Name: Identificatie en analyse van myogene voorlopercellen in vivo tijdens acuut skeletspierletsel door hoogdimensionale eencellige massacytometrie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-12-01T14:35:00.000+00:00
Duration: 11 min 2 s
Description: Leer hoe je myogene voorlopercellen identificeert en analyseert tijdens acuut skeletspierletsel met behulp van hoogdimensionale eencellige massacytometrie in muismodellen. Deze methode onthult moleculaire mechanismen van stamceldysfunctie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Single-cell CyTOF-analyse van myogene voorlopercellen bij spierregeneratie

<table><tbody><tr><td>15 mL centrifuge tube</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-200-886</td><td></td></tr><tr><td>20 G needle</td><td>KDM</td><td>KD-fine 900123</td><td></td></tr><tr><td>28 G, 0.5 mL insulin syringe&nbsp;</td><td>BD</td><td>329461</td><td></td></tr><tr><td>29 G, 0.3 mL insulin syringe</td><td>BD</td><td>324702</td><td></td></tr><tr><td>3 mL syringes</td><td>Terumo medical</td><td>MDSS03SE</td><td></td></tr><tr><td>40 &micro;m cell strainers</td><td>Fisher Scientific</td><td>11587522</td><td></td></tr><tr><td>5 mL polypropylene tubes&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>352002</td><td></td></tr><tr><td>5 mL polystyrene test tubes with 35 &micro;m cell strainer</td><td>Falcon</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>5 mL syringes</td><td>Terumo medical</td><td>SS05LE1</td><td></td></tr><tr><td>50 mL centrifuge tube</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-539-13</td><td></td></tr><tr><td>5-Iodo-2-deoxyuridine (IdU)</td><td>Merck</td><td>I7125-5g</td><td></td></tr><tr><td>anti-CD104 FITC (clone: 346-11A)</td><td>Biolegend</td><td>123605</td><td>Stock = 0.5 mg/mL</td></tr><tr><td>anti-CD11b APC-Cy7 (Clone: M1/70)</td><td>Biolegend</td><td>101226</td><td>Stock = 0.2 mg/mL</td></tr><tr><td>anti-CD31 APC-Cy7 (clone: 390)</td><td>Biolegend</td><td>102440</td><td>Stock = 0.2 mg/mL</td></tr><tr><td>anti-CD45 APC-Cy7 (Clone: 30-F11)</td><td>Biolegend</td><td>103116</td><td>Stock = 0.2 mg/mL</td></tr><tr><td>anti-CD9 APC (clone: KMC8)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>17-0091-82</td><td>Stock = 0.2 mg/mL</td></tr><tr><td>anti-Sca1 (Ly6A/E) APC-Cy7 (clone: D7)</td><td>Biolegend</td><td>108126</td><td>Stock = 0.2 mg/mL</td></tr><tr><td>anti-&alpha;7 integrin PE (clone: R2F2))</td><td>UBC AbLab</td><td>67-0010-05</td><td>Stock = 1 mg/mL</td></tr><tr><td>BD FACS Aria III (4 laser) instrument</td><td>BD Biosciences</td><td>N/A</td><td>405, 488, 561, and 633 nm laser</td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A7030-50G</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine 0.3 mg/mL</td><td>Ceva</td><td>Vnr 054594</td><td></td></tr><tr><td>CD104 (Clone: 346-11A)</td><td>BD Biosciences</td><td>553745</td><td>Dy162; In-house conjugated</td></tr><tr><td>CD106/VCAM-1 (Clone: 429 MVCAM.A)</td><td>Biolegend</td><td>105701</td><td>Er170; In-house conjugated</td></tr><tr><td>CD11b (Clone: M1/70)</td><td>BD Biosciences</td><td>553308</td><td>Nd148; In-house conjugated</td></tr><tr><td>CD29/Integrin &beta;1 (Clone: 9EG7)</td><td>BD Biosciences</td><td>553715</td><td>Tm169; In-house conjugated</td></tr><tr><td>CD31 (Clone: MEC 13.3)</td><td>BD Biosciences</td><td>557355</td><td>Sm154; In-house conjugated</td></tr><tr><td>CD34 (Clone: RAM34)</td><td>BD Biosciences</td><td>551387</td><td>Lu175; In-house conjugated</td></tr><tr><td>CD44 (Clone: IM7)</td><td>BD Biosciences</td><td>550538</td><td>Yb171; In-house conjugated</td></tr><tr><td>CD45 (Clone: MEC 30-F11)</td><td>BD Biosciences</td><td>550539</td><td>Sm147; In-house conjugated</td></tr><tr><td>CD9 (Clone: KMC8)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14-0091-85</td><td>Yb174; In-house conjugated</td></tr><tr><td>CD90.2/Thy1.2 (Clone: 30-H12)</td><td>BD Biosciences</td><td>553009</td><td>Nd144; In-house conjugated</td></tr><tr><td>CD98 (Clone: H202-141)</td><td>BD Biosciences</td><td>557479</td><td>Pr141; In-house conjugated</td></tr><tr><td>Cell Acquisition Solution/Maxpar CAS-buffer</td><td>Standard Biotools</td><td>201240</td><td></td></tr><tr><td>Cell-ID Intercalator-Iridium</td><td>Standard Biotools</td><td>201192B</td><td>cationic nucleic acid intercalator</td></tr><tr><td>Cisplatin</td><td>Merck</td><td>P4394</td><td>Pt195</td></tr><tr><td>Cisplatin (cis-Diammineplatinum(II) dichloride)</td><td>Merck</td><td>P4394</td><td></td></tr><tr><td>Clear 1.5 mL tube</td><td>Fisher Scientific</td><td>11926955</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase, Type II</td><td>Worthington Biochemical Corporation</td><td>LS004177</td><td></td></tr><tr><td>Counting chamber</td><td>Merck</td><td>BR718620-1EA</td><td></td></tr><tr><td>CXCR4/SDF1 (Clone: 2B11/CXCR4 )</td><td>BD Biosciences</td><td>551852</td><td>Gd158; In-house conjugated</td></tr><tr><td>DAPI (1 mg/mL)</td><td>BD Biosciences</td><td>564907</td><td></td></tr><tr><td>Dark 1.5 mL tube</td><td>Fisher Scientific</td><td>15386548</td><td></td></tr><tr><td>Dispase II</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>17105041</td><td></td></tr><tr><td>Dissection Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>14568-09</td><td></td></tr><tr><td>DMEM (low glucose, with pyruvate)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11885-092</td><td></td></tr><tr><td>EDTA (Ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt)</td><td>Merck</td><td>E5134</td><td>Na2EDTA-2H20</td></tr><tr><td>EQ Four Element Calibration Beads (EQ beads)</td><td>Standard Biotools</td><td>201078</td><td>Calibration beads</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum, qualified, Brazil origin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10270106</td><td></td></tr><tr><td>Forceps Dumont #5SF</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>Forceps Dumont #7</td><td>Hounisen.com</td><td>1606.3350</td><td></td></tr><tr><td>Goat serum</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>16210-072</td><td></td></tr><tr><td>Helios CyTOF system</td><td>Standard Biotools</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Horse Serum, heat inactivated, New Zealand origin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>26-050-088</td><td></td></tr><tr><td>IdU</td><td>Merck</td><td>I7125</td><td>I127</td></tr><tr><td>Iridium-Intercalator</td><td>Standard Biotools</td><td>201240</td><td>Ir191/193</td></tr><tr><td>Isoflurane/Attane Vet</td><td>ScanVet</td><td>Vnr 055226</td><td></td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>M/3900/17</td><td></td></tr><tr><td>Myf5 (Clone: C-20)</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>Sc-302</td><td>

identificatie en analyse van myogene voorlopercellen in vivo tijdens acuut skeletspierletsel door hoogdimensionale eencellige massacytometrie

Identification and Analysis of Myogenic Progenitors In Vivo During Acute Skeletal Muscle Injury by High-Dimensional Single-Cell Mass Cytometry

Identificatie en analyse van myogene voorlopercellen in vivo tijdens acuut skeletspierletsel door hoogdimensionale eencellige massacytometrie

Skeletal muscle regeneration is a dynamic process driven by adult muscle stem cells and their progeny. Mostly quiescent at a steady state, adult muscle ...

identification-analysis-myogenic-progenitors-vivo-during-acute

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Methode voor de enzymatische dissociatie, oppervlakte-etikettering en de zuivering door flowcytometrie van fibro / adipogenic en myogene voorlopercellen uit muizen skeletspieren.

Zuivering van voorlopercellen uit Skeletal Muscle

De belangrijkste aderente celtypen die zijn afgeleid van menselijk spierweefsel zijn myogene cellen en fibroblasten. Hier worden celpopulaties verrijkt met behulp van magnetisch geactiveerde celsortering op basis van het CD56-antigeen. Daaropvolgende immunolabeling met specifieke antilichamen en het gebruik van beeldanalysetechnieken maakt kwantificering van cytoplasmatische en nucleaire kenmerken in individuele cellen mogelijk.

Isolatie en Kwantitatieve Immunocytochemische karakterisering van primaire Myogene cellen en fibroblasten van Human Skeletal Muscle

Dit manuscript beschrijft een gedetailleerd protocol voor acute skeletspier regeneratie bij volwassen muizen en latere manipulaties van de spieren, zoals dissectie, bevriezen, snijden, routine kleuring en myofiber dwarsdoorsnede analyse induceren.

Inductie van Acute Skeletal Muscle Regeneration door cardiotoxine Injection

Actieve autofagie is geassocieerd met productieve spierregeneratie, die essentieel is voor het activeren van spierstamcellen (MuSC). Hier bieden we een protocol voor de in situ detectie van LC3, een autofagie marker in MyoD-positieve MuSCs van spierweefsel secties van controle en gewonde muizen.

In situ Immunofluorescente Staining of Autophagy in Spier Stamcellen

Hier beschrijven we een methodologie om een ​​pure bevolking van menselijke myoblasten te verkrijgen uit volwassen spierweefsel. Deze cellen worden gebruikt om in vitro skeletspierdifferentiatie te bestuderen en in het bijzonder om eiwitten die betrokken zijn bij Ca 2+ -signalering te bestuderen.

Isolatie van Menselijke Myoblasten, Beoordeling van Myogene Differentiatie, en Opslag Met Calcium Ingangsmeting

Skeletspieren differentiatie is een uiterst dynamisch proces, die met name gebaseerd op nucleaire positionering is. Hier beschrijven we een methode voor het bijhouden van de bewegingen van de kernen door levende cel imaging tijdens myoblast differentiatie en myotube vorming en voor het uitvoeren van een kwantitatieve karakterisering van de dynamiek van de kernen door het extraheren van informatie van automatisch bijhouden.

Exploitatie van de levende Imaging te Track kernen tijdens Myoblast differentiatie en Fusion

We presenteren technieken voor het isoleren, kweken, karakteriseren en differentiëren van menselijke primaire spier voorlopercellen (Hmpc's) verkregen uit skeletspieren biopsie weefsel.  hmpc's verkregen en gekenmerkt door middel van deze methoden kunnen worden gebruikt om vervolgens onderzoek vragen met betrekking tot menselijke myogenese en skeletspier regeneratie aan te pakken.

Isolatie, cultuur, karakterisering, en differentiatie van menselijke spier voorlopercellen van de skeletspier biopsie procedure

We beschrijven een in vivo methode om het functionele verlies van een specifiek gen in satelliet cellen te onderzoeken met behulp van een combinatie van cardiotoxine gemedieerde verwonding van de skeletspieren en de injectie van een zelfvoorzienend siRNA.

Analyse van de Satellietcel functie tijdens de skeletspieren regeneratie door Cardiotoxine letsel en injectie van Self-leveren siRNA in vivo

Dit protocol schetst een methode om Fibro-adipogene voorlopercellen (FAPs) en myogene voorlopers (MP's) te isoleren uit de skeletspieren van ratten. Het gebruik van de rat in spierletselmodellen zorgt voor een verhoogde beschikbaarheid van weefsel van atrofische spieren voor de analyse en een groter repertoire van gevalideerde methoden om spierkracht en gang bij vrij bewegende dieren te beoordelen.

Identificatie, isolatie en karakterisering van fibro-adipogene voorlopercellen (FAPs) en myogene voorlopercellen (MP's) in skeletspieren bij de rat

In dit protocol wordt een in vitro kweek- en functionele analysemethode voor spierstamcellen beschreven, die de meeste van hun interacties met hun endogene niche behoudt.

Single Myofiber Culture Assay voor de beoordeling van volwassen spierstamcelfunctionaliteit Ex Vivo

De precieze identificatie van fibro-adipogene voorlopercellen (FAPs) en spierstamcellen (MuSC's) is van cruciaal belang voor het bestuderen van hun biologische functie in fysiologische en pathologische omstandigheden. Dit protocol biedt richtlijnen voor de isolatie, zuivering en cultuur van FAPs en MuSC's van volwassen muisspieren.

FACS-isolatie en kweek van fibro-adipogene voorlopers en spierstamcellen van onverstoorbare en gewonde muizenskeletspieren

Leer hoe je myogene voorlopercellen identificeert en analyseert tijdens acuut skeletspierletsel met behulp van hoogdimensionale eencellige massacytometrie in muismodellen. Deze methode onthult moleculaire mechanismen van stamceldysfunctie.

Identificatie en analyse van myogene voorlopercellen in vivo tijdens acuut skeletspierletsel door hoogdimensionale eencellige massacytometrie (Video) | JoVE Journal

Identificatie en analyse van myogene voorlopercellen in vivo tijdens acuut skeletspierletsel door hoogdimensionale eencellige massacytometrie

Meer video's verkennen