Onderzoek naar keuzes in de levensgeschiedenis: temperatuur en substraattype gebruiken als op elkaar inwerkende factoren voor voorkeuren van bromvlieglarven en vrouwtjes

Bromvliegen zijn een diverse groep vliegen die obligate of facultatieve parasieten kunnen zijn, evenals sapro-necrofaag. Obligate parasitaire soorten voeden zich uitsluitend met levende weefsels en veroorzaken myiasis bij gewervelde dieren, terwijl sapro-necrofaag soorten zich voeden met rottend organisch materiaal. Facultatieve parasieten kunnen zich voeden met zowel levend als rottend materiaal en al dan niet als parasiet leven.

Hoewel het larvale stadium het meest problematisch is, speelt het vrouwtje een beslissende rol bij het kiezen van de eileg en daarom grotendeels bepalen waar de larven zich zullen voeden en ontwikkelen. Het algemene doel van de hier gepresenteerde methoden is het beoordelen van zowel de voorkeur voor het larvale voedselsubstraat als de keuze van de vrouwelijke ovipositieplaats bij bromvliegen. Voorkeur voor het voeren van larven.

Stap één, bereiding van de petrischaaltjes met agar 2%Bereid petrischaaltjes met 2%agar. Om dat te doen, voeg je zes gram bacteriologische agar toe aan 300 milliliter water en smelt je dit mengsel in een magnetron. Verdeel het volume vervolgens over vier petrischaaltjes.

Bereid het aantal petrischalen met agar volgens het aantal replicaten verlangen. Nadat de agar is gestold, prikt u vier gaatjes in de agar met behulp van de snijpetter in ons papier in een conische buis van 50 milliliter met een diameter van drie centimeter, twee gaatjes aan elke kant van de petrischaal. Stap twee, voorbereiding van substraten.

Om het verse vlees met bloed te bereiden, gebruikt u 12 milliliter verdund runderbloed, dat is half bloed met een antistollingsoplossing en half gefilterd water. Voeg deze oplossing vervolgens toe aan 200 gram vers rundergehakt en roer het goed door. Vergeet niet om voor elk type vlees verschillende maatcilinders en lepels te gebruiken om andere verontreiniging tussen substraten te voorkomen.

Om het rotte substraat te bereiden, voeg je 12 milliliter gefilterd water toe aan 200 gram bedorven vlees en roer je het net zoals het met het verse vlees is gedaan. Voorafgaand aan de start van het experiment laat men het vlees vijf dagen rotten bij 25 graden Celsius in een broedmachine. Na het bereiden van het vleessubstraat, vul je de gaten in de agar aan elke kant met vers en rottend vlees.

Vergeet niet om de positie van het vlees in de petrischaaltjes willekeurig te maken, zoals we hier laten zien. Stap drie, experimentele opstelling. Plaats in een kamer bij 25 graden Celsius het verwarmingskussen recht onder een lichtbron om de voorkeurstest gelijkmatig te verlichten in een brede gedragsbias naar of tegen het licht.

Gebruik vervolgens karton rond het verwarmingskussen als ondersteuning om alles op hetzelfde niveau te houden. Plaats een zwart karton over de hele set, het verwarmingskussen en het steunkarton om hetzelfde kleurenpatroon boven alle substraten te behouden. Plaats zes petrischaaltjes met agar en vleessubstraat over het zwarte karton met twee substraten, één van elk type op het verwarmingskussen en de andere twee buiten het oppervlak van het verwarmingskussen.

Door dit te doen, laten we elk van de petrischalen vier substraten hebben, vers en koud, rot en koud, vers en heet, en ten slotte rot en heet. Laat het substraat ongeveer 10 minuten opwarmen. Stap vier, larvale test.

Controleer de temperatuur van het substraat met een infraroodthermometer. De koudere kant moet rond de 25 graden Celsius zijn en de warmere rond de 33 graden Celsius. Nadat je de gewenste temperatuur hebt bereikt, plaats je met een pincet vijf larven van de derde instar in het midden van elke petrischaal.

Dek vervolgens de petrischaal af met het deksel en laat het keuze-experiment precies 10 minuten draaien. Tijdens het experiment kruipen de larven rond de petrischaal en kiezen ze uit de vier opties. Als er larven ontsnappen, neem deze dan met een pincet en plaats deze terug in het midden van de petrischaal.

Haal na 10 minuten alle experimenten petrischaaltjes uit het verwarmingskussen en plaats ze op een ander oppervlak. Tel vervolgens hoeveel larven er in elk substraat zitten. We hebben waargenomen dat kleurrijke larven in hun gekozen substraat blijven.

Voorkeur voor vrouwelijke ovipositieplaats. Stap één, experimentele opstelling. De taak kan worden uitgevoerd op een gewone plank die voorheen was bedekt met zwart karton.

Deze kartons zijn, net als bij een larvale test, nodig, dus er zijn geen visuele aanwijzingen beschikbaar voor de volwassen vrouwtjes. De plank moet ook gelijkmatig worden bekleed met LED-strips. Plaats in een kamer bij 25 graden Celsius het verwarmingskussen in het midden van de plank.

Gebruik karton rond het verwarmingskussen als ondersteuning om alles op hetzelfde niveau te houden. Plaats een zwart karton over de hele set, een verwarmingskussen en steunkarton om hetzelfde gekleurde patroon boven alle substraten te behouden. Plaats de verwarmingskussens onder twee armen van hetzelfde kruis tussen twee verschillende kruisen.

Hierdoor kan de ruimte in het schap beter worden benut. Schakel de LED-verlichting en het verwarmingskussen in voordat het experiment begint. Vergeet niet om de kruisvormige glazen altijd schoon te maken met 70% ethanol om geurverontreiniging tussen de tests te voorkomen.

Stap twee, voorbereiding van substraten. Bereid de plastic petrischaaltjes met vijf gram vers of bedorven vlees. Het substraat is hetzelfde als de larvale test, vers en vijf dagen oud rot.

Voor elk kruis zijn in totaal vier petrischalen nodig, twee met vers vlees en twee met bedorven vlees. Voeg voor het verse vlees een millimeter verdund runderbloed toe, dat is de helft bloed met antistollingsmiddel en de helft water. Voeg voor het rotte vlees een millimeter gefilterd water toe.

Vergeet niet om beide substraten goed te roeren en verschillende lepels te gebruiken om geurkruisbesmetting tussen bedorven en vers vlees te voorkomen. Controleer of de alcohol volledig is verdampt op de kruisen. Plaats vervolgens vier petrischaaltjes met vlees aan het uiteinde van de armen van het kruis, één van elke vleessoort op het verwarmingskussen en de andere twee buiten het oppervlak van het verwarmingskussen.

Hierdoor kan elk van de kruisen vier substraten hebben, vers en koud, rot en koud, vers en heet, en ten slotte rot en heet. Sluit de opening van de kruisen en laat de substraten ongeveer 10 minuten opwarmen. Stap drie, vrouwelijke test.

Verzamel grijp een vrouwtje in de vliegenkooi. Ze worden gekenmerkt door een vergrote en witgele buik. Scheid een vrouwtje voor elk kruis in afzonderlijke buizen.

Controleer de temperatuur van de ondergronden met een infraroodthermometer. De koudere kant moet rond de 25 graden Celsius zijn en de warmere rond de 33 graden Celsius. Plaats een buis met een vastgepakt vrouwtje precies in de middelste opening van elk kruis.

Nadat het vrouwtje het kruis is binnengegaan, sluit je de opening met het deksel. Nadat je alle vrouwtjes in elk kruis hebt geplaatst, sluit je het open deel van de plank met het zwarte karton om te beschermen tegen externe lichtbronnen. Laat het experiment precies vier uur draaien.

Nadat deze tijd voorbij is, verwijdert u het vrouwtje van de kruisen met behulp van een buis. Controleer vervolgens of er nog andere posities op het substraat zijn. Identificeer het deksel van elke petrischaal met de naam van het substraat.

Gebruik 70% ethanol om de kruisen te verwijderen van eventuele geuren uit de test. Stap vier, eieren tellen. De petrischaaltjes kunnen voorafgaand aan het tellen worden ingevroren.

Ontdooi in dit geval de petrischaaltjes. Tel vervolgens het aantal eieren in elk substraat met behulp van een stereomicroscoop. Data-analyse en statistieken.

Stap één, de berekening van de voorkeursindex. Voor elke replicatie van de gedragstesten wordt een voorkeursindex berekend voor het type substraat en voor de temperatuur. De voorkeursindex voor het substraattype wordt weergegeven door het aantal larven of eitjes op verse vleessubstraten gedeeld door het totale aantal larven of eitjes op alle substraten.

De voorkeursindex voor temperatuur wordt weergegeven door het aantal larven of eitjes op hete substraten gedeeld door het totale aantal larven of eitjes op alle substraten. Rekening houdend met beide indexvoorkeuren, weerspiegelen waarden dicht bij één de voorkeur voor verse of hete substraten. En waarden dicht bij nul betekenen de voorkeur voor rotte of koude substraten.

Stap twee, vergelijking van de waargenomen voorkeur voor willekeurige keuze. We kunnen de voorkeursindex voor temperatuur visualiseren op de Y-as en de voorkeursindex voor het vlees op de X-as. Om te bepalen of de larven en/of vrouwtjes een voorkeur voor een aandoening vertonen, vergeleken we onze resultaten met een willekeurige keuze met behulp van gesimuleerde gegevens.

De resultaten van onze larven zijn aanzienlijk afgeleid van alle gesimuleerde datasets in termen van temperatuur en vleesvoorkeur. Grafisch is het duidelijk dat larven een sterke voorkeur vertoonden voor het rotte en koude substraat. We ontdekten dat de vrouwelijke voorkeur voor een vleessoort significant verschilde van een willekeurige keuze in ongeveer 30% van de vergelijkingen.

Voor de temperatuur resulteerde ongeveer 70% van onze vergelijkingen in een significante voorkeur. Beide protocollen bieden de mogelijkheid om de voorkeur van larven en vrouwtjes te testen op twee factoren die op elkaar inwerken, type vlees en temperatuur. De tests zijn eenvoudig en kunnen worden aangepast om de voorkeur van andere soorten van dezelfde grootte en/of andere omstandigheden te testen.

We weten dat het gedrag van dieren nogal variabel is en wordt beïnvloed door verschillende omgevingsfactoren, dus er moet speciale aandacht worden besteed aan het vermijden van ongelijke verlichting, aanhoudende geuren en andere verontreiniging van het substraat door gedeeld keukengerei. Bedankt voor het kijken.