Name: Dynamische beoordelingen van coronaire stroomreserve na reperfusie van myocardischemie bij muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-08-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 7 s
Description: Leer een gemodificeerde parasternale long-as weergave om de linker voorste dalende slagader in muizen snel te lokaliseren. Deze methode maakt dynamische monitoring van coronaire stroomreserve na myocardischemie-reperfusie mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door de National Natural Science Foundation of China (Grant No. 82270352), Beijing Research Ward Construction Clinical Research Project (2022-YJXBF-04-03), National High Level Hospital Clinical Research Funding (2022-NHLHCRF-YSPY-01), Capital's Founds for Health Improvement and Research (nr. 2022-1-4062), National Key Clinical Specialty Discipline Construction Program (Grant nr. 2020-QTL-009) en Chinese Society of Cardiology's Foundation (nr. CSCF2021B02).

Alle experimenten werden goedgekeurd door het Animal Care and Use Committee van de Universiteit van Peking. Voor de huidige studie werden mannelijke C57-muizen van 8-12 weken oud gebruikt. De dieren zijn afkomstig van een commerciële bron (zie Materiaaltabel).
1. Voorbereiding van dieren
<ol><li>Verwijder het haar uit het precordiale gebied met behulp van ontharingscrème (zie Materiaaltabel). Ga vervolgens verder met het verkrijgen van de echografiebeelden volgens stap 2.</li>
</ol>2. Echografie vóór IR-chirurgie
<ol><li>Verdoof de muis door deze in de isofluraan-inductiekamer te plaatsen (zie Materiaaltabel) en start de afgifte van isofluraan in een concentratie van 1,5% met een stroom van 1,5-2,0 l/min O2 .</li>
	<li>Plaats de verdoofde muis in rugligging op het fysiologische bewakingsplatform (het beeldvormingsplatform van het ultrasone systeem, zie Materiaaltabel). Breng een kleine hoeveelheid geleidende gel aan op de koperen plaat van de fysiologische bewakingstafel en zet de muispoten vast met plakband om fysiologische informatie over ECG en ademhaling te verkrijgen. Houd de lichaamstemperatuur op 37-38 °C met behulp van het ingebouwde verwarmingsplatform. NOTITIE: Schakel de bedieningsschakelaar van het gasanesthesieapparaat van de kamer naar het masker en houd de anesthesiedosis gedurende deze tijd constant op 1.5%. De hartslag van de muizen zou op dit moment ongeveer 350-450 slagen/min moeten zijn.</li>
	<li>Breng oogheelkundige dierenartszalf aan op de ogen vóór de beeldvorming om uitdroging te voorkomen.</li>
	<li>Voer transthoracale echocardiografie uit met behulp van een lineaire sonde van 40 MHz9 (bijv. MS550-sonde voor muizen) (Figuur 1A). OPMERKING: Het ultrasone apparaat is uitgerust met de MS550-sonde.</li>
	<li>Breng royaal ultrasone transmissiegel aan (zie Materiaaltabel) om een optimale beeldkwaliteit te garanderen.</li>
	<li>Pas de positie van de sonde en het platform aan om een gewijzigde parasternale lange as (PLAX) te vormen view9 (Figuur 1A) om de linker voorste dalende slagader (LAD) in B-modus te onderzoeken. Maak in het kort een beeld van het hart met behulp van een parasternale lange as met het platform zijdelings uitgelijnd en gepositioneerd in een kleine hoek tussen de sonde en het platform.</li>
	<li>Zoek het geschikte hartgedeelte in de B-modus en activeer Color Doppler op het touchscreen (Figuur 1B). De LAD (witte pijl) is te herkennen in de linkerventrikelwand (Figuur 1B). De real-time rode kleur geeft de richting van de bloedstroom aan (d.w.z. de bloedstroom is naar de sonde). OPMERKING: Door de x-as aan te passen, maakt Color Doppler de visualisatie van de volledige LAD (van de aorta-sinus tot de distale takplaats) binnen dit afbeeldingsvenster mogelijk.</li>
	<li>Beweeg de sonde lichtjes om de juiste positie te vinden en de invloed van de doorbloeding van de longader te verminderen. OPMERKING: Om de invloed van de doorbloeding van de longader te verminderen, past u de sonde enigszins aan en onderscheidt u de LAD van de longader. De LAD loopt in de linkerventrikelwand, terwijl de longader uitmondt in het linker atrium. Zoek de LAD met behulp van Color Doppler en gebruik B-Mode om de geschikte sectie te selecteren.</li>
	<li>Nadat u de LAD in Color Doppler-modus hebt gevisualiseerd, drukt u op de Pulse Wave (PW) -knop en schakelt u over naar de PW-modus. Plaats de gele indicatorlijn op de kransslagader en zorg ervoor dat deze evenwijdig is aan de stroomrichting. Druk vervolgens op de knop Clip opslaan om de basislijngegevens op te nemen.</li>
	<li>Verhoog de isofluraanconcentratie tot 3% en wacht 30 s. Zorg ervoor dat de stroomsnelheid in de loop van de tijd geleidelijk toeneemt. Druk vaak op de Save Clip-knop om de hoogste bloedstroomsnelheid vast te leggen. OPMERKING: De isofluraanstimulus zorgt ervoor dat het hart harder moet werken, wat leidt tot mogelijke beweging van het hart en de LAD. Zodra het beeld in PW-modus is vastgelegd of in de bioscoop is opgeslagen, klikt u op de PW-modus om ervoor te zorgen dat de gele indicatorlijn op de LAD staat. Als er verplaatsing optreedt, past u de gele indicatorlijn iets aan tot het punt van bloedstroom en gaat u door met opnemen. Dit proces vereist snelle beheersing en schakelen.</li>
	<li>Nadat u coronaire bloedstroombeelden hebt verzameld, schakelt u de verdoving uit en stelt u de sonde in op de normale PLAX-weergave. Wacht tot de hartslag van de muis langzaam toeneemt tot ongeveer 500 slagen per minuut en meet vervolgens de hartfunctie van de muis door de sonde over te schakelen naar de parasternale korte-assectie (PSAX).</li>
	<li>Na voltooiing van de echocardiografische beeldvorming, verwijdert u het dier van het platform en laat u het herstellen in zijn thuiskooi. Verwijder de gel en laat het dier drogen om onderkoeling te voorkomen.</li>
	<li>Gebruik de Peak Vel - en LV-functietools om respectievelijk de piekdiastolische snelheden en de systolische functie van het hart uit de afbeeldingen te halen.</li>
	<li>Bereken CFR als de verhouding tussen de diastolische piek coronaire stroomsnelheid (CFV) bij maximale stroom en diastolische piek CFV bij baseline.</li>
</ol>3. Myocardiale ischemie-reperfusieprocedure
OPMERKING: De eerste meting was baseline en vervolgens werd een operatie uitgevoerd op hetzelfde dier.

<ol><li>Verdoof de muizen met natriumpentobarbital (60 mg/kg) en dien het pijnstillende carprofen toe (5 mg/kg, subcutane injectie). Gebruik een voorverwarmd verwarmingskussen (37 °C) tijdens de chirurgische ingreep. Zorg voor de juiste diepte van de anesthesie door de afwezigheid van een terugtrekkingsreflex voor teenknijp- en knipperreflexen. Leg de muis op de rug op het verwarmingskussen en breng oogzalf aan op de ogen om te voorkomen dat ze uitdrogen. Voer endotracheale intubatie uit voor mechanische ventilatie: desinfecteer het gebied met 3 afwisselende scrubs van betadine of chloorhexidine en 70% alcohol voor en na het verwijderen van het haar van de nek. Zoek de luchtpijp en breng de katheter voorzichtig in. Sluit de muizen vervolgens aan op het beademingsapparaat (inspiratoir ademvolume van 250 μL bij 120 ademhalingen/min) (zie Materiaaltabel).</li>
	<li>Desinfecteer de huid van het precordiale gebied met 3 afwisselende scrubs van betadine of chloorhexidine en 70% alcohol. Leg het hart bloot door een linker thoracotomie10 uit te voeren in de vierde intercostale ruimte.</li>
	<li>Maak de linker voorste dalende slagader (LAD) vast met een slipknot met behulp van een 5-0 zijden hechting (zie Materiaaltabel), 1-2 mm onder de wortel van het linker hartoor. Zorg ervoor dat de stikrichting evenwijdig is aan de onderkant van het linker atriale aanhangsel. Bevestig ischemie visueel bij alle muizen via lokale kleurverdonkering van het ischemische myocardium.</li>
	<li>Sluit de LAD-slagader af gedurende 30 minuten11. Laat na 30 minuten de ligatuur los en controleer de reperfusie door de roodheid van het eerder verkleurde gebied van de hartspier gedurende 1-2 minuten te observeren.</li>
	<li>Sluit na de coronaire occlusie/reperfusie de borstkas in lagen en laat de muizen ongeveer een half uur herstellen11.</li>
</ol>4. Echografie na IR-chirurgie
<ol><li>Meet de CFR opnieuw op respectievelijk 1 uur, 3 uur, 5 uur, 8 uur, 24 uur en 48 uur na reperfusie, volgens de stappen die worden beschreven in sectie 2. Vergelijk deze metingen met de CFR-waarden die zijn verkregen vóór de ischemie-reperfusie (IR) procedure.</li>
</ol>5. Statistische analyse
<ol><li>Statistische analyses uitvoeren met behulp van geschikte statistische analysesoftware (zie Materiaaltabel). OPMERKING: Gebruik voor vergelijking van continue variabelen tussen gepaarde steekproeven gepaarde t-toetsen als de gegevens normaal verdeeld zijn. Voor niet-normaal verspreide gegevens of wanneer niet aan de aannames van normaliteit wordt voldaan, gebruik Friedman's ANOVA. Beschouw p < 0,05 als statistisch significant.</li>
</ol>

CFR-veranderingen na ischemie: implicaties voor microvasculaire disfunctie

<ol><li>O'Farrell, F. M., Mastitskaya, S., Hammond-Haley, M., Freitas, F., Wah, W. R., Attwell, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capillary+pericytes+mediate+coronary+no-reflow+after+myocardial+ischaemia%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Capillary pericytes mediate coronary no-reflow after myocardial ischaemia.</a> Elife. 6, e29280(2017).</li>
<li>Dimitrow, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transthoracic+Doppler+echocardiography-noninvasive+diagnostic+window+for+coronary+flow+reserve+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+ultrasound%22%5BJournal%5D)">Transthoracic Doppler echocardiography-noninvasive diagnostic window for coronary flow reserve assessment.</a> Cardiovascular ultrasound. 1, 4(2003).</li>
<li>Picano, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress+echocardiography%3A+a+historical+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Stress echocardiography: a historical perspective.</a> The American Journal of Medicine. 114 (2), 126-130 (2003).</li>
<li>Lim, D. S., Kim, Y. H., Lee, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+flow+reserve+is+reflective+of+myocardial+perfusion+status+in+acute+anterior+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Catheterization+and+Cardiovascular+Interventions%3A+Official+Journal+of+The+Society+For+Cardiac+Angiography+%26+Interventions%22%5BJournal%5D)">Coronary flow reserve is reflective of myocardial perfusion status in acute anterior myocardial infarction.</a> Catheterization and Cardiovascular Interventions: Official Journal of The Society For Cardiac Angiography & Interventions. 51 (3), 281-286 (2000).</li>
<li>Feldman, L. J., Himbert, D., Juliard, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reperfusion+syndrome%3A+relationship+of+coronary+blood+flow+reserve+to+left+ventricular+function+and+infarct+size%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Reperfusion syndrome: relationship of coronary blood flow reserve to left ventricular function and infarct size.</a> Journal of the American College of Cardiology. 35 (5), 1162-1169 (2000).</li>
<li>Cortigiani, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+flow+reserve+during+dipyridamole+stress+echocardiography+predicts+mortality%5BTitle%5D)+AND+%22JACC+Cardiovascular+imaging%22%5BJournal%5D)">Coronary flow reserve during dipyridamole stress echocardiography predicts mortality.</a> JACC Cardiovascular imaging. 5 (11), 1079-1085 (2012).</li>
<li>Han, B., Wei, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proximal+coronary+hemodynamic+changes+evaluated+by+intracardiac+echocardiography+during+myocardial+ischemia+and+reperfusion+in+a+canine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Echocardiography+%28Mount+Kisco%2C+NY%29%22%5BJournal%5D)">Proximal coronary hemodynamic changes evaluated by intracardiac echocardiography during myocardial ischemia and reperfusion in a canine model.</a> Echocardiography (Mount Kisco, NY). 25 (3), 312-320 (2008).</li>
<li>Kelm, N. Q., Beare, J. E., LeBlanc, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+coronary+flow+reserve+after+myocardial+ischemia+reperfusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Evaluation of coronary flow reserve after myocardial ischemia reperfusion in rats.</a> Journal of Visualized Experiments. 148, e59406(2019).</li>
<li>Batra, A., Warren, C. M., Ke, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+P21-activated+kinase-1+induces+age-dependent+increased+visceral+adiposity+and+cardiac+dysfunction+in+female+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Deletion of P21-activated kinase-1 induces age-dependent increased visceral adiposity and cardiac dysfunction in female mice.</a> Molecular and Cellular Biochemistry. 476 (3), 1337-1349 (2021).</li>
<li>Lv, B., Zhou, J., He, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+myocardial+infarction+and+myocardial+ischemia-reperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Induction of myocardial infarction and myocardial ischemia-reperfusion injury in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. 179, e63257(2022).</li>
<li>Huang, G., Lu, X., Duan, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PCSK9+knockdown+can+improve+myocardial+ischemia%2Freperfusion+injury+by+inhibiting+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Toxicology%22%5BJournal%5D)">PCSK9 knockdown can improve myocardial ischemia/reperfusion injury by inhibiting autophagy.</a> Cardiovascular Toxicology. 22 (12), 951-961 (2022).</li>
<li>Lenzarini, F., Di Lascio, N., Stea, F., Kusmic, C., Faita, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+of+isoflurane-induced+vasodilation%3A+a+Doppler+ultrasound+study+of+the+left+coronary+artery+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasound+in+Medicine+%26+Biology%22%5BJournal%5D)">Time course of isoflurane-induced vasodilation: a Doppler ultrasound study of the left coronary artery in mice.</a> Ultrasound in Medicine & Biology. 42 (4), 999-1009 (2016).</li>
<li>Chowdhury, S. A. K., Rosas, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Echocardiographic+characterization+of+left+ventricular+structure%2C+function%2C+and+coronary+flow+in+neonate+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Echocardiographic characterization of left ventricular structure, function, and coronary flow in neonate mice.</a> Journal of Visualized Experiments. 182, e63539(2022).</li>
<li>Sadauskiene, E., Zakarkaite, D., Ryliskyte, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+evaluation+of+myocardial+reperfusion+by+transthoracic+Doppler+echocardiography+and+single-photon+emission+computed+tomography+in+patients+with+anterior+acute+myocardial+infarction+%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Ultrasound%22%5BJournal%5D)">Non-invasive evaluation of myocardial reperfusion by transthoracic Doppler echocardiography and single-photon emission computed tomography in patients with anterior acute myocardial infarction .</a> Cardiovascular Ultrasound. 9, 16(2011).</li>
<li>Bax, M., de Winter, R. J., Schotborgh, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short-+and+long-term+recovery+of+left+ventricular+function+predicted+at+the+time+of+primary+percutaneous+coronary+intervention+in+anterior+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Short- and long-term recovery of left ventricular function predicted at the time of primary percutaneous coronary intervention in anterior myocardial infarction.</a> Journal of the American College of Cardiology. 43 (4), 534-541 (2004).</li>
<li>Lee, S., Otsuji, Y., Minagoe, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+evaluation+of+coronary+reperfusion+by+transthoracic+Doppler+echocardiography+in+patients+with+anterior+acute+myocardial+infarction+before+coronary+intervention%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Noninvasive evaluation of coronary reperfusion by transthoracic Doppler echocardiography in patients with anterior acute myocardial infarction before coronary intervention.</a> Circulation. 108 (22), 2763-2768 (2003).</li>
<li>Kelshiker, M. A., Seligman, H., Howard, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+flow+reserve+and+cardiovascular+outcomes%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Coronary flow reserve and cardiovascular outcomes: a systematic review and meta-analysis.</a> European Heart Journal. 43 (16), 1582-1593 (2022).</li>
<li>Taqueti, V. R., Di Carli, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+microvascular+disease+pathogenic+mechanisms+and+therapeutic+options%3A+JACC+state-of-the-art+review%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Coronary microvascular disease pathogenic mechanisms and therapeutic options: JACC state-of-the-art review.</a> Journal of the American College of Cardiology. 72 (21), 2625-2641 (2018).</li>
<li>Wikström, J., Grönros, J., Gan, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenosine+induces+dilation+of+epicardial+coronary+arteries+in+mice%3A+relationship+between+coronary+flow+velocity+reserve+and+coronary+flow+reserve+in+vivo+using+transthoracic+echocardiography%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasound+in+Medicine+%26+Biology%22%5BJournal%5D)">Adenosine induces dilation of epicardial coronary arteries in mice: relationship between coronary flow velocity reserve and coronary flow reserve in vivo using transthoracic echocardiography.</a> Ultrasound in Medicine & Biology. 34 (7), 1053-1062 (2008).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat ze geen bekende concurrerende commerciële of financiële relaties hebben die van invloed zouden kunnen zijn geweest op het werk dat in dit artikel wordt gerapporteerd.

Deze studie presenteert een protocol dat gebruikmaakt van een gewijzigde parasternale lange-asweergave om CFR na ischemie-reperfusie dynamisch te beoordelen. De belangrijkste bevindingen wijzen op een significante afname van de CFR bij IR-muizen, waarbij de meest uitgesproken vermindering 1 uur na reperfusie werd waargenomen. De hartfunctie werd echter niet binnen 48 uur beïnvloed.
CFR dient als een indicator van de myocardiale bloedtoevoer en biedt een niet-invasieve benadering om zowel kransslagaderstenose als coronaire microvasculaire circulatie te evalueren. Klinische studies hebben aangetoond dat lagere CFR-waarden geassocieerd zijn met slechtere prognoses 14,15,16, en een CFR-afkapwaarde van 1,75 is vastgesteld als optimaal voor risicostratificatie 14. Een recente meta-analyse toonde verder aan dat het risico op overlijden met 16% toeneemt voor elke afname van 0,1 eenheid in CFR, wat aangeeft dat CFR een continuüm van risico vertegenwoordigt, met lagere niveaus die patiënten vatbaar maken voor slechtere klinische resultaten17. In deze studie vertoonde CFR een trend van toenemend met de verlenging van de reperfusietijd, maar bleef lager dan vóór de procedure, wat het belang benadrukt van het monitoren van patiënten, niet alleen onmiddellijk na het openen van het boosdoenervat via PCI, maar ook na 48 uur. Bovendien dient CFR als een maat voor coronaire microvasculaire disfunctie, waarbij de hemodynamische effecten van focale, diffuse en kleine vaatziekten op de perfusie van myocardweefsel wordengeïntegreerd18. Daarom is CFR een cruciale niet-invasieve techniek voor het diagnosticeren van coronaire microvasculaire aandoeningen. Aangezien CFR op LAD een sterke en onafhankelijke indicator is van mortaliteit 6,7, heeft deze studie tot doel referentiewaarden te bieden voor klinische beslissingen. Bovendien kan het gebruik van echografiemachines de behoefte aan coronaire angiografie in een omgeving met kostenbeheersing in de gezondheidszorg verminderen. Door de technologie op de juiste manier te trainen en te upgraden, kan risicostratificatie worden afgestemd op de individuele behoeften van de patiënt.
De aangepaste PLAX-weergave biedt meer gemak en tijdwinst voor wetenschappelijke onderzoekers. Voortdurende verbetering van deze technologie zal de bredere toepassing ervan in andere coronaire microvasculaire aandoeningen vergemakkelijken. De belangrijkste stappen in dit protocol zijn onder meer het visualiseren van de kransslagader en het verkrijgen van PW-snelheidsbeelden van hoge kwaliteit. De bloedstroomsnelheid neemt geleidelijk toe met een toenemende anesthesieconcentratie, dus continue opvang wordt aanbevolen om te voorkomen dat de maximale bloedstroomsnelheid wordt gemist. Aangezien een toenemende anesthesieconcentratie de hartslag kan veranderen, wordt geadviseerd om tijdens de meting kort terug te keren naar de kleurendopplermodus om een consistente positionering voor en na de meting te garanderen.
Het is essentieel om beperkingen te erkennen, waaronder beperkingen die inherent zijn aan ultrasone meting van CFR. Vanwege de kromming van de kransslagader is het niet mogelijk om de hele slagader volledig weer te geven, wat leidt tot meting in slechts één segment. Operators moeten ernaar streven het begin van de kransslagader te meten om het punt van maximale coronaire bloedstroomsnelheid zo nauwkeurig mogelijk te identificeren. Bovendien zou CFR idealiter moeten worden bepaald op basis van veranderingen in het coronaire bloedstroomvolume, maar deze studie gebruikt de bloedstroomsnelheid in plaats van het bloedstroomvolume, waarbij het effect van de bloedvatdiameter over het hoofd wordt gezien. Eerdere studies hebben echter een sterke correlatie aangetoond tussen CFR en CFVR (coronaire stroomsnelheidsreserve)19. Verder onderzoek naar de coronaire microvasculaire functie kan helpen bij het begrijpen van de complexe veranderingen in ischemie en ons begrip van coronaire microvasculaire disfunctie verbeteren.

Coronaire hartziekten zijn wereldwijd een van de belangrijkste doodsoorzaken1. Zelfs wanneer de boosdoener kransslagader wordt heropend door middel van primaire percutane coronaire interventie (PCI) na cardiale ischemie, blijft coronaire microvasculaire perfusie vaak verminderd. Bovendien is er geen garantie voor reperfusie in de stroomafwaartse haarvaten die het myocardiumvoeden 1. Dit fenomeen, bekend als het "no-reflow-fenomeen", houdt verband met klinische progressie en een slechte prognose. Bijgevolg wordt het bereiken van adequate microvasculaire reflow na succesvolle reperfusietherapie van cruciaal belang voor myocardiale redding. Daarom is een vroege beoordeling van de microvasculaire functie na revascularisatie cruciaal voor klinische praktijken.
Verschillende technieken, zoals invasieve intracoronaire temperatuur/drukvoerdraad naar de index van microcirculatoire weerstand (IMR) en hyperemische microvasculaire weerstand (HMR), niet-invasieve cardiovasculaire magnetische resonantie (CMR), computertomografie met enkelvoudige fotonemissie (SPECT) en positronemissietomografie (PET), kunnen worden gebruikt om de microvasculaire functie te beoordelen2. Deze methoden zijn echter invasief of semi-invasief, duur en vaak niet direct beschikbaar, waardoor hun klinische bruikbaarheid wordt beperkt. Aan de andere kant biedt het beoordelen van de coronaire flowreserve (CFR) door middel van transthoracale Doppler-echocardiografie een niet-invasieve, relatief eenvoudige en kosteneffectieve aanpak zonder patiënten bloot te stellen aan ioniserende straling, zoals te zien is inandere methoden.
Hoewel eerdere studies transthoracale Doppler-echocardiografie hebben gebruikt om CFR bij muizen en ratten te meten, blijven er uitdagingen voor operators om de complexe hoeken tussen het platform, de muizen en de sonde te lokaliseren. Dit protocol lost dit probleem op door een eenvoudigere methode te bieden om de kransslagader van de linker voorste dalende slagader (LAD) te lokaliseren en CFR snel te meten met behulp van de gewijzigde parasternale lange as (PLAX) weergave.
Bovendien heeft CFR verkregen in de infarct-gerelateerde slagader (IRA) distaal van de boosdoenerlaesie een sterke correlatie aangetoond met de perfusiestatus beoordeeld door myocardiale contrastechocardiografie (MCE)4. Het is ook geïdentificeerd als een voorspellende marker voor levensvatbaarheid en herstel van de linkerventrikelfunctie (LV) na een acuut myocardinfarct (AMI)5. Bovendien is CFR vastgesteld als een betrouwbare marker voor sterfte door alle oorzaken en ongunstige cardiovasculaire uitkomsten 6,7. Eerdere rapporten hebben het gebruik van echocardiografie beschreven om CFR te beoordelen in rattenmodellen van een myocardinfarct8. Desalniettemin is de CFR in het vroege stadium van ischemie-reperfusie niet grondig bestudeerd. Daarom biedt deze studie een referentiewaarde voor het diagnosticeren van microvasculaire disfunctie en het beoordelen van het therapeutische effect van ischemie-reperfusie door middel van dynamische tests bij IR-muizen in het vroege stadium van reperfusie.

<table><tbody><tr><td>5-0 zijdesutuur</td><td>Ningbo MEDICAL Needle Co., Ltd.</td><td>210322</td><td></td></tr><tr><td>C57 muizen</td><td>Peking University Health Science Center Department of Laboratory Animal Science</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ontharingsmiddel</td><td>Nair</td><td>NAR-255-1</td><td></td></tr><tr><td>Elektrode gel</td><td>Cofoe</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hoge frequentie echografie</td><td>FUJIFILM VisualSonics, Inc.</td><td>Vevo3100</td><td></td></tr><tr><td>Isofluraan</td><td>REWARD</td><td>R510-22-10</td><td></td></tr><tr><td>Lineaire array hoge frequentie transducer</td><td>FUJIFILM VisualSonics, Inc.</td><td>MS550</td><td></td></tr><tr><td>Knaagdierventilator</td><td>Shanghai Alcott Biotech</td><td>ALC-V9</td><td></td></tr><tr><td>Kleine dier anesthesie apparaat</td><td>REWARD</td><td>R530</td><td></td></tr><tr><td>SPSS</td><td>IBM Corp, Armonk, NY, USA</td><td>versie 23.0&nbsp;</td><td>statistische analyse software</td></tr><tr><td>Echografie Gel</td><td>Cofoe</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vevo Lab Software</td><td>FUJIFILM VisualSonics, Inc.</td><td></td><td>Versie 5.7.0</td></tr></tbody></table>

dynamische beoordelingen van coronaire stroomreserve na reperfusie van myocardischemie bij muizen

Dynamic Assessments of Coronary Flow Reserve after Myocardial Ischemia Reperfusion in Mice

Na cardiale ischemie is er vaak onvoldoende myocardiale perfusie, zelfs als de stroom met succes en volledig is hersteld in een stroomopwaartse slagader. Dit fenomeen, bekend als het "no-reflow-fenomeen", wordt toegeschreven aan coronaire microvasculaire disfunctie en is in verband gebracht met slechte klinische resultaten. In de klinische praktijk wordt een vermindering van de coronaire flowreserve (CFR) vaak gebruikt als een indicator van coronaire hartziekte. CFR wordt gedefinieerd als de verhouding tussen de piekstroomsnelheid geïnduceerd door farmacologische of metabolische factoren en de ruststroomsnelheid.
Dit protocol was gericht op het beoordelen van de dynamische veranderingen in CFR voor en na ischemie-reperfusie (IR) met behulp van pulsgolf Doppler-metingen. In deze studie vertoonden normale muizen het vermogen om de pieksnelheid van de coronaire bloedstroom tot twee keer hoger te verhogen dan de rustwaarden onder isofluraanstimulatie. Na ischemie-reperfusie nam de CFR na 1 uur echter significant af in vergelijking met de pre-operatieve baseline. Na verloop van tijd vertoonde de CFR een geleidelijk herstel, maar het bleef onder het normale niveau. Ondanks het behoud van de systolische functie is vroege opsporing van microvasculaire disfunctie cruciaal, en het opstellen van een praktische gids zou artsen bij deze taak kunnen helpen, terwijl het ook de studie van de progressie van hart- en vaatziekten in de loop van de tijd zou vergemakkelijken.

Deze studie maakte gebruik van mannelijke C57-muizen (BW ~18-20 g) om de dynamische verandering van CFR te karakteriseren. Het gewijzigde PLAX-beeld werd gebruikt om de karakteristieken van de kransslagaderstroom van LAD te beoordelen (Figuur 1A,B). CFR werd berekend als de verhouding tussen de maximale stroomsnelheid tijdens maximale vasodilatatie geïnduceerd door 3% isofluraan en de maximale stroomsnelheid bij een basislijn van 1,5% isofluraanconcentratie12,13. Alle metingen en berekeningen werden herhaald gedurende drie opeenvolgende hartcycli en gemiddeld, met representatieve resultaten weergegeven in figuur 2.
Vóór de IR-operatie werd de basislijn CFR gemeten en de muizen hadden een normale CFR-waarde in de buurt van 2,14 ± 0,43. Na de IR-operatie nam de CFR echter significant af bij reperfusie 1 uur in vergelijking met vóór de IR-operatie (1,18 ± 0,14 vs. 2,14 ± 0,43) (Figuur 3A). Deze vermindering gaf aan dat de microcirculatie niet onmiddellijk werd hersteld, zelfs niet na het openen van het boosdoenervat. Naarmate de reperfusietijd werd verlengd, bleven de CFR-waarden op een constant laag niveau, met waarden van 1,21 ± 0,20 na 3 uur, 1,39 ± 0,33 na 5 uur, 1,44 ± 0,38 na 8 uur, 1,34 ± 0,36 na 24 uur en 1,48 ± 0,47 48 uur na reperfusie, wat suggereert dat hypoperfusie ten minste twee dagen kan aanhouden (figuur 3A). Bovendien was er geen statistische significantie tussen CFR-waarden om 1 uur, 3 uur, 5 uur, 8 uur, 24 uur en 48 uur.
De muizen werden ook gecontroleerd op hartfunctie en er werd waargenomen dat er geen significante veranderingen waren in de hartfunctie van de linkerventrikel wanneer de CFR significant was verlaagd bij de muizen (Figuur 3B).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65391/65391fig01.jpg"> Figuur 1: Gewijzigde weergave van de parasternale lange as. (A) illustreert de positionering van de sonde en het platform tijdens het verkrijgen van de coronaire slagadersnelheid van LAD. (B) toont de plaatsing van de pulsgolfsnelheidssensor op de LAD-kransslagader. De blauwe kleur geeft beweging weg van de ultrasone sonde aan, terwijl de oranje kleur beweging naar de ultrasone sonde aangeeft. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65391/65391fig01large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65391/65391fig02.jpg"> Figuur 2: Visualisatie en opname van de beeldvorming van de pulsgolfsnelheid van LAD. (A) Pulsgolfbeeld tijdens de rusttoestand van de LAD-kransslagader. (B) Maximaal hyperemisch coronair pulsgolfbeeld van de LAD-kransslagader. De blauwe kleur illustreert de beweging weg van de ultrasone sonde, terwijl de oranje kleur de beweging naar de ultrasone sonde illustreert. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65391/65391fig02large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65391/65391fig03.jpg"> Figuur 3: Meting van de coronaire stroomreserve en de ejectiefractie. (A) Statistische analyse van CFR bij dieren vóór ischemie en respectievelijk 1 uur, 3 uur, 5 uur, 8 uur, 24 uur en 48 uur na reperfusie (n = 9). (B) Beoordeling van de ejectiefractie van elke groep op elk tijdstip (n = 9). *p < 0,05; gegevens gepresenteerd als gemiddelde ± SD, geanalyseerd met gepaarde t-tests en Friedman's ANOVA. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65391/65391fig03large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>

Het huidige protocol beschrijft een aangepast parasternale langsasaanzicht voor snelle en nauwkeurige lokalisatie van de linker voorste dalende slagader. Deze aanpak is ontworpen om eenvoudiger en gebruiksvriendelijker te zijn en tegelijkertijd het onderzoek naar dynamische veranderingen in de coronaire flowreserve na myocardischemie-reperfusie bij muizen te vergemakkelijken.

Dynamische beoordelingen van coronaire stroomreserve na reperfusie van myocardischemie bij muizen

After cardiac ischemia, there is often insufficient myocardial perfusion, even if flow has been successfully and completely restored in an upstream ...

Ons protocol beschrijft een gewijzigde parasternale lange asweergave voor snelle en nauwkeurige lokalisatie van de linker voorste dalende slagader. Met behulp van deze benadering bestudeerden we dynamische veranderingen in de coronaire flowreserve na myocardischemie-reperfusie bij muizen. Deze studie presenteert een aangepaste PLAX-weergave die tijd bespaart en gemak biedt voor wetenschappelijke onderzoekers.Bovendien bleek uit de studie dat CFR de verlenging van de basisreperfusietijd verhoogde, maar lager bleef dan vóór de procedure, wat het belang van vroege monitoring na PCI benadrukt. Ons protocol vereenvoudigt het lokaliseren van complexe hoeken tussen het platform, de muizen, de sonde en de CFR van muizen.

dynamic-assessments-coronary-flow-reserve-after-myocardial-ischemia

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

We introduceren een chirurgische methode experimentele ischemie / reperfusie (I / R) letsel veroorzaken simuleren myocardiaal infarct (MI) in muismodellen die zorgt voor meer duidelijkheid in positionering van de ligatie van de LAD (LAD) om de reproduceerbaarheid te verhogen MI van experimenten in muizen.

Een muizenmodel van myocard ischemie-reperfusie schade door de eileiders van de LAD

Coronaire flow reserve (CFR) is nuttig voor de beoordeling van myocard zuurstofbehoefte en evaluatie van cardiovasculair risico. Deze studie stelt een stapsgewijze transthoracale Doppler echocardiografische (TTDE) methode vast voor longitudinale monitoring van de veranderingen in CFR, zoals gemeten vanuit de kransslagader bij muizen, onder de experimentele drukoverbelasting van aortische banding.

Echografie gebaseerde beoordeling van coronaire Flow en Coronaire Flow Reserve Met behulp van de druk overbelasting Model in Muizen

Deze methode beschrijft het gebruik van Quantum Micro-Computed Tomography (MicroCT) om de hartmorfologie, functie, perfusie, metabolisme en levensvatbaarheid te beoordelen met behulp van een gejodeerd contrastmiddel bij muizen met experimenteel geïnduceerde myocardischemie. De techniek kan worden toegepast voor niet-destructieve, longitudinale in vivo beeldvorming met hoge doorvoer van verschillende diermodellen van menselijke hartaandoeningen.

In vivo kwantitatieve beoordeling van myocard structuur, functie, perfusie en levensvatbaarheid Met behulp van Cardiac Micro-computertomografie

Acuut myocardinfarct in muizen induceert acute maar onvolledig gekarakteriseerd veranderingen in functie van left ventriculaire (LV). LV catheterisatie in muizen ondergaan coronaire occlusie fungeert als een nieuwe methode voor een real-time evaluatie van LV functie.

Real-time druk-volume analyse van acuut myocardinfarct in muizen

Coronaire stroomreserve (CFR), wordt gedefinieerd als de verhouding van de maximale coronaire bloedtoevoer naar de rust coronaire bloedstroom. We presenteren een protocol voor het evalueren van CFR bij ratten via echografie, die de mogelijkheid biedt om cardiovasculaire risicofactoren te voorspellen bij afwezigheid van obstructieve coronaire ziekte.

Evaluatie van coronaire stroom reserve na myocardiale ischemie reperfusie bij ratten

In dit rapport stellen we een nieuwe toepassing van licht-uithardende tandheelkundige harsen voor montageplaat van elektroden of microdialyse probes in chronische experimenten. Dit materiaal maakt directe binding aan de schedel.

Toepassing van de Light-cured Dental lijm hars voor permanente montage elektroden of Microdialyseprobes bij chronische experimenten

Hier presenteren wij een montage protocol voor...

Rechtop beeldvorming van Drosophila Embryo&#39;s

Groeiende aantal vlas variëteiten onder voedingsstoffen stress resulteert in genomische variatie binnen een subset van het genoom en fenotypische variatie. Een complex plaatsing op een bepaalde locatie wordt geassocieerd met de groei onder verschillende voedingsstoffen regimes en met veranderingen in genexpressie rond deze site.

Milieuvriendelijk Induced erfelijke veranderingen in de Flax

Een efficiënte methode om in hoge mate gezuiverd levensvatbare meiotische fracties te verkrijgen van de muis testis wordt beschreven, die een combinatie van een verfijnde cel dissociatie protocol met TL-geactiveerde cel sortering (FACS). Deze methode maakt gebruik van verschillen in het DNA-gehalte en de nucleaire dichtheid van discrete meiotische fracties.

Flowcytometrie Zuivering van Mouse cellen in de meiose

Flowcytometrie gebaseerde Zuivering van<em&gt; S. cerevisiae</em&gt; Zygoten

Leer een gemodificeerde parasternale long-as weergave om de linker voorste dalende slagader in muizen snel te lokaliseren. Deze methode maakt dynamische monitoring van coronaire stroomreserve na myocardischemie-reperfusie mogelijk.

Dynamische beoordelingen van coronaire stroomreserve na reperfusie van myocardischemie bij muizen

Meer video's verkennen