Evaluatie van de impact van een nieuw koelcelprocessorsysteem op de faciliteit voor het isoleren van eilandjescellen

Hallo, ik ben Dr.Jihad, de directeur van het Center P Lab. Het doel van deze video is om een aangepaste gekoelde celprocessor te laten zien die wordt gebruikt in de oogjesisolatiefaciliteit zonder impact op het milieu en op het herstel van de cellen. Begin met het voorkoelen van de lichte en zware dichtheidsgradiënten en de celprocessorkit op vier graden Celsius.

Bereid vervolgens de celprocessor voor door 45 minuten voor te koelen. Plaats de pre-cool cell processor kit in de celprocessor voor de standaard ethanolgekoelde dubbelwandige gradiëntmaker. Sluit de twee glazen kamers aan en plaats ze op een magnetische roerstaaf Klem de slang tussen de twee kamers. Koel.

De gradiëntmaker met een ethanol circulerende chiller bij nul graden Celsius na afkoeling. Stel de pompsnelheid in op 150 milliliter per minuut om de kamer te vullen met 130 milliliter zware dichtheidsgradiënt op de bodem van de zak. Zodra de zware gradiënt in de zak zit, sluit u de hemostaat tussen twee kamers.

Voeg vervolgens 130 milliliter hoge dichtheid toe aan de voorste beker en 140 milliliter gradiënten met lage dichtheid aan de achterste beker. Klem de hemostaat tussen de twee kamers en stel vervolgens een pompsnelheid van 50 milliliter per minuut in om een continue gradiënt tussen twee kamers te creëren. Bereid vervolgens menselijke mononucleaire buffy-vachtcellen voor op zuivering uit meerdere gepoolde anonieme Buffy-jassen die zijn verzameld uit volbloedafvalproducten die door de bloedbank worden geleverd.

Voeg na scheiding vijf milliliter soortelijk gewicht dat lijkt op mononucleaire celsuspensie met lage dichtheid toe aan 95 milliliter gradiëntmedium met hoge dichtheid in een transferzak met behulp van een peristaltische pomp die is ingesteld op 25 milliliter per minuut. Laad de voorgevormde gradiënt van bovenaf met 30 milliliter mononucleaire celsuspensie met behulp van een voorgekalibreerde thermosonde. Voortdurend. Meet de temperatuur in de celprocessor met behulp van een digitaal thermokoppel dat is aangesloten op een steriele thermosonde.

Bewaak de temperatuur van gradiënten en cellen tijdens het proces. Stel aan het einde van de gradiëntbelasting de celprocessor in op 537 G om de door de rotor gegenereerde warmte te minimaliseren. Schakel de celprocessor uit zodat het hydraulische systeem kan terugkeren naar het niveau van voor het hardlopen en lucht kan ontsnappen.

Start vervolgens de celprocessor opnieuw op 537 G en voeg 130 milliliter zware en 140 milliliter lage dichtheidsgradiënten toe om een continue dichtheidsgradiënt te creëren met een debiet van 50 milliliter per minuut en 4.3 graden Celsius. Laad vervolgens 30 milliliter Buffy-jascelsuspensie bovenop een belastingdichtheidsgradiënt met een debiet van 25 milliliter per minuut en zes graden Celsius. Voeg na het laden van de cel na vijf minuten 50 milliliter wasoplossing toe aan de celverwerker.

Verzamel de gesponnen gradiënt in 12 flessen met een debiet van 100 milliliter per minuut en een vulbuis van vijf graden Celsius, één met 100 milliliter wasmiddel en 150 milliliter cellen. Vul vervolgens de tubes twee tot 12 met 225 milliliter wasmiddel en 25 milliliter cellen. De beoordeling van deeltjes in de lucht in een cleanroom-omgeving, graad C en klasse B, toonde aan dat er geen overmaat was van 0,5 en vijf micron deeltjes in de lucht volgens de drie normen voor cleanrooms, GMP klasse C, klasse B en BSL.

Tijdens de eerste vier stappen werd geen significant verschil in gradiënttemperaturen waargenomen, waarbij beide processors ongeveer 4,5 graden Celsius aanhielden. Na het centrifugeren en tijdens de inzamelstappen steeg de temperatuur echter aan het begin en het einde van de inzamelstappen voor beide verwerkers. Verder hebben de gekoelde celprocessors invloed op de zuivering van menselijke cellen.

De efficiëntie en levensvatbaarheid werden bepaald na centrifugatie. De temperatuur van de verzamelde cellen steeg licht tot 8,5 graden Celsius. Actieve luchtbemonstering en steriliteitsscreening vertoonden geen groei.