Name: Isolatie in één stap van extracellulaire blaasjes uit monsters met een groot volume met een gespleten A4F-microfluïdisch apparaat (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-02-02T14:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 28 s
Description: Leer hoe je extracellulaire blaasjes isoleert uit grote volumes biofluïden met een gespleten A4F-microfluïdisch apparaat. Deze methode maakt continue stroom en automatisering mogelijk voor bioreactorintegratie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We danken alle donoren die hebben deelgenomen aan deze studie, het personeel van de Letse genoomdatabase voor het beschikbaar stellen van de monsters. Het Instituut voor Vastestoffysica, Universiteit van Letland heeft als Center of Excellence financiering ontvangen van het Horizon 2020-kaderprogramma H2020-WIDESPREAD-01-2016-2017-TeamongPhase2 van de Europese Unie in het kader van subsidieovereenkomst nr. 739508, project CAMART2. Dit werk werd ondersteund door de Letse Raad voor Wetenschap Project nr. lzp-2019/1-0142 en projectnummer: lzp-2022/1-0373.

Microfluïdisch apparaat voor continue extracellulaire blaasjesisolatie van menselijke urine

<ol><li>Colombo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biogenesis%2C+secretion%2C+and+intercellular+interactions+of+exosomes+and+other+extracellular+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Biogenesis, secretion, and intercellular interactions of exosomes and other extracellular vesicles.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 30, 255-289 (2014).</li>
<li>Tricarico, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+and+biogenesis+of+shed+microvesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Small+GTPases%22%5BJournal%5D)">Biology and biogenesis of shed microvesicles.</a> Small GTPases. 8 (4), 220-232 (2017).</li>
<li>Yáñez-Mó, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+properties+of+extracellular+vesicles+and+their+physiological+functions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Extracell+Vesicles%22%5BJournal%5D)">Biological properties of extracellular vesicles and their physiological functions.</a> J Extracell Vesicles. 4 (1), 27066(2015).</li>
<li>Théry, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+information+for+studies+of+extracellular+vesicles+2018+%28MISEV2018%29%3A+a+position+statement+of+the+International+Society+for+Extracellular+Vesicles+and+update+of+the+MISEV2014+guidelines%5BTitle%5D)+AND+%22J+Extracell+Vesicles%22%5BJournal%5D)">Minimal information for studies of extracellular vesicles 2018 (MISEV2018): a position statement of the International Society for Extracellular Vesicles and update of the MISEV2014 guidelines.</a> J Extracell Vesicles. 7 (1), 1535750(2018).</li>
<li>Wang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicles+as+an+emerging+drug+delivery+system+for+cancer+treatment%3A+Current+strategies+and+recent+advances%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicles as an emerging drug delivery system for cancer treatment: Current strategies and recent advances.</a> Biomed Pharmacother. 153, 113480(2022).</li>
<li>Royo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+separation+and+characterization+of+extracellular+vesicles%3A+Results+of+a+Worldwide+Survey+Performed+by+the+ISEV+Rigor+and+Standardization+Subcommittee%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Methods for separation and characterization of extracellular vesicles: Results of a Worldwide Survey Performed by the ISEV Rigor and Standardization Subcommittee.</a> Cells. 9 (9), 1955(2020).</li>
<li>Sidhom, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+exosomal+isolation+methods%3A+Is+size+exclusion+chromatography+the+best+option%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">A review of exosomal isolation methods: Is size exclusion chromatography the best option.</a> Int J Mol Sci. 21 (18), 6466(2020).</li>
<li>Reshi, Q. U. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+extracellular+vesicles+%28EVs%29+using+benchtop+size+exclusion+chromatography+%28SEC%29+columns%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation of extracellular vesicles (EVs) using benchtop size exclusion chromatography (SEC) columns.</a> Methods Mol Biol. 2273, 201-206 (2021).</li>
<li>Liangsupree, T., Multia, E., Riekkola, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modern+isolation+and+separation+techniques+for+extracellular+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22J+Chromatogr+A%22%5BJournal%5D)">Modern isolation and separation techniques for extracellular vesicles.</a> J Chromatogr A. 1636, 461773(2021).</li>
<li>Priedols, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bifurcated+asymmetric+field+flow+fractionation+of+nanoparticles+in+PDMS-free+microfluidic+devices+for+applications+in+label-free+extracellular+vesicle+separation%5BTitle%5D)+AND+%22Polymers%22%5BJournal%5D)">Bifurcated asymmetric field flow fractionation of nanoparticles in PDMS-free microfluidic devices for applications in label-free extracellular vesicle separation.</a> Polymers. 15 (4), 789(2023).</li>
<li>Zhang, H., Lyden, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asymmetric-flow+field-flow+fractionation+technology+for+exomere+and+small+extracellular+vesicle+separation+and+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Asymmetric-flow field-flow fractionation technology for exomere and small extracellular vesicle separation and characterization.</a> Nat Protoc. 14 (4), 1027-1053 (2019).</li>
<li>Talebjedi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploiting+microfluidics+for+extracellular+vesicle+isolation+and+characterization%3A+Potential+use+for+standardized+embryo+quality+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Vet+Sci%22%5BJournal%5D)">Exploiting microfluidics for extracellular vesicle isolation and characterization: Potential use for standardized embryo quality assessment.</a> Front Vet Sci. 7, 620809(2020).</li>
<li>van Meer, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+molecule+absorption+by+PDMS+in+the+context+of+drug+response+bioassays%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Small molecule absorption by PDMS in the context of drug response bioassays.</a> Biochem Biophys Res Commun. 482 (2), 323-328 (2017).</li>
<li>Jia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+extracellular+vesicles+isolation+and+separation%3A+Current+techniques%2C+pending+questions+and+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Small extracellular vesicles isolation and separation: Current techniques, pending questions and clinical applications.</a> Theranostics. 12 (15), 6548-6575 (2022).</li>
<li>Bussooa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+monitoring+of+oxygen+levels+within+thermoplastic+Organ-on-Chip+devices%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+and+Bioelectronics%3A+X%22%5BJournal%5D)">Real-time monitoring of oxygen levels within thermoplastic Organ-on-Chip devices.</a> Biosensors and Bioelectronics: X. 11, 100198(2022).</li>
<li>Tang, L., Lee, N. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+facile+route+for+irreversible+bonding+of+plastic-PDMS+hybrid+microdevices+at+room+temperature%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">A facile route for irreversible bonding of plastic-PDMS hybrid microdevices at room temperature.</a> Lab Chip. 10 (10), 1274-1280 (2010).</li>
<li>Borda, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conformable+neural+interface+based+on+off-stoichiometry+thiol-ene-epoxy+thermosets%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Conformable neural interface based on off-stoichiometry thiol-ene-epoxy thermosets.</a> Biomaterials. 293, 121979(2023).</li>
<li>Sandström, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reaction+injection+molding+and+direct+covalent+bonding+of+OSTE%2B+polymer+microfluidic+devices%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Micromechanics+and+Microengineering%22%5BJournal%5D)">Reaction injection molding and direct covalent bonding of OSTE+ polymer microfluidic devices.</a> Journal of Micromechanics and Microengineering. 25 (7), 075002(2015).</li>
<li>Sticker, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thiol-ene+based+polymers+as+versatile+materials+for+microfluidic+devices+for+life+sciences+applications%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Appl+Mater+Interfaces%22%5BJournal%5D)">Thiol-ene based polymers as versatile materials for microfluidic devices for life sciences applications.</a> ACS Appl Mater Interfaces. 12 (9), 10080-10095 (2020).</li>
<li>Bajo-Santos, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicles+isolation+from+large+volume+samples+using+a+polydimethylsiloxane-free+microfluidic+device%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicles isolation from large volume samples using a polydimethylsiloxane-free microfluidic device.</a> Int J Mol Sci. 24 (9), 7971(2023).</li>
<li>Claridge, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+extracellular+vesicle+therapeutics%3A+Challenges%2C+considerations%2C+and+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Development of extracellular vesicle therapeutics: Challenges, considerations, and opportunities.</a> Front Cell Dev Biol. 9, 734720(2021).</li>
<li>Rezaie, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+on+exosomes+application+in+clinical+trials%3A+Perspective%2C+questions%2C+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Commun+Signal%22%5BJournal%5D)">Review on exosomes application in clinical trials: Perspective, questions, and challenges.</a> Cell Commun Signal. 20 (1), 145(2022).</li>
<li>Aragón, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+urinary+tract+microbiome+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Urol+Focus%22%5BJournal%5D)">The urinary tract microbiome in health and disease.</a> Eur Urol Focus. 4 (1), 128-138 (2018).</li>
</ol>

A.A., G.M. en R.R. zijn oprichters, bestuursleden en aandeelhouders in Cellbox Labs, LLC

Het gepresenteerde microfluïdische apparaat biedt een veelbelovende methode voor de isolatie en extractie van EV's uit biologische vloeistoffen, waarbij enkele van de kritieke beperkingen van bestaande gouden standaardmethoden zoals UC en SEC12 worden aangepakt. UC en SEC staan bekend als arbeidsintensief, tijdrovend en hebben een laag rendement, waardoor ze minder geschikt zijn voor toepassingen met een hoge doorvoer waar grote hoeveelheden EV's nodig zijn21,22. Het beschreven microfluïdische apparaat kan daarentegen continu een aanzienlijk volume van maximaal 20 ml biologische vloeistof verwerken met minimale input van de gebruiker, waardoor het een potentiële game-changer is voor industriële of klinische omgevingen. Een van de belangrijkste voordelen van dit microfluïdische apparaat is de mogelijkheid om EV-isolatie te standaardiseren en de reproduceerbaarheid te verbeteren in vergelijking met traditionele methoden die handmatige stappen vereisen. Door de variabiliteit van de productie van EV-isolatieapparatuur door massaproductie te verminderen, kunnen de prestaties van het apparaat beter worden gecontroleerd en consistent, wat van vitaal belang is voor toepassingen zoals EV-gebaseerde therapieën en diagnostiek. Bovendien vergroot de compatibiliteit van het apparaat met productie van grote volumes via reactie-spuitgieten van geschikte substraten het potentieel voor schaalbaarheid en bredere acceptatie verder.
Om reproduceerbaarheid en consistente prestaties te garanderen, is een uitgebreid en goed gedefinieerd protocol nodig, zowel voor de productie van de chip als voor het gebruik ervan in experimenten. De chip is ontworpen met het oog op industrialisatie. Tijdens de fabricage van het apparaat in de laboratoriumomgeving moet echter aandacht worden besteed aan het vermijden van de vorming van luchtbellen, het zorgen voor een nauwkeurige en robuuste hechting en het uitvoeren van grondige tests met hogere stroomsnelheden dan verwacht in echte experimenten. Deze voorzorgsmaatregel is vooral belangrijk voor COC-OSTE-apparaten, omdat ze gevoelig kunnen zijn voor lekken als gevolg van een mislukte verlijming, vooral bij hogere stroomsnelheden. Bovendien, aangezien OSTE een lichtgevoelig materiaal is, moet de fabricage van het apparaat worden uitgevoerd in geel licht om onnodige blootstelling aan UV te voorkomen. Aangezien deze technologie zich nog in de beginfase bevindt, moeten onderzoekers experimenteren met verschillende stroomsnelheden om de optimale instelling voor hun specifieke toepassing te bepalen, aangezien gestandaardiseerde protocollen voor deze nieuwe methode nog moeten worden vastgesteld en de viscositeit van vloeistoffen de werkzaamheid van EV-isolatie duidelijk kan beïnvloeden op basis van onze resultaten. Door deze richtlijnen te volgen en de uitdagingen van standaardisatie aan te pakken, kan het potentieel van dit microfluïdische apparaat voor EV-isolatie volledig worden gerealiseerd in verschillende onderzoeksgebieden en toepassingen.
De methode van EV-isolatie met behulp van het microfluïdische apparaat maakt uitgebreide aanpassingen en probleemoplossing mogelijk om de prestaties te optimaliseren. Om de deeltjesscheiding te verbeteren, kunnen onderzoekers langere kanalen, verschillende membraanporositeiten en poriedichtheden en gewijzigde afmetingen onderzoeken. Als er veel grote deeltjes in de uitlaat van kleine deeltjes zitten, kan het nuttig zijn om een hogere inlaatsnelheid van de buffer te testen, terwijl als er veel kleine deeltjes in de grote deeltjesuitlaat zitten, wordt geëxperimenteerd met een langer kanaal of een membraan met grotere poriën. Het aanpakken van deeltjesabsorptie kan bestaan uit het aanpassen van stroomsnelheden, oppervlaktemodificaties en OTTE-samenstelling of het wijzigen van de UV-blootstellingstijd. Voor apparaten die instabiliteit en lekkage ervaren, zijn het verlagen van de stroomsnelheden en het zorgen voor een goede lijming cruciale stappen. Om EV-schade tot een minimum te beperken, kunnen onderzoekers de stroomsnelheden verlagen, grondiger wassen met PBS na sterilisatie van het apparaat en overwegen om kleinere membraanporiën of alternatieve matrijsontwerptechnieken en -materialen te gebruiken. Door deze aanpassingen kan het microfluïdische apparaat worden verfijnd, waardoor het potentieel voor diverse toepassingen in EV-onderzoek en aanverwante gebieden wordt ontketend. Om de prestaties van het apparaat te optimaliseren, kan bovendien stroomopwaartse monsterkarakterisering, inclusief dichtheids- en viscositeitsmetingen, worden ingebouwd om de stroomparameters aan te passen. Bovendien moet bijzondere nadruk worden gelegd op de aard van het monster, gezien de vastgestelde niet-steriliteit van biovloeistoffen23. Bijgevolg moet de sterilisatie van monsters vóór hun toediening in klinische toepassingen terdege worden overwogen.
Ondanks deze uitdagingen heeft het microfluïdische apparaat een enorm potentieel in verschillende onderzoeksgebieden. Het vermogen om EV's continu te isoleren uit grote hoeveelheden zeer heterogene monsters opent de deur voor automatisering, waardoor toepassingen met een hoge doorvoer mogelijk worden en een meer diepgaande analyse van EV's uit verschillende bronnen mogelijk wordt. De integratie van deze microfluïdische module in verschillende apparaten, zoals bioreactorcartridges met holle vezelcellen of flowcytometers met hoge resolutie, zou EV-toepassingen industrievriendelijker kunnen maken en innovatie kunnen stimuleren op gebieden als medicijnafgifte, diagnostiek en cosmetica4. Al met al vertegenwoordigt dit microfluïdische apparaat een belangrijke stap voorwaarts op het gebied van EV-onderzoek en biedt het een efficiënte en gestandaardiseerde methode voor EV-isolatie met veelbelovende toepassingen in een breed scala aan onderzoeks- en industriële omgevingen.

Extracellulaire blaasjes (EV's) zijn van cellen afgeleide membraangebonden deeltjes die bestaan uit twee hoofdtypen: exosomen (30-200 nm) en microvesikels (200-1000 nm)1. Exosomen vormen zich door naar binnen knopen van het endosomale membraan in een multivesiculair lichaam (MVB), waarbij intraluminale blaasjes (ILV's) vrijkomen in de extracellulaire ruimte bij fusie met het plasmamembraan1. Microvesikels daarentegen worden gegenereerd door uitwendige knopvorming en splijting van het celmembraan2. EV's spelen een cruciale rol in intercellulaire communicatie door eiwitten, nucleïnezuren, lipiden en metabolieten te transporteren, die de fysiologische toestand van de cel weerspiegelen, waaronder groei, angiogenese, metastase, proliferatie en therapieresistentie3. Als gevolg hiervan zijn ze naar voren gekomen als veelbelovende biomarkers en therapeutische doelen voor ziekten, waaronder kanker, wat hun potentieel in diagnostiek en medicijnafgiftesystemen benadrukt4.
Om EV's volledig te benutten in ziektediagnostiek en therapieën, is efficiënte isolatie van verschillende biovloeistoffen cruciaal5. Veelgebruikte methoden zijn ultracentrifugatie (UC), dichtheidsgradiëntcentrifugatie, grootte-uitsluitingschromatografie (SEC), filtratie en immuno-isolatie6. UC is een veelgebruikte techniek, maar kan deeltjes met een vergelijkbare dichtheid opleveren die geen EV's zijn en EV-aggregaten kunnen genereren7. SEC heeft aan populariteit gewonnen vanwege het vermogen om monsters met een hogere zuiverheid te leveren door deeltjes uit te sluiten op basis van grootte in plaats van dichtheid8. Een zorgvuldige selectie van de juiste poriegrootte voor de SEC-kolom en optimalisatie van chromatografiecondities zijn echter essentieel om co-isolatie van ongewenste deeltjes zoals chylomicronen en lipoproteïnen met lage dichtheid tot een minimum tebeperken8. Ondanks hun effectiviteit zijn beide methoden tijdrovend en moeilijk te automatiseren, vooral voor monsters met een groter volume zoals celmedia of urine, waardoor hun schaalbaarheid voor industriële toepassingen wordt beperkt9.
In de afgelopen jaren is asymmetrische veldstroomveldfractionering (A4F) geëvolueerd als een krachtige scheidingstechniek voor deeltjesscheiding op basis van grootte en drijfvermogen op micro- en nanometerformaat10. Het werkingsprincipe van A4F berust op een microfluïdisch kanaal dat is voorzien van een poreus membraan aan de basis, waardoor een kracht wordt gegenereerd die op het membraan wordt uitgeoefend en die cross-flow10 wordt genoemd. In combinatie met de Brownse beweging en de Poiseuille-stroming die inherent zijn aan het systeem, vergemakkelijkt de kruisstroming een efficiënte deeltjesscheiding als gevolg van de variërende deeltjespositie binnen de stromingsdynamiek11. Ondanks de voordelen is deze methode beperkt tot monstervolumes binnen het microliterbereik12 en vereist een extra focusstap, waardoor de duur van het proces wordt verlengd10.
In het afgelopen decennium heeft microfluïdica aan bekendheid gewonnen als een hulpmiddel voor snelle, efficiënte en klinisch betrouwbare EV-scheiding13. De meeste microfluïdische methoden die zijn ontworpen voor EV-scheiding zijn echter geoptimaliseerd voor EV-monsters met een klein volume en een hoge concentratie of zijn afhankelijk van complexe scheidingsprocedures14. Bovendien wordt polydimethylsiloxaan (PDMS) op het gebied van microfluïdica erkend als het gouden standaardmateriaal vanwege zijn optische transparantie, biocompatibiliteit en gebruiksgemak15. Niettemin kan de bekende neiging om kleine lipofiele moleculen, waaronder EV's, te absorberen, problematisch zijn voor de toepassing ervan in het EV-veld13.
Cyclisch olefine-copolymeer (COC) is een veelgebruikt materiaal in microfluïdica vanwege biocompatibiliteit, kleine absorptie van moleculen en hoge chemische resistentie15. Bij de fabricage van COC-apparaten zijn echter vaak complexe processen of gespecialiseerde apparatuur nodig16. Als alternatief is off-stoichiometrie thiol-een (OSTE) een veelbelovend alternatief voor PDMS vanwege de verminderde absorptie van kleine moleculen, superieure chemische stabiliteit, fabricagegemak en schaalbaar fabricageproces17,18. Vanwege complexe verbindingen met slangen kunnen apparaten echter gevoelig zijn voor lekken19.
Het doel van deze studie was het ontwikkelen en fabriceren van een microfluïdisch apparaat dat OSTE en COC combineert met het gespleten A4F-principe voor EV-scheiding van monsters met een groot volume, zoals urine of celmedia.

<table><tbody><tr><td>0.1 &micro;m carboxylate FluoSpheres</td><td>Invitrogen</td><td>#F8803</td><td>Stock concentratie: 3,6 x 1013 kralen/mL (afhankelijk van partij)</td></tr><tr><td>0.5 mL microcentrifuge tubes</td><td>Starstedt</td><td>72.704</td><td></td></tr><tr><td>1 mL Luer cone syringe enkel gebruik zonder naald</td><td>RAYS</td><td>TUB1ML</td><td></td></tr><tr><td>1.0 &micro;m polystyreen FluoSpheres</td><td>Invitrogen</td><td>#F13083</td><td>Stock concentratie: 1 x 1010 kralen/mL (afhankelijk van partij)</td></tr><tr><td>10 mL Serologische pipetten</td><td>Sarstedt</td><td>86.1254.001</td><td></td></tr><tr><td>15 mL (100k) Amicon Ultra centrifugale filters</td><td>Merck Millipore</td><td>UFC910024</td><td></td></tr><tr><td>2.0 mL Protein LoBind buisjes</td><td>Eppendorf</td><td>30108132</td><td></td></tr><tr><td>20 mL spuiten</td><td>BD PlastikPak</td><td>10569215</td><td></td></tr><tr><td>250 &micro;m ID polyether ether ketone buisjes</td><td>Darwin Microfluidics</td><td>CIL-1581</td><td></td></tr><tr><td>3 kDa MWCO centrifugale filter units</td><td>Merck Millipore,</td><td>UFC200324</td><td></td></tr><tr><td>5 mL medische spuit zonder naald</td><td>Anhui Hongyu Wuzhou Medical</td><td>159646</td><td></td></tr><tr><td>50 mL conische buizen</td><td>Sarstedt</td><td>62.547.254</td><td></td></tr><tr><td>70 Ti hoekvaste ultracentrifuge rotor</td><td>Beckman Coulter</td><td>337922</td><td></td></tr><tr><td>800 &micro;m ID polytetrafluorethyleen buisjes</td><td>Darwin Microfluidics</td><td>LVF-KTU-15</td><td></td></tr><tr><td>96 well microplaat, f-bodem, med. binding</td><td>Greiner Bio-One</td><td>655001</td><td>ELISA plaat</td></tr><tr><td>B-27 Supplement (50x), serumvrij</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>Bovine serum albumine</td><td>SigmaAldrich</td><td>A7906-100G</td><td></td></tr><tr><td>COC Topas microscoop slide platform</td><td>Microfluidic Chipshop</td><td>10000002</td><td></td></tr><tr><td>COC Topas microscoop slide platform 2 x 16 Mini Luer&nbsp;</td><td>Microfluidic Chipshop</td><td>10000387</td><td></td></tr><tr><td>Elveflow OB1 drukregelaar</td><td>Elvesys Group</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Luer connectoren</td><td>Darwin Microfluidics</td><td>&nbsp;CS-10000095</td><td></td></tr><tr><td>Mask aligner Suss MA/BA6</td><td>SUSS MicroTec Group</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mixer Thinky ARE-250</td><td>Thinky Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NanoSight NS300</td><td>Malvern Panalytical</td><td>NS300</td><td>nanodeeltje analyzer&nbsp;</td></tr><tr><td>Optical microscope Nikon Eclipse LV150N</td><td>Nikon Metrology NV</td><td></td><td></td></tr><tr><td>OSTE 322 Crystal Clear</td><td>Mercene Labs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS TABLETS.Ca/Mg vrij. Fisher Bioreagents. 100 g</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2944-100</td><td></td></tr><tr><td>PC membraan (50 nm poriëndiameter, 11,8% dichtheid)</td><td>it4ip S.A., Louvain-La Neuve, België</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Petri schotels, sterieel</td><td>Sarstedt</td><td>82.1472.001</td><td></td></tr><tr><td>Plasma Asher GIGAbatch 360 M</td><td>PVA TePla America, LLC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>qEVoriginal/35 nm kolom</td><td>Izon</td><td>SP5</td><td>SEC kolom</td></tr><tr><td>QSIL 216 Silicone Elastomer Kit</td><td>PP&amp;S</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Resin Tough Black</td><td>Zortrax</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SW40 Ti swing ultracentrifuge rotor</td><td>Beckman Coulter</td><td>331301</td><td></td></tr><tr><td>Spuitpomp</td><td>DK Infusetek</td><td>ISPLab002</td><td></td></tr><tr><td>T175 suspensie fles</td><td>Sarstedt</td><td>83.3912.502</td><td></td></tr><tr><td>TIM4-Fc eiwit</td><td>Adipogen LifeSciences</td><td>AG-40B-0180B-3010</td><td></td></tr><tr><td>TMB (3,3',5,5'-tetramethylbenzidine)</td><td>SigmaAldrich</td><td>T0440-100ML</td><td>Horseradish peroxidase substraat</td></tr><tr><td>Tween20</td><td>SigmaAldrich</td><td>P1379-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Ultracentrifuge Optima L100XP</td><td>Beckman Coulter</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ultrasoon reinigingsapparaat P 60 H</td><td>Elma Schmidbauer GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Universele Microplate Spectrofotometer</td><td>Bio-Tek instruments</td><td>71777-1</td><td></td></tr><tr><td>Urinecollectabek, 150mL, sterieel</td><td>APTACA</td><td>2120_SG</td><td></td></tr><tr><td>Whatman Anotop 25 Spuitfilter</td><td>SigmaAldrich</td><td>68092002</td><td></td></tr><tr><td>ZetaSizer Nano ZS</td><td>Malvern Panalytical</td><td></td><td>dynamic light scattering (DLS) systeem&nbsp;</td></tr><tr><td>Zortrax Inkspire</td><td>Zortrax</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

isolatie in één stap van extracellulaire blaasjes uit monsters met een groot volume met een gespleten a4f-microfluïdisch apparaat

Single Step Isolation of Extracellular Vesicles from Large-Volume Samples with a Bifurcated A4F Microfluidic Device

Extracellulaire blaasjes (EV's) hebben een enorm potentieel voor verschillende biomedische toepassingen, waaronder diagnostiek, medicijnafgifte en regeneratieve geneeskunde. Desalniettemin brengen de huidige methodologieën voor het isoleren van EV's aanzienlijke uitdagingen met zich mee, zoals complexiteit, tijdsbesteding en de behoefte aan omvangrijke apparatuur, wat hun klinische vertaling belemmert. Om deze beperkingen aan te pakken, wilden we een innovatief microfluïdisch systeem ontwikkelen op basis van cyclisch olefine-copolymeer-off-stoichiometrie-thiol-een (COC-OSTE) voor de efficiënte isolatie van EV's uit monsters met een groot volume op een continue manier. Door gebruik te maken van scheiding op basis van grootte en drijfvermogen, bereikte de technologie die in deze studie werd gebruikt een aanzienlijk smallere grootteverdeling in vergelijking met bestaande benaderingen van urine- en celmediamonsters, waardoor het mogelijk werd om in toekomstige toepassingen specifieke EV-groottefracties te richten. Ons innovatieve COC-OSTE microfluïdische apparaatontwerp, dat gebruik maakt van gespleten asymmetrische flow field-flow fractioneringstechnologie, biedt een eenvoudige en continue EV-isolatiebenadering voor monsters met een groot volume. Bovendien biedt het potentieel voor massaproductie van dit microfluïdische apparaat schaalbaarheid en consistentie, waardoor het haalbaar wordt om EV-isolatie te integreren in routinematige klinische diagnostiek en industriële processen, waar hoge consistentie en doorvoer essentiële vereisten zijn.

We hebben een microfluïdisch apparaat gefabriceerd met behulp van een 3D-geprinte dubbele negatieve mal (Figuur 1) via zachte lithografie (Figuur 2A) voor EV-scheiding met hoge doorvoer op basis van het gespleten A4F-principe (Figuur 2B,C). De opstelling vereist een pomp en een doorstroomstation, zoals te zien is in figuur 3, voor het op geautomatiseerde wijze isoleren van EV's. Ten eerste, om de proof of concept van de apparaten te evalueren, werd een mengsel van polystyreenkorrels met diameters van 100 nm en 1000 nm bereid om blaasjes en fijn celafval voor te stellen, respectievelijk10. Er werden experimenten uitgevoerd met verschillende stroomsnelheden voor het korrelmengsel, zowel met als zonder splitsingsstroom, om het effect van lineaire snelheid op de scheidingsefficiëntie te onderzoeken. In alle experimenten bleef de terugwinning van kleine korrels consistent en boven de 90%10, wat het potentieel van het apparaat om EV's te herstellen aantoont.
Vervolgens hebben we het potentieel van het COC-OSTE-apparaat beoordeeld en vergeleken bij het isoleren van EV's uit grote volumes (>1 ml) uit complexe biovloeistoffen met minimale voorbewerking. Als zodanig werden urine van 10 gezonde donoren (Figuur 4) en celmedia van twee verschillende prostaatcellijnen (Figuur 5) gebruikt als sjabloon om EV's tegelijkertijd te isoleren volgens drie verschillende procedures: ultracentrifugatie (UC), grootte-uitsluitingschromatografie (SEC) en het op A4F microfluïdica gebaseerde OSTE-COC-apparaat. Na isolatie werden het totale aantal deeltjes en hun grootteverdeling beoordeeld met behulp van nanoparticle tracking analysis (NTA). Gemiddeld vertoonde het OSTE-COC-apparaat een betere totale deeltjesterugwinning uit biovloeistoffen in vergelijking met UC, maar de statistische significantie werd alleen bereikt door de deeltjesaantallen van beide poorten te combineren (Figuur 4A). Om de prestaties van het apparaat te vergelijken met andere systemen, moet rekening worden gehouden met de R&L-uitgang samen. Zoals te zien is in figuur 4, presteren de prestaties van L- en R-uitlaat bij het herstellen van EV's samen beter dan die van UC en SEC. Los daarvan is de L-poort ontworpen om de kleine EV-fractie op te vangen, terwijl de R-poort is ontworpen om de grotere EV-fractie op te vangen met andere moleculen van vergelijkbare grootte. Interessant is dat het herstel met behulp van de R-POORT van het OSTE-COC-apparaat iets hoger was dan SEC en UC alleen (Figuur 4A). De expressie van CD63 vertoonde een vergelijkbaar patroon (Figuur 4C). Deze bevinding geeft aan dat het OSTE-COC-apparaat effectiever was in het totale EV-herstel. Er werd een equivalente grootteverdeling gevonden tussen de verschillende methodologieën, behalve voor UC, die een grotere deeltjesgrootteverdeling laat zien (Figuur 4B).
Vergelijkbare resultaten werden waargenomen in celmediaculturen. In beide scenario's vertoonde de totale deeltjesterugwinning van beide apparaatpoorten superieure prestaties in vergelijking met SEC- of UC-methodologieën (zoals weergegeven in figuur 5A,B). Met name EV's afgeleid van PC3-cellen vertoonden een duidelijke grootteverdeling, met een grotere homogeniteit in de L-PORT-verdeling in tegenstelling tot andere experimentele groepen (Figuur 5C,D). Bovendien bevestigde de analyse van CD63-expressie de hogere EV-herstelpercentages die werden bereikt met behulp van het COC-OSTE-apparaat (zoals geïllustreerd in figuur 5E,F). Een samenvatting van de isolatiekenmerken van de verschillende methodologieën die in deze studie zijn onderzocht, is te vinden in tabel 1.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66019/66019fig01.jpg"> Afbeelding 1: 3DP serpentijnvormige dubbele negatieve malafmetingen en isometrische weergave. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66019/66019fig01large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66019/66019fig02.jpg"> Figuur 2: COC-OSTE microfluïdisch apparaat. (A) Schema van de verschillende hoofdstappen van de fabricage van het OSTE-COC-apparaat. (B) Werkingsprincipe van het apparaat. (C) Afbeelding van het voltooide apparaat. Schaalverdeling: 15 mm. Dit cijfer is aangepast met toestemming van Priedols et al.10 en Bajo-Santos et al.20. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66019/66019fig02large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66019/66019fig03.jpg"> Figuur 3: Experimentele configuratie van het apparaat. De spuitpomp bevindt zich aan de linkerkant, het OSTE-COC-apparaat bevindt zich in het midden en het herstelstation bevindt zich aan de rechterkant. Dit cijfer is aangepast met toestemming van Priedols et al.10 en Bajo-Santos et al.20. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66019/66019fig03large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66019/66019fig04.jpg"> Figuur 4: Urine-EV-grootteverdeling en deeltjesherstel van 10 donoren met behulp van ultracentrifugatie (UC), grootte-uitsluitingschromatografie (SEC) en het COC-OOSTE-apparaat. (A) Deeltjeshoeveelheid die van elke isolatiemethode wordt teruggewonnen door nanodeeltjestraceringsanalyse (NTA). Gegevens weergegeven als gemiddelde +/- standaarddeviatie. Statistische significantie aangeduid met * (p<0,05). (B) Boxplots geven de gemiddelde deeltjesgrootteverdeling weer over alle urinemonsters die door NTA zijn beoordeeld, met snorharen die de minimum- en maximumwaarden aangeven. P-waarden werden afgeleid uit vergelijkingen met UC, waarbij **** een hoge statistische significantie aangaf (p<0,0001). (C) De mediaan en het bereik van de gemiddelde hoeveelheid CD63, beoordeeld met behulp van double-sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (dsELISA), voor elke isolatiemethode, werden berekend over alle monsters. L-poort: Linker poort; R-poort: Rechter poort. Dit cijfer is aangepast met toestemming van Bajo-Santos et al.20. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66019/66019fig04large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66019/66019fig05.jpg"> Figuur 5: Karakterisering van EV's geïsoleerd uit PC3- en LNCaP-cellen met behulp van verschillende methoden. (A) Hoeveelheid deeltjes die is teruggewonnen uit PC3-media met behulp van nanodeeltjesvolganalyse (NTA), weergegeven door gemiddelde +/- standaarddeviatie. (B) De hoeveelheid deeltjes die wordt teruggewonnen uit LNCaP-celmedia met behulp van NTA, weergegeven als gemiddelde +/- standaarddeviatie. (C) De mediane deeltjesgrootteverdeling van EV's uit PC3-culturen, samen met het bereik, werd bepaald door NTA. (D) Mediane grootteverdeling van EV's geïsoleerd uit LNCaP-culturen met actieradius. (E) Mediaan en bereik van CD63-expressie voor elke isolatiemethode voor PC3-cellijn-afgeleide EV, met behulp van double-sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (dsELISA). (F) Mediaan en bereik van LNCaP-afgeleide EV CD63-expressie door dsELISA voor elke isolatiemethode. UC: Ultracentrifugatie; SEC: Grootte-uitsluitingschromatografie; L-poort: Linker poort; R-poort: Rechter poort. Dit cijfer is aangepast met toestemming van Bajo-Santos et al.20. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66019/66019fig05large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td></td>
			<td>UC</td>
			<td>SECONDE</td>
			<td>COC-OSTE</td>
		</tr><tr><td>Verwerkingstijd/monster</td>
			<td>++/+++</td>
			<td>+++</td>
			<td>+</td>
		</tr><tr><td>Doorvoer</td>
			<td>++</td>
			<td>+</td>
			<td>+++</td>
		</tr><tr><td>Kosten/steekproef</td>
			<td>+</td>
			<td>+++</td>
			<td>++</td>
		</tr><tr><td>Zuiverheid</td>
			<td>+</td>
			<td>+++</td>
			<td>++</td>
		</tr><tr><td>Automatisering</td>
			<td>++</td>
			<td>+</td>
			<td>+++</td>
		</tr><tr><td>EV-opbrengst</td>
			<td>++</td>
			<td>++</td>
			<td>+++</td>
		</tr><tr><td>Maat selectie</td>
			<td>+</td>
			<td>++</td>
			<td>++</td>
		</tr></tbody></table>Tabel 1. Vergelijking van isolatiekarakteristieken van EV's met de drie methoden: UC SEC en het COC-OSTE apparaat. UC: Ultracentrifugatie; SEC: Grootte-uitsluitingschromatografie. COC-OSTE: cyclisch olefine-copolymeer-off-stoichiometrie thiol-een. +: laag; ++: gemiddeld; +++: hoog. * Afhankelijk van het apparaat.

Extracellulaire blaasjes zijn veelbelovend voor biomedische toepassingen, maar de huidige isolatiemethoden zijn tijdrovend en onpraktisch voor klinisch gebruik. In deze studie presenteren we een microfluïdisch apparaat dat de directe isolatie van extracellulaire blaasjes uit grote hoeveelheden biovloeistoffen op een continue manier met minimale stappen mogelijk maakt.

Isolatie in één stap van extracellulaire blaasjes uit monsters met een groot volume met een gespleten A4F-microfluïdisch apparaat

Extracellular vesicles (EVs) hold immense potential for various biomedical applications, including diagnostics, drug delivery, and regenerative medicine. ...

We zien het potentieel van extracellulaire blaasjes, maar erkennen ook de moeilijkheid om ze te isoleren, vooral van grote biovloeistoffen zoals bioreactormedia. In dit onderzoek hebben we getest of we asymmetrische flow veld-flow fractionering kunnen gebruiken om extracellulaire blaasjes te isoleren. Op dit moment is het onmogelijk om extracellulaire blaasjes rechtstreeks uit biovloeistoffen te isoleren in een continue stroom voor integratie in bioreactoren.In plaats daarvan moeten biovloeistoffen eerst worden verzameld en verwerkt, wat variabiliteit en arbeid toevoegt. Ons apparaat, ontworpen voor extracellulaire vesikelisolatie van biovloeistoffen met een groot volume, maakt integratie met bioreactoren mogelijk voor continue stroom en automatisering. We ontdekten dat vloeibare viscositeit de isolatie van extracellulaire blaasjes kan beïnvloeden met behulp van asymmetrische veldstroomfractionering.We onderzoeken of het aanpassen van biovloeistof- en bufferstromen aan de viscositeit de isolatie kan verbeteren.

single-step-isolation-extracellular-vesicles-from-large-volume

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

Source: Watson, D. C., et.al. Scalable Isolation and Purification of Extracellular Vesicles from Escherichia coli and Other Bacteria. J. Vis. Exp. (2021)This video demonstrates the isolation and concentration of extracellular vesicles (EVs) derived from the outer membrane of genetically engineered bacteria. The process involves culturing the bacteria to release EVs, followed by sequential centrifugation and filtration steps to remove cells and debris. Finally, ultrafiltration is used to...

Isolation and Enrichment of Outer Membrane-Derived Extracellular Vesicles from Bacteria

Source: Watson, D. C., et al. Scalable Isolation and Purification of Extracellular Vesicles from Escherichia coli and Other Bacteria. J. Vis. Exp. (2021)This video demonstrates the use of size exclusion chromatography with porous resin beads to isolate bacterial extracellular vesicles (EVs) from a bacterial culture filtrate. Larger EVs elute early by bypassing the resin pores, while smaller proteins enter the pores and elute later.

Isolation of Bacterial Extracellular Vesicles Using Size-Exclusion Chromatography 

Dit protocol Gegevens methode extracellulaire blaasjes (EV), kleine membraneuze deeltjes vrijgemaakt uit cellen te isoleren, van slechts 10 pl serummonsters. Deze benadering omzeilt de noodzaak van ultracentrifugatie, vereist slechts enkele minuten testtijd en maakt de isolatie van EV uit monsters van beperkte omvang.

Papieren Inrichtingen voor isolatie en karakterisering van extracellulaire blaasjes

Dit protocol beschrijft een systeemarchitectuur voor het uitvoeren van geautomatiseerde scheidingen van kleine volumes (0,15–1,5 ml) deeltjes met behulp van een microfluïdisch apparaat, en bespreekt methoden om de prestaties en werking van acoustofluïdische apparaten te optimaliseren.

Een microfluïdische platform voor Precision Small-volume monster verwerking en het gebruik ervan te Grootte Aparte Biologische Deeltjes met een akoestische microdevice

Hier beschrijven we twee extracellulaire vesikel isolatie protocollen, ultrafiltratie centrifugeren en ultracentrifugatie met dichtheid kleurovergang centrifugeren, te isoleren van extracellulaire blaasjes van lymfkliertest bronchoalveolar lavage vloeibare steekproeven. De extracellulaire blaasjes lymfkliertest bronchoalveolar lavage vloeistof door beide methoden afgeleid zijn gekwantificeerd en gekenmerkt.

Isolatie van extracellulaire blaasjes aan de lymfkliertest Bronchoalveolar Lavage vloeistof met behulp van een techniek van ultrafiltratie centrifugeren

Hier presenteren we een gemakkelijk toepasbare protocol om de opslag stabiliteit van de extracellulaire blaasjes te beoordelen, een groep van nature voorkomende nanodeeltjes geproduceerd door cellen. De blaasjes worden geladen met glucuronidase als model enzym en in verschillende omstandigheden opgeslagen. Na opslag worden de fysisch-chemische parameters en de activiteit van het ingekapseld enzym geëvalueerd.

Evaluatie van de opslag stabiliteit van extracellulaire blaasjes

Dit protocol isoleert extracellulaire blaasjes (Ev's) uit de buurt van virionen met hoge efficiëntie en opbrengst door het opnemen van EV-neerslag, dichtheidsgradiënt ultracentrifugatie en deeltjes opname om een gestroomlijnde workflow en een reductie van start volume vereisten, resulterend in reproduceerbare preparaten voor gebruik in alle EV-onderzoek.

Zuivering van extracellulaire vesikel preparaten met hoge opbrengst uit de buurt van het virus

Bacteriën scheiden nanometergrote extracellulaire blaasjes (EV's) af die bioactieve biologische moleculen dragen. EV-onderzoek richt zich op het begrijpen van hun biogenese, rol in microbe-microbe en gastheer-microbe interacties en ziekte, evenals hun potentiële therapeutische toepassingen. Een workflow voor schaalbare isolatie van EV's van verschillende bacteriën wordt gepresenteerd om standaardisatie van EV-onderzoek te vergemakkelijken.

Schaalbare isolatie en zuivering van extracellulaire blaasjes van Escherichia coli en andere bacteriën

Het huidige protocol biedt gedetailleerde beschrijvingen voor isolatie, concentratie en karakterisering van extracellulaire blaasjes uit cyanobacteriële culturen. Benaderingen voor het zuiveren van blaasjes uit culturen op verschillende schalen, afwegingen tussen methodologieën en overwegingen voor het werken met veldmonsters worden ook besproken.

Isolatie en karakterisering van cyanobacteriële extracellulaire blaasjes

Dit protocol laat zien hoe de kleine extracellulaire blaasjes (hUC-MSC-sEV's) van menselijke navelstreng-afgeleide mesenchymale stamcellen kunnen worden geïsoleerd met een eenvoudige benchtop-instelling op laboratoriumschaal. De grootteverdeling, eiwitconcentratie, sEV-markers en morfologie van geïsoleerde hUC-MSC-sEV's worden gekenmerkt door respectievelijk nanodeeltjestrackinganalyse, BCA-eiwittest, western blot en transmissie-elektronenmicroscoop.

Een eenvoudige benchtop-filtratiemethode om kleine extracellulaire blaasjes te isoleren van menselijke mesenchymale stamcellen

Dit protocol biedt een snelle en groottespecifieke isolatiemethode voor kleine extracellulaire blaasjes door de grootte van de luchtsproeikop te optimaliseren, de druk van de mantelvloeistof, de druk van de monsterstroom, de spanning, versterking en triggerdrempelparameters.

Optimalisatie van flowcytometrische sorteerparameters voor isolatie met hoge doorvoer en zuivering van kleine extracellulaire blaasjes

Leer hoe je extracellulaire blaasjes isoleert uit grote volumes biofluïden met een gespleten A4F-microfluïdisch apparaat. Deze methode maakt continue stroom en automatisering mogelijk voor bioreactorintegratie.

Isolatie in één stap van extracellulaire blaasjes uit monsters met een groot volume met een gespleten A4F-microfluïdisch apparaat (Video) | JoVE Journal

Isolatie in één stap van extracellulaire blaasjes uit monsters met een groot volume met een gespleten A4F-microfluïdisch apparaat

Meer video's verkennen