Name: Primaire cultuur van stamcellen van tandpulpa (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-05T13:50:00.000+00:00
Duration: 3 min 45 s
Description: Leer de explantcultuurmethode voor het isoleren van tandpulpa-stamcellen (DPCs) voor weefselregeneratieonderzoek. Deze techniek levert een homogene celpopulatie voor regeneratieve therapieën en gepersonaliseerde geneeskunde.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We erkennen de financiële steun aan AK van het Department of Health Research (DHR), ICMR, Govt. van India (DHR-NRI Grant # R.12015/01/2022-HR). SR heeft financiering ontvangen van ICMR, Govt. van India (Grant # 2020-7593/SCR-BMS) en PS heeft een fellowship ontvangen van CSIR, Govt. van India. We zijn ook dankbaar voor mevrouw Sandhya Tokhi en mevrouw Bhupinder Kaur voor hun hulp bij flowcytometrie, en Central Advanced Instrumentation Core (CSIC) en PGIMER, Chandigarh voor het bieden van infrastructurele ondersteuning.

Totstandbrenging van de primaire cultuur van stamcellen van tandpulpa

<ol><li>Bhattacharyya, S., Kumar, A., Lal Khanduja, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+voyage+of+stem+cell+toward+terminal+differentiation%3A+a+brief+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biochimica+et+Biophysica+Sinica%22%5BJournal%5D)">The voyage of stem cell toward terminal differentiation: a brief overview.</a> Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 44 (6), 463-475 (2012).</li>
<li>Prentice, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Adult stem cells.</a> Circulation Research. 124 (6), 837-839 (2019).</li>
<li>Raik, S., Kumar, A., Bhattacharyya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+into+cell-free+therapeutic+approach%3A+Role+of+stem+cell+%26%2334%3Bsoup-ernatant%26%2334%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+and+Applied+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Insights into cell-free therapeutic approach: Role of stem cell &#34;soup-ernatant&#34.</a> Biotechnology and Applied Biochemistry. 65 (2), 104-118 (2018).</li>
<li>Rodriguez-Fuentes, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+current+clinical+applications%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Medical+Research%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells current clinical applications: a systematic review.</a> Archives of Medical Research. 52 (1), 93-101 (2021).</li>
<li>Yamazaki, K., Kawabori, M., Seki, T., Houkin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+trials+of+stem+cell+treatment+for+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Clinical trials of stem cell treatment for spinal cord injury.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (11), 3994(2020).</li>
<li>Kumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+spectrum+of+secretome+regulates+the+relative+hepatogenic+potential+of+mesenchymal+stem+cells+from+bone+marrow+and+dental+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Molecular spectrum of secretome regulates the relative hepatogenic potential of mesenchymal stem cells from bone marrow and dental tissue.</a> Scientific Reports. 7 (1), 15015(2017).</li>
<li>Kumar, A., Kumar, V., Rattan, V., Jha, V., Bhattacharyya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secretome+cues+modulate+the+neurogenic+potential+of+bone+marrow+and+dental+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Secretome cues modulate the neurogenic potential of bone marrow and dental stem cells.</a> Molecular Neurobiology. 54 (6), 4672-4682 (2017).</li>
<li>Kumar, A., Kumar, V., Rattan, V., Jha, V., Bhattacharyya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secretome+proteins+regulate+comparative+osteogenic+and+adipogenic+potential+in+bone+marrow+and+dental+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimie%22%5BJournal%5D)">Secretome proteins regulate comparative osteogenic and adipogenic potential in bone marrow and dental stem cells.</a> Biochimie. 155, 129-139 (2018).</li>
<li>Kumar, A., Bhattacharyya, S., Rattan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+uncontrolled+freezing+on+biological+characteristics+of+human+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Bank%22%5BJournal%5D)">Effect of uncontrolled freezing on biological characteristics of human dental pulp stem cells.</a> Cell Tissue Bank. 16 (4), 513-522 (2015).</li>
<li>Raik, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+post-thaw+quality+of+dental+mesenchymal+stromal+cells+after+long-term+cryopreservation+by+uncontrolled+freezing%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Biochemistry+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Assessment of post-thaw quality of dental mesenchymal stromal cells after long-term cryopreservation by uncontrolled freezing.</a> Applied Biochemistry and Biotechnology. 191 (2), 728-743 (2020).</li>
<li>Gronthos, S., Mankani, M., Brahim, J., Robey, P. G., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+human+dental+pulp+stem+cells+%28DPSCs%29+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 97 (25), 13625-13630 (2000).</li>
<li>Tsutsui, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cells%3A+advances+to+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+and+Cloning%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cells: advances to applications.</a> Stem Cells and Cloning. 13, 33-42 (2020).</li>
<li>Huang, G. T. -J., Gronthos, S., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+derived+from+dental+tissues+vs.+those+from+other+sources%3A+their+biology+and+role+in+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells derived from dental tissues vs. those from other sources: their biology and role in regenerative medicine.</a> Journal of Dental Research. 88 (9), 792-806 (2009).</li>
<li>La Noce, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cells%3A+state+of+the+art+and+suggestions+for+a+true+translation+of+research+into+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dentistry%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cells: state of the art and suggestions for a true translation of research into therapy.</a> Journal of Dentistry. 42 (7), 761-768 (2014).</li>
<li>Xiao, L., Tsutsui, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+human+dental+pulp+cells-derived+spheroids+in+serum-free+medium%3A+stem+cells+in+the+core%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Characterization of human dental pulp cells-derived spheroids in serum-free medium: stem cells in the core.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 114 (11), 2624-2636 (2013).</li>
<li>Kumar, A., Yun, H., Funderburgh, M. L., Du, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerative+therapy+for+the+cornea%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Regenerative therapy for the cornea.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 87, 101011(2022).</li>
<li>Gandia, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+dental+pulp+stem+cells+improve+left+ventricular+function%2C+induce+angiogenesis%2C+and+reduce+infarct+size+in+rats+with+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Human dental pulp stem cells improve left ventricular function, induce angiogenesis, and reduce infarct size in rats with acute myocardial infarction.</a> Stem Cells. 26 (3), 638-645 (2008).</li>
<li>Yong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+angiogenic+ability+between+SHED+and+DPSC+in+a+mice+model+with+critical+limb+ischemic%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+and+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparison of the angiogenic ability between SHED and DPSC in a mice model with critical limb ischemic.</a> Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 19 (4), 861-870 (2022).</li>
<li>Zhang, X. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+potential+of+dental+pulp+stem+cell+transplantation+in+a+rat+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regeneration+Research%22%5BJournal%5D)">Therapeutic potential of dental pulp stem cell transplantation in a rat model of Alzheimer's disease.</a> Neural Regeneration Research. 16 (5), 893-898 (2021).</li>
<li>Kabir, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imperative+role+of+dental+pulp+stem+cells+in+regenerative+therapies%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Nigerian+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Imperative role of dental pulp stem cells in regenerative therapies: a systematic review.</a> Nigerian Journal of Surgery. 20 (1), 1-8 (2014).</li>
<li>Kumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cell+secretome+ameliorates+d-galactose+induced+accelerated+aging+in+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biochemistry+and+Function%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cell secretome ameliorates d-galactose induced accelerated aging in rat model.</a> Cell Biochemistry and Function. 40 (5), 535-545 (2022).</li>
<li>Hirata, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multifaceted+therapeutic+benefits+of+factors+derived+from+dental+pulp+stem+cells+for+mouse+liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Multifaceted therapeutic benefits of factors derived from dental pulp stem cells for mouse liver fibrosis.</a> Stem Cells Translational Medicine. 5 (10), 1416-1424 (2016).</li>
<li>Fujii, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((regeneration+by+human+dental+pulp+stem+cells+using+a+helioxanthin+derivative+and+cell-sheet+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">regeneration by human dental pulp stem cells using a helioxanthin derivative and cell-sheet technology.</a> Stem Cell Research & Therapy. 9 (1), 24(2018).</li>
<li>Ferrua, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+has+dental+pulp+stem+cells+isolation+been+conducted%3F+A+scoping+review%5BTitle%5D)+AND+%22Brazilian+Oral+Research%22%5BJournal%5D)">How has dental pulp stem cells isolation been conducted? A scoping review.</a> Brazilian Oral Research. 31, e87(2017).</li>
<li>Pilbauerova, N., Soukup, T., Suchankova Kleplova, T., Suchanek, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzymatic+isolation%2C+amplification+and+characterization+of+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Folia+Biologica%22%5BJournal%5D)">Enzymatic isolation, amplification and characterization of dental pulp stem cells.</a> Folia Biologica. 65 (3), 124-133 (2019).</li>
<li>Tatullo, M., Marrelli, M., Shakesheff, K. M., White, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cells%3A+function%2C+isolation+and+applications+in+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Tissue+Engineering+and+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cells: function, isolation and applications in regenerative medicine.</a> Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 9 (11), 1205-1216 (2015).</li>
<li>Hilkens, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+isolation+methodology+on+stem+cell+properties+and+multilineage+differentiation+potential+of+human+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Effect of isolation methodology on stem cell properties and multilineage differentiation potential of human dental pulp stem cells.</a> Cell and Tissue Research. 353 (1), 65-78 (2013).</li>
<li>Hendijani, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Explant+culture%3A+An+advantageous+method+for+isolation+of+mesenchymal+stem+cells+from+human+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Proliferation%22%5BJournal%5D)">Explant culture: An advantageous method for isolation of mesenchymal stem cells from human tissues.</a> Cell Proliferation. 50 (2), e12334(2017).</li>
<li>Aryal Ac, S., Islam, M. S., Samsudin, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+the+effect+of+a+time+delay+on+the+characteristics+and+survival+of+dental+pulp+stem+cells+from+extracted+teeth%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Investigation of the effect of a time delay on the characteristics and survival of dental pulp stem cells from extracted teeth.</a> Archives of Oral Biology. 119, 104896(2020).</li>
<li>Langenbach, F., Handschel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+dexamethasone%2C+ascorbic+acid+and+%CE%B2-glycerophosphate+on+the+osteogenic+differentiation+of+stem+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Effects of dexamethasone, ascorbic acid and β-glycerophosphate on the osteogenic differentiation of stem cells in vitro.</a> Stem Cell Research & Therapy. 4, 117(2013).</li>
<li>Jaiswal, N., Haynesworth, S. E., Caplan, A. I., Bruder, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteogenic+differentiation+of+purified%2C+culture-expanded+human+mesenchymal+stem+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Osteogenic differentiation of purified, culture-expanded human mesenchymal stem cells in vitro.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 64 (2), 295-312 (1997).</li>
<li>Bernar, A., Gebetsberger, J. V., Bauer, M., Streif, W., Schirmer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+alizarin+red+S+assay+by+enhancing+mineralization+of+osteoblasts%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Optimization of the alizarin red S assay by enhancing mineralization of osteoblasts.</a> International Journal of Molecular Sciences. 24 (1), 723(2022).</li>
<li>Coe, C. L., Lubach, G. R., Schneider, M. L., Dierschke, D. J., Ershler, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+rearing+conditions+alter+immune+responses+in+the+developing+infant+primate%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Early rearing conditions alter immune responses in the developing infant primate.</a> Pediatrics. 90, 505-509 (1992).</li>
<li>Bakopoulou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+impact+of+two+different+isolation+methods+on+the+osteo%2Fodontogenic+differentiation+potential+of+human+dental+stem+cells+derived+from+deciduous+teeth%5BTitle%5D)+AND+%22Calcified+Tissue+International%22%5BJournal%5D)">Assessment of the impact of two different isolation methods on the osteo/odontogenic differentiation potential of human dental stem cells derived from deciduous teeth.</a> Calcified Tissue International. 88 (2), 130-141 (2011).</li>
<li>Arthur, A., Rychkov, G., Shi, S., Koblar, S. A., Gronthos, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+human+dental+pulp+stem+cells+differentiate+toward+functionally+active+neurons+under+appropriate+environmental+cues%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Adult human dental pulp stem cells differentiate toward functionally active neurons under appropriate environmental cues.</a> Stem Cells. 26 (7), 1787-1795 (2008).</li>
<li>Kim, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoblastic%2Fcementoblastic+and+neural+differentiation+of+dental+stem+cells+and+their+applications+to+tissue+engineering+and+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+B%2C+Reviews%22%5BJournal%5D)">Osteoblastic/cementoblastic and neural differentiation of dental stem cells and their applications to tissue engineering and regenerative medicine.</a> Tissue Engineering. Part B, Reviews. 18 (3), 235-244 (2012).</li>
<li>Ge, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distal+C+terminus+of+CaV1.2+channels+plays+a+crucial+role+in+the+neural+differentiation+of+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Distal C terminus of CaV1.2 channels plays a crucial role in the neural differentiation of dental pulp stem cells.</a> PLoS One. 8 (11), e81332(2013).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat er geen sprake is van financiële of niet-financiële belangenconflicten.

Stamcellen hebben de hoop gevestigd op het genezen van tal van ziekten, vanwege hun plasticiteit, robuustheid, immunomodulerende eigenschappen, paracriene mechanismen en homing-efficiëntie. Tandpulpweefsel wordt beschouwd als de krachtigste en meest waardevolle bron van stamcellen, met een uitstekende plasticiteit en een regeneratief vermogen. Hier demonstreren we de isolatie van DPSC's, met behulp van de algemeen aanvaarde explantatiecultuurmethode, waarbij de cellen migreren van stukjes pulpweefsel of explantaten om ui...

Volwassen stamcellen zijn vanwege hun plasticiteit, paracriene mechanismen en immunomodulerende eigenschappen uitgegroeid tot een krachtig therapeutisch hulpmiddel voor celgerichte behandelingen en therapieën1,2,3. De bemoedigende gegevens van op stamcellen gebaseerde preklinische studies hebben onderzoekers geïnspireerd om te werken voor de vertaling van bank naar bed. Het type stamcellen dat wordt gebruikt voor stamceltherapie speelt een belangrijke rol bij succesvolle resultaten. In preklinische en klinische studies blijft de meest gerapporteerde bron voor mesenchymale stamcellen (MSC's) beenmerg 4,5. Grote nadelen van het gebruik van beenmerg-afgeleide stamcellen (BMSC's) zijn echter hun zeldzame populatie, zeer invasieve procedures voor isolatie en hun beperkte vermogen om uit te breiden. Daarom wordt gekeken naar alternatieve bronnen van MSC's. In dit opzicht worden tandweefsels, met hun gemakkelijke toegankelijkheid, enorme plasticiteit, hoog regeneratief potentieel en hoge proliferatieve vermogen, nu beschouwd als een rijke en potentiële alternatieve bron van stamcellen 6,7,8,9,10.
Tandpulpstamcellen (DPSC's) waren het eerste type tandheelkundige stamcellen dat in 2000 door Gronthos werd geïsoleerd en gekarakteriseerd11. DPSC's hebben de aandacht getrokken voor weefselmanipulatietoepassingen vanwege hun hoge proliferatiesnelheid, aanzienlijk differentiatiepotentieel, gemakkelijke toegankelijkheid met moeiteloze kweek en, belangrijker nog, hun vermogen om zonder enige ethische zorg uit een afgedankte tand te worden verkregen12. De beperkingen van andere stamcelbronnen, zoals BMSC's en van vet afgeleide stamcellen (ADSC's), in hun isolatie en ontoereikende zelfvernieuwingscapaciteiten, worden omzeild door DPSC's13. Menselijke DPSC's kunnen worden verkregen uit menselijke melktanden, blijvende tanden, verstandskiezen, geëxfolieerde melktanden (SHED's) en apicale papillen. Bovendien kunnen DPSC's ook worden geïsoleerd uit overtollige tanden, die over het algemeen worden weggegooid14. DPSC's brengen neurale top-geassocieerde markers tot expressie en hebben het potentieel om zowel in vitro als in vivo te differentiëren tot neuronale cellen 15. Naast hun neurogene potentieel kunnen DPSC's differentiëren in andere cellijnen, zoals osteogene, chondrogene, adipogeen, hetische en myogeen, wanneer ze specifieke differentiatievoorwaarden krijgen13. Deze multipotente cellen hebben dus een groot potentieel voor celgebaseerde therapie en kunnen worden gebruikt voor de regeneratie van verschillende weefsels. Studies hebben ook de mogelijke rol van DPSC's gerapporteerd bij de reconstructie van het hoornvlies16, herstel van een hartinfarct17 en hun potentiële therapeutische rol bij ziekten zoals ischemie van ledematen18, de ziekte van Alzheimer 19, de ziekte van Parkinson 20 en verouderingvan 21. Daarom kunnen van tandweefsel afgeleide stamcellen niet alleen worden gebruikt voor tandregeneratie, maar ook voor het herstel en de regeneratie van niet-tandheelkundige organen zoals ogen16, harten17, levers22, botten23 enz.
Er zijn twee specifieke methoden voor de isolatie van een MSC-populatie uit pulpaweefsel - enzymatische vertering en explantatiecultuur24,25. Succesvolle vestiging van primaire culturen zonder enig significant verschil in de hoeveelheid en eigenschappen van DPSC's zijn gerapporteerd door beide methoden26. In deze studie hebben we ons gericht op de isolatie van DPSC's door de explantatiemethode27, aangezien deze methode DPSC's genereert zonder contaminatie van hematopoëtische en endotheelcellen, in vergelijking met enzymatische vertering die kan leiden tot fibroblastcontaminatie28.

<table><tbody><tr><td>6 well cell culture plate</td><td>Costar</td><td>3516</td><td>Voor celcultuur</td></tr><tr><td>Alcian blue stain</td><td>EZstain chondrocyte staining kit, HiMedia</td><td>CCK029</td><td></td></tr><tr><td>alizarin red S stain</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>TMS-008</td><td>Osteogeen vlek</td></tr><tr><td>Antibiotic cocktail</td><td>Himedia</td><td>A002-5X50ML</td><td>Om cultuurbesmetting te voorkomen</td></tr><tr><td>Ascorbic Acid</td><td>Himedia</td><td>TC094-25G</td><td>Chondrogeen inductie</td></tr><tr><td>B27 supplement</td><td>Gibco</td><td>17504044</td><td>Voor neurale inductie</td></tr><tr><td>bFGF ( basic Fibroblast Growth Factor)</td><td>Gibco</td><td>PHG0024</td><td>Voor neurale inductie</td></tr><tr><td>CD 105</td><td>BD-Pharmingen</td><td>560839</td><td></td></tr><tr><td>CD 35</td><td>Biolegend</td><td>343604</td><td></td></tr><tr><td>CD 45</td><td>Biolegend</td><td>304006</td><td></td></tr><tr><td>CD 73</td><td>Biolegend</td><td>344016</td><td></td></tr><tr><td>CD 90</td><td>Biolegend</td><td>328107</td><td>Karakterisatie</td></tr><tr><td>cetyl pyridinium chloride (CPC)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1104006</td><td>Voor Alizarin Red extractie</td></tr><tr><td>Dexamethasone 21-phosphate disodium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D1159-100MG</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate Buffered Saline</td><td>Himedia</td><td>TS1006-5L</td><td>Voor wasdoeleinden</td></tr><tr><td>EGF (Epidermal Growth Factor)</td><td>Gibco</td><td>PHG0311</td><td>Voor hepatische en neurale inductie</td></tr><tr><td>EVOS LED microscope</td><td>Invitrogen</td><td></td><td>Voor fluorescentie beeldvorming</td></tr><tr><td>EZ stain Chondrocyte staining kit</td><td>Himedia</td><td>CCK029-1KT</td><td>Chondro vlek Kit</td></tr><tr><td>FACS Canto flow cytometer</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td>Voor cel karakterisatie</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Gibco</td><td>16000044</td><td>Voor primaire cultuur</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F2442</td><td>Voor celcultuur</td></tr><tr><td>G5 supplement</td><td>Gibco</td><td>17503012</td><td>Voor neurale inductie</td></tr><tr><td>HGF( Hepatocyte Growth Factor)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1404</td><td>Voor hepatische inductie</td></tr><tr><td>HLA-DR</td><td>Biolegend</td><td>307605</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;Human TGF-&beta;3</td><td>Peprotech</td><td>#100-36E-10U</td><td></td></tr><tr><td>Insulin-Transferrin-Selenous acid premix</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I3146</td><td>Voor hepatische inductie</td></tr><tr><td>ITS premix</td><td>Corning</td><td>354350</td><td></td></tr><tr><td>LDL Uptake Assay kit</td><td>Abcam</td><td>ab133127</td><td>Voor hepatische karakterisering</td></tr><tr><td>Low glucose DMEM</td><td>Gibco</td><td>11885-084</td><td>Voor hepatische inductie</td></tr><tr><td>MAP2 antibody</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M4403</td><td>Voor neurale karakterisering</td></tr><tr><td>N2 supplement</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td>Voor neurale inductie</td></tr><tr><td>Neural Basal Media</td><td>Gibco</td><td>21103049</td><td>Voor neurale inductie</td></tr><tr><td>NFM antibody</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N4142</td><td>Voor neurale karakterisering</td></tr><tr><td>Nikon Elipse TS100 microscope</td><td>Nikon</td><td></td><td>Voor fluorescentie beeldvorming</td></tr><tr><td>Oil Red O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>01391-250Ml</td><td>Adipogeen vlek</td></tr><tr><td>Oncostatin M</td><td>R&amp;D Systems</td><td>295-OM-010/CF</td><td>Voor hepatische inductie</td></tr><tr><td>Petridish</td><td>Tarson</td><td>460090-90MM</td><td>Voor weefsel snijden</td></tr><tr><td>Potassium phosphate monobasic</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>15655-100G</td><td>Osteogeen inductie</td></tr><tr><td>Propan-2-ol</td><td>Thermo Fisher</td><td>Q13827</td><td>Voor Oil Red O extractie</td></tr><tr><td>Sodium pyruvate solution</td><td>Sigma life sciences</td><td>S8636-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T4049</td><td>Voor celpassage</td></tr><tr><td>Whatman filter paper</td><td>merck</td><td>WHA1001325</td><td>filterpapier</td></tr><tr><td>&alpha;- Minimum Essential Media (&alpha;-MEM)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M0643-10X 1L</td><td>Media voor primaire cultuur</td></tr><tr><td>&beta;-glycerophosphate disodium salt hydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G9422-50G</td><td></td></tr></tbody></table>

primaire cultuur van stamcellen van tandpulpa

Primary Culture of Dental Pulp Stem Cells

De menselijke tandpulp vertegenwoordigt een veelbelovend multipotent stamcelreservoir met een vooraanstaande regeneratieve competentie dat kan worden geoogst uit een geëxtraheerde tand. De van de neurale top afgeleide ecto-mesenchymale oorsprong van tandpulpstamcellen (DPSC's) verleent een hoge mate van plasticiteit die te danken is aan de veelzijdige voordelen bij weefselherstel en regeneratie. Er zijn verschillende praktische manieren om volwassen stamcellen te oogsten, te onderhouden en te prolifereren die worden onderzocht voor hun gebruik in de regeneratieve geneeskunde. In dit werk demonstreren we de oprichting van een primaire mesenchymale stamcelcultuur uit tandweefsel door middel van de explantatiecultuurmethode. De geïsoleerde cellen hadden de vorm van een spoel en hechtten zich aan het plastic oppervlak van de kweekplaat. De fenotypische karakterisering van deze stamcellen vertoonde een positieve expressie van de door de International Society of Cell Therapy (ISCT) aanbevolen celoppervlaktemarkers voor MSC, zoals CD90, CD73 en CD105. Verder bevestigde een verwaarloosbare expressie van hematopoëtische (CD45) en endotheliale markers (CD34), en minder dan 2% expressie van HLA-DR-markers, de homogeniteit en zuiverheid van de DPSC-culturen. We illustreerden hun multipotentie verder op basis van differentiatie in adipogene, osteogene en chondrogene afstammingslijnen. We hebben deze cellen ook geïnduceerd om te differentiëren in leverachtige en neuronale-achtige cellen door overeenkomstige stimulatiemedia toe te voegen. Dit geoptimaliseerde protocol zal helpen bij het kweken van een zeer uitbreidbare populatie mesenchymale stamcellen die in het laboratorium of voor preklinische studies kunnen worden gebruikt. Vergelijkbare protocollen kunnen worden opgenomen in klinische opstellingen voor het beoefenen van DPSC-gebaseerde behandelingen.

Hier beschrijven we hoe onderzoekers een zuivere cultuur van DPSC's kunnen opzetten via de explantatiemethode 6,7,8,9,10 en ze in de richting van meerdere afstammingslijnen kunnen induceren om de zuiverheid van de cultuur voor stroomafwaartse toepassingen vast te stellen.
We hebben een primaire cultuur van DPSC's opgezet ui...

Dit artikel biedt een stapsgewijze handleiding voor het opzetten van een primaire cultuur van stamcellen van tandpulp met behulp van de explantatiecultuurmethode en karakterisering van deze cellen op basis van ICSCRT-richtlijnen. De cellen die door dit protocol worden geïsoleerd, kunnen worden beschouwd als mesenchymale stamcellen voor verdere toepassingen.

Primaire cultuur van stamcellen van tandpulpa

The human dental pulp represents a promising multipotent stem cell reservoir with pre-eminent regenerative competence that can be harvested from an ...

We onderzoeken het potentieel van DPSC's in celgebaseerde en celvrije toepassingen voor ziektemodellen, terwijl we de cellulaire en moleculaire mechanismen bestuderen die betrokken zijn bij weefselregeneratie. Daarnaast onderzoeken we de rol van van stamcellen afgeleide secretoire factoren bij het beheersen van het lot van stamcellen en het bevorderen van weefselregeneratie. Onze huidige focus ligt op het gebruik van 3D-kweektechnieken om een beter begrip te krijgen van moleculaire mechanismen, genetische en epigenetische veranderingen die verband houden met weefselregeneratie.We integreren geavanceerde technieken zoals next-gen sequencing, RNA-sequencing en chipsequencing om regulerende domeinen te ontrafelen die verschillende cellulaire processen beheersen. Met behulp van explantatiemethoden om DPSC te isoleren, kan een homogene stamcelpopulatie efficiënt worden geoogst, vrij van andere cellen zoals endotheel en pericyten. Deze celtypen blijven in de celcultuur wanneer DPSC's worden vastgesteld met behulp van enzymatische procedures.Ons onderzoek met behulp van DPSC's als cellulair model voor het screenen van geneesmiddelen en weefselregeneratie kan nieuwe therapieën en geavanceerde gepersonaliseerde geneeskunde ontwikkelen en verstrekkende implicaties hebben voor regeneratieve geneeskunde, waaronder craniofaciale reconstructie en in vivo botregeneratie na tandextractie. We onderzoeken momenteel hoe DPSC's kunnen worden gebruikt om botdefecten aan te pakken, zoals lange bot- en calvariale defecten. Daarnaast onderzoeken we de mogelijke therapeutische implicaties van secretoire moleculen afgeleid van DPSC's in verschillende ziektemodellen, waaronder neurodegeneratie en glaucoom.

primary-culture-of-dental-pulp-stem-cells

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

De werkwijze beschreven isolatie en karakterisering van menselijke pulpa stamcellen (hDPSCs) door...

Isolatie, karakterisering en vergelijkende differentiatie van humane Dental Pulp stamcellen uit permanente tanden met behulp van twee verschillende methoden

Wij bieden protocollen voor evaluatie van mesenchymale stamcellen van tandmerg geïsoleerd en prostaatkanker cel interacties op basis van directe en indirecte co kweekmethoden. Voorwaarde medium en trans-well membranen zijn geschikt voor het analyseren van indirecte paracrine activiteit. Zaaien differentieel is gekleurd cellen samen een passend model voor directe cel-cel interactie.

Mesenchymale stamcellen isolatie uit Pulp weefsel en co cultuur met kankercellen te bestuderen van hun interacties

Hier presenteren we een protocol voor menselijke tandheelkundige Pulp stamcellen isolatie en vermeerdering teneinde het prion-eiwit expressie tijdens neuronale differentiatie.

Isolatie, vermeerdering en Prion eiwituitdrukking tijdens neuronale differentiatie van stamcellen van menselijke tandmerg

Dit protocol legt de nadruk op de extractie, kweek en conservering van multipotente stamcellen uit tandpulp door middel van enzymatische vergisting. Bovendien toont het hun potentieel aan om te differentiëren in osteoblasten, adipocyten en chondrocyten, wat het belang van precisie en consistentie in het proces benadrukt.

Isolatie, cultuur en karakterisering van stamcellen van tandpulp uit menselijke loof- en permanente tanden

Dit protocol laat zien hoe het behoud van gezonde, ongedifferentieerde menselijke embryonale stamcellen (ES) cellen.

Cultuur en onderhoud van menselijke embryonale stamcellen

Primaire hepatocyten een waardevol hulpmiddel om biochemische, moleculaire en metabolische functies in een fysiologisch relevante experimentele systeem te evalueren. We beschrijven een betrouwbaar protocol voor rat in situ leverperfusie, die consequent levensvatbare hepatocyten genereert tot to1.0 ×...

Isolatie en Primaire Cultuur van Rat levercellen

Een eenvoudige werkwijze beschreven voor de inductie van epitheliale naar mesenchymale transitie (EMT) in verschillende celtypen. Methoden voor de analyse van cellen in EMT toestanden met immunocytochemie inbegrepen.

Inductie en analyse van epitheliale naar mesenchymale transitie

In deze publicatie beschrijven we een snelle en gemakkelijke werkwijze voor het isoleren en kweken van primaire acinaire cellen van de pancreas muizen. Deze methode vormt een waardevolle benadering van de fysiologie van verse primaire normale / getransformeerde exocriene pancreas cellen te bestuderen.

Isolatie en Cultuur van de Muis Primaire Pancreatic Acinaire Cells

Hier hebben we detail een methode om cultuur tand ziektekiemen in onderkaak plakjes met een tissue chopper. Deze methode maakt het mogelijk unieke toegang tot de tand tijdens de ontwikkeling, het verstrekken van uitstekende gelegenheid voor manipulatie en lineage tracing, niet beschikbaar gebruik van meer traditionele kweekmethoden.

De Slice kweekmethode voor Na Ontwikkeling van Tooth Germs In explantaatkweek

De isolatie en cultuur van een zuivere populatie van rustende cellen satelliet, een spier stamcelpopulatie, is essentieel voor het begrip van spier stamcel biologie en regeneratie, en stamceltransplantatie voor therapieën spierdystrofie en andere degeneratieve ziekten.

Isolatie, Cultuur en Transplantatie van Muscle satelliet-cellen

Leer de explantcultuurmethode voor het isoleren van tandpulpa-stamcellen (DPCs) voor weefselregeneratieonderzoek. Deze techniek levert een homogene celpopulatie voor regeneratieve therapieën en gepersonaliseerde geneeskunde.

Primaire cultuur van stamcellen van tandpulpa

Meer video's verkennen