Name: High-Throughput Small Molecule Drug Screening voor leeftijdsgebonden slaapstoornissen met behulp van Drosophila melanogaster (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-10-20T14:15:00.000+00:00
Duration: 5 min 59 s
Description: Leer high-throughput drug screening voor slaaponderzoek bij verouderde Drosophila melanogaster. Deze methode verbetert de nauwkeurigheid van slaapmetingen en vereenvoudigt operationele procedures.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We danken de lableden van Prof. Junhai Han voor hun discussie en commentaar. Dit werk werd ondersteund door de National Natural Science Foundation of China 32170970 aan Y.T en het "Cyanine Blue Project" van de provincie Jiangsu aan Z.C.Z.

Dit protocol maakt gebruik van de 30 dagen oude w1118 vliegen van het Bloomington Drosophila Stock Center (BDSC_3605, zie Tabel met materialen).
1. Bereiding van de gerijpte fruitvliegjes
<ol><li>Voedselbereiding<ol><li>Bereid standaard maïszetmeelkweekmedium door 50 g/l cornflakes, 110 g/l suiker, 5 g/l agar en 25 g/l gist te mengen. Verwarm de cornflakes en gist met water om te gelatiniseren en los vervolgens alle stoffen volledig op.</li>
		<li>Wanneer het medium is afgekoeld tot 50-60 °C, voeg dan 6 ml/l propionzuur toe en verpak ze onmiddellijk in kweekflessen.</li>
	</ol></li>
	<li>Vliegenkweek en voorbereiding van oude vliegen<ol><li>Kweek de vliegenstam w1118in flessen met een standaard maizena-kweekmedium en plaats de flessen in een incubator met constante temperatuur bij 25° C, 68% relatieve vochtigheid, 500-1000 lux lichtomstandigheden en een 12 u:12 h licht: donker cyclus.</li>
		<li>Breng vliegen elke 7 dagen over in een nieuwe fles, afhankelijk van de groeicyclus van vliegen, waarbij de leeftijd van individuen in dezelfde fles consistent blijft.</li>
		<li>Verzamel de nieuwe partij vliegen die uit de originele fles komen 3 dagen na het overbrengen en doe ze in een nieuwe fles. Volgens het principe om de fles om de 7 dagen te vervangen, worden ze gekweekt tot ze ongeveer 30 dagen oud zijn.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Bereiding van medicinale voeding en glazen buisjes voor monitoring
OPMERKING: De procedure voor de voorbereiding van glazen buizen volgt het werk van Jin et al. met wijzigingen34.
<ol><li>Reinigen en drogen van glazen buizen<ol><li>Plaats de glazen buis (5 mm diameter x 65 mm lang, zie Materiaaltabel) in een grote beker, week hem en kook hem 20 minuten met dubbel gedestilleerd water. Herhaal 3 keer.</li>
		<li>Verwijder en bundel de glazen buis, spoel de binnenkant 3-5 keer af met dubbel gedestilleerd water en plaats deze in een oven om te drogen.</li>
	</ol></li>
	<li>Bereiding van eenvoudig kweekmedium (100 ml)<ol><li>Los 1,5 g agar en 5 g sucrose op in dubbel gedestilleerd water, verwarm en concentreer tot 100 ml.</li>
		<li>Voeg 600 μL propionzuur toe wanneer het medium is afgekoeld tot ongeveer 70 °C, zodat het niet kan stollen met behulp van een waterbad met constante temperatuur.</li>
		<li>Voeg ongeveer 4 ml enkelvoudig medium en reserpine (zie materiaaltabel) toe aan een bekerglas van 10 ml tot het geneesmiddel 20 μM of 50 μM bereikt. Voeg dimethylsulfoxide (DMSO) toe tot de concentratie van 0,2% in de negatieve controlegroep.</li>
	</ol></li>
	<li>Bereiding van de glazen buisjes met medicijnen<ol><li>Om de doorstroming van het medium te vergemakkelijken, steekt u voorzichtig een geschikte lengte glazen buis in een kleine beker. Het medium komt op natuurlijke wijze door atmosferische druk in de glazen buis.</li>
		<li>Trek de glazen buis eruit wanneer het kweekmedium volledig is gestold en veeg de buitenwand schoon om een glazen bewakingsbuis te verkrijgen met aan één uiteinde een kweekmedium dat medicijnen bevat.</li>
		<li>Verwarm de vaste paraffine in een bekerglas tot het smelt bij 70 °C, steek het uiteinde van de glazen buis dicht bij het voedsel ongeveer 5 mm in de paraffinevloeistof en verwijder het snel. Wacht tot de paraffine is gestold om het voedseluiteinde van de glazen buis af te sluiten.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Experimenteel ontwerp en vliegenbehandeling
<ol><li>Ontwerp het experiment voor de vliegenbehandeling volgens tabel 1.</li>
</ol>4. Drosophila-assemblage en slaapbewaking
OPMERKING: De procedure voor de assemblage van Drosophila volgt het werk van Jin et al.34 met wijzigingen.
<ol><li>Verdoof vliegen met CO2 -gas, doe ze in met paraffine verzegelde glazen buizen (één per buis) en blokkeer het non-fooduiteinde met een absorberend watje om te voorkomen dat vliegen ontsnappen en om luchtcirculatie te garanderen.</li>
	<li>Laad buizen op de infraroodmonitor om ze te bewaken.<ol><li>Monteer de glazen buisjes met vliegen op een infraroodmonitor in dezelfde richting en noteer het monitornummer en het gatnummer dat overeenkomt met elk medicijn.</li>
		<li>Pas de uitlijning van elke buis aan en laat de infraroodstralen verticaal door het midden van het activiteitsbereik van de vlieg gaan.</li>
		<li>Plaats de monitor in een incubator van 25 °C in de donkere kamer van de vliegslaap, volgens de gespecificeerde instellingen: temperatuur van 25 °C, Zeitgeber 12 (ZT12) (gelijk aan lokale tijd 08:00 uur) en ZT24 (gelijk aan lokale tijd 08:00 uur). Deze opstelling zorgt ervoor dat de vliegen afwisselend periodes van 12 uur licht en duisternis ervaren. NOTITIE: Probeer de deur niet te openen voordat het verzamelen van de bewakingsgegevens is voltooid om tijdens de bewaking een stabiele omgeving in de couveuse te behouden.</li>
		<li>Start de bewaking met behulp van het DAM2-systeem (zie Materiaaltabel).</li>
		<li>Zodra de monitoring is voltooid, downloadt u de verzamelde gegevens in .txt formaat van het systeem.</li>
	</ol></li>
</ol>5. Gegevensverwerking
OPMERKING: De gegevensverwerking met behulp van het DAM-systeem, DAMFileScan107 en SCAMP werd uitgevoerd volgens de instructies op hun officiële websites (zie Materiaaltabel).
<ol><li>Importeer het bovenstaande txt-bestand in de DAMFileScan107-software om te scannen en verdeel het naar behoefte om slaapgegevens te verkrijgen.<ol><li>Stel de starttijd van segmentatiegegevens in op 8:01 (segmentatie van 1 minuut) of 8:00 uur (segmentatie van 30 minuten) op de derde ochtend na het starten van de monitoren, en de eindtijd is drie dagen na de starttijd om 8:00 uur (Figuur 2A1). OPMERKING: Vliegen moeten zich minimaal één dag aanpassen aan de bewakingsomgeving. Men kan dus de starttijd van de gesplitste gegevens instellen op 8 uur op de derde dag nadat de monitor is begonnen.</li>
		<li>Splits de gegevens met tussenpozen van 1 minuut en 30 minuten. Wijzig de optie "Binlengte" in 1 minuut, wijzig de optie "Uitvoerbestandstype" in Kanaalbestanden, hernoem en uitvoer. De 30 min datasegmentatiemethode is dezelfde als hierboven (Figuur 2A2-5). OPMERKING: Bij het uitvoeren van gegevenssegmentatie met intervallen van 1 minuut en 30 minuten, moet de uiteindelijke hernoeming van de twee bestanden consistent zijn; anders kan het onleesbaar zijn tijdens de daaropvolgende Matlab-verwerking. Indien nodig kan de bestandsnaam na uitvoer worden gewijzigd om differentiatie te vergemakkelijken.</li>
	</ol></li>
	<li>Gegevensverwerking met behulp van SCAMP2020<ol><li>Open het programmapakket SCAMP2020 in Matlab en dubbelklik op Vecsey Sleep and Circadian Analysis MATLAB Program (SCAMP) (Figuur 2B).</li>
		<li>Voeg de submap "Vecsey SCAMP Scripts" toe aan het pad, zoek het bestand "scamp.m" in die map en voer het uit. Selecteer in het volgende pop-upvenster de mappen proces 1 min en 30 min achtereenvolgens (Figuur 2C,D).</li>
		<li>Selecteer een monitor, klik op Laad individuele See Plots om een voorbeeld te bekijken (Figuur 3A1) en controleer de afbeelding die verschijnt. Schakel het overeenkomstige kanaal van dode vliegen uit (Figuur 3A2, Figuur 3B).</li>
		<li>Herhaal de bovenstaande stappen om alle monitoren te controleren.</li>
		<li>Hernoem elk kanaal in elke monitor op basis van het corresponderende medicijn dat moet worden getest (Figuur 3A3), selecteer alle monitoren en klik op ANALYZE Selected Data voor analyse (Figuur 3A4).</li>
		<li>Ga standaard naar de geselecteerde optie, klik op Analyseren voor gekozen prullenbak, vink Gegevens exporteren aan en klik ten slotte op GRAFIEK 30 min gegevenstypen voor alle dagen voor geselecteerde groepen en EXPORTEER alle gegevens om de resultaten uit te voeren (Figuur 3C).</li>
	</ol></li>
	<li>Selecteer het bestand met de naam s30 in het CSV-bestand, zoek de bijbehorende gemiddelde waarde en standaardfoutgegevens voor elke monitor, maak een back-up naar Excel voor wijziging en aanpassing en plak het in GraphPad Prism (zie Materiaaltabel) om een slaapstatusdiagram te tekenen (Figuur 4A,B).</li>
	<li>Zoek het bestand met de naam "stdur" en bereken de gemiddelde waarden van dag, nacht en totale slaap voor elke vlieg binnen drie dagen (Figuur 4A,C). Plak de gegevens in de Prism-software om de verschiltest te voltooien en een grafiek te tekenen.</li>
</ol>

Geavanceerde behandelingen voor slaapstoornissen: een op drosophila gebaseerde screeningbenadering

<ol><li>Le Bon, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationships+between+REM+and+NREM+in+the+NREM-REM+sleep+cycle%3A+a+review+on+competing+concepts%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep+Medicine%22%5BJournal%5D)">Relationships between REM and NREM in the NREM-REM sleep cycle: a review on competing concepts.</a> Sleep Medicine. 70, 6-16 (2020).</li>
<li>Krueger, J. M., Frank, M. G., Wisor, J. P., Roy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+function%3A+Toward+elucidating+an+enigma%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep+Medicine+Reviews%22%5BJournal%5D)">Sleep function: Toward elucidating an enigma.</a> Sleep Medicine Reviews. 28, 46-54 (2016).</li>
<li>Ohayon, M. M., Carskadon, M. A., Guilleminault, C., Vitiello, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meta-analysis+of+quantitative+sleep+parameters+from+childhood+to+old+age+in+healthy+individuals%3A+developing+normative+sleep+values+across+the+human+lifespan%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep%22%5BJournal%5D)">Meta-analysis of quantitative sleep parameters from childhood to old age in healthy individuals: developing normative sleep values across the human lifespan.</a> Sleep. 27 (7), 1255-1273 (2004).</li>
<li>Li, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperexcitable+arousal+circuits+drive+sleep+instability+during+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Hyperexcitable arousal circuits drive sleep instability during aging.</a> Science. 375 (6583), eabh3021(2022).</li>
<li>Rodriguez, J. C., Dzierzewski, J. M., Alessi, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+problems+in+the+elderly%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Sleep problems in the elderly.</a> Medical Clinics of North America. 99 (2), 431-439 (2015).</li>
<li>Gulia, K. K., Kumar, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+disorders+in+the+elderly%3A+a+growing+challenge%5BTitle%5D)+AND+%22Psychogeriatrics%22%5BJournal%5D)">Sleep disorders in the elderly: a growing challenge.</a> Psychogeriatrics. 18 (3), 155-165 (2018).</li>
<li>Wolkove, N., Elkholy, O., Baltzan, M., Palayew, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+and+aging%3A+1.+Sleep+disorders+commonly+found+in+older+people%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Medical+Association+Journal%22%5BJournal%5D)">Sleep and aging: 1. Sleep disorders commonly found in older people.</a> Canadian Medical Association Journal. 176 (9), 1299-1304 (2007).</li>
<li>Suzuki, K., Miyamoto, M., Hirata, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+disorders+in+the+elderly%3A+Diagnosis+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+General+and+Family+Medicine%22%5BJournal%5D)">Sleep disorders in the elderly: Diagnosis and management.</a> Journal of General and Family Medicine. 18 (2), 61-71 (2017).</li>
<li>Foley, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+complaints+among+elderly+persons+-+an+epidemiologic-study+of+3+communities%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep%22%5BJournal%5D)">Sleep complaints among elderly persons - an epidemiologic-study of 3 communities.</a> Sleep. 18 (6), 425-432 (1995).</li>
<li>Yu, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insomnia+Severity+Index%3A+psychometric+properties+with+Chinese+community-dwelling+older+people%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Advanced+Nursing%22%5BJournal%5D)">Insomnia Severity Index: psychometric properties with Chinese community-dwelling older people.</a> Journal of Advanced Nursing. 66 (10), 2350-2359 (2010).</li>
<li>Hoevenaar-Blom, M. P., Spijkerman, A. M., Kromhout, D., van den Berg, J. F., Verschuren, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+duration+and+sleep+quality+in+relation+to+12-year+cardiovascular+disease+incidence%3A+the+MORGEN+study%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep%22%5BJournal%5D)">Sleep duration and sleep quality in relation to 12-year cardiovascular disease incidence: the MORGEN study.</a> Sleep. 34 (11), 1487-1492 (2011).</li>
<li>Rebok, G. W., Rovner, B. W., Folstein, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+disturbance+and+Alzheimer%27s+disease%3A+relationship+to+behavioral+problems%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+%28Milano%29%22%5BJournal%5D)">Sleep disturbance and Alzheimer's disease: relationship to behavioral problems.</a> Aging (Milano). 3 (2), 193-196 (1991).</li>
<li>Schroeck, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+safety+and+efficacy+of+sleep+medicines+in+older+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Review of safety and efficacy of sleep medicines in older adults.</a> Clinical Therapeutics. 38 (11), 2340-2372 (2016).</li>
<li>Pericic, D., Strac, D. S., Jembrek, M. J., Vlainic, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allosteric+uncoupling+and+up-regulation+of+benzodiazepine+and+GABA+recognition+sites+following+chronic+diazepam+treatment+of+HEK+293+cells+stably+transfected+with+alpha1beta2gamma2S+subunits+of+GABA+%28A%29+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Naunyn-Schmiedeberg%27s+Archives+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Allosteric uncoupling and up-regulation of benzodiazepine and GABA recognition sites following chronic diazepam treatment of HEK 293 cells stably transfected with alpha1beta2gamma2S subunits of GABA (A) receptors.</a> Naunyn-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology. 375 (3), 177-187 (2007).</li>
<li>Lader, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((History+of+benzodiazepine+dependence%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Substance+Abuse+Treatment%22%5BJournal%5D)">History of benzodiazepine dependence.</a> Journal of Substance Abuse Treatment. 8 (1-2), 53-59 (1991).</li>
<li>Chen, P. L., Lee, W. J., Sun, W. Z., Oyang, Y. J., Fuh, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+of+dementia+in+patients+with+insomnia+and+long-term+use+of+hypnotics%3A+a+population-based+retrospective+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">Risk of dementia in patients with insomnia and long-term use of hypnotics: a population-based retrospective cohort study.</a> Plos One. 7 (11), e49113(2012).</li>
<li>Kang, D. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zolpidem+use+and+risk+of+fracture+in+elderly+insomnia+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Preventive+Medicine+and+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Zolpidem use and risk of fracture in elderly insomnia patients.</a> Journal of Preventive Medicine and Public Health. 45 (4), 219-226 (2012).</li>
<li>Kao, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+of+zolpidem+and+cancer+risk%3A+a+Taiwanese+population-based+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Mayo+Clinic+Protocols%22%5BJournal%5D)">Relationship of zolpidem and cancer risk: a Taiwanese population-based cohort study.</a> Mayo Clinic Protocols. 87 (5), 430-436 (2012).</li>
<li>Sateia, M. J., Kirby-Long, P., Taylor, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+clinical+safety+of+ramelteon%3A+an+evidence-based+review%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep+Medicine+Reviews%22%5BJournal%5D)">Efficacy and clinical safety of ramelteon: an evidence-based review.</a> Sleep Medicine Reviews. 12 (4), 319-332 (2008).</li>
<li>Friedrich, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug-induced+liver+injury+during+antidepressant+treatment%3A+results+of+amsp%2C+a+drug+surveillance+program%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Drug-induced liver injury during antidepressant treatment: results of amsp, a drug surveillance program.</a> The International Journal of Neuropsychopharmacology. 19 (4), pyv126(2016).</li>
<li>Entzeroth, M., Flotow, H., Condron, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+high-throughput+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Overview of high-throughput screening.</a> Current Protocols in Pharmacology. Chapter 9, (2009).</li>
<li>Ferreira, L. G., Dos Santos, R. N., Oliva, G., Andricopulo, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+docking+and+structure-based+drug+design+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Molecular docking and structure-based drug design strategies.</a> Molecules. 20 (7), 13384-13421 (2015).</li>
<li>Campbell, S. S., Tobler, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+sleep+-+a+review+of+sleep+duration+across+phylogeny%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+and+Biobehavioral+Reviews%22%5BJournal%5D)">Animal sleep - a review of sleep duration across phylogeny.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 8 (3), 269-300 (1984).</li>
<li>Hendricks, J. C., Sehgal, A., Pack, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+need+for+a+simple+animal+model+to+understand+sleep%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">The need for a simple animal model to understand sleep.</a> Progress in Neurobiology. 61 (4), 339-351 (2000).</li>
<li>Hendricks, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rest+in+Drosophila+is+a+sleep-like+state%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Rest in Drosophila is a sleep-like state.</a> Neuron. 25 (1), 129-138 (2000).</li>
<li>Shaw, P. J., Cirelli, C., Greenspan, R. J., Tononi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlates+of+sleep+and+waking+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Correlates of sleep and waking in Drosophila melanogaster.</a> Science. 287 (5459), 1834-1837 (2000).</li>
<li>Ly, S., Pack, A. I., Naidoo, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neurobiological+basis+of+sleep%3A+Insights+from+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+%26+Biobehavioral+Reviews%22%5BJournal%5D)">The neurobiological basis of sleep: Insights from Drosophila.</a> Neuroscience & Biobehavioral Reviews. 87, 67-86 (2018).</li>
<li>Jeibmann, A., Paulus, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+melanogaster+as+a+model+organism+of+brain+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Drosophila melanogaster as a model organism of brain diseases.</a> International Journal of Molecular Sciences. 10 (2), 407-440 (2009).</li>
<li>Morse, D., Sassone-Corsi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+after+time%3A+inputs+to+and+outputs+from+the+mammalian+circadian+oscillators%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Time after time: inputs to and outputs from the mammalian circadian oscillators.</a> Trends in Neuroscience. 25 (12), 632-637 (2002).</li>
<li>De Nobrega, A. K., Lyons, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila%3A+an+emergent+model+for+delineating+interactions+between+the+circadian+clock+and+drugs+of+abuse%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Plasticity%22%5BJournal%5D)">Drosophila: an emergent model for delineating interactions between the circadian clock and drugs of abuse.</a> Neural Plasticity. 2017, 4723836(2017).</li>
<li>Reppert, S. M., Weaver, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coordination+of+circadian+timing+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Coordination of circadian timing in mammals.</a> Nature. 418 (6901), 935-941 (2002).</li>
<li>Koudounas, S., Green, E. W., Clancy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reliability+and+variability+of+sleep+and+activity+as+biomarkers+of+ageing+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Biogerontology%22%5BJournal%5D)">Reliability and variability of sleep and activity as biomarkers of ageing in Drosophila.</a> Biogerontology. 13 (5), 489-499 (2012).</li>
<li>Nall, A. H., Sehgal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small-molecule+screen+in+adult+Drosophila+identifies+VMAT+as+a+regulator+of+sleep%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Small-molecule screen in adult Drosophila identifies VMAT as a regulator of sleep.</a> Journal of Neuroscience. 33 (19), 8534-8464 (2013).</li>
<li>Jin, X., Gu, P., Han, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+for+Drosophila+sleep+deprivation+using+single-chip+board%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protocols%22%5BJournal%5D)">Protocol for Drosophila sleep deprivation using single-chip board.</a> STAR Protocols. 2 (4), 100827(2021).</li>
<li>Kashyap, A., Singh, P. K., Silakari, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Counting+on+fragment+based+drug+design+approach+for+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Counting on fragment based drug design approach for drug discovery.</a> Current Topics in Medicinal Chemistry. 18 (27), 2284-2293 (2018).</li>
<li>Qi, W., Ding, D., Salvi, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxic+effects+of+dimethyl+sulphoxide+%28DMSO%29+on+cochlear+organotypic+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">Cytotoxic effects of dimethyl sulphoxide (DMSO) on cochlear organotypic cultures.</a> Hearing Research. 236 (1-2), 52-60 (2008).</li>
<li>Nishimura, M., Ueda, N., Naito, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+dimethyl+sulfoxide+on+the+gene+induction+of+cytochrome+P450+isoforms%2C+UGT-dependent+glucuronosyl+transferase+isoforms%2C+and+ABCB1+in+primary+culture+of+human+hepatocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+and+Pharmaceutical+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Effects of dimethyl sulfoxide on the gene induction of cytochrome P450 isoforms, UGT-dependent glucuronosyl transferase isoforms, and ABCB1 in primary culture of human hepatocytes.</a> Biological and Pharmaceutical Bulletin. 26 (7), 1052-1056 (2003).</li>
<li>Solovev, I. A., Shaposhnikov, M. V., Moskalev, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronobiotics+KL001+and+KS15+extend+lifespan+and+modify+circadian+rhythms+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Clocks+Sleep%22%5BJournal%5D)">Chronobiotics KL001 and KS15 extend lifespan and modify circadian rhythms of Drosophila melanogaster.</a> Clocks Sleep. 3 (3), 429-441 (2021).</li>
<li>Cavas, M., Beltran, D., Navarro, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioural+effects+of+dimethyl+sulfoxide+%28DMSO%29%3A+changes+in+sleep+architecture+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology+Letters%22%5BJournal%5D)">Behavioural effects of dimethyl sulfoxide (DMSO): changes in sleep architecture in rats.</a> Toxicology Letters. 157 (3), 221-232 (2005).</li>
<li>Pfeiffenberger, C., Lear, B. C., Keegan, K. P., Allada, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Locomotor+activity+level+monitoring+using+the+Drosophila+Activity+Monitoring+%28DAM%29+System%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Locomotor activity level monitoring using the Drosophila Activity Monitoring (DAM) System.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2010 (11), 5518(2010).</li>
<li>Gilestro, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Video+tracking+and+analysis+of+sleep+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Video tracking and analysis of sleep in Drosophila melanogaster.</a> Nature Protocols. 7 (5), 995-1007 (2012).</li>
<li>Branson, K., Robie, A. A., Bender, J., Perona, P., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+ethomics+in+large+groups+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">High-throughput ethomics in large groups of Drosophila.</a> Nature Methods. 6 (6), 451-457 (2009).</li>
<li>Kabra, M., Robie, A. A., Rivera-Alba, M., Branson, S., Branson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((JAABA%3A+interactive+machine+learning+for+automatic+annotation+of+animal+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">JAABA: interactive machine learning for automatic annotation of animal behavior.</a> Nature Methods. 10 (1), 64-67 (2013).</li>
<li>Donelson, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+positional+tracking+for+long-term+analysis+of+Drosophila+sleep+and+locomotion+using+the+%26%2334%3Btracker%26%2334%3B+program%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">High-resolution positional tracking for long-term analysis of Drosophila sleep and locomotion using the &#34;tracker&#34; program.</a> Plos One. 7 (5), e37250(2012).</li>
<li>Cichewicz, K., Hirsh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ShinyR-DAM%3A+a+program+analyzing+Drosophila+activity%2C+sleep+and+circadian+rhythms%5BTitle%5D)+AND+%22Communications+Biology%22%5BJournal%5D)">ShinyR-DAM: a program analyzing Drosophila activity, sleep and circadian rhythms.</a> Communications Biology. 1, 25(2018).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat er geen tegenstrijdige belangen zijn.

De beschreven methode is geschikt voor het snel screenen van kleine en middelgrote slaapmiddelen. Momenteel zijn de meeste gangbare high-throughput methoden voor het screenen van geneesmiddelen gebaseerd op biochemisch en cellulair niveau. Zo wordt bijvoorbeeld gekeken naar de structuur en eigenschappen van de receptor om te zoeken naar specifieke liganden die zich eraan kunnen binden22. Een andere benadering omvat het analyseren van de bindingswijze en sterkte van moleculaire fragmenten van gesel...

Slaap, een van de essentiële gedragingen die nodig zijn voor het overleven van de mens, wordt gekenmerkt door twee hoofdtoestanden: REM-slaap (Rapid Eye Movement) en niet-Rapid Eye Movement (NREM)-slaap1. NREM-slaap bestaat uit drie fasen: N1 (de overgang tussen waken en slapen), N2 (lichte slaap) en N3 (diepe slaap, langzame golfslaap), die de progressie van waakzaamheid naar diepe slaap1 vertegenwoordigen. Slaap speelt een cruciale rol in zowel de lichamelijke als de geestelijke gezondheid2. Veroudering vermindert echter de totale slaapduur, de slaapefficiëntie, het slow-wave slaappercentage en het REM-slaappercentage bijvolwassenen3. Oudere mensen hebben de neiging om meer tijd in lichte slaap door te brengen in vergelijking met langzame slaap, waardoor ze gevoeliger zijn voor nachtelijk ontwaken. Naarmate het aantal ontwaken toeneemt, neemt de gemiddelde slaaptijd af, wat resulteert in een gefragmenteerd slaappatroon bij ouderen, wat in verband kan worden gebracht met overmatige excitatie van Hprt-neuronen bij muizen4. Bovendien dragen leeftijdsgerelateerde dalingen van circadiane mechanismen bij aan een eerdere verschuiving in slaapduur 5,6. In combinatie met lichamelijke ziekte, psychologische stress, omgevingsfactoren en medicijngebruik maken deze factoren oudere volwassenen vatbaarder voor slaapstoornissen, zoals slapeloosheid, REM-slaapgedragsstoornis, narcolepsie, periodieke beenbewegingen, rustelozebenensyndroom en slaapstoornissen in de ademhaling 7,8.
Epidemiologische studies hebben aangetoond dat slaapstoornissen nauw verband houden met chronische ziekten bij ouderen9, waaronder depressie10, hart- en vaatziekten11 en dementie12. Het aanpakken van slaapstoornissen speelt een cruciale rol bij het verbeteren en behandelen van chronische ziekten en het verbeteren van de kwaliteit van leven van oudere volwassenen. Momenteel vertrouwen patiënten voornamelijk op geneesmiddelen zoals benzodiazepinen, niet-benzodiazepinen en melatoninereceptoragonisten om de slaapkwaliteit teverbeteren13. Benzodiazepinen kunnen echter leiden tot neerwaartse regulatie van receptoren en afhankelijkheid na langdurig gebruik, waardoor ernstige ontwenningsverschijnselen ontstaan bij stopzetting14,15. Niet-benzodiazepinen brengen ook risico's met zich mee, waaronder dementie 16, fracturen17 en kanker18. De veelgebruikte melatoninereceptoragonist, ramelteon, vermindert de slaaplatentie, maar verlengt de slaapduur niet en heeft problemen met de leverfunctie als gevolg van uitgebreide first-pass-eliminatie19. Agomelatine, een melatoninereceptoragonist en serotoninereceptorantagonist, verbetert depressiegerelateerde slapeloosheid, maar vormt ook een risico op leverbeschadiging20. Daarom is er dringend behoefte aan veiligere medicijnen om slaapstoornissen te behandelen of te verlichten. De huidige strategieën voor het screenen van geneesmiddelen, gebaseerd op moleculaire en cellulaire experimenten in combinatie met geautomatiseerde systemen en computeranalyse, zijn echter duur en tijdrovend21. Op structuur gebaseerde strategieën voor het ontwerpen van geneesmiddelen, die gebaseerd zijn op de structuur en eigenschappen van receptoren, vereisen een duidelijk begrip van de driedimensionale structuur van receptoren en missen voorspellende mogelijkheden voor geneesmiddeleffecten22.
In 2000 stelden onderzoekers, op basis van de slaapcriteria voorgesteld door Campbell en Tobler in 1984 23, eenvoudige diermodellen op om slaap24 te bestuderen, waaronder Drosophila melanogaster, die slaapachtige toestanden vertoonde25,26. Ondanks anatomische verschillen tussen Drosophila en mensen, zijn veel neurochemische componenten en signaalroutes die de slaap bij Drosophila reguleren bewaard gebleven in de slaap van zoogdieren, wat de studie van neurologische aandoeningen bij de mens vergemakkelijkt27,28. Drosophila wordt ook op grote schaal gebruikt in circadiane ritmestudies, ondanks verschillen in kernoscillatoren tussen vliegen en zoogdieren 29,30,31. Daarom dient Drosophila als een waardevol modelorganisme voor het bestuderen van slaapgedrag en het uitvoeren van slaapgerelateerde drugsscreening.
Deze studie stelt een kosteneffectieve en eenvoudige op fenotype gebaseerde benadering voor voor het screenen van geneesmiddelen met kleine moleculen om slaapstoornissen te behandelen met behulp van verouderde vliegen. Slaapregulatie bij Drosophila is sterk geconserveerd25, en de afname van de slaap die met de leeftijd wordt waargenomen, kan omkeerbaar zijn door toediening van medicijnen. Deze op slaapfenotype gebaseerde screeningsmethode kan dus intuïtief de werkzaamheid van geneesmiddelen weerspiegelen. We voeden de vliegen met een mengsel van het onderzochte medicijn en voedsel, monitoren en registreren het slaapgedrag met behulp van de Drosophila Activity Monitor (DAM)32 en analyseren de verkregen gegevens met behulp van het open-source SCAMP2020 datapakket in MATLAB (Figuur 1). Statistische analyse wordt uitgevoerd met behulp van statistische en grafische software (zie Tabel met materialen). Als voorbeeld demonstreren we de effectiviteit van dit protocol door experimentele gegevens te presenteren over Reserpine, een remmer van kleine moleculen van de vesiculaire monoaminetransporter waarvan wordt gemeld dat deze de slaapverhoogt33. Dit protocol biedt een waardevolle benadering om geneesmiddelen te identificeren voor de behandeling van leeftijdsgebonden slaapproblemen.

<table><tbody><tr><td>Ager</td><td>BIOFROXX</td><td>8211KG001</td><td></td></tr><tr><td>Artificial Climate Box</td><td>PRANDT</td><td>PRX-1000A</td><td>officiële website:https://www.nbplt17.com/PLTXBS-Products-20643427/</td></tr><tr><td>DAM2 Drosophila Activity Monitor</td><td>TriKineics</td><td>DAM2</td><td>officiële website:https://www.trikinetics.com/</td></tr><tr><td>DAM2system</td><td>TriKineics</td><td>versie:v3.03</td><td>officiële website:https://www.trikinetics.com/</td></tr><tr><td>DAMFileScan</td><td>TriKineics</td><td>versie:1.0.7.0</td><td>officiële website:https://www.trikinetics.com/</td></tr><tr><td>Dimethyl Sulfoxide</td><td>SIGMA</td><td>276855</td><td></td></tr><tr><td>Drosophila Activity Monitoring Incubator</td><td>Tritech Research</td><td>DT2-CIRC-TK</td><td>officiële website:https://www.tritechresearch.com/DT2-CIRC-TK.html</td></tr><tr><td>Drosophila Bottles</td><td>Biologix</td><td>51-17720</td><td>officiële website:http://biologixgroup.com/goods.php?id=48</td></tr><tr><td>Drosophila: w1118</td><td>Bloomington Drosophila Stock Center&nbsp;</td><td>BDSC_3605</td><td></td></tr><tr><td>Excel</td><td>Microsoft</td><td>versie:Excel 2016</td><td>officiële website:https://www.microsoftstore.com.cn/software/office/excel</td></tr><tr><td>Glass tubes</td><td>TriKinetics</td><td>PPT5x65</td><td>officiële website:https://www.trikinetics.com/</td></tr><tr><td>MATLABR2022b</td><td>MathWorks</td><td>versie:9.13.0.2049777</td><td>officiële website:https://ww2.mathworks.cn/products/matlab.html</td></tr><tr><td>Prism</td><td>GraphPad</td><td>Versie:Prism 8.0.1</td><td>officiële website:https://www.graphpad.com/features</td></tr><tr><td>Reserpine</td><td>MACKLIN</td><td>R817202-1g</td><td></td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>SIGMA</td><td>1245GR500</td><td></td></tr><tr><td>SCAMP</td><td>Vecsey Lab</td><td>N/A</td><td>officiële website:https://academics.skidmore.edu/blogs/cvecsey/</td></tr></tbody></table>

high-throughput small molecule drug screening voor leeftijdsgebonden slaapstoornissen met behulp van drosophila melanogaster

High-Throughput Small Molecule Drug Screening For Age-Related Sleep Disorders Using Drosophila melanogaster

Slaap, een essentieel onderdeel van de gezondheid en het algehele welzijn, vormt vaak een uitdaging voor oudere personen die vaak slaapstoornissen ervaren die worden gekenmerkt door een verkorte slaapduur en gefragmenteerde patronen. Deze slaapstoornissen correleren ook met een verhoogd risico op verschillende ziekten bij ouderen, waaronder diabetes, hart- en vaatziekten en psychische stoornissen. Helaas worden bestaande medicijnen voor slaapstoornissen in verband gebracht met aanzienlijke bijwerkingen zoals cognitieve stoornissen en verslaving. Daarom is de ontwikkeling van nieuwe, veiligere en effectievere medicijnen tegen slaapstoornissen dringend nodig. De hoge kosten en de lange experimentele duur van de huidige methoden voor het screenen van geneesmiddelen blijven echter beperkende factoren.
Dit protocol beschrijft een kosteneffectieve en high-throughput screeningsmethode die gebruik maakt van Drosophila melanogaster, een soort met een sterk geconserveerd slaapregulatiemechanisme in vergelijking met zoogdieren, waardoor het een ideaal model is voor het bestuderen van slaapstoornissen bij ouderen. Door verschillende kleine verbindingen toe te dienen aan oude vliegen, kunnen we hun effecten op slaapstoornissen beoordelen. Het slaapgedrag van deze vliegen wordt geregistreerd met behulp van een infraroodbewakingsapparaat en geanalyseerd met het open-source datapakket Sleep and Circadian Analysis MATLAB Program 2020 (SCAMP2020). Dit protocol biedt een goedkope, reproduceerbare en efficiënte screeningsaanpak voor slaapregulatie. Fruitvliegjes zijn vanwege hun korte levenscyclus, lage houderijkosten en gebruiksgemak uitstekende onderwerpen voor deze methode. Ter illustratie: Reserpine, een van de geteste medicijnen, toonde het vermogen aan om de slaapduur bij oudere vliegen te bevorderen, wat de effectiviteit van dit protocol benadrukte.

Reserpine is een remmer van kleine moleculen van de vesiculaire monoaminetransporter (VMAT), die de heropname van monoaminen in presynaptische blaasjes remt, wat leidt tot een verhoogdeslaap33. De slaapbevorderende effecten van Reserpine werden onderzocht bij vliegen van 30 dagen oud, waarbij de controlegroep uitsluitend werd gevoed met het oplosmiddel dimethylsulfoxide (DMSO). In de Reserpine-groep vertoonden oudere vliegen zowel overdag als 's nachts een significant verhoogde slaap in vergelijki...

Gepresenteerd wordt een protocol voor high-throughput drug screening om de slaap te verbeteren door het slaapgedrag van fruitvliegjes te monitoren in een ouder Drosophila-model .

High-Throughput Small Molecule Drug Screening voor leeftijdsgebonden slaapstoornissen met behulp van Drosophila melanogaster

Sleep, an essential component of health and overall well-being, often presents challenges for older individuals who frequently experience sleep disorders ...

Technieken voor het screenen van geneesmiddelen omvatten high-throughput screening, waarbij gebruik wordt gemaakt van automatisering voor het ontdekken van geneesmiddelen, op structuur gebaseerde ontwerpen en het vinden van receptorbindende moleculen op basis van de structuur, en een op fragmenten gebaseerd ontwerp, waarbij gebruik wordt gemaakt van nucleaire magnetische resonantie en massaspectrometrie om moleculaire fragmenten te optimaliseren en de verbindingen te identificeren. Het DAM-systeem meet de slaap van vliegen door het detecteren van infraroodstraalstenen. Deze methode kan echter de slaap overschatten als de vliegen statisch blijven aan het ene uiteinde van de buis, of als de vlieg niet erg mobiel is.Bovendien kan de volgorde van een getest medicijn van invloed zijn op de inname van vliegenfruit, waardoor experimentele resultaten mogelijk scheef worden getrokken. Daarom zal ons experiment verschillende rekoefeningen bevatten om deze factoren te verminderen en de nauwkeurigheid te verbeteren. Vergeleken met op videoanalyse gebaseerde methoden, biedt onze methode hoge doorvoermogelijkheden, verlaagt het de kosten en vereenvoudigt het de bediening.Het proces van experimentele gegevens is dus ook relatief eenvoudig, waarbij de resulterende grafiek de effecten van het medicijn visueel weergeeft.

high-throughput-small-molecule-drug-screening-for-age-related-sleep

Research

JoVE Journal

Behavior

Gedrag

We beschrijven de procedures voor de registratie van de dagelijkse bewegingsactiviteit ritmes...

Het testen van de locomotorische activiteit te circadiaanse ritmes Studie en parameters Sleep in Drosophila</em

Gekoppelde Nanoinjection en Elektrofysiologie test voor het screenen op bioactiviteit van verbindingen met behulp van de Drosophila melanogaster Giant Fiber System

Eenvoudige tests voor het meten van ethanolgevoeligheid en snelle tolerantie bij Drosophila vergemakkelijken het gebruik van dit modelorganisme voor het onderzoeken van deze belangrijke ethanol-gerelateerde gedragingen. Hier wordt een relatief eenvoudige, schaalbare test beschreven voor het meten van ethanolgevoeligheid en snelle tolerantie bij vliegen.

Een goedkope, Scalable Behavioral Test voor het meten Ethanol Sedatie Gevoeligheid en Rapid Tolerantie in<em&gt; Drosophila</em

Dit protocol beschrijft een hoogdoorlaattest voor het testen van ei-legvoorkeuren van Drosophila melanogaster met een nauwkeurigheid per enkel dier. Deze test biedt een eenvoudige, efficiënte en schaalbare platform om genen en circuitonderdelen te identificeren die een eenvoudig besluitvormingsproces controleren.

High Throughput Assay to-eierleggende Voorkeuren van de individuele onderzoeken<em&gt; Drosophila melanogaster</em

We presenteren een protocol met een voorwaartse genetische benadering van het scherm voor mutanten die neurodegeneratie in Drosophila melanogastertentoonstellen. Het bevat een klim test, histologie analyse, genmapping en DNA-sequencing om uiteindelijk nieuwe genen te identificeren die verband houden met het neuroprotectie proces.

In vivo genetisch scherm naar voren om nieuwe neuroprotectieve genen in Drosophila melanogaster te identificeren

Drosophila is een veel gebruikt experimenteel model geschikt voor het screenen van geneesmiddelen met mogelijke toepassingen voor kankertherapie. Hier beschrijven we het gebruik van Drosophila bonte oogkleurfenotypes als een methode voor het screenen van kleine moleculen verbindingen die heterochromatinevorming bevorderen.

Een screeningmethode voor de identificatie van heterochromatine-bevorderende drugs met drosophila

De huidige methoden om de alcoholgevoeligheid in Drosophila te meten zijn ontworpen om groepen vliegen te testen. We presenteren een eenvoudige, goedkope, hoge doorvoer test voor de beoordeling van alcohol sedatie gevoeligheid in grote aantallen enkele vliegen. De methode vereist geen gespecialiseerde gereedschappen en kan worden uitgevoerd in elk laboratorium met behulp van gemeenschappelijke materialen.

High-Throughput Methode voor het meten van alcohol sedatie tijd van individuele Drosophila melanogaster

Het huidige protocol beoordeelt de locomotorische activiteit van Drosophila door de beweging van vliegen in een handgemaakte arena te volgen en te analyseren met behulp van open-source software Fiji, compatibel met plug-ins om pixels van elk frame te segmenteren op basis van high-definition video-opname om parameters van snelheid, afstand, enz. Te berekenen.

Een eenvoudige techniek om locomotorische activiteit in Drosophila te testen

Dit protocol beschrijft het gebruik van Drosophila-larven om unieke anti-epileptische verbindingen voor de behandeling van epilepsie te identificeren.

Aanvalsactiviteit geïnduceerd door elektroshocks bij Drosophila-larven

Het protocol presenteert een high-throughput, kosteneffectieve methode voor het beoordelen van neurotoxiciteit in de fruitvlieg door middel van de kwantificering van locomotorische disfunctie als alternatief voor traditionele zoogdiermodellen. Het heeft tot doel de neurotoxische effecten van farmaceutische verbindingen, milieuagentia of genetische modificaties te evalueren met behulp van een gevoelig, reproduceerbaar en ethisch gunstig model.

Gedragsanalyse van locomotorische disfunctie bij Drosophila melanogaster als uitlezing voor neurotoxiciteit

Leer high-throughput drug screening voor slaaponderzoek bij verouderde Drosophila melanogaster. Deze methode verbetert de nauwkeurigheid van slaapmetingen en vereenvoudigt operationele procedures.

High-Throughput Small Molecule Drug Screening voor leeftijdsgebonden slaapstoornissen met behulp van Drosophila melanogaster

Meer video's verkennen