Name: Meten van de mitochondriale functie van naïeve en effector CD8 T-cellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 7 s
Description: Leer de Mito Stress Test voor bio-energetische analyse van CD8 T-cellen. Deze methode meet mitochondriale functie en metabole flexibiliteit om immunologisch onderzoek te ondersteunen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<table><tbody><tr><td>Antimycin A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8674</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD28</td><td>Biolegend</td><td>102116</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD3/CD28 Dynabeads</td><td>ThermoFisher</td><td>11456D</td><td></td></tr><tr><td>Biotinylated anti-CD3</td><td>Biolegend</td><td>317320</td><td></td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>108321-42-2</td><td></td></tr><tr><td>CD8a+ T cell isolation kit</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-104-075</td><td></td></tr><tr><td>Cell Strainers (100 &micro;m)</td><td>CELL TREAT</td><td>229485</td><td></td></tr><tr><td>Ethylenediaminetetraacetic acid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E8008</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>26873-85-8</td><td>density gradient medium&nbsp;</td></tr><tr><td>FCCP ((4-(trifluoromethoxy) phenyl) carbonohydrazonoyl dicyanide)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C2920</td><td></td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G-6152</td><td></td></tr><tr><td>Glutamine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7513</td><td></td></tr><tr><td>LS Columns</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td>Positive selection columns</td></tr><tr><td>Magnetic cell separation column</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-301</td><td></td></tr><tr><td>Microplate</td><td>Agilent</td><td>102601-100</td><td></td></tr><tr><td>Oligomycin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>75351</td><td></td></tr><tr><td>Pyruvate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>113-24-6</td><td></td></tr><tr><td>Recobinant IL-2</td><td>PeproTech</td><td>200-02</td><td></td></tr><tr><td>Rotenone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R8875</td><td></td></tr><tr><td>Seahorse media</td><td>Agilent</td><td>103576-100</td><td></td></tr><tr><td>Sensor cartridge</td><td>Agilent</td><td>102601-100</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9275</td><td></td></tr><tr><td>Sterile 6 well plate</td><td>CELL TREAT</td><td>230601</td><td></td></tr><tr><td>Sterile 24 well plate</td><td>CELL TREAT</td><td>229524</td><td></td></tr><tr><td>XF Calibrant</td><td>Agilent</td><td>102601-100</td><td></td></tr></tbody></table>

meten van de mitochondriale functie van naïeve en effector cd8 t-cellen

Measuring Mitochondrial Function of Na&#239;ve and Effector CD8 T Cells

Meten van de mitochondriale functie van naïeve en effector CD8 T-cellen

Understanding how immunometabolism impacts the function, differentiation, and fate of lymphocytes has garnered significant interest and attention. ...

measuring-mitochondrial-function-of-nave-and-effector-cd8-t-cells

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Cel-gemedieerde lymphocytotoxicity (CML) testen kunnen worden gebruikt voor het autoreactieve reacties en onderzoek naar mechanismen van celdood in vitro test. Echter, met behulp van live-cell confocale microscopische beeldvorming technieken met fluorescente kleurstoffen, het type en de kinetiek van celdood en gebruik gemaakt van de paden worden bestudeerd in meer detail.

Methoden om Beta Cell Death gemedieerd beoordelen door cytotoxische T lymfocyten

This video demonstrates the assessment of the mitochondrial functioning of cerebral vascular endothelial (CVE) cells using an extracellular flux assay. CVE cells are plated in an extracellular flux cell culture plate. Extracellular flux sensors are hydrated before loading and calibration into the bioanalyzer. The plate containing cells is then loaded for analysis.

Assessing Mitochondrial Function in Cerebral Vascular Endothelial Cells

Dit protocol beschrijft een gevoelige, cel-gebaseerde cytotoxiciteit assay. Door het tellen van de afname in frequentie van levende doelwit CD4+ T-cellen in aanwezigheid van een toenemend aantal effector CD8+ T-cellen, staat deze assay toe de directe beoordeling van de cytolytische activiteit van antigeen-specifieke CD8+ T-cellen.

Celgebaseerde flowcytometrie-test om cytotoxische activiteit te meten

Dit artikel illustreert een krachtige methode om te kwantificeren mitochondriën of lysosomen in levende cellen. De combinatie van lysosoom - of mitochondriën-specifieke kleurstoffen met fluorescently geconjugeerde antilichamen tegen oppervlakte markeringen zorgt ervoor dat de kwantificering van deze organellen in gemengde cel populaties, zoals primaire cellen geoogst van weefselmonsters, met behulp van Multicolor stroom cytometry.

Multicolor Stroom Cytometry gebaseerde kwantificering van Mitochondria en lysosomen in T cellen

We beschrijven hier een flow Cytometry-based in vivo doden assay die het mogelijk maakt onderzoek van immunodominance in chemo T lymfocyten (CTL) Reacties op een model tumor antigeen. Wij bieden voorbeelden van hoe deze elegante assay kan worden gebruikt voor mechanistische studies en voor de effectiviteit van geneesmiddelen testen.

Maatwerk in vivo chemo tests om Immunodominance in tumor-specifieke CD8+ T Cell responsen te bestuderen

Hier beschrijven we een betrouwbare methode voor het meten van de mitochondriale massa en membraan potentieel in ex vivo gekweekte hematopoietische stamcellen en T-cellen.

Meting van het mitochondriale massa-en membraanpotentiaal in hematopoietische stamcellen en T-cellen doorstroming Cytometrie

Ontduiking van natuurlijke killer (NK) celgemedieerde uitroeiing door kankercellen is belangrijk voor kanker initiatie en progressie. Hier presenteren we twee niet-radioactiviteit-gebaseerde protocollen om NK cel-gemedieerde cytotoxiciteit te evalueren in de richting van levertumorcellen. Daarnaast wordt een derde protocol gepresenteerd om NK-celmigratie te analyseren.

Meting van Natural Killer Cell-Gemedieerde Cytotoxiciteit en Migratie in de context van levertumorcellen

Metabole aanpassing is fundamenteel voor T-cellen omdat het differentiatie, persistentie en cytotoxiciteit dicteert. Hier wordt een geoptimaliseerd protocol gepresenteerd voor het monitoren van mitochondriale ademhaling in ex vivo cytokine-gedifferentieerde menselijke primaire T-cellen.

Real-time monitoring van mitochondriale ademhaling in cytokine-gedifferentieerde menselijke primaire T-cellen

Een procedure voor het bestuderen van de dynamiek van mitochondriaal DNA (mtDNA) metabolisme in cellen met behulp van een multi-well plaatformaat en geautomatiseerde immunofluorescentie beeldvorming om mtDNA-synthese en -distributie te detecteren en te kwantificeren, wordt beschreven. Dit kan verder worden gebruikt om de effecten van verschillende remmers, cellulaire stress en gen-uitschakeling op het mtDNA-metabolisme te onderzoeken.

High-throughput image-based kwantificering van mitochondriale DNA-synthese en -distributie

Methoden voor het bestuderen van mitochondriale bio-energetica onder fysiologisch relevante substraatconcentraties in immuuncellen zijn beperkt. We bieden een gedetailleerd protocol dat gebruik maakt van fluorespirometrie met hoge resolutie om veranderingen in de reactie van het mitochondriale membraanpotentieel op de energievraag in menselijke T-cellen, monocyten en perifere mononucleaire cellen te beoordelen.

Fluorespirometrie met hoge resolutie om dynamische veranderingen in het mitochondriale membraanpotentiaal in menselijke immuuncellen te beoordelen

In deze studie beschrijven we een stapsgewijs protocol en benadrukken we de belangrijkste details voor het bepalen van morfologische kenmerken van mitochondriën in levende cellen, inclusief monstervoorbereiding, beeldacquisitie en gegevensanalyse. Deze methode wordt vaak gebruikt om de mitochondriale morfologie te onderzoeken voor het bestuderen van verschillende aandoeningen.

Bepaling van mitochondriale morfologie in levende cellen met behulp van confocale microscopie

Leer de Mito Stress Test voor bio-energetische analyse van CD8 T-cellen. Deze methode meet mitochondriale functie en metabole flexibiliteit om immunologisch onderzoek te ondersteunen.

Meten van de mitochondriale functie van naïeve en effector CD8 T-cellen

Meer video's verkennen