Name: Vergelijking van twee representatieve methoden voor differentiatie van door de mens geïnduceerde pluripotente stamcellen in mesenchymale stromale cellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-10-20T13:50:00.000+00:00
Duration: 6 min 24 s
Description: Leer twee methoden om menselijke iPSCs te differentiëren naar mesenchymale stromale cellen via monolaag- en embryoid body-technieken. Deze vergelijking helpt onderzoekers bij het optimaliseren van stamceltherapieën.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We zijn alle leden van het Mao en Hu Lab, vroeger en nu, enorm dankbaar voor de interessante discussies en geweldige bijdragen aan het project. We zijn het National Clinical Research Center for Child Health dankbaar voor de geweldige steun. Deze studie werd financieel ondersteund door de National Natural Science Foundation of China (U20A20351 aan Jianhua Mao, 82200784 aan Lidan Hu), de Natural Science Foundation van de provincie Zhejiang in China (nr. LQ22C070004 naar Lidan Hu).

1. hiPSC's onderhoud
<ol><li>Ontdooien van hiPSC<ol><li>Haal de cellen uit de vloeibare stikstof en ontdooi de cellen snel in een waterbad van 37 °C. Breng de ontdooicellen over in een buis van 15 ml die is voorbereid met 3 ml iPSC-onderhoudsmedium (materiaaltabel). Meng het medium voorzichtig.</li>
		<li>Centrifugeer op 300 x g gedurende 5 min. Verwijder het supernatant en resuspendeer de cellen voorzichtig in 1 ml iPSC-onderhoudsmedium met 10 μM Y-27632 (pipetteer de cellen 2-3 keer op en neer).</li>
		<li>Breng de celsuspensie over in een weefselkweekplaat met 6 putjes bedekt met groeifactorgereduceerde (GFR)-extracellulaire matrixgel (1:100) en 2 ml iPSC-onderhoudsmedium met vooraf 10 μM Y-27632 toegevoegd (ongeveer 4 x 104 cellen/cm2).</li>
		<li>Kweek de cellen gedurende 5-6 dagen (80%-90% samenvloeiing) bij 37 °C, 5% CO2 met iPSC-onderhoudsmedia die elke dag worden ververst.</li>
	</ol></li>
	<li>Passage van hiPSC<ol><li>Verwijder het iPSC-onderhoudsmedium van de plaat met 6 putjes. Was de hiPSC's één keer met DPBS.</li>
		<li>Voeg 700-800 μL 0,48 mM EDTA-oplossing toe en incubeer gedurende 1 minuut bij kamertemperatuur (RT) en verwijder vervolgens de digestieoplossing. Blijf 3-5 minuten incuberen bij een temperatuur van 37 °C.</li>
		<li>Wanneer cellen worden verteerd tot vellen (verteer cellen niet tot afzonderlijke cellen), voeg dan 1 ml iPSC-onderhoudsmedium toe met 10 μM Y-27632 om de spijsvertering te beëindigen. Pipeteer de cellen voorzichtig 2-3 keer op en neer.</li>
		<li>Breng de celsuspensie over in een weefselkweekplaat met 6 putjes die is gecoat met groeifactorgereduceerde (GFR)-extracellulaire matrixgel (1:100) en 2 ml iPSC-onderhoudsmedium waaraan vooraf 10 μM Y-27632 is toegevoegd. OPMERKING: De passaging-verhouding varieert van 1:6 tot 1:20 (ongeveer 4 x 104 cellen/cm2), en de gemiddelde aggregatiegrootte is ongeveer 50-200 μm.</li>
		<li>Kweek de cellen tot 80%-90% confluentie (5-6 dagen) bij 37 °C, 5% CO2 met iPSC-onderhoudsmedia die elke dag worden ververst.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Differentiatie van MSC's van hiPSC's via EB-vorming
OPMERKING: De methode is afgeleid van eerdere literatuur 21,22,23,24. Een overzicht van de methode wordt geïllustreerd in figuur 1. De kenmerken van de methode zijn samengevat in tabel 1.
<ol><li>Bereiding van het medium<ol><li>Bereid MSC-differentiatiemedium voor door α-MEM aan te vullen met 1% (v/v) GlutaMAX, 10% (v/v) FBS, 10 ng/ml FGF2 en 5 ng/ml TGFβ.</li>
		<li>Bereid MSC-onderhoudsmedium voor door α-MEM aan te vullen met 1% (v/v) GlutMAX, 10% (v/v) FBS en 1 ng/ml FGF2.</li>
	</ol></li>
	<li>Voorbereiding van hiPSC's<ol><li>Kweek hiPSC-lijnen (passage ten minste 2-3 keer na ontdooiing) in iPSC-onderhoudsmedium op een weefselkweekplaat met 6 putjes bedekt met groeifactorgereduceerde (GFR)-extracellulaire matrixgel (1:100) bij 37 °C, 5% CO2 tot 80%-90% confluentie.</li>
	</ol></li>
	<li>Dag 0: EB-vorming<ol><li>Verwijder het iPSC-onderhoudsmedium van de plaat met 6 putjes. Was de hiPSC's één keer met DPBS.</li>
		<li>Voeg 700-800 μL 0,48 mM EDTA-oplossing toe en incubeer gedurende 1 minuut bij RT, verwijder vervolgens de digestieoplossing. Blijf 3-5 minuten incuberen bij een temperatuur van 37 °C.</li>
		<li>Wanneer cellen worden verteerd tot vellen (verteer cellen niet in afzonderlijke cellen), voeg dan 2 ml iPSC's onderhoudsmedium toe (met 10 μM Rock-remmer en 1:100 GFR-extracellulaire matrixgel) om de spijsvertering te beëindigen.</li>
		<li>Breng de cellen over naar een lage bevestigingsplaat met 6 putjes. Zaai de cellen in een verhouding van 2 putjes weefselkweekplaat tot 1 putje lage bevestigingsplaat. Incubeer de cellen in een shaker (60 rpm/min) bij 37 °C, 5% CO2 gedurende 24 uur om bolvormige EB's te vormen.</li>
	</ol></li>
	<li>Dag 1 - Dag 7: EB-differentiatie<ol><li>Breng de EB's over naar de centrifugebuis met een pasteurpipet (zonder EB's te vernietigen) en laat de EB's op natuurlijke wijze bezinken gedurende 5-10 minuten bij RT. Verwijder vervolgens het supernatant.</li>
		<li>Breng de EB's over naar een 6-wells lage bevestigingsplaat met 2 ml MSC-differentiatiemedium. Kweek de EB's op de shaker bij 37 °C, 5% CO2 gedurende 7 dagen met eenmaal gemiddelde verandering.</li>
	</ol></li>
	<li>Dag 8 - Dag 17: EB-inenting<ol><li>Breng de EB's over naar de centrifugebuis met een pasteurpipet (zonder EB's te vernietigen) en laat de EB's 5-10 minuten op natuurlijke wijze bezinken. Verwijder vervolgens het supernatant.</li>
		<li>Breng de EB's over naar een GFR-extracellulaire matrix-gelgecoate plaat met 6 putjes en 2 ml MSC-onderhoudsmedium. Kweek tot 90% confluentie (~10 dagen) met regelmatige mediaverandering na celadhesie.</li>
	</ol></li>
	<li>Dag 18 - Dag 27: MSC's rijping en expansie<ol><li>Behandel de EB-afgeleide kweek met een dissociatieoplossing bij 37 °C gedurende 5-10 minuten (de verteringstijd varieert door de aanwezigheid van verschillende celtypen).</li>
		<li>Wanneer een deel van de cellen is verteerd tot afzonderlijke cellen, voeg dan 2 ml van het MSC-onderhoudsmedium toe om de vertering te beëindigen en breng de celsuspensie over naar een centrifugebuis. Was de resterende onverteerde cellen eenmaal met DPBS en verteer opnieuw. Herhaal dit meerdere keren totdat alle cellen zijn verteerd tot enkele cellen. Centrifugeer de celsuspensie bij 250 x g gedurende 5 minuten en verwijder vervolgens het supernatant.</li>
		<li>Zaai de cellen op een met gelatine beklede kweekplaat (ongeveer 2 x 105 cellen/cm2). Kweek tot 90% samenvloeiing in MSC-onderhoudsmedium met regelmatige verandering van medium. Wijs deze generatie cellen op dit punt aan als doorgang 0 (P0).</li>
		<li>Om MSC zuiver en rijp te maken, moet u de cellen twee keer passeren in een splitverhouding van 1:3 in ongeveer 6 dagen. De meeste cellen vertonen een fibroblastachtige morfologie (spoelvormig).</li>
	</ol></li>
</ol>3. Differentiatie van MSC's van hiPSC's via monolayercultuur
OPMERKING: De methode is afgeleid van eerdere literatuur 25,26,27,28. Een overzicht van deze methode wordt geïllustreerd in figuur 1. De kenmerken van de methode zijn samengevat in tabel 1.
<ol><li>Bereiding van het medium<ol><li>Bereid het MSC-onderhoudsmedium voor door α-MEM aan te vullen met 1% (v/v) GlutMAX, 10% (v/v) FBS en 1 ng/ml FGF2.</li>
	</ol></li>
	<li>Voorbereiding van hiPSC's<ol><li>Kweek hiPSC-lijnen (passage ten minste 2-3 keer na ontdooiing) in het iPSC-onderhoudsmedium op een weefselkweekplaat met 6 putjes bedekt met groeifactorgereduceerde (GFR)-extracellulaire matrixgel (1:100) bij 37 °C, 5% CO2 tot 50%-60% confluentie.</li>
	</ol></li>
	<li>Dag 0-Dag 13: Differentiatie door directe monolaagculturen<ol><li>Verwijder het iPSC-onderhoudsmedium van de plaat met 6 putjes.</li>
		<li>Voeg direct 2 ml van het MSC-onderhoudsmedium toe en kweek gedurende 14 dagen bij 37 °C, 5% CO2 , waarbij het medium elke dag wordt ververst.</li>
	</ol></li>
	<li>Dag 14 - Dag 35: MSC's rijping door herhaalde passage<ol><li>Behandel de monolaagculturen met een dissociatieoplossing bij 37 °C gedurende 5-10 minuten (de verteringstijd varieert door de aanwezigheid van verschillende celtypen).</li>
		<li>Wanneer de cellen zijn verteerd tot afzonderlijke cellen, voegt u 2 ml MSC-onderhoudsmedium toe om de spijsvertering te beëindigen en brengt u de celsuspensie over naar de centrifugebuis. Was de resterende onverteerde cellen eenmaal met DPBS en verteer opnieuw. Herhaal dit meerdere keren totdat alle cellen zijn verteerd tot enkele cellen. Centrifugeer de celsuspensie bij 250 x g gedurende 5 minuten en verwijder vervolgens het supernatant.</li>
		<li>Zaai de cellen op een met gelatine beklede kweekschaal (ongeveer 2 x 105 cellen/cm2). Kweek tot 90% samenvloeiing in MSC-onderhoudsmedium met regelmatige mediawissels. Wijs deze generatie cellen op dit punt aan als doorgang 0 (P0).</li>
		<li>Om MSC zuiver en rijp te maken, moet u de cellen 6 keer passeren in een splitverhouding van 1:3 in ongeveer 18 dagen. De meeste cellen vertonen een fibroblastachtige morfologie (spoelvormig).</li>
	</ol></li>
</ol>4. Oppervlakte-antigenenanalyse van hiPSC-aansturende MSC's door middel van flowcytometrie
OPMERKING: Vergelijkbaar met de oppervlakte-antigenen van van beenmerg afgeleide MSC's, brengen hiPSC's die MSC aansturen CD105, CD73 en CD90 tot expressie, maar brengen ze CD45, CD3429 niet tot expressie. Bovendien kunnen hiPSC's worden gebruikt als negatieve controlecellen. Oppervlakte-antigenenanalyse van hiPSC-aansturende MSC's en hiPSC's door middel van flowcytometrie wordt weergegeven in figuur 2.
<ol><li>Behandel de hiPSC-rijdende MSC's gedurende 2-3 minuten met een dissociatieoplossing bij 37 °C. Behandel de hiPSC's met 0,48 mM EDTA-dissociatiereagens en incubeer gedurende 1 minuut bij RT, verwijder vervolgens het dissociatiereagens. Blijf 3-5 minuten incuberen bij een temperatuur van 37 °C.</li>
	<li>Wanneer de cellen zijn verteerd tot afzonderlijke cellen, voegt u medium toe (MSC-onderhoudsmedium aan MSC's en iPSC-onderhoudsmedium aan iPSC's) om de spijsvertering te beëindigen.</li>
	<li>Centrifugeer de celsuspensie op 350 x g gedurende 5 minuten en verwijder vervolgens het supernatant.</li>
	<li>Was de cellen eenmaal met koud DPBS, centrifugeer gedurende 5 minuten op 350 x g en verwijder vervolgens het supernatant.</li>
	<li>Tel en resuspendeer de cellen in koude 10% FBS-DPBS (v/v)-oplossing bij 10 x 106 cellen/ml en verdeel 100 μL/buisje celsuspensie (1 x 106 cellen/buisje) in centrifugebuisjes van 1,5 ml.</li>
	<li>Voeg 5 μL humane Fc-receptorblokkerende oplossing toe aan 100 μL celsuspensie. Incubeer gedurende 5-10 minuten bij RT om niet-specifieke blokkering uit te voeren.</li>
	<li>Centrifugeer gedurende 5 minuten op 350 x g en verwijder het supernatant. Was de cellen twee keer met een koude 2% FBS-DPBS (v/v) oplossing.</li>
	<li>Resuspendeer de cellen in koude 100 μL 2% FBS-DPBS (v/v)-oplossing.</li>
	<li>Voeg 5 μL (1 test) anti-CD34-FITC en 5 μL (1 test) anti-CD45-APC toe aan de 100 μL cel Suspensie. Voeg 5 μL (1 test) anti-CD73-APC, 5 μL (1 test) anti-CD90-FITC en 5 μL (1 test) anti-CD105-PE toe aan nog een 100 μL celsuspensiebuis. Voeg 5 μL humane IgG1-isotypecontrole FITC, humane IgG1-isotypecontrole PE en humane IgG1-isotypecontrole APC toe aan de derde 100 μL-celsuspensiebuis. Incubeer gedurende 15-20 minuten op ijs in het donker. Bereid ondertussen enkelvoudige kleurkralen voor.</li>
	<li>Was de cellen twee keer met een koude 2% FBS-DPBS (v/v) oplossing.</li>
	<li>Voeg 300 μL koude 2% FBS-DPBS (v/v)-oplossing toe om de cellen te resuspenderen en filtreer via een zeeffilter met 200 mazen.</li>
	<li>Analyseer de monsters met behulp van flowcytometrie. Analyseer de celsuspensie gekleurd met antilichamen voor isotypecontrole en stel de poort in. Analyseer vervolgens de celsuspensie die is gekleurd met doelantilichamen.</li>
</ol>5. Osteogene differentiatie van hiPSC-rijdende MSC's
OPMERKING: De hiPSC-rijdende MSC's bezitten osteogeen differentiatiepotentieel (Figuur 3A, B). Het protocol voor osteogene differentiatie wordt hieronder gegeven.
<ol><li>Bereid osteogeen inductiemedium voor door α-MEM aan te vullen met 10% FBS, 100 nM dexamethason, 10 mM bèta-glycerofosfaat en 100 μM ascorbinezuur.</li>
	<li>Zaai 1 x 105 MSC's in een met gelatine beklede plaat met 48 putjes en kweek tot het 60%-70% samenvloeiend is.</li>
	<li>Verwijder het medium en voeg 0,3 ml osteogeen inductiemedium toe. Kweek de cellen gedurende 14 dagen in een osteogeen inductiemedium bij 37 °C, 5% CO2, waarbij de media om de 3 dagen worden vervangen.</li>
	<li>Verwijder het medium en was één keer met DPBS.</li>
	<li>Voeg 0,3 ml 4% PFA toe en incubeer 30 minuten bij RT.</li>
	<li>PFA verwijderen. Spoel de cellen met 0,3 ml DPBS gedurende 10 minuten bij RT en herhaal 3 keer.</li>
	<li>Verwijder de DPBS, voeg 0,2 ml Alizarine rode kleuroplossing toe en incubeer gedurende 30 minuten bij RT.</li>
	<li>Verwijder de kleuroplossing, spoel de cellen met 0,3 ml DPBS gedurende 10 minuten bij RT en herhaal 3 keer.</li>
	<li>Observeer de kleuring van calciumafzetting onder een lichtmicroscoop.</li>
</ol>6. Adipogene differentiatie van hiPSC-rijdende MSC's
OPMERKING: De hiPSC-sturende MSC's bezitten een adipogeen differentiatiepotentieel (Figuur 3C, D). Het protocol voor adipogene differentiatie wordt hieronder gegeven.
<ol><li>Preparare adipogeen inductiemedium door α-MEM aan te vullen met 10% FBS, 1 μM dexamethason, 1 μM IBMX, 10 μg/ml insuline en 100 μM indomethacine. Bereid het adipogene onderhoudsmedium voor door α-MEM aan te vullen met 10% FBS en 10 μg/ml insuline.</li>
	<li>Zaai 1 x 105 MSC's in een met gelatine beklede plaat met 48 putjes en kweek tot de celdichtheid 90% bereikt.</li>
	<li>Verwijder het medium en voeg 0,3 ml adipogeen inductiemedium toe. Ga door met het kweken van de cellen in het adipogene inductiemedium gedurende 4 dagen bij 37 °C, 5% CO2.</li>
	<li>Verwijder het medium en voeg 0,3 ml adipogeen onderhoudsmedium toe. Ga door met het kweken van de cellen in het adipogene onderhoudsmedium gedurende 3 dagen bij 37 °C, 5% CO2.</li>
	<li>Herhaal stap 6.3 en 6.4 2-3 keer totdat de differentiatie en rijping van de adipocyten zijn verstreken.</li>
	<li>Verwijder het medium en was één keer met DPBS.</li>
	<li>Voeg 0,3 ml 4% PFA toe en incubeer gedurende 10 minuten bij RT. Verwijder de PFA en spoel 2 keer met DPBS.</li>
	<li>Breng Oli Red O-beits aan volgens de instructies van de fabrikant en observeer de lipidedruppeltjes onder een lichtmicroscoop.</li>
</ol>7. Chondrogene differentiatie van hiPSC-rijdende MSC's
OPMERKING: De hiPSC-sturende MSC's bezitten chondrogene differentiatiepotentiaal (Figuur 3E, F). Het protocol voor chondrogene differentiatie wordt hieronder gegeven.
<ol><li>Bereid chondroblast-inductiemedium voor door α-MEM aan te vullen met 10% FBS, 100 nM dexamethason, 1% insuline-transferrine-selenium (ITS), 10 μM ascorbinezuur, 1 mM natriumpyruvaat, 50 μg/ml proline, 0,02 nM transformerende groeifactor β3 (TGFβ3) en 0,5 μg/ml botmorfogenetisch eiwit 6 (BMP-6).</li>
	<li>Verzamel 2,5 x 105 hiPSC-aangedreven MSC's en centrifugeer de cellen gedurende 5 minuten bij 150 x g en verwijder vervolgens het supernatant. Suspendeer de cellen in 1 ml α-MEM en centrifugeer vervolgens gedurende 5 minuten op 150 x g .</li>
	<li>Verwijder het supernatans en suspendeer de cellen in 0,5 ml chondrogenisch inductiemedium. Centrifugeer de cellen op 150 x g gedurende 5 min.</li>
	<li>Schroef het deksel direct los en kweek gedurende 21 dagen met chondrogene inductiemedia vervang elke 3 dagen bij 37 °C, 5% CO2. Draai zachtjes met de centrifugebuis om de chondrogene pellets elke dag tijdens de chondrogene differentiatie op te schorten (zonder chondrogene pellets te vernietigen).</li>
	<li>Verwijder het supernatans en was tweemaal met 0,5 ml PBS.</li>
	<li>Voeg 0,3 ml 4% PFA toe en fixeer gedurende 24 uur.</li>
	<li>Paraffine sluit de chondrogene pellets in en snijd ze vervolgens in stukken (3 μm). Kleur de secties gedurende 30 minuten in toluïdineblauw (1%).</li>
	<li>Observeer de extracellulaire chondrocytenmatrix onder een lichtmicroscoop.</li>
</ol>

Karakterisering van oppervlakte-antigenen en proliferatievermogen in hiPSC-rijdende MSC's

<ol><li>Weng, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem%2Fstromal+cell+senescence%3A+Hallmarks%2C+mechanisms%2C+and+combating+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem/stromal cell senescence: Hallmarks, mechanisms, and combating strategies.</a> Stem Cells Translational Medicine. 11 (4), 356-371 (2022).</li>
<li>Soliman, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotent+stromal+cells%3A+One+name%2C+multiple+identities%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Multipotent stromal cells: One name, multiple identities.</a> Cell Stem Cell. 28 (10), 1690-1707 (2021).</li>
<li>Friedenstein, A. J., Chailakhyan, R. K., Gerasimov, U. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+osteogenic+stem+cells%3A+in+vitro+cultivation+and+transplantation+in+diffusion+chambers%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Kinetics%22%5BJournal%5D)">Bone marrow osteogenic stem cells: in vitro cultivation and transplantation in diffusion chambers.</a> Cell and Tissue Kinetics. 20 (3), 263-272 (1987).</li>
<li>Friedenstein, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precursors+for+fibroblasts+in+different+populations+of+hematopoietic+cells+as+detected+by+the+in+vitro+colony+assay+method%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Hematology%22%5BJournal%5D)">Precursors for fibroblasts in different populations of hematopoietic cells as detected by the in vitro colony assay method.</a> Experimental Hematology. 2 (2), 83-92 (1974).</li>
<li>Friedenstein, A. J., Gorskaja, J. F., Kulagina, N. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblast+precursors+in+normal+and+irradiated+mouse+hematopoietic+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Hematology%22%5BJournal%5D)">Fibroblast precursors in normal and irradiated mouse hematopoietic organs.</a> Experimental Hematology. 4 (5), 267-274 (1976).</li>
<li>El Agha, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+in+fibrotic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells in fibrotic disease.</a> Cell Stem Cell. 21 (2), 166-177 (2017).</li>
<li>Mushahary, D., Spittler, A., Kasper, C., Weber, V., Charwat, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+cultivation%2C+and+characterization+of+human+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Isolation, cultivation, and characterization of human mesenchymal stem cells.</a> Cytometry A. 93 (1), 19-31 (2018).</li>
<li>Ullah, M., Liu, D. D., Thakor, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stromal+cell+homing%3A+Mechanisms+and+strategies+for+improvement%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stromal cell homing: Mechanisms and strategies for improvement.</a> iScience. 15, 421-438 (2019).</li>
<li>Regmi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+viability+and+function+of+mesenchymal+stromal+cell+spheroids+is+mediated+via+autophagy+induction%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">Enhanced viability and function of mesenchymal stromal cell spheroids is mediated via autophagy induction.</a> Autophagy. 17 (10), 2991-3010 (2021).</li>
<li>Hoang, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell-based+therapy+for+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduction+and+Targeted+Therapy%22%5BJournal%5D)">Stem cell-based therapy for human diseases.</a> Signal Transduction and Targeted Therapy. 7 (1), 272(2022).</li>
<li>Jiang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concise+review%3A+Mesenchymal+stem+cells+derived+from+human+pluripotent+cells%2C+an+unlimited+and+quality-controllable+source+for+therapeutic+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Concise review: Mesenchymal stem cells derived from human pluripotent cells, an unlimited and quality-controllable source for therapeutic applications.</a> Stem Cells. 37 (5), 572-581 (2019).</li>
<li>Soontararak, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+%28MSC%29+derived+from+induced+pluripotent+stem+cells+%28iPSC%29+equivalent+to+adipose-derived+MSC+in+promoting+intestinal+healing+and+microbiome+normalization+in+mouse+inflammatory+bowel+disease+model%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells (MSC) derived from induced pluripotent stem cells (iPSC) equivalent to adipose-derived MSC in promoting intestinal healing and microbiome normalization in mouse inflammatory bowel disease model.</a> Stem Cells Translational Medicine. 7 (6), 456-467 (2018).</li>
<li>Di Baldassarre, A., Cimetta, E., Bollini, S., Gaggi, G., Ghinassi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human-induced+pluripotent+stem+cell+technology+and+cardiomyocyte+generation%3A+Progress+and+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Human-induced pluripotent stem cell technology and cardiomyocyte generation: Progress and clinical applications.</a> Cells. 7 (6), 48(2018).</li>
<li>Shi, Y., Inoue, H., Wu, J. C., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induced+pluripotent+stem+cell+technology%3A+a+decade+of+progress%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">Induced pluripotent stem cell technology: a decade of progress.</a> Nature Reviews. Drug Discovery. 16 (2), 115-130 (2017).</li>
<li>Levy, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shattering+barriers+toward+clinically+meaningful+MSC+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Advances%22%5BJournal%5D)">Shattering barriers toward clinically meaningful MSC therapies.</a> Science Advances. 6 (30), eaba6884(2020).</li>
<li>Zhao, C., Ikeya, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+and+applications+of+induced+pluripotent+stem+cell-derived+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+International%22%5BJournal%5D)">Generation and applications of induced pluripotent stem cell-derived mesenchymal stem cells.</a> Stem Cells International. 2018, 9601623(2018).</li>
<li>Path, G., Perakakis, N., Mantzoros, C. S., Seufert, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cells+in+the+treatment+of+diabetes+mellitus+-+Focus+on+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolism%22%5BJournal%5D)">Stem cells in the treatment of diabetes mellitus - Focus on mesenchymal stem cells.</a> Metabolism. 90, 1-15 (2019).</li>
<li>Zhou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One-step+derivation+of+functional+mesenchymal+stem+cells+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-Protocol%22%5BJournal%5D)">One-step derivation of functional mesenchymal stem cells from human pluripotent stem cells.</a> Bio-Protocol. 8 (22), e3080(2018).</li>
<li>Hua, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-intensity+pulsed+ultrasound+promotes+osteogenic+potential+of+iPSC-derived+MSCs+but+fails+to+simplify+the+iPSC-EB-MSC+differentiation+process%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Bioengineering+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Low-intensity pulsed ultrasound promotes osteogenic potential of iPSC-derived MSCs but fails to simplify the iPSC-EB-MSC differentiation process.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 10, 841778(2022).</li>
<li>Dupuis, V., Oltra, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+produce+induced+pluripotent+stem+cell-derived+mesenchymal+stem+cells%3A+Mesenchymal+stem+cells+from+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Methods to produce induced pluripotent stem cell-derived mesenchymal stem cells: Mesenchymal stem cells from induced pluripotent stem cells.</a> World Journal of Stem Cells. 13 (8), 1094-1111 (2021).</li>
<li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+stem+cells.+A+Werner+syndrome+stem+cell+model+unveils+heterochromatin+alterations+as+a+driver+of+human+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Aging stem cells. A Werner syndrome stem cell model unveils heterochromatin alterations as a driver of human aging.</a> Science. 348 (6239), 1160-1163 (2015).</li>
<li>Liu, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+Fanconi+anemia+pathogenesis+and+therapeutics+using+integration-free+patient-derived+iPSCs%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Modelling Fanconi anemia pathogenesis and therapeutics using integration-free patient-derived iPSCs.</a> Nature Communications. 5, 4330(2014).</li>
<li>Kubben, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repression+of+the+antioxidant+NRF2+pathway+in+premature+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Repression of the antioxidant NRF2 pathway in premature aging.</a> Cell. 165 (6), 1361-1374 (2016).</li>
<li>Duan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PTEN+deficiency+reprogrammes+human+neural+stem+cells+towards+a+glioblastoma+stem+cell-like+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">PTEN deficiency reprogrammes human neural stem cells towards a glioblastoma stem cell-like phenotype.</a> Nature Communications. 6, 10068(2015).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosomes+released+from+human+induced+pluripotent+stem+cells-derived+MSCs+facilitate+cutaneous+wound+healing+by+promoting+collagen+synthesis+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Exosomes released from human induced pluripotent stem cells-derived MSCs facilitate cutaneous wound healing by promoting collagen synthesis and angiogenesis.</a> Journal of Translational Medicine. 13, 49(2015).</li>
<li>Hu, G. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosomes+secreted+by+human-induced+pluripotent+stem+cell-derived+mesenchymal+stem+cells+attenuate+limb+ischemia+by+promoting+angiogenesis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Exosomes secreted by human-induced pluripotent stem cell-derived mesenchymal stem cells attenuate limb ischemia by promoting angiogenesis in mice.</a> Stem Cell Research & Therapy. 6 (1), 10(2015).</li>
<li>Kang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+derived+from+human+induced+pluripotent+stem+cells+retain+adequate+osteogenicity+and+chondrogenicity+but+less+adipogenicity%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells derived from human induced pluripotent stem cells retain adequate osteogenicity and chondrogenicity but less adipogenicity.</a> Stem Cell Research & Therapy. 6 (1), 144(2015).</li>
<li>Wang, L. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+mesenchymal+stem+cells+from+human+induced+pluripotent+stem+cells+results+in+downregulation+of+c-Myc+and+DNA+replication+pathways+with+immunomodulation+toward+CD4+and+CD8+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Differentiation of mesenchymal stem cells from human induced pluripotent stem cells results in downregulation of c-Myc and DNA replication pathways with immunomodulation toward CD4 and CD8 cells.</a> Stem Cells. 36 (6), 903-914 (2018).</li>
<li>Dominici, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+criteria+for+defining+multipotent+mesenchymal+stromal+cells.+The+International+Society+for+Cellular+Therapy+position+statement%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.</a> Cytotherapy. 8 (4), 315-317 (2006).</li>
<li>Kim, S., Kim, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+mesenchymal+stem-like+cells+for+producing+extracellular+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Generation of mesenchymal stem-like cells for producing extracellular vesicles.</a> World Journal of Stem Cells. 11 (5), 270-280 (2019).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

In dit protocol werden twee representatieve methoden onderzocht om hiPSC's te differentiëren in MSC's: 20,21,22,23,24,25,26,27,28,30. Beide methoden waren in staat om MSC's af te leiden u...

Mesenchymale stromale cellen (MSC's) zijn van mesoderm afgeleide volwassen pluripotentestamcellen1. MSC's zijn aanwezig in bijna alle bindweefsels2. Sinds MSC's voor het eerst werden ontdekt in de jaren 1970 en met succes werden geïsoleerd uit het beenmerg in 1987 door Friedenstein et al.3,4,5, is een verscheidenheid aan menselijke somatische (inclusief foetale en volwassen) weefsels gebruikt voor het isoleren van MSC's zoals bot, kraakbeen, pezen, spieren, vetweefsel en hematopoëtisch ondersteunend stroma 1,2,6,7 . MSC's vertonen een hoog proliferatief vermogen en plasticiteit om te differentiëren in vele somatische cellijnen en kunnen migreren naar beschadigde en ontstoken weefsels 2,8,9. Deze eigenschappen maken MSC's een potentiële kandidaat voor regeneratieve geneeskunde10. Van somatisch weefsel afgeleide MSC's (st-MSC's) worden echter beperkt door beperkte donatie, beperkte celproliferatieve capaciteit, kwaliteitsvariaties en bezorgdheid over de bioveiligheid voor mogelijke overdracht van pathogenen, indien aanwezig, van de donoren 11,12.
Humane geïnduceerde pluripotente stamcellen (hiPSC's) zijn afgeleid van volwassen cellen die herprogrammeren met transcriptiefactoren (Oct4, Sox2, Klf4 en c-Myc), die vergelijkbare functies hebben als embryonale stamcellen13,14. Ze kunnen zichzelf vernieuwen en hebben het potentieel om te differentiëren in elk type somatische cellen, inclusief MSC's. Vergeleken met st-MSC's hebben iPSC-MSC's het voordeel van onbeperkte levering, lagere kosten, hogere zuiverheid, gemak bij kwaliteitscontrole, gemakkelijk voor schaalproductie en genmodificatie 15,16,17.
Vanwege deze voordelen van iPSC-MSC's zijn er verschillende methoden gerapporteerd die MSC vanuit iPSC aansturen. Deze differentiatiemethoden zijn gecentreerd rond twee kweekmethoden: (1) de vorming van embryoïde lichamen (EB's) en (2) het gebruik van monolaagculturen 11,18,19,20. Hierin werd een representatieve benadering voor elk van de twee methodologieën gekenmerkt. Verder werd ook gebruik gemaakt van vergelijkingen tussen twee representatieve benaderingen op basis van tijd, kosten, proliferatievermogen, expressie van MSC-biomarkers en differentiatievermogen in vitro.

<table><tbody><tr><td>Alizarin red staining kit</td><td>Beyotime&nbsp;Biotechnology</td><td>C0148S</td><td></td></tr><tr><td>Anti-human-CD105 (PE)</td><td>Biolegend</td><td>323206</td><td></td></tr><tr><td>Anti-human-CD34 (FITC)</td><td>Biolegend</td><td>343503</td><td></td></tr><tr><td>Anti-human-CD45 (APC)</td><td>Biolegend</td><td>304011</td><td></td></tr><tr><td>Anti-human-CD73( APC)</td><td>Biolegend</td><td>344006</td><td></td></tr><tr><td>Anti-human-CD90 (FITC)</td><td>Biolegend</td><td>328108</td><td></td></tr><tr><td>Ascorbic acid</td><td>Solarbio</td><td>A8100</td><td></td></tr><tr><td>BMP-6</td><td>Novoprotein</td><td>C012</td><td></td></tr><tr><td>Carbon dioxide level shaker</td><td>Crystal</td><td>CO-06UC6</td><td></td></tr><tr><td>Compensation Beads</td><td>BioLegend</td><td>424601</td><td></td></tr><tr><td>CryoStor CS10</td><td>STEMCELL Technology</td><td>07959</td><td></td></tr><tr><td>Dexamethasone</td><td>Beyotime&nbsp;Biotechnology</td><td>ST1254</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12&nbsp; medium</td><td>Servicebio</td><td>G4610</td><td></td></tr><tr><td>Fetal bovine serum</td><td>HAKATA</td><td>HS-FBS-500</td><td></td></tr><tr><td>FGF2</td><td>Stemcell</td><td>78003.1</td><td></td></tr><tr><td>Gelatin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G2500-100G</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>human IgG1 isotype control APC</td><td>BioLegend</td><td>403505</td><td></td></tr><tr><td>human IgG1 isotype control FITC</td><td>BioLegend</td><td>403507</td><td></td></tr><tr><td>human IgG1 isotype control PE</td><td>BioLegend</td><td>403503</td><td></td></tr><tr><td>Human TGF-&beta;1</td><td>Stemcell</td><td>78067</td><td></td></tr><tr><td>Human TruStain FcX&nbsp;</td><td>BioLegend</td><td>422301</td><td></td></tr><tr><td>IBMX</td><td>Beyotime&nbsp;Biotechnology</td><td>ST1398</td><td></td></tr><tr><td>Indomethacin</td><td>Solarbio</td><td>SI9020</td><td></td></tr><tr><td>Insulin</td><td>Beyotime&nbsp;Biotechnology</td><td>P3376</td><td></td></tr><tr><td>iPSC maintenance medium</td><td>STEMCELL Technology</td><td>85850</td><td></td></tr><tr><td>ITS Media Supplement</td><td>Beyotime&nbsp;Biotechnology</td><td>C0341-10mL</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel, growth factor reduced</td><td>BD Corning</td><td>354230</td><td></td></tr><tr><td>Oli Red O staining kit</td><td>Beyotime&nbsp;Biotechnology</td><td>C0158S</td><td></td></tr><tr><td>Proline</td><td>Solarbio</td><td>P0011</td><td></td></tr><tr><td>Sodium pyruvate</td><td>ThermoFisher</td><td>11360-070</td><td></td></tr><tr><td>TGF&beta;3</td><td>Novoprotein</td><td>CJ44</td><td></td></tr><tr><td>Toluidine blue staining kit</td><td>Solarbio</td><td>G2543</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express Enzyme(1x)&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>12604013</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-Low Attachment 6 Well Plate</td><td>Costar</td><td>3471</td><td></td></tr><tr><td>Versene</td><td>Gibco</td><td>15040-66</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632</td><td>Stemcell</td><td>72304</td><td></td></tr><tr><td>&alpha;-MEM</td><td>Hyclone</td><td>SH30265</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-glycerophosphate</td><td>Solarbio</td><td>G8100</td><td></td></tr></tbody></table>

vergelijking van twee representatieve methoden voor differentiatie van door de mens geïnduceerde pluripotente stamcellen in mesenchymale stromale cellen

Comparison of Two Representative Methods for Differentiation of Human Induced Pluripotent Stem Cells into Mesenchymal Stromal Cells

Mesenchymale stromale cellen (MSC's) zijn volwassen pluripotente stamcellen die op grote schaal worden gebruikt in de regeneratieve geneeskunde. Aangezien somatische weefsel-afgeleide MSC's worden beperkt door beperkte donatie, kwaliteitsvariaties en bioveiligheid, is er de afgelopen 10 jaar een grote toename geweest in de inspanningen om MSC's te genereren uit door de mens geïnduceerde pluripotente stamcellen (hiPSC's). Eerdere en recente inspanningen in de differentiatie van hiPSC's in MSC's waren gecentreerd rond twee kweekmethodologieën: (1) de vorming van embryoïde lichamen (EB's) en (2) het gebruik van monolaagcultuur. Dit protocol beschrijft deze twee representatieve methoden voor het afleiden van MSC uit hiPSC's. Elke methode heeft zijn voor- en nadelen, waaronder tijd, kosten, celproliferatievermogen, de expressie van MSC-markers en hun vermogen tot differentiatie in vitro. Dit protocol toont aan dat beide methoden volwassen en functionele MSC's kunnen afleiden uit hiPSC's. De monolaagmethode wordt gekenmerkt door lagere kosten, eenvoudigere bediening en gemakkelijkere osteogene differentiatie, terwijl de EB-methode wordt gekenmerkt door een lager tijdsverbruik.

Volgens het protocol (Figuur 1A) werden hiPSC's gedifferentieerd in MSC's via de EB-vormings- en monolaagkweekmethoden. Tijdens de differentiatie vertoonden de cellen verschillende representatieve morfologieën (Figuur 1B,C).
Zoals te zien is in figuur 1B, vertonen de hiPSC-kolonies een typische compacte morfologie vóór differentiatie met een duidelijke grens die bestaat uit dicht opeengep...

Dit protocol beschrijft en vergelijkt twee representatieve methoden voor het differentiëren van hiPSC's in mesenchymale stromale cellen (MSC's). De monolaagmethode wordt gekenmerkt door lagere kosten, eenvoudigere bediening en gemakkelijkere osteogene differentiatie. De embryoïde lichamen (EB's) methode wordt gekenmerkt door een lager tijdsverbruik.

Vergelijking van twee representatieve methoden voor differentiatie van door de mens geïnduceerde pluripotente stamcellen in mesenchymale stromale cellen

Mesenchymal stromal cells (MSCs) are adult pluripotent stem cells which have been widely used in regenerative medicine. As somatic tissue-derived MSCs are ...

De reikwijdte van onze studie is een mechanisme en een therapeutisch strategieonderzoek van genetische ziekten. Ons onderzoek is gebaseerd op multilevel ziektemodellen, zoals cellijnen, iPSC's, organoïden en muizen. iPSC's hebben een duidelijk voordeel ten opzichte van andere modellen.iPSC's van patiënten en alle daaropvolgende afgeleide cellen en organoïden delen hetzelfde genoom met de patiënten, wat een bank van patiëntcellen en modellen voor veel ziekten oplevert. Ook met de methoden van vastgestelde iPSC's van patiënten zijn ze behoorlijk volwassen. Er blijven veel uitdagingen in de richting van differentiatie van iPSC's in specifieke cellen en organoïden, met een dieper begrip van ontwikkelingsmechanismen in de huidige ontwikkeling in het veld.

comparison-two-representative-methods-for-differentiation-human

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

This video describes an in vitro method for generating macrophages from human induced pluripotent stem cells (iPSCs). Macrophage generation from iPSCs occurs in three stages: (i) aggregation of iPSCs in suspension to form three-dimensional embryoid bodies (EBs) that differentiate into mesodermal cells, (ii) formation of macrophage precursor cells from the differentiated EBs, and (iii) differentiation of the macrophage precursor cells into mature, functional macrophages.

Differentiation of Human-Induced Pluripotent Stem Cells into Macrophages

Het artikel beschrijft de gedetailleerde methodologie efficiënt onderscheiden humane pluripotente stamcellen naar cardiomyocyten door het selectief moduleren van de Wnt route, gevolgd door flow cytometrie analyse van referentiemarkeringen aan homogeniteit en identiteit van de bevolking beoordelen.

High Efficiency differentiatie van humane pluripotente stamcellen naar cardiomyocyten en karakterisering door flowcytometrie

Met het doel om veranderingen in miRNA's in gedifferentieerde menselijke neurale stamcellen (hNSC's) te karakteriseren, beschrijven we hNSC-differentiatie op een driedimensionaal systeem, de evaluatie van veranderingen in microRNA-expressie door miRNA PCR-array en computationele analyse voor miRNA-doelwitvoorspelling en de validatie ervan door middel van een dual luciferase-assay.

Differentiatie van een menselijke neurale stamcellen Line op Three Dimensional Culturen, Analyse van MicroRNA en vermeende doelwit-genen

Menselijke pluripotente stamcellen (hPSCs) hebben de intrinsieke vermogen om onderscheid te maken en zichzelf organiseren in verschillende weefsel patronen; hoewel dit vereist de presentatie van ruimtelijke milieu-hellingen. Wij presenteren stencil micropatterning als een eenvoudige en robuuste methode om biochemische en mechanische gradiënten genereren voor het besturen van HPSC differentiatie patronen.

Stencil micropatterning van menselijke pluripotente stamcellen voor Probing ruimtelijke organisatie van Differentiatie Fates

Hier presenteren we een protocol voor de ontleding van menselijke navelstreng (UC) en foetale placenta monster in koord bekleding (CL), Wharton's gelei (WJ), cord-placenta junctie (CPJ) en foetale placenta (FP) voor het isoleren en karakterisering van mesenchymale stromale cellen (MSC's) met de explantaatkweek techniek.

Isolatie en karakterisering van mesenchymale stromale cellen uit menselijke navelstreng en foetale Placenta

Hier presenteren we een methode voor het efficiënt benutten van het potentieel van de cardiale differentiatie van jonge bronnen van menselijke mesenchymale stamcellen om te genereren van functionele, aanbestedende, cardiomyocyte-achtige cellen in vitro.

In Vitro Differentiatie van menselijke mesenchymale stamcellen in functionele Cardiomyocyte-achtige cellen

Het genereren van gedifferentieerde celtypen van menselijke pluripotente stamcellen (hPSCs) houdt een grote therapeutische belofte in, maar blijft uitdagend. PSCs vertonen vaak een inherent onvermogen om te differentiëren, zelfs wanneer ze worden gestimuleerd met een juiste reeks signalen. Hier beschreven is een eenvoudig hulpmiddel om de multi Lineage-differentiatie over verschillende PSC-lijnen te verbeteren.

Voorbijgaande behandeling van menselijke pluripotente stamcellen met DMSO om differentiatie te bevorderen

In dit protocol beschrijven we een stabiele, zeer efficiënte differentiatiestrategie voor het genereren van postganglionische sympathische neuronen uit menselijke pluripotente stamcellen. Dit model zal neuronen beschikbaar stellen voor het gebruik van studies van meerdere autonome aandoeningen.

Efficiënte differentiatie van postganglionic Sympathische neuronen met behulp van menselijke pluripotente stamcellen onder Feeder-vrije en chemisch gedefinieerde cultuurvoorwaarden

Deze studie rapporteert een nieuwe benadering om meerdere mitochondriale functionele parameters te meten op basis van flowcytometrie en dubbele kleuring met twee fluorescerende melders of antilichamen om veranderingen in mitochondriaal volume, mitochondriaal membraanpotentiaal, reactief zuurstofsoortniveau, mitochondriale ademhalingsketensamenstelling en mitochondriaal DNA te detecteren.

Flowcytometrische analyse van meerdere mitochondriale parameters in door de mens geïnduceerde pluripotente stamcellen en hun neurale en gliaderivaten

Het protocol maakt het mogelijk om een zuivere adipocytenpopulatie te genereren uit geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPSC's). Retinoïnezuur wordt gebruikt om iPSC's te differentiëren in mesenchymale stamcellen (MSC's) die worden gebruikt voor de productie van adipocyten. Vervolgens wordt een sorteerbenadering op basis van Nijlrode kleuring gebruikt om zuivere adipocyten te verkrijgen.

Robuuste differentiatie van menselijke iPSC's in een zuivere populatie van adipocyten om adipocyten-geassocieerde aandoeningen te bestuderen

Dit protocol presenteert de differentiatie van humane osteoclasten van geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPSC's) en beschrijft methoden voor de karakterisering van osteoclasten en osteoclastprecursoren.

Differentiatie en karakterisering van osteoclasten van door de mens geïnduceerde pluripotente stamcellen

Leer twee methoden om menselijke iPSCs te differentiëren naar mesenchymale stromale cellen via monolaag- en embryoid body-technieken. Deze vergelijking helpt onderzoekers bij het optimaliseren van stamceltherapieën.

Vergelijking van twee representatieve methoden voor differentiatie van door de mens geïnduceerde pluripotente stamcellen in mesenchymale stromale cellen (Video) | JoVE Journal

Vergelijking van twee representatieve methoden voor differentiatie van door de mens geïnduceerde pluripotente stamcellen in mesenchymale stromale cellen

Meer video's verkennen