Name: Dissectie en classificatie van de ontwikkeling van de eierstokken bij vrouwelijke insecten van het wildtype (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-07-14T14:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 41 s
Description: Leer een eenvoudige dissectiemethode voor migratoire vrouwelijke insecten om eierstokontwikkeling en voortplantingsanatomie te bestuderen. Deze techniek vergelijkt paarzakken en eierstokken voor soortidentificatie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Deze studie werd ondersteund door het grote wetenschappelijke en technologische innovatieproject (2020CXGC010802).

OPMERKING: Let op veiligheidsmaatregelen voordat u migrerende insecten van het wilde type vangt, wordt aangeraden om veiligheidsuitrusting te dragen (handschoenen, shirts met lange mouwen en een veiligheidsbril). Schakel de val ook uit wanneer deze niet in gebruik is om andere veiligheidsrisico's en oververhitting van het licht te voorkomen. Het is belangrijk om vóór de dissectie de veiligheidsprotocollen te volgen, zoals het dragen van handschoenen, een veiligheidsbril en een laboratoriumjas om blootstelling aan lichaamsvloeistoffen en chemicaliën te voorkomen.
1. Vangen van migrerende insecten
<ol><li>Begin dit protocol met het vangen van insecten met behulp van de zoeklichtlamp. In dit protocol is de bron van het testinsect het Jiyang-district, de stad Jinan, de provincie Shandong, China (36.977088 ° N, 116.982747 ° E).</li>
	<li>Gebruik het hoofdgedeelte van de zoeklichtlamp, dat is gemaakt van niet-geroest staal, de doos, die een rechthoekige behuizing is, en de halogeenkoplamp van het type GT75, met een vermogen van 1000 W. Plaats de koplamp in het midden als lichtbron.</li>
	<li>Plaats een trechtervormig insectenverzamelkanaal in en plaats aan de onderkant van de lamp een doos voor het verzamelen van insecten met een diameter van 5 cm, gevolgd door een netzak voor het verzamelen van insecten van 60 bestellingen (0,5 m x 0,5 m), die wordt gebruikt om insecten te verzamelen die door licht worden gevangen. De bekende projectie van het licht is ongeveer 500 m boven de grond.</li>
	<li>Dit protocol legt de nadruk op de immigratiedynamiek van wildtype vrouwtjes en de ontwikkeling van de eierstokken; verzamel daarom verschillende soorten insecten (hier werd verzameld van april tot augustus, van 2021 tot 2022). Vermijd het verzamelen van kleine en gewonde insecten, selecteer groot ongedierte van vergelijkbare grootte voor dit experiment.</li>
</ol>2. Bereiding van insecten
<ol><li>Breng alle verzamelde insecten over van de netzak (0,5 m) naar de netkooi (30 cm x 30 cm) en zorg vervolgens voor een petrischaal met een gesteriliseerde oplossing van 10% honingwater (voeren is optioneel). Plaats de kooi bij 27 ± 2 °C, 65% ± 12 % relatieve vochtigheid en houd hem 8-12 uur in het donker.</li>
	<li>Selecteer wildtype vrouwtjes die op dezelfde dag in de kooi zijn gevlogen, breng ze voorzichtig over in de afzonderlijke flaconbuisjes en sluit elk buisje af met een katoenen deksel. Vermijd directe hantering, die het ongedierte kan beschadigen of verwonden als gevolg van overmatige druk. OPMERKING: Alle wildtype vrouwtjes werden 's nachts gevangen en de dissectie werd overdag uitgevoerd. Zo werd elk experiment binnen een dag uitgevoerd.</li>
</ol>3. Voorbereiding voor de insectenverlammingsmethode (figuur 1)
<ol><li>Plaats het geselecteerde vrouwelijke ongedierte afzonderlijk in een vliegenflesje in het midden en verdoven het vrouwtje met CO2 -gas door de naald van het blaaspistool vast te houden om milde verlamming te veroorzaken. Om te bevestigen of het ongedierte verlamd is of niet, duwt of raakt u het ongedierte voorzichtig aan met een zachte borstel. Geen reactie op zachte prikkels en immobiliteit duidt op een succesvolle verlamming. OPMERKING: Lage temperatuur (-20 °C) kan ook worden gebruikt als een alternatieve techniek om insecten te verlammen.</li>
</ol>4. Dissectie van insecten
<ol><li>Plaats het vers verlamde vrouwtje in de ontleedpetrischaal met absolute ethanol (10 ml). Om de invloed van schubbenharen en vleugelpoeder tijdens dissectie te voorkomen, infiltreert u het levende of verlamde insect met absolute alcohol en spoelt u het af met schoon water.</li>
	<li>Scheid de dorsale vleugels van de kruising van de borst en het buiklichaam, met behulp van twee pincetten.</li>
	<li>Breng de buik over in een nieuwe wegwerppetrischaal, met een geschikte hoeveelheid water (2-5 mm diep), en pel voorzichtig het abdominale exoskelet langs de dorsale ventrale lijn van de puntige mond naar de staart, met behulp van een ontleedtang. Herhaal dezelfde stappen aan de andere kant en leg het vervolgens in schoon water om de intacte weefsels te verspreiden.</li>
	<li>Trek voorzichtig de vetweefsels van de opperhuid af met een pincet en trek voorzichtig aan de eierstokken en laat ze los.</li>
	<li>Gebruik een ontleedtang om vetdeeltjes en andere organen rond de eierstokken voorzichtig te verwijderen. Over het algemeen zijn de eierstokken van het ongedierte meestal aan beide zijden van de buik naar binnen gevouwen, proberen ze in een vloeibare omgeving te werken terwijl ze de eierstokken ontvouwen, en trekken ze langzaam de paringszak uit het midden en halen ze de vetdeeltjes eruit die aan de eierstokbuizen zijn bevestigd.</li>
	<li>Houd de eierstok en de paringszak voorzichtig vast vanaf het verticale achterste uiteinde en vouw deze voorzichtig naar beneden. Om schade tijdens het uitvouwen te voorkomen, plaatst u de eierstok in een nieuwe of schone petrischaal met water. Houd de punt van de eierstok vast en vouw de eierstok naar binnen; Voer deze stap zorgvuldig uit om beschadiging van de eierstokken te voorkomen.</li>
</ol>5. Analyse van gegevens voor de anatomie van eierstokweefsels
<ol><li>Beoordeel in deze stap de ontwikkeling van de eieren voor elk insect, volgens de kleur en grootte van de eieren, om de volwassenheid ervan te beoordelen. Beoordeel vervolgens de graad van de eierstokken op basis van de ontwikkeling van de eieren. OPMERKING: De verdeling van verschillende ovariële ontwikkelingsniveaus wordt voornamelijk verdeeld, hetzij vóór het leggen van eieren, hetzij vóór de ei-ontwikkeling met dooierneerslagniveau. De ontwikkeling van insecten in eikorrels is verder onderverdeeld in stadia voor meer duidelijkheid, zoals het stadium van het voorkomen van dooier, het stadium van dooierrijpheid en het stadium van het sterven van de dooier. De rijpheid van eierkorrels hangt af van de volheid, kleur en grootte van het ei om de rijpheid te beoordelen.</li>
	<li>Zorg er na dissectie voor dat de weefsels van de vrouwelijke paringszakken worden gescheiden van de intacte eierstokken en observeer de morfologie om de soort te onderscheiden, omdat de anatomie van de meeste paringszakken van soort tot soort verschilt. Gebruik daarom paringszakjes om onderscheid te maken tussen soorten.</li>
	<li>Evalueer bij deze stap de anatomie van de eierstokken en analyseer de beoordeling van de ontwikkeling van de eierstokken. Verdeel de eierstokweefsels in vijf graden (graad 1 tot graad 5).<ol><li>Zoek naar de volgende veranderingen en structuur om het weefsel te organiseren: eerste klas (1) is een vroeg stadium van ontwikkeling (melkachtig transparant), volle buik, zacht, vet lichaam pluizig, lichte kleur, moeilijk te pellen. Tweede graad (2) is het dooierafzettingsstadium en beoordeelt de eierstokken indien nodig afzonderlijk na observatie van het langere en dikkere eierstokkanaal. Derde klas (3) heeft minder vetlichamen en slechts een paar korrels die aan de eierstok vastzitten. Vierde klas (4) lijkt minder elastisch en gemakkelijk te breken, en sommige eieren kunnen aanwezig zijn in het midden van de baarmoederbuis. Vijfde leerjaar (5) is gemakkelijk te identificeren met minder of geen vetlichamen, atrofische en fragiele eierstokken.</li>
	</ol></li>
	<li>Leg foto's vast met een digitale camera volgens de experimentele behoefte.</li>
</ol>

Dissectie voor het identificeren van trekkende insecten via ovariële reproductieanalyse

De auteurs hebben geen belangenconflicten te melden.

Eierstokanalysemethoden worden routinematig gebruikt in de gewasbescherming, om de beweging van insectenvlucht en populatie op te helderen voor voorspelling 19,20,21 en om de fysiologische variaties in insecten uit te werken. Het is opgevallen dat de unieke migratie en het snelle verspreidingsvermogen van veel voorkomende landbouwplagen, zoals bolworm, legerworm, tarorups en bietenmot, het moeilijk maken om voorspellingen uit an...

Migratie van insecten speelt een cruciale rol in de populatiedynamiek van de wereldwijde verspreiding van insecten voor insecten zoals Helicoverpa armigera - de katoenbolworm, Mythimna apart - de oosterse legerworm, Spodoptera litura - de tarorups, Spodoptera exigua - de bietenlegerworm, die zijn gemeld als ernstige plagen in China 1,2,3,4 . De lange reisafstanden, seizoensgebonden bewegingen, hoge vruchtbaarheid van migrerende plagen en ecologische factoren hebben grote moeilijkheden veroorzaakt bij het voorspellen, voorspellen en bestrijden van deze plagen5. Monitoring van de migratie van plagen is nodig om het aanpassingsvermogen en de gedragsveranderingen aan het licht te brengen die migrerende plagen vergemakkelijken volgens klimaatveranderingen of cycli6. Om hun groei, voortplanting en overleving te ondersteunen, hebben insecten tijdens de evolutie sequentieel aanpassingsvermogen verworven; Deze reeks adaptieve levens heeft geleid tot veel veranderingen in het voortplantingssysteem, zoals een migratiestrategie die leidt tot controle van de ontwikkeling van de eierstokken in het lange migratieproces.
De ontwikkeling van de eierstokken komt veel voor bij trekkende plagen, wat de groei van hun populatie beïnvloedt7. Daarom is de ontwikkeling van de eierstokken al lange tijd een hot topic van onderzoek naar migrerende plagen. Een reeks studies heeft geleid tot verschillende indicatoren voor de ontwikkeling van de eierstokken en classificatiestrategieën. Tot nu toe zijn verschillende methoden gebruikt om de ontwikkeling van de eierstokken te analyseren, bijvoorbeeld Loxostege sticticalis - de ontwikkeling van de weidemot en de eierstok die de eerste bevederingsfase, de vroege paaiperiode, de paaiperiode en het einde van ovipositie8 omvat. Sommige onderzoekers verdelen de eierstokniveaus op basis van de ontwikkeling van de dooierkleur in migrerende Lepidoptera-plagen, zoals S. exigua - de bietenlegerworm, Pseudaletia unipuncta - de echte legerworm, en Cnaphalocrocis medinalis - de rijstbladmap, enz.9,10,11,12. In eerdere studies werden de ovariële ontwikkelingsniveaus voor ongedierte, zoals katoenbolworm en rijstbladroller, verdeeld in vijf stadia: dooierafzettingsfase, rijpheidsstadium van eikorrels, rijpheidsfase van rijp wachten op geboorte, piek-ovogeneseperiode en eindpaaifase13,14. De ovariële ontwikkeling van de Europese maïsboorder was verdeeld in zes ontwikkelingsstadia: dooierafzettingsfase, eirijping, pre-eieren dispositionering, piekpaaifase en eindpaaifase15.
Bovendien hebben insecten van hetzelfde geslacht verschillende ontwikkelingsstadia, zoals ovariële ontwikkelingsniveaus van Spodoptera frugiperda - de herfstlegerworm - valt uiteen in vier niveaus: dooierafzettingsfase, volwassen wachten op levering, piek ovi-positiviteit en eindpaaifase16. Aan de andere kant heeft de ontwikkeling van de eierstokken in Spodoptera exigua - de bietenmot - vijf niveaus: transparant, vitellogenese, rijping van eieren, afgifte van eieren en late legniveaus17.
Eerdere studies kunnen de ontwikkeling van enkele tot meerdere ovariële ontwikkelingsniveaus alleen classificeren met behulp van kleurrijpheid van dooier, ovipositie en ei-ontwikkelingen, maar classificatie kan niet worden gedaan op basis van anatomie van het voortplantingssysteem. De ontwikkeling van een eierstok op basis van de morfogenese-anatomie is een minder bestudeerd gebied. Hier werd de dissectiemethode ontworpen om migrerende vrouwtjes in de populatie te voorspellen met behulp van twee soorten eierstokweefsel, om hun voortplantingsdynamiek uit te werken op basis van de anatomische morfogenese van het ovariële ontwikkelingsstadium en de paringszak, wat direct bewijs leverde om migrerende wildtype vrouwtjes te onderscheiden.
Sommige studies hebben aangetoond dat migrerende insectensoorten van de Noctuidae vaak werden vastgelegd door zoeklichten18. De eierstok van de meeste trekkende insectensoorten van de Noctuidae bevindt zich in de vroege stadia van ontwikkeling tijdens de beginfase van de migratie en het eierstokniveau neemt toe met de voortgang van de trek. In deze studie wordt de dissectiemethode voor ovariële ontwikkelingsgraden beschreven, om de twee voortplantingsweefsels van verschillende vrouwelijke populatieplagen te bestuderen, gevangen door zoeklicht. Deze methode bevordert niet alleen het onderzoek om de migratiedynamiek te begrijpen, maar ook faciliteiten op het gebied van insectenclassificatie, insectenfysiologie, plaagvoorspelling en voorspelling van vrouwelijke plaagsoorten.

<table><tbody><tr><td>Digitale camera</td><td>Canon ( China ) co., LTD</td><td>EOS 800D</td><td></td></tr><tr><td>Druppelaar</td><td>Qingdao jindian biochemisch apparatuur co., LTD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Absoluut ethanol (99,7%)</td><td>Shanghai Hushi Laboratoriumapparatuurco., LTD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pincet</td><td>&nbsp;Vetus Tools co., LTD</td><td>ST-14</td><td></td></tr><tr><td>GT75 type halogeen koplamp (1000 W)</td><td>Shanghai Yadeng Industry co., LTD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Helicoverpa armigera, Mythimna separate, Spodoptera litura, Spodoptera exigua</td><td>Jiyang district, Jinan stad, Shandong provincie, China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Meetcilinder, beker, kolf</td><td>Qingdao jindian biochemisch apparatuur co., LTD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Net zak&nbsp;</td><td>Qingdao jindian biochemisch apparatuur co., LTD</td><td></td><td>0,5 m&nbsp;</td></tr><tr><td>Net kooien&nbsp;</td><td>Qingdao jindian biochemisch apparatuur co., LTD</td><td></td><td>30 cm x 30 cm</td></tr><tr><td>Petrischalen</td><td>Qingdao jindian biochemisch apparatuur co., LTD</td><td></td><td>&nbsp;60 mm diameter</td></tr></tbody></table>

dissectie en classificatie van de ontwikkeling van de eierstokken bij vrouwelijke insecten van het wildtype

Dissection and Grading of Ovarian Development in Wild-Type Female Insects

Trekkende insectenplagen vormen een ernstige uitdaging voor de voedselproductie en -zekerheid over de hele wereld. De trekkende plagen kunnen worden gemonitord en gevangen met behulp van zoeklichtvallen. Een van de belangrijkste technieken voor het voorspellen van migrerende plagen is het identificeren van de migrerende soorten. In de meeste gevallen is het echter moeilijk om de informatie alleen op het uiterlijk te krijgen. Daarom kan het gebruik van kennis die is verkregen door systematische analyse van het vrouwelijke voortplantingssysteem helpen om de gecombineerde anatomische morfologie van de paringszak van de eierstokken en de ontwikkelingsgradatie van de eierstokken van wildtype migrerende insecten die zijn gevangen met zoeklichtvallen te begrijpen. Om de toepasbaarheid van deze methode aan te tonen, werden de ontwikkelingsstatus van de eierstokken en de ontwikkelingsstadia van eikorrels rechtstreeks beoordeeld in Helicoverpa armigera, Mythimna separata, Spodoptera litura en Spodoptera exigua voor de anatomie van de eierstokken, en werden de paringszakjes van de eierstokken bestudeerd in Agrotis ipsilon, Spaelotis valida, Helicoverpa armigera, Athetis lepigone, Mythimna separata, Spodoptera litura, Mamestra brassicae en Spodoptera exigua, om hun relaties te onderzoeken. Dit werk toont de specifieke dissectiemethode om migrerende insecten van het wildtype te voorspellen, waarbij het unieke voortplantingssysteem van verschillende trekkende insecten wordt vergeleken. Vervolgens werden beide weefsels, namelijk de eierstok en de paringszakjes, verder onderzocht. Deze methode helpt bij het voorspellen van de dynamiek en de structurele ontwikkeling van voortplantingssystemen in wilde vrouwelijke trekinsecten.

Ontwikkeling van de eieren Het bovenstaande protocol werd toegepast om de ontwikkeling van eicellen in de eierstok te analyseren. Voor dit doel werden eieren in het algemeen in vier stadia ingedeeld om een onderscheid te maken tussen de vroege en volwassen stadia van ei-ontwikkeling tussen alle soorten, bijvoorbeeld bolworm, legerworm, tarorups en bietenmot. Hier werd het vroege stadium van bevedering (melkwit transparant stadium) waargenomen. Figuur 2A laat zien dat de e...

Het protocol demonstreert een eenvoudige en gemakkelijke dissectiemethode, geschikt voor wildtype migrerende vrouwelijke insecten die zijn gevangen met zoeklichtvallen. Deze techniek kan dezelfde soort aanzienlijk ophelderen door beide voortplantingsweefsels te vergelijken, namelijk de paringszak en de ovariële ontwikkeling van vrouwelijke insecten van het wildtype.

Dissectie en classificatie van de ontwikkeling van de eierstokken bij vrouwelijke insecten van het wildtype

Migratory insect pests pose serious challenges to food production and security all over the world. The migratory pests can be monitored and captured using ...

We streven ernaar om deze nieuwste methode voor trekplagen toe te passen bij het beschrijven van de ovariële anatomie van migrerende vrouwtjes. Deze informatie zal nuttig zijn om vergelijkbare individuele soorten te analyseren. Het voorspellen van migrerende vrouwelijke insecten is een behoorlijke uitdaging.Daarom is visualisatie van de anatomie van de eierstokken vrij eenvoudig en erg nuttig.

dissection-grading-ovarian-development-wild-type-female

Research

JoVE Journal

Behavior

Gedrag

Dissectie van Drosophila Eierstokken

Hoe niches en stamcellen vorm tijdens de ontwikkeling is een belangrijke vraag met praktische implicaties. In...

Dissectie en kleuring van de Drosophila Larvale Eierstokken

Voorbereiden Individuele Drosophila Egg Chambers voor Live Imaging

Deze video beschrijft de algemene anatomie van de Drosophila-eierstok en bevat een methode om eierstokken te ontleden voor levende of vaste beeldvorming.

Melanogaster van Drosophila Eierstokdissectie: een techniek voor ex vivo weefselpreparaat

Stage-specifieke isolatie van midden tot late Drosophila follikels is bruikbaar voor verschillende doeleinden. Deze follikels ontwikkelen cultuur, die zorgt voor genetische en / of farmacologische manipulaties worden gecombineerd met in vitro assays en levende ontwikkeling beeldvorming. Bovendien kan follikels worden gebruikt voor moleculaire studies, zoals het isoleren van mRNA en eiwit.

Het nut van Stage-specifieke mid-to-late<em&gt; Drosophila</em&gt; Follikel Isolation

Analyse van de structureel-functionele relatie van de mitochondriën is vereist voor een grondig begrip van de regulerende mechanismen van de functionele werking van mitochondriën. Specifieke methoden voor het bestuderen van de structuur en functie van mitochondriën in levende en gefixeerde Drosophila eierstokken worden in dit artikel beschreven en gedemonstreerd.

Het bestuderen van mitochondriale structuur en functie in Drosophila Eierstokken

We beschrijven een protocol voor dissectie, fixatie en immunokleuring van steroidogenic organen in Drosophila larven en volwassen vrouwtjes steroïde hormonen biosynthese en haar reguleringsmechanisme bestuderen. Naast steroïdogene organen visualiseren we de innervatie van steroidogenic organen en steroidogene doelcellen zoals kiemlijn stamcellen.

Protocollen voor het visualiseren steroidogenic organen en hun Interactive Organen met Immunokleuring in de fruitvlieg<em&gt; Drosophila melanogaster</em

De Drosophila eierstok is een uitstekende modelsysteem voor het bestuderen van de stamcel niche ontwikkeling. Hoewel de methoden voor het ontleden van larvale en volwassen eierstokken zijn gepubliceerd, vereisen pop eierstok dissecties verschillende technieken die niet zijn gepubliceerd in detail. Hier duidelijk naar voren komt een protocol voor ontleden, kleuring en montage van de pop eierstokken.

Dissectie en kleuring van Drosophila pop eierstokken

Een methode voor microdissectie van de eileider van de muis die het mogelijk maakt om de afzonderlijke segmenten te verzamelen met behoud van RNA-integriteit wordt gepresenteerd. Bovendien wordt een niet-enzymatische ovductale celdissociatieprocedure beschreven. De methoden zijn geschikt voor latere gen- en eiwitanalyse van de functioneel verschillende eileidersegmenten en gedissocieerde eileidercellen.

Microdissectie en dissociatie van de murine-eileider: individuele segmentidentificatie en eencellige isolatie

Het keldermembraan is essentieel voor weefsel- en orgaanmorfogenese tijdens de ontwikkeling. Om de mechanismen die leiden tot de juiste plaatsing van deze structuur beter te begrijpen, beschrijft het gepresenteerde protocol methoden om de intracellulaire handel en secretie van keldermembraaneiwitten in epitheelcellen te visualiseren en te karakteriseren met behulp van confocale en superresolutiemicroscopie.

Confocale en superresolutie beeldvorming van gepolariseerde intracellulaire handel en secretie van keldermembraaneiwitten tijdens Drosophila Oogenesis

Leer een eenvoudige dissectiemethode voor migratoire vrouwelijke insecten om eierstokontwikkeling en voortplantingsanatomie te bestuderen. Deze techniek vergelijkt paarzakken en eierstokken voor soortidentificatie.

Dissectie en classificatie van de ontwikkeling van de eierstokken bij vrouwelijke insecten van het wildtype

Meer video's verkennen