Name: Een alomvattende benadering om de celcomponenten van cerebrale bloedstolsels te analyseren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-07-21T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 12 s
Description: Leer een nieuwe methode voor de analyse van celcomponenten in cerebrale bloedstolsels door fibrinolyse en kleuring. Deze techniek maakt kwantitatieve en kwalitatieve analyse van intacte cellen mogelijk voor verbeterde diagnostiek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit onderzoek werd gefinancierd door het Science and Technology Bureau van de stad Xiamen (3502Z20227197) en het Science and Technology Bureau van de provincie Fujian (nr. 2019J01070, nr. 2021Y0027).

Het onderzoek is uitgevoerd in overeenstemming met de institutionele richtlijnen van de Commissie Medische Ethiek van de Huaqiao University. De cerebrale bloedstolsels werden operatief verwijderd en verzameld in het Quanzhou First Hospital, verbonden aan de Fujian Medical University, met geïnformeerde toestemming van de patiënten.
1. Voorbehandeling van bloedstolsels
<ol><li>Leg de stolsels op een schone schaal, voeg 5 ml fysiologische zoutoplossing toe met een pincet, schud de schaal voorzichtig en verwijder de zoutoplossing met een pipet. NOTITIE: Herhaal de spoeling drie keer.</li>
	<li>Snijd de stolsels met een schaar in kleinere stukken (kleiner dan 5 mm x 5 mm x 5 mm). Voeg 5 ml fysiologische zoutoplossing toe, schud het gerecht voorzichtig en verwijder de zoutoplossing met een pipet. NOTITIE: Herhaal de spoeling drie keer. Zorg ervoor dat er tijdens het spoelen geen stolsels worden opgezogen.</li>
	<li>Breng de stolsels over naar een andere schone U-plaat. OPMERKING: Het protocol kan hier worden gepauzeerd (bewaar de plaat bij 2-8 °C) en later opnieuw worden gestart.</li>
</ol>2. Trombolyse
<ol><li>Bereid de sFE-werkoplossing voor door de concentratie van sFE aan te passen tot 2000 E/ml met fysiologische zoutoplossing. OPMERKING: De sFE is opgesteld volgens de gevestigde protocollen van Tang Lab15.</li>
	<li>Voeg 300 μL sFE-werkoplossing toe aan de voorbehandelde stolsels.</li>
	<li>Voer de eerste degradatieronde uit.<ol><li>Incubeer het mengsel van sFE en stolsels bij 37 °C gedurende 0,5 uur. OPMERKING: De met fysiologische zoutoplossing behandelde vlek werd ingesteld als negatieve controle. Draai het monster niet op de shaker.</li>
		<li>Meng het monster voorzichtig. Breng het vloeibare deel over naar een andere schone buis met een schone pipet. OPMERKING: De resterende stolsels werden gebruikt voor een nieuwe afbraakronde.</li>
		<li>Centrifugeer het vloeibare deel bij 200 × g gedurende 5 minuten bij 4 °C.</li>
		<li>Breng het supernatans met een pipet over in een andere schone buis om de teruggewonnen sFE-oplossing te verkrijgen.</li>
		<li>Meng de celneerslag voorzichtig met 50 μL fysiologische zoutoplossing. OPMERKING: Het celmengsel werd 2-8 °C bewaard voor later gebruik.</li>
	</ol></li>
	<li>Voer de daaropvolgende degradatie uit.<ol><li>Breek de resterende stolsels (stap 2.3.2) af met de teruggewonnen sFE-oplossing (stap 2.3.4) bij 37 °C gedurende 0,5 uur. LET OP: De ruststappen waren hetzelfde als de eerste degradatieronde. Het afbraakproces werd voltooid totdat de hele stolsels waren afgebroken.</li>
	</ol></li>
	<li>Voer celverzameling uit.<ol><li>Bereid het bloedcelmonster voor door het celmengsel van elke afbraakronde te verzamelen.</li>
	</ol></li>
</ol>3. De kleuring van Wright
<ol><li>Voer een celuitstrijkje uit.<ol><li>Stel de cellen in op een dichtheid van 1 x 106 cellen/ml.</li>
		<li>Voeg 5 μL van de cellen toe aan het met poly-L lysine gecoate glasplaatje en smeer ze vervolgens in met het afdekglaasje.</li>
		<li>Verdamp de vloeistof bij kamertemperatuur.</li>
	</ol></li>
	<li>Voer de kleuring uit.<ol><li>Voeg voorzichtig 200 μL Wright's kleurstof (zie Materiaaltabel) toe aan het celuitstrijkje en voeg 600 μL Wright's kleurstof B toe om gelijkmatig te mengen.  Vlek gedurende 10 minuten op kamertemperatuur.</li>
		<li>Spoel de kleurstof voorzichtig af met schoon water. NOTITIE: Het uitstrijkje met gekleurde cellen kan bij kamertemperatuur worden bewaard voor later gebruik.</li>
	</ol></li>
	<li>Voer microscopische beeldvorming uit.<ol><li>Onderzoek de gekleurde cellen met een lichtmicroscoop (zie Tabel met materialen).</li>
	</ol></li>
</ol>4. Routinematig bloedonderzoek
<ol><li>Stel de cellen in op een dichtheid van 1 x 106 cellen/ml.</li>
	<li>Analyseer de celcomponenten zoals bloedplaatjes, erytrocyten, witte bloedcellen, lymfocyten, neutrofielen, monocyten, eosinofielen, basofielen en onrijpe granulocyten met behulp van een autohematologieanalysator volgens de instructies van de fabrikant (zie Materiaaltabel).</li>
</ol>

Een op fibrinolytische enzymen gebaseerde methode om cerebrale trombuscelcomponenten te bestuderen

<ol><li>Park, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Edoxaban+versus+dual+antiplatelet+therapy+for+leaflet+thrombosis+and+cerebral+thromboembolism+after+TAVR%3A+The+ADAPT-TAVR+Randomized+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Edoxaban versus dual antiplatelet therapy for leaflet thrombosis and cerebral thromboembolism after TAVR: The ADAPT-TAVR Randomized clinical trial.</a> Circulation. 146 (6), 466-479 (2022).</li>
<li>Devasagayam, S., Wyatt, B., Leyden, J., Kleinig, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+venous+sinus+thrombosis+incidence+is+higher+than+previously+thought%3A+a+retrospective+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Cerebral venous sinus thrombosis incidence is higher than previously thought: a retrospective population-based study.</a> Stroke. 47 (9), 2180-2182 (2016).</li>
<li>Sacco, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+updated+definition+of+stroke+for+the+21st+century%3A+a+statement+for+healthcare+professionals+from+the+American+Heart+Association%2FAmerican+Stroke+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">An updated definition of stroke for the 21st century: a statement for healthcare professionals from the American Heart Association/American Stroke Association.</a> Stroke. 44 (7), 2064-2089 (2013).</li>
<li>Thalin, C., Hisada, Y., Lundstrom, S., Mackman, N., Wallen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps%3A+villains+and+targets+in+arterial%2C+venous%2C+and+cancer-associated+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis+Thrombosis+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps: villains and targets in arterial, venous, and cancer-associated thrombosis.</a> Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology. 39 (9), 1724-1738 (2019).</li>
<li>Mocsai, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+novel+functions+of+neutrophils+in+immunity%2C+inflammation%2C+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Diverse novel functions of neutrophils in immunity, inflammation, and beyond.</a> Journal of Experimental Medicine. 210 (7), 1283-1299 (2013).</li>
<li>Dhanesha, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PKM2+promotes+neutrophil+activation+and+cerebral+thromboinflammation%3A+therapeutic+implications+for+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">PKM2 promotes neutrophil activation and cerebral thromboinflammation: therapeutic implications for ischemic stroke.</a> Blood. 139 (8), 1234-1245 (2022).</li>
<li>Ducroux, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombus+neutrophil+extracellular+traps+content+impair+tpa-induced+thrombolysis+in+acute+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Thrombus neutrophil extracellular traps content impair tpa-induced thrombolysis in acute ischemic stroke.</a> Stroke. 49 (3), 754-757 (2018).</li>
<li>Solomon, C., Ranucci, M., Hochleitner, G., Schochl, H., Schlimp, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+methodology+for+calculating+platelet+contribution+to+clot+strength+%28platelet+component%29+in+thromboelastometry+and+thrombelastography%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesia+and+Analgesia%22%5BJournal%5D)">Assessing the methodology for calculating platelet contribution to clot strength (platelet component) in thromboelastometry and thrombelastography.</a> Anesthesia and Analgesia. 121 (4), 868-878 (2015).</li>
<li>Daraei, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+fiber+diameter+and+porosity+measurements+of+plasma+clots+in+scanning+electron+microscopy+images%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Automated fiber diameter and porosity measurements of plasma clots in scanning electron microscopy images.</a> Biomolecules. 11 (10), 1536(2021).</li>
<li>Abbasi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+thrombus+composition+in+thrombectomy+stroke+patients+with+longer+time+to+recanalization%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+Research%22%5BJournal%5D)">Diverse thrombus composition in thrombectomy stroke patients with longer time to recanalization.</a> Thrombosis Research. 209, 99-104 (2022).</li>
<li>C W Francis, a, Marder, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concepts+of+clot+lysis%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Concepts of clot lysis.</a> Annual Review of Medicine. 37 (1), 187-204 (1986).</li>
<li>Preparation and application of natural fibrinolytic enzyme from peanut worm. , https://patents.google.com/patent/CN109295042A/en (2019).</li>
<li>Fotso Fotso, A., Drancourt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+Diagnosis+of+tick-borne+african+relapsing+fevers%3A+latest+developments%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Laboratory Diagnosis of tick-borne african relapsing fevers: latest developments.</a> Front Public Health. 3, 254(2015).</li>
<li>Liou, G. Y., Byrd, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+bioliquid+markers+for+pancreatic+cancer%3A+What+we+have+vs.+what+we+need%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Diagnostic bioliquid markers for pancreatic cancer: What we have vs. what we need.</a> Cancers (Basel). 15 (9), 2446(2023).</li>
<li>Tang, M., Lin, H., Hu, C., Yan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Affinity+purification+of+a+fibrinolytic+enzyme+from+Sipunculus+nudus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Affinity purification of a fibrinolytic enzyme from Sipunculus nudus.</a> Journal of Visualized Experiments. 196, e65631(2023).</li>
<li>Ge, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+antithrombotic+protease+from+marine+worm+Sipunculus+Nudus%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+Of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">A Novel antithrombotic protease from marine worm Sipunculus Nudus.</a> International Journal Of Molecular Sciences. 19 (10), 3023(2018).</li>
<li>Talukder, M. A., Menyuk, C. R., Kostov, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinguishing+between+whole+cells+and+cell+debris+using+surface+plasmon+coupled+emission%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Distinguishing between whole cells and cell debris using surface plasmon coupled emission.</a> Biomedical Optics Express. 9 (4), 1977-1991 (2018).</li>
<li>Shapiro, D. J., Hicks, L. A., Pavia, A. T., Hersh, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic+prescribing+for+adults+in+ambulatory++care+in+the+USA%2C+2007-09%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Antibiotic prescribing for adults in ambulatory care in the USA, 2007-09.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 69 (1), 234-240 (2014).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen belangenconflicten om bekend te maken.

sFE is een fibrinolytisch middel dat het fibrine direct en effectief kan afbreken12,16. Hier werd sFE gebruikt om het verknoopte fibrine van de cerebrale bloedstolsels af te breken, de ingesloten cellen in de stolsels vrij te maken en de celcomponenten van de stolsels kwalitatief en kwantitatief te analyseren. De microscopiegegevens en routinematig bloedonderzoek gaven aan dat de ingesloten cellen uit de bloedstolsels waren vrijgekomen. Bovendien werden de celtyp...

Cerebrovasculaire ziekte is een van de drie belangrijkste ziekten die de menselijke gezondheid kunnen bedreigen, waaronder ischemische cerebrovasculaire ziekte meer dan 80%. Cerebrale trombose en cerebrale veneuze trombose zijn tegenwoordig de meest bezorgde ischemische cerebrovasculaire aandoeningen, voornamelijk veroorzaakt door cerebrale bloedstolsels 1,2. Als de behandeling niet goed wordt uitgevoerd, zal deze hoge invaliditeits- en sterftecijfers hebben en een hoog recidiefpercentage na ontslag3.
Onlangs heeft een groeiend aantal onderzoeken aangetoond dat de celcomponenten van cerebrale bloedstolsels nauw gecorreleerd zijn met de diagnose, behandeling en prognose van cerebrale trombose 4,5,6. Daarom is de beschikbaarheid van gegevens over de samenstelling van de trombus, met name de celcomponenten, belangrijk voor klinische diagnose en behandeling. Helaas kunnen de momenteel beschikbare methoden de bloedstolselcomponent niet kwantitatief en kwalitatief volledig analyseren. Op Martius Scarlett Blue gebaseerde in-situ kleuring kan bijvoorbeeld alleen de rood/witte bloedcellen van bepaalde plakjes van het stolsel7 bestuderen. Op immunohistochemie (IHC) gebaseerde in-situ kleuring kan slechts beperkte bloedcomponenten van bepaalde plakjes van het stolsel bestuderen met behulp van hun antilichamen8. De microscopische beeldgebaseerde methoden houden zich alleen bezig met de specifieke structuur van het stolsel9. Bovendien zijn al die methoden arbeidsintensief en tijdrovend10. Tot op heden zijn de procedures voor het kwantitatief en kwalitatief bestuderen van cerebrale trombicelcomponenten niet gerapporteerd. Het wordt algemeen erkend dat het verknoopte fibrine de bloedcellen stevig omhult in de stolsels11. Bijgevolg is de specifieke afbraak van het verknoopte fibrine en het vrijkomen van de intacte cellen van cruciaal belang voor de nauwkeurige analyse van celcomponenten.
Eerdere werken isoleerden een fibrinolytisch enzym uit Sipunculus nudus (sFE), dat het fibrine specifiek en snel kanafbreken12. Hierin werd een methode voorgesteld voor het analyseren van de celcomponenten van de cerebrale trombi op basis van de unieke activiteit van sFE. Dit protocol maakte gebruik van sFE om eerst het fibrine van stolsels af te breken en analyseerde vervolgens de celcomponenten door middel van Wright's kleuring en routinematig bloedonderzoek13,14. Volgens deze methode kunnen de celcomponenten van cerebrale trombi kwantitatief en kwalitatief worden bestudeerd. Dit eenvoudige en effectieve protocol kan worden toegepast voor de analyse van celcomponenten van andere bloedstolsels.

<table><tbody><tr><td>Agglutination Reaction Plate</td><td>ROTEST</td><td>RTB-4003</td><td></td></tr><tr><td>Auto Hematology Analyzer</td><td>SYSMEX</td><td>XNB2</td><td></td></tr><tr><td>Automatic Vertical Pressure Steam Sterilizer&nbsp;</td><td>SANYO</td><td>MLS-3750</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge Tube (1.5 mL)</td><td>Biosharp</td><td>BS-15-M</td><td></td></tr><tr><td>Clean bench</td><td>AIRTECH</td><td>BLB-1600</td><td></td></tr><tr><td>Constant Temperature Incubator</td><td>JINGHONG</td><td>JHS-400</td><td></td></tr><tr><td>Culture Dish (100 mm)</td><td>NEST</td><td>704001</td><td></td></tr><tr><td>DHG Series Heating and Drying Oven&nbsp;</td><td>SENXIN</td><td>DGG-9140AD</td><td></td></tr><tr><td>Electronic Analytical Balance</td><td>DENVER</td><td>TP-213</td><td></td></tr><tr><td>Filter Membrane (0.22 &micro;m)</td><td>Millex GP</td><td>SLGP033NK</td><td></td></tr><tr><td>Micro Refrigerated Centrifuge&nbsp;</td><td>Cence</td><td>H1650-W</td><td></td></tr><tr><td>Microscope Slides</td><td>CITOGLAS</td><td>01-30253-50</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q Reference</td><td>Millipore</td><td>Z00QSV0CN</td><td></td></tr><tr><td>Normal Saline</td><td>CISEN</td><td>H37022337</td><td></td></tr><tr><td>Optical Microscope</td><td>Nikon</td><td>ECLIPSE E100</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td>PM-996</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate-Buffered Saline</td><td>Beyotime</td><td>C0221A</td><td></td></tr><tr><td>Pipette Tip (1 mL )</td><td>Axygene</td><td>T-1000XT-C</td><td></td></tr><tr><td>Pipette Tip (200 &micro;L)</td><td>Axygene</td><td>T-200XT-C</td><td></td></tr><tr><td>Pipettor (1 mL)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY18723</td><td></td></tr><tr><td>Pipettor (200 &micro;L)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY20280</td><td></td></tr><tr><td>Scalpel</td><td>MARTOR</td><td>23111</td><td></td></tr><tr><td>Small-sized Vortex Oscillator</td><td>Kylin-Bell</td><td>VORTEX KB3</td><td></td></tr><tr><td>Tweezer</td><td>Hystic</td><td>HKQS-180</td><td></td></tr><tr><td>Wright Staining Solution</td><td>Beyotime</td><td>C0135-500ml</td><td></td></tr></tbody></table>

een alomvattende benadering om de celcomponenten van cerebrale bloedstolsels te analyseren

A Comprehensive Approach to Analyze the Cell Components of Cerebral Blood Clots

Cerebrale trombose, een bloedstolsel in een hersenslagader of ader, is het meest voorkomende type herseninfarct. De studie van de celcomponenten van cerebrale bloedstolsels is belangrijk voor diagnose, behandeling en prognose. De huidige benaderingen voor het bestuderen van de celcomponenten van de stolsels zijn echter voornamelijk gebaseerd op in situ kleuring, die ongeschikt is voor de uitgebreide studie van de celcomponenten omdat cellen strak in de stolsels zijn gewikkeld. Eerdere studies hebben met succes een fibrinolytisch enzym (sFE) geïsoleerd uit Sipunculus nudus, dat het verknoopte fibrine direct kan afbreken, waardoor de celcomponenten vrijkomen. Deze studie heeft een uitgebreide methode vastgesteld op basis van de sFE om de celcomponenten van cerebrale trombus te bestuderen. Dit protocol omvat het oplossen van stolsels, het vrijgeven van cellen, celkleuring en routinematig bloedonderzoek. Volgens deze methode konden de celcomponenten kwantitatief en kwalitatief worden bestudeerd. De representatieve resultaten van experimenten met deze methode worden getoond.

In de beginfase van het afbraakproces bleek dat de bloedstolsels een rode compacte structuur hadden en dat de werkoplossing kleurloos was. Na 30 minuten incubatie werd de werkoplossing lichtrood, wat aangaf dat de gekruiste bloedcellen in de werkoplossing waren vrijgegeven. De meeste stolsels werden opgelost bij het verlengen van de incubatietijd tot 5 uur en de werkoplossing werd lichtrood. Integendeel, er was geen significante verandering in de fysiologische zoutoplossinggroep (NC), zelfs niet na 10 uur incubatie (<str...

Deze studie beschrijft een snelle en effectieve methode voor de analyse van celcomponenten van cerebrale bloedstolsels door middel van stolseloplossing, celkleuring en routinematig bloedonderzoek.

Een alomvattende benadering om de celcomponenten van cerebrale bloedstolsels te analyseren

Cerebral thrombosis, a blood clot in a cerebral artery or vein, is the most common type of cerebral infarction. The study of the cell components of ...

Ons onderzoek richt zich vooral op cerebrale trombose. Veel onderzoeken hebben aangetoond dat de celcomponent van cerebrale bloedstolsels correleert met de diagnose, behandeling en prognose van cerebrale trombose. In deze studie hebben we een nieuwe methode ontwikkeld voor de analyse van de celcomponent van cerebrale bloedstolsels.Deze uitdaging bij het analyseren van celcomponenten van cerebrale bloedstolsels is het vrijkomen van de hele schacht uit bloedstolsels. Dit komt omdat de stolsels de bloedcellen in de stolsels lekten. Gerichte benaderingen voor het starten van de celcomponenten van de stolsels kunnen het beste worden gedaan in C2-stand, wat niet geschikt is voor het volledig starten van de celcomponenten.Integendeel, onze methode maakt zowel kwantitatieve als kwalitatieve verlichting van de celcomponenten van de cerebrale helling mogelijk. Onze methode maakt gebruik van fibrinolytisch enzym om de vezels in bloedstolsels te vertragen, waardoor de intacte cellen vrijkomen. De gegevens die worden verkregen uit de analyse van de celcomponenten zullen de studie van de mechanismen van cerebrale trombose op moleculair niveau vergemakkelijken.Ons team zal zich blijven richten op de studie van fibrinolyse en stollingssystemen.

a-comprehensive-approach-to-analyze-cell-components-cerebral-blood

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biochemie

Source: Kim, D., et. al. Combined Near-infrared Fluorescent Imaging and Micro-computed Tomography for Directly Visualizing Cerebral Thromboemboli. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates visualization of cerebral thrombus in mice using micro-computed tomography (micro-CT) imaging. A cerebral thrombus mouse model is injected with fibrin-targeted gold nanoparticles acting as a contrasting agent. The mouse is placed on the bed of a micro-CT machine, and images are acquired from multiple angles.

Visualization of a Cerebral Thrombus in a Mouse Using Micro-Computed Tomography Imaging

Brain myeloïde cellen karakterisatie volgende slag kan worden uitgevoerd door stereology de optische fractioneerinrichting methode of een flowcytometrische analyse van hersenen leukocyten suspensies. Beide zijn nuttige technieken om een ​​nauwkeurige fenotypische onderscheiding van de belangrijkste myeloïde cel subsets in de ischemische hersenen voeren.

Stereological en flowcytometrie Karakterisering van leukocytsubpopulaties in Modellen van voorbijgaande of blijvende cerebrale ischemie

Ontsteking speelt een centrale rol in de pathogenese van ischemische beroerte. Toenemend bewijs suggereert dat het als een tweesnijdend zwaard werkt, wat vroege hersenschade verergert, maar ook bijdraagt aan later herstel. Dit protocol beschrijft de isolatie van immuuncellen uit de ischemische hersenen en hun daaropvolgende flowcytometrische fenotypering.

Isolatie en Flow cytometrische analyse van de immuuncellen van de ischemische hersenen van muizen

Dit protocol beschrijft de toepassing van gecombineerde nabij-infrarood fluorescerende (NIRF) beeldvorming en micro-computertomografie (microCT) voor het visualiseren van cerebrale thromboemboli. Deze techniek maakt de kwantificering van trombus last en evolutie. De NIRF beeldvormende techniek visualiseert fluorescent gelabelde trombus in weggesneden hersenen, terwijl de microCT techniek visualiseert trombus in levende dieren met behulp van goud-nanodeeltjes.

Gecombineerde nabij-infrarood Fluorescent Imaging en Micro-computertomografie voor het direct visualiseren Cerebral Thromboemboli

Het doel van dit artikel is het presenteren van een methode waarmee een 3-dimensionale reconstructie van de cerebrovasculaire boom in muizen nadat micro berekende tomografie en bepaling van de hoeveelheden van hele schip segmenten die kunnen worden gebruikt voor het kwantificeren van cerebrale vasospasm in lymfkliertest modellen van subarachnoïdale bloeding.

Een volumetrische methode voor de kwantificering van cerebrale Vasospasm in een lymfkliertest Model van subarachnoïdale bloeding

We presenteren een in vitro vasculaire ziekte model om hele bloed interacties met patiënt-afgeleide endotheel te onderzoeken. Dit systeem maakt het mogelijk om tromboogene eigenschappen van primaire endotheelcellen onder verschillende omstandigheden te bestuderen. De methode is vooral geschikt om in situ tromboïgeniteit en antistollingstherapie te evalueren tijdens verschillende fasen van stolling.

In Vitro Microfluidic Disease Model to Study Whole Blood-Endothelial Interactions and Blood Clot Dynamics in Real-Time

Dit protocol beschrijft een nieuwe techniek om de drie belangrijkste parameters van ischemisch hersenletsel te meten op dezelfde set knaagdierhersenmonsters. Het gebruik van slechts één hersenmonster is zeer voordelig in termen van ethische en economische kosten.

Het meten van post-beroerte cerebraal oedeem, infarctzone en bloed-hersenbarrière-afbraak in een enkele set knaagdierhersenmonsters

Dit protocol presenteert methoden om de neuro-inflammatoire en hemodynamische respons op mild traumatisch hersenletsel te karakteriseren en om deze gegevens te integreren als onderdeel van een multivariate systeemanalyse met behulp van partiële kleinste kwadratenregressie.

Systeemanalyse van de neuro-inflammatoire en hemodynamische respons op traumatisch hersenletsel

Fibrin is verantwoordelijk voor stolselvorming tijdens hemostase en trombose. Troebelheidstesten en tromboelastograhy (TEG) kunnen worden gebruikt als synergetische instrumenten die complementaire beoordeling van een stolsel bieden. Deze twee technieken samen kunnen meer inzicht geven in hoe stollingscondities de vorming van fibrinstolsel beïnvloeden.

Gebruikmaken van troebelheid en trombo-lastografie voor complementaire clot karakterisering

Traditionele modellen met fototrombotische beroerte (PTS) induceren voornamelijk dichte bloedplaatjesaggregaten met een hoge weerstand tegen weefselplasminogeenactivator (tPA)-lytische behandeling. Hier wordt een gemodificeerd muizen PTS-model geïntroduceerd door trombine en lichtgevoelige kleurstof samen te injecteren voor fotoactivering. Het trombine-versterkte PTS-model produceert gemengde bloedplaatjes:fibrinestolsels en is zeer gevoelig voor tPA-trombolyse.

Een fibrine-verrijkt en tPA-gevoelig fototrombotisch beroertemodel

Dit werk beschrijft een microfluissue-assay die schuifspanning gebruikt om de vorming van tromben in het bloed te triggeren en karakteriseert de trombus aan de hand van meerdere dimensies van uitlezen. De test kan de protrombische neiging van bloedmonsters meten en is daardoor nuttig voor ziektediagnose, geneesmiddelenontdekking, evenals basismechanistische studies gerelateerd aan trombose.

Thrombus Profiling Assay: Een op microfludiica gebaseerd platform voor het volledig karakteriseren van biomechanische trombogenese

Leer een nieuwe methode voor de analyse van celcomponenten in cerebrale bloedstolsels door fibrinolyse en kleuring. Deze techniek maakt kwantitatieve en kwalitatieve analyse van intacte cellen mogelijk voor verbeterde diagnostiek.

Een alomvattende benadering om de celcomponenten van cerebrale bloedstolsels te analyseren

Meer video's verkennen