Evaluatie van de impact van een nieuw koelcelprocessorsysteem op de faciliteit voor het isoleren van eilandjescellen
August 11th, 2023
Het protocol hier beschrijft een aangepast koelcel-processorsysteem dat compatibel is met een schone ruimte met goede fabricagepraktijken (GMP) om de cellevensvatbaarheid na verwerking te verbeteren.
Hallo, ik ben Dr.Jihad, de directeur van het Center P Lab. Het doel van deze video is om een aangepaste gekoelde celprocessor te laten zien die wordt gebruikt in de oogjesisolatiefaciliteit zonder impact op het milieu en op het herstel van de cellen. Begin met het voorkoelen van de lichte en zware dichtheidsgradiënten en de celprocessorkit op vier graden Celsius.
Bereid vervolgens de celprocessor voor door 45 minuten voor te koelen. Plaats de pre-cool cell processor kit in de celprocessor voor de standaard ethanolgekoelde dubbelwandige gradiëntmaker. Sluit de twee glazen kamers aan en plaats ze op een magnetische roerstaaf Klem de slang tussen de twee kamers. Koel.
De gradiëntmaker met een ethanol circulerende chiller bij nul graden Celsius na afkoeling. Stel de pompsnelheid in op 150 milliliter per minuut om de kamer te vullen met 130 milliliter zware dichtheidsgradiënt op de bodem van de zak. Zodra de zware gradiënt in de zak zit, sluit u de hemostaat tussen twee kamers.
Voeg vervolgens 130 milliliter hoge dichtheid toe aan de voorste beker en 140 milliliter gradiënten met lage dichtheid aan de achterste beker. Klem de hemostaat tussen de twee kamers en stel vervolgens een pompsnelheid van 50 milliliter per minuut in om een continue gradiënt tussen twee kamers te creëren. Bereid vervolgens menselijke mononucleaire buffy-vachtcellen voor op zuivering uit meerdere gepoolde anonieme Buffy-jassen die zijn verzameld uit volbloedafvalproducten die door de bloedbank worden geleverd.
Voeg na scheiding vijf milliliter soortelijk gewicht dat lijkt op mononucleaire celsuspensie met lage dichtheid toe aan 95 milliliter gradiëntmedium met hoge dichtheid in een transferzak met behulp van een peristaltische pomp die is ingesteld op 25 milliliter per minuut. Laad de voorgevormde gradiënt van bovenaf met 30 milliliter mononucleaire celsuspensie met behulp van een voorgekalibreerde thermosonde. Voortdurend. Meet de temperatuur in de celprocessor met behulp van een digitaal thermokoppel dat is aangesloten op een steriele thermosonde.
Bewaak de temperatuur van gradiënten en cellen tijdens het proces. Stel aan het einde van de gradiëntbelasting de celprocessor in op 537 G om de door de rotor gegenereerde warmte te minimaliseren. Schakel de celprocessor uit zodat het hydraulische systeem kan terugkeren naar het niveau van voor het hardlopen en lucht kan ontsnappen.
Start vervolgens de celprocessor opnieuw op 537 G en voeg 130 milliliter zware en 140 milliliter lage dichtheidsgradiënten toe om een continue dichtheidsgradiënt te creëren met een debiet van 50 milliliter per minuut en 4.3 graden Celsius. Laad vervolgens 30 milliliter Buffy-jascelsuspensie bovenop een belastingdichtheidsgradiënt met een debiet van 25 milliliter per minuut en zes graden Celsius. Voeg na het laden van de cel na vijf minuten 50 milliliter wasoplossing toe aan de celverwerker.
Verzamel de gesponnen gradiënt in 12 flessen met een debiet van 100 milliliter per minuut en een vulbuis van vijf graden Celsius, één met 100 milliliter wasmiddel en 150 milliliter cellen. Vul vervolgens de tubes twee tot 12 met 225 milliliter wasmiddel en 25 milliliter cellen. De beoordeling van deeltjes in de lucht in een cleanroom-omgeving, graad C en klasse B, toonde aan dat er geen overmaat was van 0,5 en vijf micron deeltjes in de lucht volgens de drie normen voor cleanrooms, GMP klasse C, klasse B en BSL.
Tijdens de eerste vier stappen werd geen significant verschil in gradiënttemperaturen waargenomen, waarbij beide processors ongeveer 4,5 graden Celsius aanhielden. Na het centrifugeren en tijdens de inzamelstappen steeg de temperatuur echter aan het begin en het einde van de inzamelstappen voor beide verwerkers. Verder hebben de gekoelde celprocessors invloed op de zuivering van menselijke cellen.
De efficiëntie en levensvatbaarheid werden bepaald na centrifugatie. De temperatuur van de verzamelde cellen steeg licht tot 8,5 graden Celsius. Actieve luchtbemonstering en steriliteitsscreening vertoonden geen groei.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Overzicht
Deze studie richt zich op een op maat gemaakt gekoeld celprocessorsysteem dat is ontworpen voor gebruik in een GMP-schoonruimte om de levensvatbaarheid van cellen na verwerking te verbeteren. De methode beschrijft stappen voor het voorbereiden en gebruiken van de processor, die de terugwinning van gezuiverde humane mononucleaire cellen uit bloedafvalproducten verbetert.
Belangrijke onderdelen van het onderzoek
Onderzoeksgebied
- Cellevensvatbaarheid
- Schoonruimte protocollen
- Verwerking van humane cellen
Achtergrond
- Belang van het handhaven van lage temperaturen bij celverwerking
- Uitdagingen bij het terugwinnen van levensvatbare cellen na verwerking
- Naleving van GMP-normen in celverwerkingsomgevingen
Gebruikte methoden
- Centrifugatie met gradiëntdichtheid
- Humane mononucleaire buffy coat cellen
- Temperatuurbewaking met een digitaal thermokoppel
Belangrijkste resultaten
- Demonstratie van efficiënte celterugwinning zonder significante temperatuurverhoging
- Onderhoud van steriele omstandigheden zonder overschrijding van deeltjes in de lucht
- Gegarandeerde levensvatbaarheid en zuiverheid van verwerkte humane cellen na centrifugatie
Conclusies
- Het protocol verbetert effectief de levensvatbaarheid en verwerkingsresultaten van humane cellen
- Dit systeem draagt bij aan vooruitgang in celverwerkingsmethodologieën die relevant zijn voor klinische toepassingen
Veelgestelde vragen
Executive Industry Relevance
Maintaining optimal temperature control during cell processing is critical for preserving cell viability and function in cell therapy manufacturing. The introduction of a cooled cell processor system directly addresses the risk of thermal stress during centrifugation, supporting higher recovery and viability of therapeutic cell populations. This capability strengthens the reliability of cell isolation workflows and aligns with GMP cleanroom requirements for advanced therapy production.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables robust assessment of cell viability and function post-processing for downstream biological studies.
- Reduces confounding thermal effects, supporting clearer interpretation of cell-based assays.
- Improves confidence in the biological relevance of isolated cell populations for target validation.
Screening & Assay Development
- Facilitates preparation of high-viability cell samples for assay development and screening platforms.
- Supports reproducible and standardized cell isolation, minimizing batch-to-batch variability.
- Ensures quantitative recovery metrics for reliable compound evaluation in cell-based assays.
Translational & Preclinical Research
- Aligns cell processing conditions with clinical manufacturing standards, supporting translational continuity.
- Enables risk-adjusted advancement of cell therapy candidates by preserving functional cell attributes.
- Provides a platform for validating process changes without compromising GMP cleanroom compliance.
Pipeline & Workflow Integration
This cooled cell processor system integrates into the cell therapy pipeline from early cell isolation through preclinical and translational research, supporting both discovery and manufacturing environments.
- Discovery Biology: Enhances hypothesis testing by ensuring cell integrity during isolation.
- Screening: Delivers reproducible, high-viability cell preparations for assay readiness.
- Analytics: Provides quantitative temperature and viability readouts for process monitoring.
- Translational Research: Maintains GMP-aligned conditions for preclinical and clinical cell therapy workflows.
- Enterprise Reuse: Offers a scalable, minimally invasive cooling solution adaptable across cell processing platforms.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence in cell-based assays and reduces mechanistic ambiguity from thermal artifacts.
- Operational Value: Standardizes temperature control, supporting reproducibility and scalability in cell processing.
- Strategic Value: Enables better go/no-go decisions by ensuring high-quality cell products for downstream applications.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization of cell therapy candidates by improving process reliability.
Implementation Considerations
- Requires expertise in cell processing and cleanroom operations.
- Needs integration with temperature monitoring and digital thermocouple instrumentation.
- Demands adherence to GMP cleanroom standards for sterility and particulate control.
- Adaptable to various cell types and density gradient protocols with minimal modification.
- Limited by the availability of donor material for validation in certain regions.
