraan wordt gebruikt samen met fluorescerend gelabelde GBM-cellen, kunnen dergelijke culturen van onderaf worden afgebeeld met behulp van een omgekeerde widefield- of confocale fluorescentiemicroscoop 10,11,12,13,14,15.
Hoewel veel in vivo orthotopische hersentumor xenograft en ex vivo organotypische hersenschijfcultuurmodellen zijn vastgesteld met behulp van knaagdieren, zoals hierboven aangehaald, is het kuikenembryo (Gallus gallus) onderbenut voor deze doeleinden. Er is echter aangetoond dat het kuikenembryo kan worden gebruikt als een in vivo orthotopisch xenograftmodel voor de studie van zowel menselijke als rattenglioominvasie 1,2,5. Xenogetransplanteerde cellen in kuikenembryohersenen hebben invasiepatronen vertoond die vergelijkbaar zijn met die waargenomen in knaagdiermodellen, wat het gebruik van kuikenembryo's als een in vivo model voor GBM-tumorcelanalyse verder ondersteunt. Kuikenembryo's zijn ook goedkoop, kunnen gemakkelijker worden onderhouden dan knaagdieren (d.w.z. in hun eierschalen in een laboratoriumincubator) en zijn veel gemakkelijker om mee te werken, waardoor ze een aantrekkelijke optie zijn voor kortdurende in vivo GBM-studies. Een recent artikel heeft het gebruik van kuikenembryo hersenschijfculturen beschreven voor de vorming en groei van axonen tijdens de normale hersenontwikkeling waarbij de plakjes gedurende ten minste 7 dagen levensvatbaar waren16. Het gebruik van dergelijke kuikenembryo-hersenschijfculturen voor ex vivo analyse van GBM-celgedrag in een weefselomgeving ontbreekt echter. In dit artikel worden zowel de transplantatie van menselijke GBM-cellen en GBM-stamcellen (GSC's) in het vroege kuikenembryobrein in vivo, als de introductie van GBM-cellen op levende kuikenembryo-hersenschijfculturen ex vivo beschreven. Enkele representatieve voorbeelden van de resulterende tumoren en celinvasiepatronen verkregen uit deze preparaten worden ook gegeven.

<table><tbody><tr><td>1 cm x 1 cm square hole paper punch</td><td>Birabira</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>1 mm biopsy punch pen</td><td>Robbins Instruments</td><td>20335</td><td></td></tr><tr><td>6 well insert plate (Corning Transwell)</td><td>Millipore Sigma</td><td>CLS3450</td><td></td></tr><tr><td>9" Disposable Pasteur Pipets</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-20C</td><td></td></tr><tr><td>15 mL centrifuge tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-539-12</td><td></td></tr><tr><td>24 well plate</td><td>Corning Costar</td><td>3526</td><td></td></tr><tr><td>50 mL centrifuge tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-539-9</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Fisher BioReagents</td><td>BP1423-500</td><td>voor het inbedden van gefixeerde hersenen</td></tr><tr><td>Alexafluor 488-conjugated GAM IgG</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>115-605-146</td><td></td></tr><tr><td>Alexafluor 647-conjugated GAM IgG</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>115-545-146</td><td></td></tr><tr><td>Aluminiumfolie</td><td>ReynoldsWrap</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Ampicillin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A-9518</td><td></td></tr><tr><td>anti-integrin alpha-6 monoklonaal antilichaam GOH3</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-19622</td><td></td></tr><tr><td>anti-L1CAM monoklonaal antilichaam UJ127</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-53386</td><td></td></tr><tr><td>anti-laminine monoklonaal antilichaam</td><td>Developmental Studies Hybridoma Bank</td><td>3H11</td><td></td></tr><tr><td>anti-nestin monoklonaal antilichaam 10c2</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-23927</td><td></td></tr><tr><td>anti-Sox2 monoklonaal antilichaam E-4</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-365823</td><td></td></tr><tr><td>B27 supplement zonder vitamine A</td><td>GIBCO</td><td>17504-044</td><td></td></tr><tr><td>bisbenzimide (Hoechst 33258)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B2883</td><td>nucleair kleurmiddel</td></tr><tr><td>Celkweekincubator</td><td>Forma</td><td></td><td>standaard bevochtigde CO2 incubator</td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Beckman Coulter</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Confocale microscoop</td><td>Nikon Instruments</td><td>C2si+</td><td>Met op maat gemaakte cell incubator kamer</td></tr><tr><td>Confocale microscoop objectieven</td><td>Nikon Instruments</td><td></td><td>Plan Apo lenzen, behalve S Plan Fluor ELWD 20x 0.45 NA objectieflens voor confocale time-lapse beeldvorming</td></tr><tr><td>Confocale microscoop software</td><td>Nikon Instruments</td><td>NIS Elements</td><td>Versie 5.2</td></tr><tr><td>Gebogen pincet</td><td>World Precision Intruments</td><td>504478</td><td></td></tr><tr><td>Gebogen schaar</td><td>Fine Science Tools</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gebogen spatel</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-375-20</td><td></td></tr><tr><td>Cyanoacrylaatlijm</td><td>Krazy Glue</td><td>KG-585 12R</td><td></td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>Millipore Sigma</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>DiD ver rood fluorescent kleurmiddel</td><td>Invitrogen</td><td>V22887</td><td>Vybrant DiD</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D5671</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D8437</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D4540</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5493-1L</td><td></td></tr><tr><td>Eierincubator</td><td>Humidaire</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Elektrisch plakband (10 mil dik/254 &micro;m)</td><td>Scotch</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol 200 proof</td><td>Decon Laboratories</td><td>2701</td><td></td></tr><tr><td>Fast green FCF kleurstof</td><td>Avocado Research Chemicals</td><td>16520</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Gemini Bio-products</td><td>900-108</td><td></td></tr><tr><td>Filterpapier</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gaas</td><td>Dynarex</td><td>3353</td><td></td></tr><tr><td>Glas capillaire buizen voor microinjectie</td><td>World Precision Instruments</td><td>TW100-4</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Fisher BioReagents</td><td>BP228-1</td><td>voor montagemedia</td></tr><tr><td>GSC's (menselijke glioblastoom stamcellen)</td><td>Niet van toepassing</td><td></td><td>Geïsoleerd uit patiënt GBM-specimens in Galileo laboratorium in GSC media en vervolgens getransduceerd met een GFP coderende lentivirale vector.&nbsp; Cellen die werden gebruikt waren tussen passage 10 en 30.</td></tr><tr><td>Hanks Balanced Salt Solution (HBSS)</td><td>Corning</td><td>21-020-CV</td><td></td></tr><tr><td>Hemacytometer</td><td>Hausser scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heparine</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2524-100</td><td></td></tr><tr><td>HEPES buffer</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H0887</td><td></td></tr><tr><td>Paarden serum (HI)</td><td>Gibco</td><td>26050-088</td><td></td></tr><tr><td>Human FGF-2</td><td>BioVision</td><td>4037-1000</td><td></td></tr><tr><td>Human TGF-&alpha;</td><td>BioVision</td><td>4339-1000</td><td></td></tr><tr><td>Inverteerde fase contrast microscoop</td><td>Nikon Instruments</td><td>TMS</td><td>voor routinematige observatie van gekweekte cellen</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP366</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Fisher Scientific</td><td>P284</td><td></td></tr><tr><td>Laboratoriumfolie</td><td>Parafilm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Labquake Shaker</td><td>LabIndustries</td><td>T400-110</td><td></td></tr><tr><td>L-Glut:Pen:Strep</td><td>Gemini Bio-products</td><td>400-110</td><td></td></tr><tr><td>Low-melt agarose</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1360</td><td>voor het inbedden van levende hersenen</td></tr><tr><td>Matrix</td><td>Corning Matrigel</td><td>354234</td><td></td></tr><tr><td>Medium 199</td><td>GIBCO</td><td>11150-059</td><td></td></tr><tr><td>MEM</td><td>Corning</td><td>10-010-CV</td><td></td></tr><tr><td>Metaal vibratome blok</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Micropipet tippen (20, 200, 1,000 &micro;L)</td><td>Fisherbrand</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Micropipetten (20, 200, 1,000 &micro;L)</td><td>Gilson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscoopdekglas (nr. 1.5 dikte)</td><td>Fisherbrand</td><td>12544A</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>S271</td><td></td></tr><tr><td>NaH2PO4 + H2O</td><td>Fisher Scientific</td><td>S369</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP328</td><td></td></tr><tr><td>Normaal geiten

het kuikenembryobrein gebruiken als model voor in vivo en ex vivo analyses van menselijk glioblastoomcelgedrag

Using the Chick Embryo Brain as a Model for In Vivo and Ex Vivo Analyses of Human Glioblastoma Cell Behavior

Het kuikenembryo is een ideaal modelsysteem geweest voor de studie van de ontwikkeling van gewervelde dieren, met name voor experimentele manipulaties. Het gebruik van het kuikenembryo is uitgebreid voor het bestuderen van de vorming van menselijk glioblastoom (GBM) hersentumoren in vivo en de invasiviteit van tumorcellen in het omliggende hersenweefsel. GBM-tumoren kunnen worden gevormd door injectie van een suspensie van fluorescerend gelabelde cellen in de E5-middenhersenen (optisch tectum) ventrikel in ovo. 
Afhankelijk van de GBM-cellen vormen zich willekeurig compacte tumoren in de ventrikel en in de hersenwand en dringen groepen cellen het hersenwandweefsel binnen. Dikke weefselsecties (350 μm) van vaste E15-tecta met tumoren kunnen immunogekleurd worden om te onthullen dat binnendringende cellen vaak langs bloedvaten migreren wanneer ze worden geanalyseerd door 3D-reconstructie van confocale z-stackbeelden. Levende E15 middenhersenen en voorhersenen plakjes (250-350 μm) kunnen worden gekweekt op membraaninzetstukken, waar fluorescerend gelabelde GBM-cellen kunnen worden geïntroduceerd op niet-willekeurige locaties om ex vivo co-culturen te bieden om celinvasie te analyseren, die ook langs bloedvaten kan optreden, gedurende een periode van ongeveer 1 week. Deze ex vivo co-culturen kunnen worden gevolgd door widefield of confocale fluorescentie time-lapse microscopie om het gedrag van levende cellen te observeren. 
Co-gekweekte plakjes kunnen vervolgens worden gefixeerd, immunogekleurd en geanalyseerd door confocale microscopie om te bepalen of de invasie al dan niet plaatsvond langs bloedvaten of axonen. Bovendien kan het co-cultuursysteem worden gebruikt voor het onderzoeken van potentiële cel-celinteracties door aggregaten van verschillende celtypen en kleuren op verschillende precieze locaties te plaatsen en celbewegingen te observeren. Medicamenteuze behandelingen kunnen worden uitgevoerd op ex vivo culturen, terwijl deze behandelingen niet compatibel zijn met het in ovo-systeem . Deze twee complementaire benaderingen maken gedetailleerde en nauwkeurige analyses mogelijk van menselijk GBM-celgedrag en tumorvorming in een zeer manipuleerbare gewervelde hersenomgeving.

Kuikenembryo's worden gebruikt voor het bestuderen van menselijke glioblastoom (GBM) hersentumoren in ovo en in ex vivo hersenschijfcoculturen. GBM-celgedrag kan worden geregistreerd door time-lapse-microscopie in ex vivo co-culturen en beide preparaten kunnen op het experimentele eindpunt worden geanalyseerd door gedetailleerde 3D-confocale analyse.

Het kuikenembryobrein gebruiken als model voor in vivo en ex vivo analyses van menselijk glioblastoomcelgedrag

The chick embryo has been an ideal model system for the study of vertebrate development, particularly for experimental manipulations. Use of the chick ...

De reikwijdte van ons onderzoek is om te proberen mechanismen te ontdekken die de verspreiding van glioblastoomcellen in hersenweefsel bevorderen. Specifieke vragen draaien om verschillen in glioblastoomceltypen of -toestanden en moleculaire mechanismen die ervoor zorgen dat deze cellen zeer invasief zijn. Hoe bevordert L1CAM-expressie bijvoorbeeld invasiviteit?Zowel in vitro als in vivo modellen zijn onvoldoende voor het nauwkeurig analyseren van glioblastoom celgedrag. In vitro modellen wijzigen en oversimplificeren vrijwel zeker in vivo celgedrag. Terwijl in vivo modellen geen gemakkelijke observatie van gedrag mogelijk maken wanneer ze zich voordoen, maken ze in plaats daarvan analyses mogelijk nadat het gedrag zich heeft voorgedaan.We hebben aangetoond dat het kuikenembryobrein een goed model is voor het bestuderen van het gedrag van menselijke hersenkankercellen, zowel in vivo als in ex-vivo plakculturen. We hebben ook vastgesteld dat L1CAM-expressie door glioblastoomcellen diepgaande effecten kan hebben op celproliferatie, invasie en rangschikking in de tumor. Naast verschillende voordelen van het gebruik van kuikenembryo's, introduceert ons ex-vivo sferoïde protocol cellen op levende plakjes zonder extra schade, terwijl andere methoden voor celintroductie het doorboren van het weefsel en het implanteren van cellen omvatten.Bovendien maakt het protocol live time-lapse-beeldvorming mogelijk die in vivo technieken niet mogelijk maken. Onze bevindingen suggereren dat het kuikenembryo een goed model is voor kankeronderzoek, met name hersenkanker, en uiterst gunstig is voor de wetenschappelijke gemeenschap, omdat het veel gemakkelijker beschikbaar is voor diegenen die misschien niet over de fondsen, faciliteiten of expertise voor knaagdiermodellen beschikken. We zullen ons blijven richten op moleculaire mechanismen die de invasiviteit van glioblastoomcellen in hersenweefsel regelen, met name langs bloedvaten.Een andere cruciale vraag is of glioblastoomstamcellen een duidelijk en stabiel fenotype zijn of een functionele toestand die kan worden aangenomen wanneer dat nodig is. Dat heeft enorme gevolgen voor behandelingen.

using-chick-embryo-brain-as-model-for-vivo-ex-vivo-analyses-human

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Fenotypisch wild-type astrocyten en neurale stamcellen die zijn geoogst uit muizen die zijn gemodificeerd met gefloxte, conditionele oncogeen allelen en getransformeerd via virale Cre-gemedieerde recombinatie, kunnen worden gebruikt om de pathogenese van astrocytomen in vitro en in vivo te modelleren door orthotopische injectie van getransformeerde cellen in hersenen van syngene, immuuncompetente nestgenoten.

Modeling Astrocytoom Pathogenese In Vitro En In Vivo Met behulp van corticale Astrocyten of neurale stamcellen uit Conditional, genetisch gemanipuleerde muizen

Dit werk beschrijft de ontwikkeling van flexibele interdigitated elektroden voor implementatie in 3D hersentumormodellen, namelijk in vitro cultuur, in ovo model en in vivo murine  model. De voorgestelde methode kan worden gebruikt om de effecten van gepulseerde elektrische velden op tumoren op verschillende niveaus van complexiteit te evalueren.

Flexibele organische elektronische apparaten voor gepulseerde elektrische veldtherapie van glioblastoom

Hier beschrijven we een preklinisch orthotopisch muismodel voor GBM, vastgesteld door intracraniële injectie van cellen afgeleid van genetisch gemanipuleerde muismodeltumoren. Dit model toont de ziektekenmerken van menselijke GBM. Voor translationele studies wordt de hersentumor van de muis gevolgd door in vivo MRI en histopathologie.

Translationele orthotopische modellen van glioblastoom multiforme

Om een ​​snelle evaluatie van de functie van genen in de ontwikkeling van cerebrale cortex voeren beschrijven we werkwijzen...

Methoden voor Studie van Neuronale Morphogenesis:<em&gt; Ex vivo</em&gt; RNAi Elektroporatie in Embryonale Murine Cerebral Cortex

Wordt een techniek beschreven voor het in grote lijnen het openen van de bloed-hersen barrière in de muis met behulp van microbellen en ultrageluid. Met deze techniek kan mangaan worden toegediend aan de hersenen van muizen. Omdat mangaan is een MRI-contrastmiddel dat zich ophoopt in gedepolariseerd neuronen, deze aanpak maakt beeldvorming van neuronale activiteit.

Functionele neuroimaging Met behulp van ultrasone bloed-hersen barrière verstoring en mangaan-enhanced MRI

Dit artikel beschrijft een werkwijze waarbij men kunnen...

Ex vivo kweken van Whole, Het ontwikkelen van Drosophila Brains

Hier ontwikkelen we de instrumenten die nodig zijn voor...

Ex vivo Live-Imaging van Single Cell Divisies in Muis neuroepithelium

Optogenetica is een krachtig hulpmiddel geworden voor gebruik in gedragsneurowetenschappelijke experimenten. Dit protocol biedt een stapsgewijze handleiding voor het ontwerp en de installatie van lasersystemen en biedt een volledig protocol voor het uitvoeren van meerdere en gelijktijdige in vivo optogenetische stimulaties die compatibel zijn met de meeste gedragstestparadigma's bij knaagdieren.

In vivo optogenetische Stimulatie van de knaagdieren centrale zenuwstelsel

We beschrijven een protocol voor in vivo markering van olfactorische sensorische neuronen door middel van elektroporatie en vervolgens confocale laser-scanning of multifotonmicroscopie om de neuronale morfologie en de ontwikkeling ervan in de loop van de tijd te visualiseren.

Het olfactorisch systeem als model om axonale groeipatronen en morfologie Bestudeer In Vivo

In deze video, beschrijven we een werkwijze voor het implanteren van een chronische optische beeldvorming kamer via dorsale ruggenmerg van een levende muis. De kamer, chirurgische ingreep, en chronische beeldvorming worden beoordeeld en aangetoond.

Een procedure voor het implanteren van een Spinal Kamer voor Longitudinaal In Vivo Beeldvorming van de Muis Spinal Cord

Leer hoe kuikenembryobreinen dienen als model voor in vivo en ex vivo analyses van menselijk glioblastoomcelgedrag. Deze methode maakt real-time observatie van tumorinvasie en L1CAM-expressie mogelijk.

Het kuikenembryobrein gebruiken als model voor in vivo en ex vivo analyses van menselijk glioblastoomcelgedrag

Meer video's verkennen