Name: Een efficiënte en reproduceerbare methode voor het produceren van samengestelde planten door Agrobacterium rhizogenes-gebaseerde harige worteltransformatie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-06-30T14:20:00.000+00:00
Duration: 4 min 9 s
Description: Leer een efficiënte Agrobacterium rhizogenes-gebaseerde methode voor haarworteltransformatie in diverse plantensoorten. Deze techniek vereenvoudigt het maken van samengestelde planten voor genfunctiestudies.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door het Onderzoeksfonds van de Liaocheng Universiteit (318012028) en de Natural Science Foundation van de provincie Shandong (ZR2020MC034).

1. Groeiomstandigheden van planten en A. rhizogenes-cultuur 
<ol><li>Zaaien van zaden OPMERKING: Wilde sojabonenzaden werden verzameld in Yanggu County, Liaocheng, China; zaden van S. americanum en pompoen lokale variëteit Yinsu werden gekocht van een markt.<ol><li>Verzamel zaden van wilde sojabonen, S. americanum en de lokale variëteit van pompoen, zaai ze in vermiculiet op een diepte van 1 cm en geef ze grondig water. Plant 20 zaden in plastic dozen van 8 cm x 11 cm x 9 cm. Kweek de planten in een groeikamer bij 24 ± 2 °C met een 16 h licht/8 h dark cyclus bij ongeveer 70% relatieve vochtigheid. OPMERKING: Jassen van wilde sojabonenzaden moeten worden gebroken voordat ze worden gezaaid. Als de onderzoeksvraag zich richt op interacties tussen planten en micro-organismen, moeten zaden, vermiculiet, plastic dozen en water voor gebruik worden gesteriliseerd.</li>
		<li>Activering en kweek van A. rhizogenes K599 OPMERKING: De A. rhizogenes K599-stam had één binaire vector pRed13052 met een rood fluorescerend reportergen DsRed2.
		<ol><li>Verwijder de A. rhizogenes stam K599 uit een vriezer van -80 °C en activeer de bacteriën op vast LB-medium (met 50 mg/L kanamycine en 50 mg/L streptomycine) bij 28 °C gedurende 48 uur.</li>
			<li>Kies een enkele kloon van stam K599 en kweek deze gedurende 12 uur in 1 ml vloeibaar antibioticumbevattend LB-medium.</li>
			<li>Verdeel 500 μL van de bacteriële suspensie gelijkmatig over vast antibioticumbevattend LB-medium, gevolgd door incubatie bij 28 °C gedurende 24 uur.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
</ol>2. One-step A. rhizogenes-gemedieerde harige worteltransformatiemethode
<ol><li>Hypocotylincisie<ol><li>Na 7 dagen (definieer het zaaien van de zaden als dag 0), zijn zaadling zaadlobben net ontvouwd (figuur 1A), gebruik een gesteriliseerd, scherp scalpel om ongeveer 0,5-1 cm van het hypocotyl te snijden (figuur 1B). Gooi de primaire wortel en een deel van de gedeeltelijke hypocotyl weg. OPMERKING: Gebruik de scalpel met zorg.</li>
	</ol></li>
	<li>K599 inenting<ol><li>Bedek de hypocotylincisie met K599-bacteriën (figuur 1C).</li>
		<li>Plant de zaailingen in vochtig vermiculiet (figuur 1D).</li>
		<li>Infecteer 30 planten van elke soort via A. rhizogenes-gemedieerde harige worteltransformatie. Geef elke plant water met 5 ml geresuspendeerde K599 bacteriële suspensie (OD600 = 0,5-0,6) in een kwartsterkte (0,25x) Gamborg B-5 basisch medium (figuur 1E).</li>
		<li>Bedek de potten met een zeer transparante plastic zak (figuur 1F) en plaats ze in een groeikamer.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Harige wortelproductie
<ol><li>Laat de planten groeien gedurende ~ 12 dagen na inenting, nieuwe harige wortels zullen worden geïnduceerd en gegenereerd op de incisieplaats. Na 15 dagen bereiken de behaarde wortellengtes meestal 2-5 cm (figuur 2).</li>
	<li>Om te bepalen of de geproduceerde harige wortels transgeen zijn, onderzoekt u de expressie van reportergenen die afhankelijk zijn van de getransformeerde vector in K599.<ol><li>Detecteer de expressie van het reportergen DsRed2 met behulp van een chemiluminescentiebeeldvormingssysteem met groen excitatielicht bij 540 nm en emissie bij 600 nm (figuur 2B, figuur 2D en figuur 2F).</li>
	</ol></li>
</ol>

Eenstaps harige worteltransformatiemethode voor het bevorderen van wortelgerelateerde biologie

<ol><li>Chilton, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agrobacterium+rhizogenes+inserts+T-DNA+into+the+genome+of+the+host+plant+root+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Agrobacterium rhizogenes inserts T-DNA into the genome of the host plant root cells.</a> Nature. 295, 432-434 (1982).</li>
<li>Fan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+fast%2C+simple%2C+high+efficient+and+one-step+generation+of+composite+cucumber+plants+with+transgenic+roots+by+Agrobacterium+rhizogenes-mediated+transformation%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%2C+Tissue+and+Organ+Culture+%28PCTOC%29%22%5BJournal%5D)">A fast, simple, high efficient and one-step generation of composite cucumber plants with transgenic roots by Agrobacterium rhizogenes-mediated transformation.</a> Plant Cell, Tissue and Organ Culture (PCTOC). 141, 207-216 (2020).</li>
<li>Du, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+targeted+mutagenesis+in+soybean+by+TALENs+and+CRISPR%2FCas9%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Efficient targeted mutagenesis in soybean by TALENs and CRISPR/Cas9.</a> Journal of Biotechnology. 217, 90-97 (2016).</li>
<li>Nguyen, D. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+efficient+hairy+root+system+for+validation+of+plant+transformation+vector+and+CRISPR%2FCas+construct+activities+in+cucumber+%28Cucumis+sativus+L.%29%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Plant+Science%22%5BJournal%5D)">An efficient hairy root system for validation of plant transformation vector and CRISPR/Cas construct activities in cucumber (Cucumis sativus L.).</a> Frontiers in Plant Science. 12, 770062(2022).</li>
<li>Liu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AtGCS+promoter-driven+clustered+regularly+interspaced+short+palindromic+repeats%2FCas9+highly+efficiently+generates+homozygous%2Fbiallelic+mutations+in+the+transformed+roots+by+Agrobacterium+rhizogenes-mediated+transformation%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Plant+Science%22%5BJournal%5D)">AtGCS promoter-driven clustered regularly interspaced short palindromic repeats/Cas9 highly efficiently generates homozygous/biallelic mutations in the transformed roots by Agrobacterium rhizogenes-mediated transformation.</a> Frontiers in Plant Science. 13, 952428(2022).</li>
<li>Irigoyen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+hairy+roots+enable+high+throughput+identification+of+antimicrobials+against+Candidatus+Liberibacter+spp%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Plant hairy roots enable high throughput identification of antimicrobials against Candidatus Liberibacter spp.</a> Nature Communications. 11 (1), 5802(2020).</li>
<li>Plasencia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eucalyptus+hairy+roots%2C+a+fast%2C+efficient+and+versatile+tool+to+explore+function+and+expression+of+genes+involved+in+wood+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Biotechnology+Journal%22%5BJournal%5D)">Eucalyptus hairy roots, a fast, efficient and versatile tool to explore function and expression of genes involved in wood formation.</a> Plant Biotechnology Journal. 14 (6), 1381-1393 (2016).</li>
<li>Gutierrez-Valdes, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hairy+root+cultures-a+versatile+tool+with+multiple+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Plant+Science%22%5BJournal%5D)">Hairy root cultures-a versatile tool with multiple applications.</a> Frontiers in Plant Science. 11, 33(2020).</li>
<li>Stougaard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agrobacterium+rhizogenes+as+a+vector+for+transforming+higher+plants.+Application+in+Lotus+corniculatus+transformation%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Agrobacterium rhizogenes as a vector for transforming higher plants. Application in Lotus corniculatus transformation.</a> Methods in Molecular Biology. 49, 49-61 (1995).</li>
<li>Kereszt, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agrobacterium+rhizogenes-mediated+transformation+of+soybean+to+study+root+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Agrobacterium rhizogenes-mediated transformation of soybean to study root biology.</a> Nature Protocols. 2 (4), 948-952 (2007).</li>
<li>Ho-Plágaro, T., Huertas, R., Tamayo-Navarrete, M. I., Ocampo, J. A., García-Garrido, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+method+for+Agrobacterium+rhizogenes-mediated+transformation+of+tomato+suitable+for+the+study+of+arbuscular+mycorrhizal+symbiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Methods%22%5BJournal%5D)">An improved method for Agrobacterium rhizogenes-mediated transformation of tomato suitable for the study of arbuscular mycorrhizal symbiosis.</a> Plant Methods. 14, 34(2018).</li>
<li>Yu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overexpression+of+phosphatidylserine+synthase+IbPSS1+affords+cellular+Na%2B+homeostasis+and+salt+tolerance+by+activating+plasma+membrane+Na%2B%2FH%2B+antiport+activity+in+sweet+potato+roots%5BTitle%5D)+AND+%22Horticulture+Research%22%5BJournal%5D)">Overexpression of phosphatidylserine synthase IbPSS1 affords cellular Na+ homeostasis and salt tolerance by activating plasma membrane Na+/H+ antiport activity in sweet potato roots.</a> Horticulture Research. 7, 131(2020).</li>
<li>Boisson-Dernier, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agrobacterium+rhizogenes-transformed+roots+of+Medicago+truncatula+for+the+study+of+nitrogen-fixing+and+endomycorrhizal+symbiotic+associations%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Plant-Microbe+Interactions%3A+MPMI%22%5BJournal%5D)">Agrobacterium rhizogenes-transformed roots of Medicago truncatula for the study of nitrogen-fixing and endomycorrhizal symbiotic associations.</a> Molecular Plant-Microbe Interactions: MPMI. 14 (6), 695-700 (2001).</li>
<li>Fan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One-step+generation+of+composite+soybean+plants+with+transgenic+roots+by+Agrobacterium+rhizogenes-mediated+transformation%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Plant+Biology%22%5BJournal%5D)">One-step generation of composite soybean plants with transgenic roots by Agrobacterium rhizogenes-mediated transformation.</a> BMC Plant Biology. 20 (1), 208(2020).</li>
<li>Fan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anthocyanin%2C+a+novel+and+user-friendly+reporter+for+convenient%2C+non-destructive%2C+low+cost%2C+directly+visual+selection+of+transgenic+hairy+roots+in+the+study+of+rhizobia-legume+symbiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Methods%22%5BJournal%5D)">Anthocyanin, a novel and user-friendly reporter for convenient, non-destructive, low cost, directly visual selection of transgenic hairy roots in the study of rhizobia-legume symbiosis.</a> Plant Methods. 16, 94(2020).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+AtMYB75+as+a+reporter+gene+in+the+study+of+symbiosis+between+tomato+and+Funneliformis+mosseae%5BTitle%5D)+AND+%22Mycorrhiza%22%5BJournal%5D)">Application of AtMYB75 as a reporter gene in the study of symbiosis between tomato and Funneliformis mosseae.</a> Mycorrhiza. 33 (3), 181-185 (2023).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+set+of+novel+binary+expression+vectors+for+plant+gene+function+analysis+and+genetic+transformation%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Plant+Science%22%5BJournal%5D)">Development of a set of novel binary expression vectors for plant gene function analysis and genetic transformation.</a> Frontiers in Plant Science. 13, 1104905(2023).</li>
<li>Li, Q. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phytochrome+B+inhibits+darkness-induced+hypocotyl+adventitious+root+formation+by+stabilizing+IAA14+and+suppressing+ARF7+and+ARF19%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Journal%3A+For+Cell+and+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Phytochrome B inhibits darkness-induced hypocotyl adventitious root formation by stabilizing IAA14 and suppressing ARF7 and ARF19.</a> The Plant Journal: For Cell and Molecular Biology. 105 (6), 1689-1702 (2021).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen belangenconflicten te melden.

De eenstaps A. rhizogenes-gemedieerde harige wortelmethode is een eenvoudigere en efficiëntere methode voor het produceren van samengestelde planten dan de hypocotyl-injectiemethode. De ARM-methode in één stap verbetert de efficiëntie van harige worteltransformatie aanzienlijk, verkort de tijd om harige wortels te produceren, verhoogt het aantal harige wortels en vermindert de hoeveelheid werk die ermee gemoeid is. Het verbeterde transformatieprotocol is optimaal voor studies naar symbiose tussen vlinderbloemige...

Agrobacterium rhizogenes is een gramnegatieve bodembacterie uit de familie Rhizobiaceae. A. rhizogenes kan bijna alle tweezaadlobbigen, een paar eenzaadlobbigen en individuele gymnospermen via wonden infecteren en harige wortels in geïnfecteerde planten produceren. De bacterie draagt het Ri (wortel-inducerend) plasmide en het T-DNA van het Ri-plasmide draagt het opinesynthesegen en rolgenen (wortellocusgenen). Nadat het T-DNA van het Ri-plasmide een plantencel binnendringt en is geïntegreerd in een gastheerchromosoom, induceert de expressie van de rolgenen de productie van harige wortels1. Een plant binaire expressievector met een doelgen wordt omgezet in A. rhizogenes en de getransformeerde A. rhizogenes wordt gebruikt om een plant te infecteren. Transgene wortels kunnen worden geïnduceerd in geïnfecteerde planten, waardoor samengestelde planten worden geproduceerd die transgene wortels en niet-transgene stengels en knoppen bevatten. Over het algemeen kan een samengestelde plant binnen 14-20 dagen worden verkregen. A. rhizogenes-gemedieerde harige worteltransformatie wordt over het algemeen niet beperkt door genotype in tweezaadlobbige planten2. De harige wortels geproduceerd door A. rhizogenes-geïnfecteerde planten worden gekenmerkt door een snelle groeisnelheid, stabiele overerving en eenvoudige bediening. Harige worteltransformatie gemedieerd door A. rhizogenes wordt momenteel veel gebruikt om wortelgerelateerde biologie te bestuderen. Bovendien kan de transformatie van harige wortels ook worden gebruikt om de doelbewerkingsefficiëntie van het CRISPR / Cas9-systeem 3,4,5 en eiwitsubcellulaire lokalisatie te valideren en te optimaliseren. Daarom is harige worteltransformatie een belangrijk hulpmiddel bij onderzoek naar de genfunctie van planten, metabole engineering en interacties tussen wortels en rhizosfeermicro-organismen 6,7,8.
Samengestelde planten die transgene wortels bevatten die zijn verkregen door harige worteltransformatie, zijn op grote schaal geproduceerd in tweezaadlobbige planten, vooral in peulvruchten. De traditionele methode om de hypocotyl te injecteren met A. rhizogenes is gebruikt om composiet Lotus corniculatus9, sojabonen 10, tomaat11, zoete aardappelen12 en vele andere planten 5,8 te produceren. De hypocotyl-injectiemethode is inefficiënt en veroorzaakt waarschijnlijk de dood van jonge of kleine hypocotylplanten. Daarom werd de methode verbeterd door de embryonale wortels af te snijden, de zaailingincisie te bedekken met A. rhizogenes en vervolgens het hypocotyl op steriel kweekmedium te plaatsen voor bewortelingsteelt13. Die stappen worden echter uitgevoerd in een steriele omgeving en de bedieningsstappen zijn relatief omslachtig. In het bijzonder moeten de resulterende samengestelde planten worden getransplanteerd, wat de hoeveelheid werk verhoogt. In eerder werk werd eenstaps A. rhizogenes-gemedieerde (ARM) harige worteltransformatie vastgesteld in komkommer, sojabonen, Lotus japonicus, Medicago truncatula en tomaat 2,14,15,16,17. De primaire wortel en gedeeltelijke hypocotyl werden verwijderd, de incisieplaats van de resterende hypocotyl werd bedekt met getransformeerde A. rhizogenes en de zaailing werd vervolgens geplant in vochtig steriel vermiculiet. Na 12 dagen van de teelt werden harige wortels geproduceerd op de incisieplaats. De eenstaps ARM-methode is zeer efficiënt en vereist minder tijd om harige wortels te produceren. Verplanten na het vormen van harige wortels is ook niet nodig. Omdat microbiële besmetting kan worden vermeden zonder transplantatie, kan de eenstaps ARM-methode bijzonder nuttig zijn bij het bestuderen van interacties tussen planten en micro-organismen, zoals symbiotische stikstoffixatie tussen vlinderbloemige planten en Rhizobia, en symbiose tussen planten en arbusculaire mycorrhizaschimmels. In dit artikel wordt een gedetailleerd één-stap A. rhizogenes-gemedieerd harig worteltransformatieprotocol gegeven met voorbeelden van samengestelde planten geproduceerd in wilde sojabonen, Solanum americanum en pompoen. Met het protocol kunnen onderzoekers de armtransformatie in één stap soepel uitvoeren.

<table><tbody><tr><td>kanamycin</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td>A506636</td><td></td></tr><tr><td>LB medium</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td>B540113</td><td></td></tr><tr><td>plastic box</td><td>LiaoSu</td><td></td><td>8 cm x 11 cm x 9 cm</td></tr><tr><td>pumpkin</td><td></td><td></td><td>local variety Yinsu</td></tr><tr><td>streptomycin</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td>A610494&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Tanon-5200Multi machine</td><td>Tanon Co., Ltd., China</td><td>5200Multi</td><td>chemiluminescence imaging system</td></tr><tr><td>tomato</td><td></td><td></td><td>local variety Zhongshu4</td></tr><tr><td>wild soybean</td><td></td><td></td><td>collected in Yanggu County, Liaocheng, China</td></tr></tbody></table>

een efficiënte en reproduceerbare methode voor het produceren van samengestelde planten door agrobacterium rhizogenes-gebaseerde harige worteltransformatie

An Efficient and Reproducible Method for Producing Composite Plants by Agrobacterium rhizogenes-Based Hairy Root Transformation

Het produceren van samengestelde planten met transgene wortels en niet-transgene stengels en knoppen met behulp van Agrobacterium rhizogenes-gemedieerde harige worteltransformatie is een krachtig hulpmiddel om wortelgerelateerde biologie te bestuderen. Harige worteltransformatie wordt vastgesteld in een breed scala van tweezaadlobbigen en in verschillende eenzaadlobbige soorten en is bijna onafhankelijk van het genotype. De traditionele methode van hypocotylinjectie met A. rhizogenes om samengestelde planten te verkrijgen is inefficiënt, tijdrovend, arbeidsintensief en veroorzaakt vaak de dood van zachte en kleine hypocotylplanten. Een zeer efficiënte, eenstaps harige worteltransformatie gemedieerd door A. rhizogenes werd eerder vastgesteld, waardoor de noodzaak voor transplantatie na het produceren van harige wortels wordt geëlimineerd. In deze studie werden een gedeeltelijke hypocotyl en primaire wortel verwijderd, de hypocotylincisieplaats werd bedekt met A. rhizogenes en vervolgens werden hypocotylen geplant in steriel vermiculiet. Na 12 dagen van de teelt breidde de hypocotylincisie zich uit en werden nieuwe harige wortels geïnduceerd. Dit artikel biedt het gedetailleerde protocol van een transformatiemethode in één stap, gemedieerd door A. rhizogenes, waarvan de effectiviteit wordt aangetoond door samengestelde planten van wilde sojabonen, Solanum americanum en pompoen te produceren.

Zeer efficiënte eenstaps A. rhizogenes-gemedieerde harige worteltransformatie Harige wortels werden geproduceerd op de injectieplaats van de hypocotylincisie 12 dagen na inenting met gemanipuleerde K599. Transgene harige wortels werden bepaald op basis van de expressie van het reporter-gen in de binaire vector. Transgene wortels getransformeerd met het reportergen DsRed2 van samengestelde wilde sojabonen, S. americanum en pompoen werden waargenomen onder natuurlijk (figuur 2...

Hier bieden we het gedetailleerde protocol van een transformatiemethode in één stap, gemedieerd door Agrobacterium tumefaciens om samengestelde planten te produceren.

Een efficiënte en reproduceerbare methode voor het produceren van samengestelde planten door Agrobacterium rhizogenes-gebaseerde harige worteltransformatie

Producing composite plants with transgenic roots and nontransgenic stems and buds using Agrobacterium rhizogenes-mediated hairy root transformation is a ...

Ons team richt zich op Agrobacterium rhizogenes-gebaseerde harige worteltransformatie. Harige worteltransformatie is cruciaal bij het bestuderen van de genfunctie van planten, metabole engineering en interacties tussen wortels en rhizosfeermicro-organismen. Dit artikel biedt een transformatiemethode in één stap, gemedieerd door Agrobacterium rhizogenes.Harige worteltransformatie wordt vastgesteld in verschillende soorten tweezaadlobbigen en eenzaadlobbigen en is bijna onafhankelijk van het genotype. De eenstapsmethode gemedieerd door Agrobacterium rhizogenes voor het induceren van harige wortels is eenvoudiger en efficiënter voor het maken van samengestelde planten in vergelijking met de hypocotylinjectiemethode. De hypocotylinjectiemethode is inefficiënt en veroorzaakt waarschijnlijk de dood van jonge of kleine hypocotylplanten.De eenstaps Agrobacterium rhizogenes-gemedieerde methode is zeer efficiënt en vereist minder tijd om harige wortels te produceren. Bovendien is het niet nodig om voorbij de vorming van harige wortels te transplanteren. Alfa-teken regulatie genen en beta-teken synthese genen werden gebruikt als virale screen markers in harige wortel transformatie gemedieerd door Agrobacterium rhizogenes.

an-efficient-reproducible-method-for-producing-composite-plants

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Laten we zien hoe harige wortel composiet planten kunnen worden gebruikt om de plant-Rhizobium interacties en nodulatie studie in het moeilijk te transformeren...

Genereren van Composite Planten in Medicago truncatula Gebruikt voor nodulatie Assays

Met behulp van DNA assembly kunnen meerdere CRISPR vectoren parallel worden geconstrueerd in een enkele klonen reactie, waardoor de bouw van grote aantallen vectoren CRISPR een eenvoudige taak. Tomaat harige wortels zijn een uitstekend model systeem om CRISPR vectoren te valideren en het genereren van mutant materialen.

High-throughput CRISPR Vector Constructie en karakterisering van DNA Wijzigingen van Generation van Tomato Hairy Roots

Hier presenteren we twee protocollen te transformeren aardappelplanten. De transformatie van het Agrobacterium tumefaciens leidt tot een volledige transgene plant terwijl het Agrobacterium rhizogenes produceert transgene harige wortels in een wild type shoot die zelf gekweekte kunnen. We detecteren dan promotor activiteit door GUS vlekken in het getransformeerde wortels.

Agrobacterium tumefaciens en Agrobacterium rhizogenes-gemedieerde transformatie van aardappel- en de activiteit van de promotor van een gen suberine door GUS Staining

We beschrijven een methode om harige wortels te induceren door Agrobacterium rhizogenes-gemedieerde transformatie in Tartary boekweit(Fagopyrum tataricum). Dit kan worden gebruikt om genfuncties en de productie van secundaire metabolieten in Tartary boekweit te onderzoeken, worden aangenomen voor elke genetische transformatie, of gebruikt voor andere geneeskrachtige planten na verbetering.

Inducerende harige wortels door Agrobacterium rhizogenes-Gemedieerde transformatie in Tartary Boekweit(Fagopyrum tataricum)

Hier presenteren we een protocol voor de zeer efficiënte productie van transgene sojabonenharige wortels.

Sojabonen harige worteltransformatie voor de analyse van de genfunctie

Het protocol beschrijft de inductie van harige wortels met behulp van Arabidopsis primaire bloeiwijzestengels en Brassica napus hypocotyls. De harige wortels kunnen worden gekweekt en gebruikt als explantaten om transgene planten te regenereren.

Transformatie en regeneratie van harige wortels bij Arabidopsis thaliana en Brassica napus

Planten bieden een nieuw systeem voor de productie van farmaceutische eiwitten op commerciële schaal die is beter schaalbaar, kostenefficiënte en veilige dan de huidige expressie paradigma. In deze studie, rapporteren we een eenvoudig en handig, toch schaalbare aanpak van target-gen-bevattende...

Efficiënte Agroinfiltration van planten voor High-level Tijdelijke expressie van recombinante eiwitten

Kaposi sarcoom (KS) is een tumor die is veroorzaakt door infectie met de oncogene virus Humaan herpesvirus-8/KS herpesvirus (HHV-8/KSHV). De endothelial cell cultuur model hier beschreven is uniek geschikt voor de studie van de mechanismen waarmee KSHV gastheer cellen transformeert.

Een In Vitro Model voor het bestuderen van cellulaire transformatie door Kaposi sarcoom Herpesvirus

Hier beschrijven we een snel en flexibel protocol voor de vorming van 3D-celsferoïden door celaggregatie. Dit is gemakkelijk aanpasbaar voor meerdere celtypen en is geschikt voor gebruik in een verscheidenheid aan toepassingen, waaronder celmigratie, invasie of anoikis-assays, en voor het visualiseren en kwantificeren van cel-matrix interacties.

Een efficiënt en flexibel Cel aggregatie voor 3D Sferoïde Production

Dit protocol beschrijft een methode om stabiele integratie van een gen van belang in het menselijk genoom door het transcriptionally gereglementeerde Sleeping Beauty -systeem. Voorbereiding van de integratie van defecte lentivirale vectoren, de in vitro -transductie van menselijke cellen en de moleculaire test op getransduceerde cellen worden gemeld.

Een efficiënte In Vitro omzetting methode door een Transcriptionally gereglementeerde Sleeping Beauty systeem verpakt in een defecte lentivirale Vector integratie

Leer een efficiënte Agrobacterium rhizogenes-gebaseerde methode voor haarworteltransformatie in diverse plantensoorten. Deze techniek vereenvoudigt het maken van samengestelde planten voor genfunctiestudies.

Een efficiënte en reproduceerbare methode voor het produceren van samengestelde planten door Agrobacterium rhizogenes-gebaseerde harige worteltransformatie (Video) | JoVE Journal

Een efficiënte en reproduceerbare methode voor het produceren van samengestelde planten door Agrobacterium rhizogenes-gebaseerde harige worteltransformatie

Meer video's verkennen