Gestroomlijnde intravitale beeldvormingsbenadering voor langetermijnmonitoring van de dynamiek van epitheelweefsel op een omgekeerde confocale microscoop
June 30th, 2023
Het protocol presenteert een nieuw hulpmiddel om intravitale beeldvorming te vereenvoudigen met behulp van omgekeerde confocale microscopie.
We ontwikkelden een tool om intravitale beeldvorming uit te voeren op levende muizen met behulp van een omgekeerde confocale microscoop. Dit stelt ons in staat om de dynamiek van huidcellen tijdens de homeostase te volgen en het celgedrag tijdens het begin en de progressie van de ziekte te vergelijken. Multifotonenmicroscopie is de primaire benadering die wordt toegepast om intravitale celtracking te bereiken.
De nadelen van deze microscopen zijn echter de beperkte dagelijkse beeldvorming, de hoge kosten en de technische complexiteit. Onze nieuwe tool maakt het gebruik van veelzijdige omgekeerde confocale microscopen mogelijk voor in vivo intravitale beeldvorming. Door het ontwerpbestand aan te passen, kunnen de afmetingen van de tafelwisselplaat worden aangepast aan elk merk omgekeerde microscoop.
Het objectiefgat kan worden vergroot of verkleind en verplaatst om in elk diermodel en weefsel naar keuze te passen.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Overzicht
Deze studie introduceert een nieuwe tool voor het uitvoeren van intravitale beeldvorming met behulp van omgekeerde confocale microscopie bij levende muizen, waardoor onderzoekers de dynamica van huidcellen tijdens homeostase en ziekteprogressie kunnen volgen. De nieuwe tool gaat in op de beperkingen van multi-foton microscopie, waardoor intravitale beeldvorming toegankelijker en veelzijdiger wordt.
Belangrijkste onderdelen van het onderzoek
Onderzoeksgebied
- Intravitale beeldvorming
- Huidceldynamica
- Microscopietechnieken
Achtergrond
- Huidige beperkingen van multi-foton microscopie omvatten hoge kosten en technische complexiteit.
- Omgekeerde confocale microscopen bieden veelzijdige beeldvormingsopties voor levend weefsel.
- Het aangepaste ontwerp zorgt voor aanpassingsvermogen aan verschillende diermodellen.
Gebruikte methoden
- Omgekeerde confocale microscopie met op maat gemaakte 3D-geprinte inserts
- Levende muizen als het biologische systeem
- Aanpasbare beeldvormingsopstelling voor verschillende weefsels
Belangrijkste resultaten
- Succesvolle acquisitie van Z-stacks van fluorescentie gelabeld oorweefsel met minimale drift.
- Continue beeldvorming van huidcellen (mCherry en GFP positief) over langere tijdsperioden.
- De effectiviteit van de 3D-geprinte live-beeldvormingsinserts voor stabiele beeldvorming is gevalideerd.
Conclusies
- Deze studie demonstreert een innovatieve aanpak om intravitale beeldvormingscapaciteiten te verbeteren.
- De tool verbetert het vermogen om cellulaire dynamica in levende modellen te bestuderen, waardoor onderzoek naar cellulaire biologie wordt bevorderd.
